CN108575193A - 一种快速培养桃杂交后代的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种快速培养桃杂交后代的方法，包括以下步骤：首先将杂交种子依次用乙醇和次氯酸浸泡进行无菌化处理，然后用无菌水清洗后将其接种在添加了赤霉素、细胞分裂素、水解乳蛋白、抗坏血酸、蔗糖、萘乙酸的生长培养基上进行培养，然后在室内练苗后进行移栽，既提高了桃杂交种子的出苗率，也打破了种子的休眠，提高了出苗速度。

Description

一种快速培养桃杂交后代的方法
技术领域
本发明涉及植物种子的培养技术领域，更具体的说是涉及一种快速培养桃杂交后代的方法。
背景技术
目前，桃树的杂交育种过程中，杂交种子因存在不同程度的休眠而导致种子不能萌发、出芽速度慢，因此破除种子的休眠对果树的生产有着重要的意义。
但是，利用传统的沙藏技术打破种子的休眠状态，在收藏过程中受湿度、透气性以及种子受污腐烂等多种因素影响，导致杂交种子萌发率和出苗率低，出苗不整齐，严重影响了果树的育苗进程。
因此，如何提高桃树杂交种子的出苗率和出苗速度是本领域技术人员亟需解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种快速培养桃杂交后代的方法。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种快速培养桃杂交后代的方法，包括以下步骤：
步骤(1)：将去壳带种皮的杂交种子用乙醇浸泡，再用次氯酸钠浸泡，然后用无菌水冲洗，获得无菌化种子；
步骤(2):将所述步骤(1)中的无菌化种子接种在生长培养基上，并在培养基内加入水解乳蛋白、抗坏血酸、蔗糖、细胞分裂素、萘乙酸、赤霉素；将所述无菌化种子在4℃温度下进行暗培养3d-5d，再转至温度25℃-30℃下培养，获得杂交幼苗；
步骤(3)：将所述步骤(2)中获得的所述杂交幼苗进行室内练苗，再用清水洗掉根部残余培养基，然后用氯化钙溶液浸沾杂种苗根部，获得移栽幼苗；
步骤(4)：将所述步骤(3)中所述移栽幼苗用清水洗掉根部残余培养基，然后移栽入装有育苗基质的营养钵中。
采用上述技术方案的有益效果是：本发明克服了现有技术中杂交种子出苗率低且出苗速度慢的技术问题。本申请中采用乙醇和次氯酸钠对种子进行消毒，可以获得无菌化的种子，可以防止种子本身带菌；并且消毒后易清除，影响小，采用加入水解乳蛋白、抗坏血酸、蔗糖、细胞分裂素、萘乙酸、赤霉素的生长培养基进行培养种子，可以促进细胞分裂与扩大，诱导种子快速出芽；在室内练苗后再移栽可以让幼苗从封闭稳定的环境向开放变化的环境过渡，慢慢适应自然环境，等瓶苗生长健壮、叶色正常，再移栽，提高幼苗的成活率。
优选的，所述步骤(1)中所述乙醇浓度为80-90w/v％，浸泡时间为30s-50s；所述次氯酸钠浓度为5-6w/v％，浸泡时间为20min～40min。
优选的，所述步骤(2)中的生长培养基中包括大量元素、微量无机盐和有机成分中的一种或者几种。
本发明采用的生长培养基中包括大量元素、微量无机盐和有机成分中的一种或者几种，可以满足种子发芽所需的营养物质、微量元素、有机元素等。
优选的，所述步骤(2)中的生长培养基的制备方法为：加入1mol/L的 NaOH将培养基的pH调整至5.5-6.5，再用0.7％琼脂条固化培养基，然后将培养基在温度为110℃，1个大气压下高压灭菌20min。
优选的，所述步骤(2)中的细胞分裂素为6-卞氨基基嘌呤；所述赤霉素为赤霉素GA3。
优选的，所述步骤(2)中水解乳蛋白浓度为400mg/L；抗坏血酸浓度为 100mg/L；蔗糖浓度为15g/L；细胞分裂素浓度为0.5mg/L；萘乙酸浓度为 0.2mg/L；赤霉素浓度为5mg/L。
优选的，所述步骤(2)中温度在温度25℃-30℃时，光照或黑暗下培养，光照强度为1000lx-1400lx，光周期为14h/d。
优选的，所述步骤(4)中的育苗基质的配比为草炭∶蛭石∶珍珠岩＝2∶ 1∶0.5。
优选的，所述步骤(3)中氯化钙浓度为0.5-1.0w/v％；浸沾杂交幼苗根部时间为6min-8min。
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种快速培养桃杂交后代的方法，其有益效果如下：对种子进行无菌化处理，防止种子携带病菌，可以增强种子抗病能力，提高种子的萌发率，无菌化后再进行接种培养，并且在生长培养基中添加细胞分裂素、赤霉素、萘乙酸，在种子萌发前期，赤霉素迅速解除休眠,促进种子萌发，随后萘乙酸可以有效的促进细胞伸长，有利于根的分化，后期细胞分裂素促进细胞分裂,促进芽的分化. 本发明各激素相互配合，有效的缩短种子的萌发时间，大大提高种子的出苗速度，增加种子的出苗率，经过室内练苗再进行移栽，可以提高幼苗对环境的适应性，增加幼苗的成活率。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
本发明一种快速培养桃杂交后代的方法，包括以下步骤：
步骤(1)：取240颗杂交桃的成熟果实，去掉果肉、果核，取出带种皮的杂交种子，将该桃树杂交种子用80w/v％的乙醇浸泡50s，再用6w/v％的次氯酸钠浸泡20min，然后用无菌水冲洗三次，获得无菌化种子；
步骤(2):将所述步骤(1)中的无菌化种子在无菌条件下剥去种皮，接种在生长培养基上，并在培养基内加入浓度为400mg/L水解乳蛋白、浓度为 100mg/L的抗坏血酸、浓度为15g/L的蔗糖、0.5mg/L的玉米素、浓度为0.2mg/L 的萘乙酸、浓度为5mg/L的赤霉素GA3；将所述无菌化种子在4℃温度下进行暗培养5d，再转至温度25℃下黑暗培养15d，获得杂交幼苗；
其中生长培养基的组成如下：
无机大量元素 工作浓度(mg/L)
NH4NO3 800
KNO3 1900
KH2PO4 170
MgSO4·7H2O 370
Ca(NO3)2 492
无机微量元素
FeSO4·7H2O 27.8
EDTA 37.3
KI 0.83
H3BO3 6.2
MnSO4·4H2O 22.3
ZnSO4·7H2O 8.6
Na2MoO4·2H2O 0.25
CuSO4·5H2O 0.025
CoCl2·6H2O 0.025
有机成分
烟酸 0.5
VB1 0.5
VB6 0.5
甘氨酸 2.0
肌醇 100
步骤(3)：将所述步骤(2)中获得的所述杂交幼苗进行室内练苗4天，再用清水洗掉根部残余培养基，然后用0.5w/v％氯化钙溶液浸沾8min杂种苗根部，获得移栽幼苗；
步骤(4)：将所述步骤(3)中所述移栽幼苗用清水洗掉根部残余培养基，然后移栽入装有经过高压灭菌30min的配比为草炭∶蛭石∶珍珠岩＝2∶1∶ 0.5的育苗基质的营养钵中，喷布500倍多菌灵杀菌剂，薄膜覆盖，罩上遮阳网，保湿防止强光。以后每天喷布一次多菌灵杀菌剂，隔3d-5d喷一次水。3d 后逐渐撤下遮阳网，每天定时放风2h-3h，3周后，小苗长出新叶，可揭去塑料薄膜。精细管理，每月浇灌一次液体肥料，定期进行病虫害防治。
实施例2
本发明一种快速培养桃杂交后代的方法，包括以下步骤：
步骤(1)：取杂交桃的成熟果实，去掉果肉、桃核，取出180粒带种皮的杂交种子，将该杂交种子用85w/v％的乙醇浸泡40s、再用5.5w/v％的次氯酸钠浸泡30min，然后用无菌水冲洗，获得无菌化种子；
步骤(2):将步骤(1)中的无菌化种子接种在生长培养基上，并在培养基内加入浓度为400mg/L水解乳蛋白、浓度为100mg/L的抗坏血酸、浓度为 15g/L的蔗糖、0.5mg/L的6-卞氨基基嘌呤、浓度为0.2mg/L的萘乙酸、浓度为5mg/L的赤霉素GA2；将所述无菌化种子在4℃温度下进行暗培养5d，再转至温度30℃下黑暗培养20d，获得杂交幼苗；
其中生长培养基的组成如下：
步骤(3)：将所述步骤(2)中获得的所述杂交幼苗进行室内练苗5d，再用清水洗掉根部残余培养基，然后用1.0w/v％氯化钙溶液浸沾6min杂种苗根部，获得移栽幼苗；
步骤(4)：将步骤(3)中幼苗移栽入装有经过高压灭菌30min的配比为草炭∶蛭石∶珍珠岩＝2∶1∶0.5的育苗基质的营养钵中，喷布300倍多菌灵杀菌剂，薄膜覆盖，罩上遮阳网，保湿防止强光。以后每天喷布一次多菌灵杀菌剂，隔3d喷一次水。3d后逐渐撤下遮阳网，每天定时放风2h，3周后，小苗长出新叶，可揭去塑料薄膜。精细管理，每月浇灌一次液体肥料，定期进行病虫害防治。
实施例3
本发明一种快速培养桃杂交后代的方法，包括以下步骤：
步骤(1)：取220粒杂交杏的成熟果实，去掉果肉、桃核，取出带种皮的杂交种子,将该杂交种子用90w/v％的乙醇30s,再用5w/v％次氯酸钠浸泡 40min，然后用无菌水冲洗2次，获得无菌化种子；
步骤(2):将步骤(1)中的无菌化种子在无菌条件下剥去种皮接种在生长培养基上，并在培养基内加入浓度为400mg/L水解乳蛋白、浓度为100mg/L 的抗坏血酸、浓度为15g/L的蔗糖、0.5mg/L的激动素、浓度为0.2mg/L的萘乙酸、浓度为5mg/L的赤霉素GA3；将所述无菌化种子在4℃温度下进行暗培养5d，再转至温度25℃下光照培养18天，获得杂交幼苗；
其中，生长培养基的组分如下：
步骤(3)：将步骤(2)中获得的杂交幼苗进行室内练苗3d，再用清水洗掉根部残余培养基，然后用0.75w/v％氯化钙溶液浸沾7min杂种苗根部，获得移栽幼苗；
步骤(4)：将步骤(3)中移栽幼苗用然后移栽入装有经过高压灭菌30min 的配比为草炭∶蛭石∶珍珠岩＝2∶1∶0.5的育苗基质的营养钵中，喷布300 倍多菌灵杀菌剂，薄膜覆盖，罩上遮阳网，保湿防止强光。以后每天喷布一次多菌灵杀菌剂，隔4天喷一次水。3天后逐渐撤下遮阳网，每天定时放风 2.5h，3周后，小苗长出新叶，可揭去塑料薄膜。精细管理，每月浇灌一次液体肥料，定期进行病虫害防治。
观察实施例1-3，在种子接种培养20d后观察其出苗率，在练苗结束，移栽10d后观察其幼苗成活率，其结果如下：
表1观察结果：
以上实施例1-3，由表1观察结果可知，本发明中种子出苗率高，幼苗成活率高，解决了现有技术中桃杂交后代种子出苗率低、成活率低的问题，并且其出苗速度快，成长迅速，与现有技术相比，本发明更能适应大面积发展的需求。
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。对于实施例公开的装置而言，由于其与实施例公开的方法相对应，所以描述的比较简单，相关之处参见方法部分说明即可。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (9)

1.一种快速培养桃杂交后代的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤(1)：将去壳带种皮的杂交种子依次用乙醇、次氯酸钠浸泡，然后用无菌水冲洗，获得无菌化种子；
步骤(2):将所述步骤(1)中的无菌化种子接种在生长培养基上，并在生长培养基内加入水解乳蛋白、抗坏血酸、蔗糖、细胞分裂素、萘乙酸和赤霉素；将所述无菌化种子在4℃温度下进行暗培养3d-5d，再转至温度25℃-30℃下培养，获得杂交幼苗；
步骤(3)：将所述步骤(2)中获得的所述杂交幼苗进行室内练苗，再用清水洗掉根部残余培养基，然后用氯化钙溶液浸沾杂种苗根部，获得移栽幼苗；
步骤(4)：将所述步骤(3)中所述移栽幼苗用清水洗掉根部残余培养基，然后移栽入装有育苗基质的营养钵中。
2.根据权利要求1所述的一种快速培养桃杂交后代的方法，其特征在于，所述步骤(1)中所述乙醇浓度为80-90w/v％，浸泡时间为30s-50s；所述次氯酸钠浓度为5-6w/v％，浸泡时间为20min～40min。
3.根据权利要求1所述的一种快速培养桃杂交后代的方法，其特征在于，所述步骤(2)中的生长培养基中包括大量元素、微量无机盐和有机成分中的一种或者几种。
4.根据权利要求1所述的一种快速培养桃杂交后代的方法，其特征在于，所述步骤(2)中的生长培养基的制备方法为：加入1mol/L的NaOH将所述生长培养基的pH调整至5.5-6.5，再用0.7％琼脂条固化培养基，然后将培养基在温度为110℃，1个大气压下灭菌20min。
5.根据权利要求1所述的一种快速培养桃杂交后代的方法，其特征在于，所述步骤(2)中的细胞分裂素为6-卞氨基基嘌呤；所述赤霉素为赤霉素GA3。
6.根据权利要求1所述的一种快速培养桃杂交后代的方法，其特征在于，所述步骤(2)培养基中水解乳蛋白浓度为400mg/L；抗坏血酸浓度为100mg/L；蔗糖浓度为15g/L；细胞分裂素浓度为0.5mg/L；萘乙酸浓度为0.2mg/L；赤霉素浓度为5mg/L。
7.根据权利要求1所述的一种快速培养桃杂交后代的方法，其特征在于，所述步骤(2)中温度为25℃-30℃时，光照条件为黑暗或者光照强度为1000lx-1400lx。
8.根据权利要求1所述的一种快速培养桃杂交后代的方法，其特征在于，所述步骤(4)中的育苗基质的重量配比为草炭∶蛭石∶珍珠岩＝2∶1∶0.5。
9.根据权利要求1所述的一种快速培养桃杂交后代的方法，其特征在于，所述步骤(3)中氯化钙浓度为0.5-1.0w/v％；浸沾杂交幼苗根部时间为6min-8min。
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