CN108575994A - 促生型木霉与芽孢杆菌复合可湿性粉剂的制备与应用 - Google Patents

促生型木霉与芽孢杆菌复合可湿性粉剂的制备与应用 Download PDF

Info

Publication number
CN108575994A
CN108575994A CN201810205650.8A CN201810205650A CN108575994A CN 108575994 A CN108575994 A CN 108575994A CN 201810205650 A CN201810205650 A CN 201810205650A CN 108575994 A CN108575994 A CN 108575994A
Authority
CN
China
Prior art keywords
trichoderma
growth
bacillus
powder
bacillus amyloliquefaciens
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201810205650.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108575994B (zh
Inventor
刘振阳
刘佳
陈捷
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Jiaotong University
Original Assignee
Shanghai Jiaotong University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Jiaotong University filed Critical Shanghai Jiaotong University
Priority to CN201810205650.8A priority Critical patent/CN108575994B/zh
Publication of CN108575994A publication Critical patent/CN108575994A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108575994B publication Critical patent/CN108575994B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N25/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests
    • A01N25/12—Powders or granules
    • A01N25/14—Powders or granules wettable
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/30—Microbial fungi; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K17/00—Soil-conditioning materials or soil-stabilising materials
    • C09K17/14—Soil-conditioning materials or soil-stabilising materials containing organic compounds only
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K17/00—Soil-conditioning materials or soil-stabilising materials
    • C09K17/40—Soil-conditioning materials or soil-stabilising materials containing mixtures of inorganic and organic compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K2101/00—Agricultural use

Abstract

本发明公开了一种促生型木霉与芽孢杆菌复合可湿性粉剂的制备与应用；本发明采用棘孢木霉菌(Trichoderma asperegillum)GDSF1009菌株、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ACCC11060作为复合制剂的发酵菌株，分别制备成棘孢木霉菌母粉与解淀粉芽孢杆菌母粉；再加入硫酸镁、硼砂、磷酸二氢钾、腐殖酸钾等盐类助剂混合而成的最终产品。本发明的复合可湿性粉剂可用来浸种、拌土、灌根、叶面喷施，可提高种子的萌发率、出苗率；促进幼苗的生长，增加幼苗鲜重；增加瓜果类蔬菜的产量与质量；还能有效防治黄瓜炭疽病、灰霉病等叶部病害及水稻纹枯病、玉米茎腐病等土传病害。

Description

促生型木霉与芽孢杆菌复合可湿性粉剂的制备与应用
技术领域
本发明属于微生物肥料领域，具体涉及一种促生型木霉与芽孢杆菌复合可湿性粉剂的制备方法及其促进作物、蔬菜生长和防治病害等方面的应用。
背景技术
木霉菌是土壤和根际生态系统中普遍存在有益真菌，木霉定殖植物根部后可以提高蔬菜、作物对非生物胁迫的抵抗及对营养的利用和摄取。同时，能够产生或分泌多种化合物，这些物质一方面可刺激作物生长，提高产量，另一方面可以诱导植物产生局部或系统抗病性，对土壤中多种有害真菌及微生物有很好的防治作用。
解淀粉芽孢杆菌属于芽孢杆菌属，由于它可以产生液化淀粉酶分解淀粉而被命名为解淀粉芽孢杆菌。解淀粉芽孢杆菌是一种广泛分布于大自然中的革兰氏阳性菌，对环境无残留危害，毒性极低，具有很强应用潜力。解淀粉芽孢杆菌能通过多种机制与植物互作，能够较好地促进植物生长、控制植物病害、提高作物品质。将解淀粉芽孢杆菌施入土壤或水体中，能够降解自然界中一些有毒物质，净化被污染的土壤和河流湖泊。解淀粉芽孢杆菌这些优良的特性在环境保护、农业生产方面都有很大应用潜力。
以往研究已经证明木霉菌和芽孢杆菌是国际上应用普遍的生防微生物，然而两种微生物单一使用均有一定的局限性。一方面，单一使用木霉菌对于防控细菌病害的效果不突出，而芽孢杆菌对于土传病害防治效果不如木霉菌；另一方面，木霉菌具有显著的土壤修复、降解或吸附农化物质的功能，而芽孢杆菌则有较强的促生作用，但两种微生物产生的拮抗性次生代谢物种类却有明显不同。此外，木霉菌对病原真菌具有较明显的重寄生和竞争作用，芽孢杆菌也具有突出的拮抗作用和抗逆性；因此，目前尚无这两类微生物协同使用的相关研究。
发明内容
本发明的目的在于克服上述现有技术存在的不足，提供一种促生型木霉与芽孢杆菌复合可湿性粉剂的制备与应用。由于木霉菌对病原真菌具有较明显的重寄生和竞争作用，芽孢杆菌也具有突出的拮抗作用和抗逆性，因此，筛选出兼容性强并能产生增益效应的两类菌株，是本发明研制复合菌剂至关重要的一点。本发明首先在筛选发酵菌株时，对具有良好促生作用的解淀粉芽孢杆菌ACCC11060菌株与多种具有抗病、抗逆特性的棘孢木霉优秀菌株进行平板增益性筛选试验，其中棘孢木霉GDSF1009能与解淀粉芽孢杆菌ACCC11060亲合性互作，即如图1所示，两者平板生长无明显抑菌圈，解淀粉芽孢杆菌ACCC11060对木霉菌GDSF1009的产孢有促进作用，而其它供试木霉菌株与该芽孢杆菌菌株表现为相互拮抗作用。其次，对两种菌株发酵出的母粉的混合比例进行了筛选，最终确定了最佳的混合比例，从而保证了两种菌粉的增益性。即如图2所示，复合菌剂的促生效果高于木霉菌单剂及芽孢杆菌单剂。另外，本发明还对棘孢木霉GDS1009、解淀粉芽孢杆菌ACCC11060的发酵工艺与制剂配方进行了优化，再次保证了复合型可湿性粉剂的活孢子数量与货架期等问题。通过上述方法，本发明所述的复合型微生物可湿性粉剂，既可用于提高作物与果蔬的产量、改善品质、改良土壤、又可防治作物与果蔬花卉的叶传及土传病害，且对环境无污染、无残留、安全无毒。如能在全国进行推广使用，对实现“化学农残零增长”的政策具有十分重要的意义。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的：
本发明涉及一种促生型木霉与芽孢杆菌复合可湿性粉剂，所述可湿性粉剂包括质量比为1:5～1:10的棘孢木霉菌母粉和解淀粉芽孢杆菌母粉。
本发明采用室内育苗盘拌土播种黄瓜种子的方法对棘孢木霉菌母粉和解淀芽孢杆菌母粉进行了最佳配比的筛选。这两种微生物母粉以质量比为1:8进行混合时，对黄瓜幼苗的促生效果最好。
优选的，所述棘孢木霉菌为棘孢木霉菌(Trichoderma asperegillum)GDSF1009,保藏编号为CGMCC NO.9512；所述解淀粉芽孢杆菌为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)ACCC11060。
优选的，所述棘孢木霉菌母粉由木霉厚垣孢子发酵液经离心沉淀处理，加入占沉淀质量300％～400％的填料、40％～60％的分散剂、10％～25％的保护剂混合干燥而成；所述填料选自麦芽糊精、食品级羟基淀粉醚、磷酸淀粉钠、阿拉伯半乳糖胶、可溶性大豆蛋白、硅藻土中的一种或几种；所述分散剂选自NNO、MF、PEG、阿拉伯树胶中的一种或几种；所述保护剂选自脱脂乳、蔗糖、黄原胶中的一种或几种。
优选的，所述木霉厚垣孢子发酵液中产孢子数达到(2.0-6.0)×108个/mL，厚垣孢子比重约占总孢子比重的22％～30％。更优选，本发明选择的棘孢木霉GDSF1009在玉米粉优化发酵培养基中液体发酵所产孢子数达到(2.0-6.0)×108个/mL，厚垣孢子比重约占总孢子比重的25％。
优选的，所述解淀粉芽孢杆菌母粉由解淀粉芽孢杆菌发酵液，加入发酵液质量100％～200％的填料及2％～3％的抗氧化剂混合制成母液，再经喷雾干燥机干燥制成；所述填料选自麦芽糊精、硫酸钠、食品级羟基淀粉醚、磷酸淀粉钠、阿拉伯半乳糖胶中的一种或几种；所述抗氧化剂为偏重亚硫酸钠。
优选的，所述解淀粉芽孢杆菌发酵液中，根据活菌计数得，种子液菌体＞1×108CFU/ml，分裂中的菌体数＞50％。更优选，本发明选择的解淀粉芽孢杆菌ACCC11060在酵母浸出粉糖蜜优化发酵培养基中培养18-19h，根据活菌计数得种子液菌体＞1×108CFU/ml，分裂中的菌体数＞50％。
优选的，所述可湿性粉剂包括如下各组分：
棘孢木霉菌母粉 1000重量份，
解淀粉芽孢杆菌母粉 5000～10000重量份，
以及占所述棘孢木霉菌母粉和解淀粉芽孢杆菌母粉总重2％～6％的盐类填料。
优选的，所述盐类填料是用量分别为所述棘孢木霉菌母粉和解淀粉芽孢杆菌母粉总重1％～2％的磷酸二氢钾、结晶硫酸镁、十水合四硼酸钠的组合，或者是用量分别为所述棘孢木霉菌母粉和解淀粉芽孢杆菌母粉总重1％～2％的腐殖酸钾与结晶硫酸镁的组合。
本发明还涉及一种根据本发明所述的促生型木霉与芽孢杆菌复合可湿性粉剂在促进幼苗生长、和/或增加果实产量、和/或增加果实质量、和/或增强抗病性中的用途。
优选的，所述幼苗为黄瓜、番茄幼苗、花椰菜幼苗、哈密瓜秧苗或水稻幼苗；所述抗病性指的是抗黄瓜炭疽病、灰霉病、玉米茎腐病或水稻纹枯病。
优选的，所述复合可湿性粉剂可采用浸种、育苗盘拌土、土壤灌根、叶面喷施施用方式中的一种或几种。
优选的，所述浸种具体为：按照所述复合可湿性粉剂稀释10000倍浸种，浸种时间为15h-24h。
优选的，所述育苗盘拌土具体为：按照所述复合可湿性粉剂与土壤质量比1-2％的比例进行育苗盘拌土。
优选的，所述土壤灌根具体为：按照所述复合可湿性粉剂兑水稀释500-1000倍灌根。
优选的，所述叶面喷施具体为：按照所述复合可湿性粉剂兑水稀释300-500倍叶面喷施。一般每亩使用剂量约为80g-100g。喷施时以稀释倍数为主要参考标准。
综上，本发明经棘孢木霉菌株与解淀粉芽孢杆菌菌株的组合筛选试验，确定采用棘孢木霉菌(Trichoderma asperegillum)GDSF1009菌株、解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)菌株ACCC11060作为复合制剂的发酵菌株。将两种菌株按照最佳的发酵工艺参数与制剂工艺参数，分别制备成棘孢木霉菌母粉与解淀粉芽孢杆菌母粉。通过质量配比筛选试验，确定按照木霉菌母粉与芽孢杆菌母粉质量比为1:8的比例混合，获得木霉菌·芽孢杆菌复合可湿性粉剂母粉，再加入少量比例的硫酸镁、硼砂、磷酸二氢钾、腐殖酸钾等盐类助剂混合而成的最终产品——促生型木霉·芽孢杆菌复合可湿性粉剂。本发明的复合可湿性粉剂可用来浸种、拌土、灌根、叶面喷施，使用方便，低毒，对环境相对安全。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
1、按照本发明提供的促生型木霉菌与芽孢杆菌复合可湿性粉剂及其使用浓度进行浸种、拌土、灌根、叶面喷施，可提高(蔬菜、小麦、水稻)种子的萌发率、出苗率、促进蔬菜、玉米等幼苗地上部分、地下部分生长，增加幼苗鲜重；在(瓜果类蔬菜)植株的幼苗期与定植期进行灌根、叶面喷施处理，可提高成株期的果实产量及品质。
2、该复合可湿性粉剂能有效防治黄瓜炭疽病、灰霉病等叶部病害及水稻纹枯病、玉米茎腐病等土传病害。
3、该复合可湿性粉剂能降解农药残留(有机磷农药，氯氰菊脂类)和固化或螯合土壤重金属，减少土壤盐渍化，提高作物果蔬营养利用效率。
4、该复合可湿性粉剂可提高作物对土壤盐渍化及干旱等逆境因子抗性。
5、按照本发明提供的促生型木霉菌与芽孢杆菌复合可湿性粉剂，按照一定比例要求进行浸种、拌土、灌根、喷施，对土壤无污染。
附图说明
通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、目的和优点将会变得更明显：
图1为棘孢木霉GDSF1009与解淀粉芽孢杆菌ACCC11060亲和性试验；其中，a为对峙培养，b为两菌对峙交界处孢，c为木霉菌单一培养产孢；
图2为复合可湿性粉剂与单剂促生试验；其中a为复合可湿性粉剂拌基质土，b为芽孢杆菌ACCC11060拌基质土，c为木霉可湿性粉剂拌基质土，d为对照组；
图3为复合可湿性粉剂浸种促进萌发试验；其中，a为复合可湿性粉剂浸种，b为对照组；
图4为复合可湿性粉剂室内拌土促生试验；其中，a为复合可湿性粉剂拌土，b为对照组；
图5为复合可湿性粉剂室内灌根促生试验；其中，a为复合可湿性粉剂灌根，b为对照组；
图6为复合可湿性粉剂田间灌根促生试验；其中，a为复合可湿性粉剂灌根，b为对照组；
图7为复合可湿性粉剂田间喷施防病试验；其中，a为复合可湿性粉剂喷施，b为对照组。
具体实施方式
以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
本发明涉及一种促生型木霉与芽孢杆菌复合可湿性粉剂的制备与应用；本发明经过棘孢木霉(Trichoderma asperellum)菌株与解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)的组合筛选，确定所采用的生防菌株为棘孢木霉(Trichodermaasperegillum)GDSF1009与解淀粉芽孢杆菌ACCC11060。所述棘孢木霉菌GDSF1009,保藏编号为CGMCC NO.9512(植物保护学报Journal of Plant Protection，2015，42(6):1030－1035)；所述解淀粉芽孢杆菌ACCC11060保藏于中国农业微生物菌种保藏管理中心(Agricultural Culture Colletion of China)，保藏编号为ACCC11060；订购地址：北京市海淀区中关村南大街12号中国农业科学院农业资源与农业区划研究所资源楼206，邮编：100081
电话：010-82108683；010-82108651-601传真：010-82108683电子信箱：sale@accc.org.cn可于中国农业微生物菌种保藏管理中心官方网站http://accc.host7.voosite.com/进行网上订购。
经过菌株初筛、复筛纯化后，分别保存于玻璃试管斜面与甘油中。在配方优化后的培养基中，两种菌株分别进行种子液体培养与大罐发酵，得到棘孢木霉菌厚垣孢子发酵液与解淀粉芽孢杆菌发酵液。分别将两种发酵液经过添加填料、分散剂、保护剂、离心干燥等步骤制成母粉，再按最佳比例混配成复合型菌剂母粉，再填入少量比例的镁盐、钾盐等助剂复合而成。促生型复合可湿性粉剂采用浸种、拌土、灌根、喷施的方式在温室与田间对植株进行处理，与清水对照组相比，可促进黄瓜、番茄幼苗鲜重，壮根壮苗；苗期灌根或喷施处理，可对成株期增产增质、抗病抗逆有一定的促进作用。
如图1所示，解淀粉芽孢杆菌ACCC11060与木霉菌GDSF1009两者平板生长无明显抑菌圈，说明两者之间无抑制作用；木霉菌GDSF1009对解淀粉芽孢杆菌ACCC11060的次生代谢产物无影响。另外，解淀粉芽孢杆菌ACCC11060对木霉菌GDSF1009的产孢有促进作用。
实施例1
1、棘孢木霉菌GDSF1009经过平板接种、活化培养、发酵、离心、制剂干燥，制备成棘孢木霉菌母粉。具体包括：
(1)棘孢木霉菌平板活化与扩繁：将棘孢木霉GDSF1009接种于PDA培养皿中，28℃培养箱中倒置培养3-4d。
PDA培养基：200g马铃薯蒸煮后过滤的上层汁液，20g葡萄糖，20g琼脂粉，纯净水定容至1L，121℃高压灭菌30min。
(2)棘孢木霉菌种子菌的制备：200g马铃薯，20g葡萄糖，纯净水1L，分装至250mL三角瓶，121℃高压灭菌25min。从PDA木霉菌菌落用无菌水洗下分生孢子，调整至1.5×106CFU/mL浓度，接入液体培养基中，置于180r/min，28℃摇床中摇瓶培养5天，得到棘孢木霉菌种子菌液。
(3)棘孢木霉菌中试规模发酵液制备，如下表1：
表1
药品名称 药品用量(g/L) 200L用量
结晶硫酸镁 0.5 100
结晶硫酸亚铁 0.0075 1.5
硫酸锰 0.0025 0.5
硫酸锌 0.002 0.4
磷酸二氢钾 3.83 766
硝酸钠 1.42 284
硫酸铵 1.1 220
氯化钠 1 200
以上配方加入玉米粉10kg，200L水，装入300L发酵罐中。用Na0H调节pH为5-6。121℃下高温灭菌30-60min。接入重量比为0.3％的木霉菌种子菌液，发酵温度为28℃，发酵时间7d，即可获得棘孢木霉菌生产用发酵液。所述发酵液中产孢子数达到(2.0-6.0)×108个/mL，厚垣孢子比重约占总孢子比重的22％～30％。
(4)棘孢木霉菌母粉的制备：
棘孢木霉发酵液离心：将发酵获得的液体培养基使用立式离心机在50HZ的转速下离心，加料结束之后继续离心5min之后，关闭离心机。
物料混匀：将获得的木霉离心沉淀，与3.5倍质量的糊精、50％质量的NNO、12.5％质量的脱脂奶粉、5％质量的蔗糖充分混合拌匀。
干燥：使用活性孢子粉专用干燥机对拌匀的物料进行干燥，干燥温度设置为45℃，引风速度为35-37，加料速度为1.0-1.2，预热30min，然后将拌匀的物料加入物料槽中。干燥之后得到木霉菌母粉。
2、解淀粉芽孢杆菌ACCC11060经过平板接种、活化培养、发酵、制剂干燥，制备成解淀粉芽孢杆菌母粉。具体包括：
(1)解淀粉芽孢杆菌平板菌株的活化：
第一次活化：取20％或30％甘油冷冻管(-60℃保存)，常温解冻，划线接种于PDA平板。30℃静置培养48h，单个菌落直径约0.8-1.2cm。
第二次活化：挑取一次活化的单个菌落，划线接种于PDA平板，30℃静置培养约24h。
PDA培养基：200g马铃薯蒸煮后过滤的上层汁液，20g葡萄糖，20g琼脂粉，纯净水定容至1L，121℃高压灭菌30min。
(2)解淀粉芽孢杆菌种子液的制备
取第二次活化菌种接种2环于装有50ml培养基液体的带挡板三角瓶中(500ml)。30℃200rpm培养18-19h。
酵母浸出粉糖蜜优化发酵培养基配方如下表2：
表2
(3)解淀粉芽孢杆菌发酵液的制备
按照(2)所述的配方比例，称取相应质量的原料加入100L发酵罐，另外加入0.5g/L的泡敌PPG，加水至50L。用Na0H调节pH为6.5-7。121℃下高温灭菌30-60min。接入重量比为0.3％的解淀粉芽孢杆菌种子液，发酵温度为30℃，发酵时间72h-94h，获得解淀粉芽孢杆菌发酵液。所述解淀粉芽孢杆菌发酵液中，根据活菌计数得，种子液菌体＞1×108CFU/ml，分裂中的菌体数＞50％。
(4)解淀粉芽孢杆菌母粉的制备
将40％质量的解淀粉芽孢杆菌发酵液与29.5％质量的麦芽糊精、29.5％质量的硫酸钠、1％质量的偏重亚硫酸钠等填料混合制成母液，再经喷雾干燥机干燥制成解淀粉芽孢杆菌母粉。
3、将上述棘孢木霉菌母粉与解淀粉芽孢杆菌母粉按照质量比为1:8的比例混合均匀，制成复合型可湿性粉剂母粉，再加入母粉总质量1％磷酸二氢钾+1％结晶硫酸镁+1％十水合四硼酸钠，或者加入1％腐殖酸钾+1％结晶硫酸镁，搅拌机充分混匀，获得促生型木霉菌·芽孢杆菌复合可湿性粉剂。
4、黄瓜种子生理指标试验：将黄瓜种子浸在上述复合制剂10000倍稀释液中24小时，设无菌水浸种处理为对照组。浸种结束后倒掉浸种剂，种子放在定性滤纸上滤干，再放入培养皿中进行催芽，每个培养皿25粒种子，每个处理3次重复。7d后考察黄瓜出芽率、芽长、根长、鲜重等指标。
表3
生长指标 复合菌剂浸种 对照组 增效(％)
出芽率(％) 88 84 4.76
平均芽长cm 2.27 1.35 68.15
平均根长cm 9.21 8.73 5.50
10株鲜重g 2.49 1.94 28.35
由表3和图3的实验结果表明：复合型可湿性粉剂稀释液浸种黄瓜种子，其萌发与生长均受到一定的影响，复合型可湿性粉剂可增加黄瓜种子出芽率，并且对黄瓜种子的芽、根的生长有促进作用。
实施例2
1、棘孢木霉菌GDSF1009经过平板接种、活化培养、发酵、离心、制剂干燥，制备成棘孢木霉菌母粉。
2、解淀粉芽孢杆菌ACCC11060经过平板接种、活化培养、发酵、制剂干燥，制备成解淀粉芽孢杆菌母粉。
3、将上述棘孢木霉菌母粉与解淀粉芽孢杆菌母粉按照质量比为1:8的比例混合均匀，制成复合型可湿性粉剂母粉，再加入母粉总质量1％磷酸二氢钾+1％结晶硫酸镁+1％十水合四硼酸钠，或者加入1％腐殖酸钾+1％结晶硫酸镁，搅拌机充分混匀，获得促生型木霉菌·芽孢杆菌复合可湿性粉剂。
4、室内盆栽拌土试验：
将足量黄瓜种子进行次氯酸钠溶液消毒5min，蒸馏水冲洗3遍，将复合可湿性粉剂与育苗基质按照质量比为2:100的比例充分拌匀，分布在5个12cm口径的花盆中，每花盆种4粒黄瓜种子。对照组只有育苗基质。7周后，约4-5叶期时，调查不同处理的黄瓜幼苗生长指标，统计数据。
表4
生长指标 复合菌剂2％比例拌土 对照组 增效(％)
平均株高cm 8.89 7.35 20.95
平均根长cm 4.80 3.90 23.08
平均叶面积cm2 34.61 31.21 10.89
10株鲜重g 25.00 21.90 14.16
表4和图4的实验结果表明：促生型木霉菌·粉芽孢杆菌复合可湿性粉剂拌土处理对黄瓜幼苗地上、地下部分的生长，都有较好的促进作用。
实施例3
1、棘孢木霉菌GDSF1009经过平板接种、活化培养、发酵、离心、制剂干燥，制备成棘孢木霉菌母粉。
2、解淀粉芽孢杆菌ACCC11060经过平板接种、活化培养、发酵、制剂干燥，制备成解淀粉芽孢杆菌母粉。
3、将上述棘孢木霉菌母粉与解淀粉芽孢杆菌母粉按照质量比为1:8的比例混合均匀，制成复合型可湿性粉剂母粉，再加入母粉总质量1％磷酸二氢钾+1％结晶硫酸镁+1％十水合四硼酸钠，或者加入1％腐殖酸钾+1％结晶硫酸镁，搅拌机充分混匀，获得促生型木霉菌·芽孢杆菌复合可湿性粉剂。
4、室内灌根试验：
供试实验室:上海交大七宝校区温室。
种植品种：黄瓜。
处理时间：黄瓜4叶苗期。种于12cm口径花盆中，每盆种4颗苗。
灌根方式：稀释800倍，每盆80ml药剂。
调查时间：6-8叶期秧苗。
调查方法：每个处理调查15株。
调查指标、数据如下表5：
表5
室内黄瓜盆栽 800倍灌根 对照组 灌根增效(％)
株高cm 22.33 19 17.53
根长cm 21.67 19.43 11.53
叶宽cm 11.78 9.57 23.09
茎宽mm 4.78 3.29 45.29
叶片数 7.33 6.14 19.38
地上鲜重g 9.11 5.25 73.52
表5和图5的实验结果表明：稀释800倍的促生型木霉菌·芽孢杆菌复合可湿性粉剂灌根处理，对黄瓜幼苗的株高、根长、叶宽、茎宽、叶片数、地上鲜重有不同程度的促进作用。
实施例4
1、棘孢木霉菌GDSF1009经过平板接种、活化培养、发酵、离心、制剂干燥，制备成棘孢木霉菌母粉。
2、解淀粉芽孢杆菌ACCC11060经过平板接种、活化培养、发酵、制剂干燥，制备成解淀粉芽孢杆菌母粉。
3、将上述棘孢木霉菌母粉与解淀粉芽孢杆菌母粉按照质量比为1:8的比例混合均匀，制成复合型可湿性粉剂母粉，再加入母粉总质量1％磷酸二氢钾+1％结晶硫酸镁+1％十水合四硼酸钠，或者加入1％腐殖酸钾+1％结晶硫酸镁，搅拌机充分混匀，获得促生型木霉菌·芽孢杆菌复合可湿性粉剂。
4、田间应用试验：
(1)供试基地:上海浦东新区孙桥现代农园区。
种植品种：黄瓜、番茄。
试验设计采用随机区组排列。
处理时间：黄瓜、番茄苗期。
灌根方式：稀释800倍，每株100ml药剂。
调查时间：黄瓜采收期，番茄坐果期及采收期
调查方法：每个处理采取5点法，调查15株。统计数据，计算平均值。
调查指标、数据如下表6：
表6
孙桥农园区黄瓜 800倍灌根 对照 灌根增效(％)
株高dm 24.41 22.79 7.12
叶片宽度cm 28.29 26.50 6.74
每株果实数 13.71 10.86 26.32
果实长度cm 11.00 10.75 2.33
果实日产量kg 5.77 5.40 6.74
VC含量mg/100g 11.00 10.62 3.63
表7
孙桥农园区番茄 800倍灌根 对照 灌根增效(％)
株高dm 14.36 13.59 5.68
叶片长径cm 12.50 11.86 5.42
每株果实数 8.00 6.86 16.67
果实长径cm 6.79 6.14 10.47
果实产量kg 18.30 17.50 7.46
病株率 6％ 13％ 53.85
表6和表7的实验结果表明：稀释800倍的促生型木霉菌·芽孢杆菌复合型制剂对黄瓜、番茄进行苗期灌根处理，能够使黄瓜、番茄成株期的株高、叶宽/叶长、每株果实数、果实长度/长径、果实产量有不同程度的增加；还可提高黄瓜果实维生素C含量；对番茄病毒病防效达到53.85％。
(2)供试基地:上海崇明区健绿蔬菜合作社。
种植品种：花椰菜
试验设计采用随机区组排列。
处理时间：花菜苗期。
灌根方式：稀释600倍，每株100ml药剂。
调查时间：开花期。
调查方法：每个处理采取5点法，调查15株。统计数据，计算平均值。
调查指标、数据如下表8：
表8
崇明花菜 600倍灌根 对照 灌根增效(％)
株高cm 85.83 72.08 19.09
叶片长径cm 76.00 64.85 17.20
叶片宽度cm 35.67 29.00 22.99
菜花直径cm 22.75 20.30 12.09
表8的实验结果表明：稀释600倍的促生型木霉菌·芽孢杆菌复合型制剂对花椰菜进行苗期灌根处理，能够使花椰菜成株的株高、叶长度、叶片宽度、菜花直径有不同程度的增加。
(3)供试基地:上海金山区桑园村哈密瓜大棚。
种植品种：哈密瓜
试验设计采用随机区组排列。
处理时间：哈密瓜苗期。
灌根方式：稀释500倍，每株100ml药剂。
调查时间：瓜果成熟期。
调查方法：每个处理采取5点法，调查15株。统计数据，计算平均值。
调查指标、数据如下表9：
表9
表9和图6的实验结果表明：稀释500倍的促生型木霉菌·芽孢杆菌复合可湿性粉剂对哈密瓜秧苗进行苗期灌根处理，能够使哈密瓜成株期的果实数量、叶片宽度、果实还原糖总量、果实抗坏血酸总量、果实含铁量有不同程度地增加。
实施例5
1、棘孢木霉菌GDSF1009经过平板接种、活化培养、发酵、离心、制剂干燥，制备成棘孢木霉菌母粉。
2、解淀粉芽孢杆菌ACCC11060经过平板接种、活化培养、发酵、制剂干燥，制备成解淀粉芽孢杆菌母粉。
3、将上述棘孢木霉菌母粉与解淀粉芽孢杆菌母粉按照质量比为1:8的比例混合均匀，制成复合型可湿性粉剂母粉，再加入母粉总质量1％磷酸二氢钾+1％结晶硫酸镁+1％十水合四硼酸钠，或者加入1％腐殖酸钾+1％结晶硫酸镁，搅拌机充分混匀，获得促生型木霉菌·芽孢杆菌复合可湿性粉剂。
4、田间喷施应用试验：
供试基地:大连瓦房店水稻基地。
种植品种：港优3号水稻
防治对象：水稻纹枯病
试验设计：采用随机区组排列。
处理方法：100g/亩，稀释300倍，喷施2亩。在6月下旬喷施2次复合可湿性粉剂，每次间隔7-10天(早稻)；在7月上旬喷施2次复合可湿性粉剂，每次间隔7-10d(中晚稻)。
调查时间：水稻成熟期。
调查方法：每块田5点取样，每点取25穴，调查病株数和病株严重度，分别计算病株率和病情指数，以处理区与对照区(清水)的病情指数计算防治效果。
调查指标：调查病株数。
纹枯病分级标准：按0～9级分级标准，进行病株严重度分级。
防效计算方法：病株率(％)＝发病株数/调查总株数×100。
病情指数＝∑[(各级病叶数×各级代表值)/最高级代表值×调查总株数]×100
防效(％)＝[(对照区病指或病株率)-处理区病指或病株率)/对照区病指或病株率]×100
防病调查数据如表10所示：
表10
大连水稻基地 稀释300倍喷施 对照组
病情指数 28.98％ 57.33％
喷施防效 49％ ——
表10和图7的实验结果表明：稀释300倍的促生型木霉菌·芽孢杆菌复合可湿性粉剂对水稻苗期进行喷施处理，可对水稻纹枯病有一定的防治作用，防效达到49％。
以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变形或修改，这并不影响本发明的实质内容。

Claims (10)

1.一种促生型木霉与芽孢杆菌复合可湿性粉剂，其特征在于，所述可湿性粉剂包括质量比为1:5～1:10的棘孢木霉菌母粉和解淀粉芽孢杆菌母粉。
2.根据权利要求1所述的促生型木霉与芽孢杆菌复合可湿性粉剂，其特征在于，所述棘孢木霉菌为棘孢木霉菌(Trichoderma asperegillum)GDSF1009,保藏编号为CGMCCNO.9512；所述解淀粉芽孢杆菌为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ACCC11060。
3.根据权利要求1所述的促生型木霉与芽孢杆菌复合可湿性粉剂，其特征在于，所述棘孢木霉菌母粉由棘孢木霉厚垣孢子发酵液经离心沉淀处理，加入占沉淀质量300％～400％的填料、40％～60％的分散剂、10％～25％的保护剂混合干燥而成；所述填料选自麦芽糊精、食品级羟基淀粉醚、磷酸淀粉钠、阿拉伯半乳糖胶、可溶性大豆蛋白、硅藻土中的一种或几种；所述分散剂选自NNO、MF、PEG、阿拉伯树胶中的一种或几种；所述保护剂选自脱脂乳、蔗糖、黄原胶中的一种或几种。
4.根据权利要求3所述的促生型木霉与芽孢杆菌复合可湿性粉剂，其特征在于，所述棘孢木霉厚垣孢子发酵液中产孢子数达到(2.0～6.0)×108个/mL，厚垣孢子比重约占总孢子比重的22％～30％。
5.根据权利要求1所述的促生型木霉与芽孢杆菌复合可湿性粉剂，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌母粉由解淀粉芽孢杆菌发酵液，加入发酵液质量100％～200％的填料及2％～3％的抗氧化剂混合制成母液，再经喷雾干燥机干燥制成；所述填料选自麦芽糊精、硫酸钠、食品级羟基淀粉醚、磷酸淀粉钠、阿拉伯半乳糖胶中的一种或几种；所述抗氧化剂为偏重亚硫酸钠。
6.根据权利要求5所述的促生型木霉与芽孢杆菌复合可湿性粉剂，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌发酵液中，根据活菌计数得，种子液菌体＞1×108CFU/ml，分裂中的菌体数＞50％。
7.根据权利要求1所述的促生型木霉与芽孢杆菌复合可湿性粉剂，其特征在于，所述可湿性粉剂包括如下各组分：
棘孢木霉菌母粉 1000重量份，
解淀粉芽孢杆菌母粉 5000～10000重量份，
以及占所述棘孢木霉菌母粉和解淀粉芽孢杆菌母粉总重2％～6％的盐类填料。
8.根据权利要求7所述的促生型木霉与芽孢杆菌复合可湿性粉剂，其特征在于，所述盐类填料是用量分别为所述棘孢木霉菌母粉和解淀粉芽孢杆菌母粉总重1％～2％的磷酸二氢钾、结晶硫酸镁、十水合四硼酸钠的组合，或者是用量分别为所述棘孢木霉菌母粉和解淀粉芽孢杆菌母粉总重1％～2％的腐殖酸钾与结晶硫酸镁的组合。
9.一种根据权利要求1～8中任一项所述的促生型木霉与芽孢杆菌复合可湿性粉剂在促进幼苗生长、和/或增加果实产量、和/或增加果实质量、和/或增强抗病性中的用途。
10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述复合可湿性粉剂可采用浸种、育苗盘拌土、土壤灌根、叶面喷施施用方式中的一种或几种。
CN201810205650.8A 2018-03-13 2018-03-13 促生型木霉与芽孢杆菌复合可湿性粉剂的制备与应用 Active CN108575994B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810205650.8A CN108575994B (zh) 2018-03-13 2018-03-13 促生型木霉与芽孢杆菌复合可湿性粉剂的制备与应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810205650.8A CN108575994B (zh) 2018-03-13 2018-03-13 促生型木霉与芽孢杆菌复合可湿性粉剂的制备与应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108575994A true CN108575994A (zh) 2018-09-28
CN108575994B CN108575994B (zh) 2020-09-15

Family

ID=63626159

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810205650.8A Active CN108575994B (zh) 2018-03-13 2018-03-13 促生型木霉与芽孢杆菌复合可湿性粉剂的制备与应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108575994B (zh)

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110423718A (zh) * 2019-08-13 2019-11-08 上海交通大学 利用芽孢杆菌发酵液生产木霉菌厚垣孢子的方法及应用
CN110477019A (zh) * 2019-08-14 2019-11-22 安徽旭辰生物科技有限公司 一种生物刺激素及其制备方法与应用
CN110591921A (zh) * 2018-12-19 2019-12-20 扬州工业职业技术学院 一种木霉菌液体发酵的厚垣孢子及其制备方法
CN111138229A (zh) * 2020-01-07 2020-05-12 上海交通大学 一种益菌化的木霉菌和芽孢杆菌包衣化肥的制备及其应用
CN111357771A (zh) * 2020-05-12 2020-07-03 海南大学 一种防治土传病害的生防菌制剂
CN111466415A (zh) * 2020-04-24 2020-07-31 上海交通大学 利用木霉菌剂诱导玉米抗镰孢菌穗腐病的方法
CN111567183A (zh) * 2020-05-14 2020-08-25 上海交通大学 利用含木霉菌菌剂降低鲜食玉米镰孢菌毒素的方法
CN114431255A (zh) * 2021-10-29 2022-05-06 中国科学院烟台海岸带研究所 一种类棘孢木霉的应用及植物生长促进菌剂
CN115886038A (zh) * 2022-11-22 2023-04-04 东北农业大学 一种大豆种子包衣剂及其应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7429477B2 (en) * 2001-02-02 2008-09-30 Johnson Thomas D Controlling plant pathogens with bacterial/fungal antagonist combinations
CN103184162A (zh) * 2013-04-24 2013-07-03 牛赡光 一株棘孢木霉及其应用
CN105567568A (zh) * 2014-10-10 2016-05-11 天津市植物保护研究所 一种防控茄果类蔬菜病毒病的微生物菌剂及其制备方法
CN106879585A (zh) * 2017-03-10 2017-06-23 上海交通大学 木霉菌·芸苔素内酯可湿性粉剂及其制备方法和应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7429477B2 (en) * 2001-02-02 2008-09-30 Johnson Thomas D Controlling plant pathogens with bacterial/fungal antagonist combinations
CN103184162A (zh) * 2013-04-24 2013-07-03 牛赡光 一株棘孢木霉及其应用
CN105567568A (zh) * 2014-10-10 2016-05-11 天津市植物保护研究所 一种防控茄果类蔬菜病毒病的微生物菌剂及其制备方法
CN106879585A (zh) * 2017-03-10 2017-06-23 上海交通大学 木霉菌·芸苔素内酯可湿性粉剂及其制备方法和应用

Cited By (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110591921A (zh) * 2018-12-19 2019-12-20 扬州工业职业技术学院 一种木霉菌液体发酵的厚垣孢子及其制备方法
CN110591921B (zh) * 2018-12-19 2023-12-05 扬州工业职业技术学院 一种木霉菌液体发酵的厚垣孢子及其制备方法
CN110423718B (zh) * 2019-08-13 2021-10-15 上海交通大学 利用芽孢杆菌发酵液生产木霉菌厚垣孢子的方法及应用
CN110423718A (zh) * 2019-08-13 2019-11-08 上海交通大学 利用芽孢杆菌发酵液生产木霉菌厚垣孢子的方法及应用
CN110477019A (zh) * 2019-08-14 2019-11-22 安徽旭辰生物科技有限公司 一种生物刺激素及其制备方法与应用
CN110477019B (zh) * 2019-08-14 2021-06-04 安徽旭辰生物科技有限公司 一种生物刺激素及其制备方法与应用
CN111138229A (zh) * 2020-01-07 2020-05-12 上海交通大学 一种益菌化的木霉菌和芽孢杆菌包衣化肥的制备及其应用
CN111466415A (zh) * 2020-04-24 2020-07-31 上海交通大学 利用木霉菌剂诱导玉米抗镰孢菌穗腐病的方法
CN111357771A (zh) * 2020-05-12 2020-07-03 海南大学 一种防治土传病害的生防菌制剂
CN111357771B (zh) * 2020-05-12 2021-09-28 海南大学 一种防治土传病害的生防菌制剂
CN111567183A (zh) * 2020-05-14 2020-08-25 上海交通大学 利用含木霉菌菌剂降低鲜食玉米镰孢菌毒素的方法
CN111567183B (zh) * 2020-05-14 2021-10-08 上海交通大学 利用含木霉菌菌剂降低鲜食玉米镰孢菌毒素的方法
CN114431255A (zh) * 2021-10-29 2022-05-06 中国科学院烟台海岸带研究所 一种类棘孢木霉的应用及植物生长促进菌剂
CN115886038A (zh) * 2022-11-22 2023-04-04 东北农业大学 一种大豆种子包衣剂及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN108575994B (zh) 2020-09-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108575994A (zh) 促生型木霉与芽孢杆菌复合可湿性粉剂的制备与应用
CN102433280B (zh) 一种溶磷复合微生物菌剂及其应用
CN105018366B (zh) 甲基营养型芽孢杆菌及其应用
CN102533611B (zh) 一种高效溶磷促生菌、由其制备的微生物菌剂及应用
CN103992963A (zh) 一种巨大芽孢杆菌及其应用
CN101734956B (zh) 鱼皮鱼鳞制备微生物发酵液的方法及含该发酵液的菌肥
CN104276882A (zh) 一种含聚谷氨酸、解磷菌和解钾菌的组合型肥料增效剂及其制备方法和应用
CN106591193A (zh) 一株具有广谱促生抗逆作用的解淀粉芽孢杆菌
CN110272832A (zh) 棘孢木霉fj069及其应用
CN105234167B (zh) 一种含海藻寡糖重金属生物修复剂及其制备方法
CN107523524B (zh) 一种防治番茄黄萎病的复合菌剂及其制备方法和应用
CN107266249A (zh) 一种防控蔬菜病虫害型双膜缓释肥及其制备方法
CN104531545A (zh) 一株萎缩芽孢杆菌株dppg-28及其在作物病害防治方面的应用
CN105385638A (zh) 一种微生物解磷制剂及其制备方法和应用
CN105439725A (zh) 一种用于农场现场发酵的多粘类芽孢杆菌药肥及其应用
CN101463339B (zh) 一种防治苹果真菌病害并促增产的菌剂及其专用菌株与应用
CN106929443A (zh) 一种弧菌lx6‑2及其在制备生物海藻肥中的用途
CN109320355A (zh) 一种改良设施土壤盐渍化的生物活性调理剂及其应用
CN102219613B (zh) 绿色多功能复合生态有机液肥及其加工方法
CN103525748B (zh) 哈茨木霉厚垣孢子的生产方法
CN103627642A (zh) 一株产黄青霉ch03菌株及其在修复土壤重金属污染中的应用
CN104788175A (zh) 木霉菌生物颗粒剂及其制备方法和应用
CN107603906B (zh) 一种防治马铃薯枯萎病的菌株及其制剂的制备方法和应用
CN109134081A (zh) 一种富含功能性多糖的生物肥料及其制备方法
CN102618527A (zh) 柠檬酸废水资源化生产多粘类芽孢杆菌微生物菌剂

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant