CN108562735A - 一种碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液及其制备方法 - Google Patents

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    • G01N21/76—Chemiluminescence; Bioluminescence

Abstract

本发明公开了一种碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液,含有95‑120mg/L的((4‑氯苯基)硫代)(10‑甲基吖啶‑9(10H)‑亚基)甲基磷酸二钠。进一步的，还含有3.0‑4.5mg/L的光泽精和1g/L的十二烷基磺酸钠、0.1‑1.0mM的氯化镁和/或5‑15mg/L的亚硫酸钠。在18℃‑25℃温度范围内pH值为8.85±0.1，相对发光强度RLU≤1500，碱性磷酸酶浓度为0.1ug/mL时，发光强度RLU值达32000000以上。本发明的碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液可在100s内迅速到达平台期，发光强度高，持续时间长，可达30分钟以上，满足了临床检测的需要，并且主要的性能指标已经达到了与国际相同水准，从而大大降低了发光底物的成本，提高化学发光试剂的市场竞争力和核心技术的控制力。

Description

一种碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液及其制备方法
技术领域
本发明涉及免疫检测技术领域，具体为一种碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液及其制备方法。
背景技术
酶促化学发光底物液属于免疫诊断技术领域。本世纪70年代中期Arakawe首次报道用发光信号进行酶免疫分析，利用发光的化学反应分析超微量物质，特别是用于临床免疫分析中检验超微量活性物质。目前，这一技术已成为临床医学的常规检测手段。化学发光免疫分析(Chemiluminescence Immunoassay，CLIA)是将化学发光或生物发光体系与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。其检测原理与放射免疫(RIA)和酶免疫(EIA)相似，不同之处是以发光物质代替放射性核素或酶作为标记物，并借助其自身的发光强度直接进行测定。化学发光免疫分析既具有放射免疫的高灵敏度，又具有酶联免疫的操作简便、快速的特点，易于标准化操作。且测试中不使用有毒有害的试剂，试剂保持期长，应用于生物学、医学研究和临床实验诊断工作，成为非放射性免疫分析法中最有前途的方法之一。
化学发光系统的原理在于免疫反应中的酶作用于发光底物。发光底物在酶的作用下，底物发生化学反应并释放出大量的能量，产生激发态的中间体。这种激发态中间体，当其回到稳定的基态时，可同时发射出光子。利用发光信号测量仪器即可测量光量子产额，该光量子产额与样品中的待测物质的量成正比。由此可以建立标准曲线并计算样品中待测物质的含量。
传统的化学发光底物液是由A液(氧化剂)和B液(发光剂)二部分组成，A液和B液分开保存，使用时将A液和B液等体积混合，在10分钟之内用完，否则其稳定性就会变差，使其测试信号值急剧下降、检测范围明显变窄，稳定性变差，不便于临床应用。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有的化学发光底物液需要将A液和B液等体积混合，且需要在10分钟之内用完的缺陷，提供一种碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液及其制备方法。
为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：
一种碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液,含有95-120mg/L的((4-氯苯基)硫代)(10-甲基吖啶-9(10H)-亚基)甲基磷酸二钠。
进一步的，还含有3.0-4.5mg/L的光泽精和1g/L的十二烷基磺酸钠。
进一步的，还含有0.1-1.0mM的氯化镁。
进一步的，还可以含有5-15mg/L的亚硫酸钠。
上述碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液在18℃-25℃温度范围内pH值为8.85±0.1，相对发光强度RLU≤1500，碱性磷酸酶浓度为0.1ug/mL时，发光强度RLU值达32000000以上。
其制备方法为，先配制0.05-0.35mol/L的tirs溶液，加入3.0-4.5mg/L的十二烷基磺酸钠、5-15mg/L的亚硫酸钠，调节pH值后，加入((4-氯苯基)硫代)(10-甲基吖啶-9(10H)-亚基)甲基磷酸二钠和光泽精。
本发明的碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液可在100s内迅速到达平台期，发光强度高，持续时间长，可达30分钟以上，满足了临床检测的需要，并且主要的性能指标已经达到了与国际相同水准，从而大大降低了发光底物的成本。提高化学发光试剂的市场竞争力和核心技术的控制力。
附图说明
附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：
图1是TSH临床样本浓度与发光强度RLU值做线性回归图。
具体实施方式
以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
一种碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液,含有110mg/L的((4-氯苯基)硫代)(10-甲基吖啶-9(10H)-亚基)甲基磷酸二钠、3.8mg/L的光泽精、1g/L的十二烷基磺酸钠、0.5mM的氯化镁和10mg/L的亚硫酸钠。
实施例2
一种碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液,含有95mg/L的((4-氯苯基)硫代)(10-甲基吖啶-9(10H)-亚基)甲基磷酸二钠、3.0mg/L的光泽精、1g/L的十二烷基磺酸钠、0.1mM的氯化镁和5mg/L的亚硫酸钠。
实施例3
一种碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液,含有120mg/L的((4-氯苯基)硫代)(10-甲基吖啶-9(10H)-亚基)甲基磷酸二钠、4.5mg/L的光泽精、1g/L的十二烷基磺酸钠、1.0mM的氯化镁和15mg/L的亚硫酸钠。
实施例1-3的碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液的制备方法为先配制0.05-0.35mol/L的tirs溶液，加入十二烷基磺酸钠和亚硫酸钠，调节pH值为8.85±0.1，然后加入((4-氯苯基)硫代)(10-甲基吖啶-9(10H)-亚基)甲基磷酸二钠和光泽精。
应用实施例1的碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液进行双抗体夹心法检测人血清中TSH的含量，实验步骤如下：
表1 TSH标准品的浓度及对应的发光值
在反应管中分别加入异硫氰酸荧光素标记的TSH抗体30μL、碱性磷酸酶标记的TSH抗体30μL、人血清样本100μL或TSH标准品，混匀；37℃反应30分钟；
1)加入磁微粒试剂30μL；37℃反应5分钟；
2)加入300μL洗液清洗，清洗3次；
3)加入实施例1中制备的化学发光底物液200μL；
4)化学发光检测仪检测发光强度RLU值。图1中显示了不同的TSH临床样本浓度与发光强度RLU值做线性回归图。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液,其特征在于，含有95-120mg/L的((4-氯苯基)硫代)(10-甲基吖啶-9(10H)-亚基)甲基磷酸二钠。
2.如权利要求1所述的碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液,其特征在于，还含有3.0-4.5mg/L的光泽精和1g/L的十二烷基磺酸钠。
3.如权利要求2所述的碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液,其特征在于，还含有0.1-1.0mM的氯化镁。
4.如权利要求3所述的碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液,其特征在于，还含有5-15mg/L的亚硫酸钠。
5.如权利要求1-4任一项所述的碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液,其特征在于，在18℃-25℃温度范围内pH值为8.85±0.1，相对发光强度RLU≤1500，碱性磷酸酶浓度为0.1ug/mL时，发光强度RLU值达32000000以上。
6.如权利要求2所述的碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：先配制0.05-0.35mol/L的tirs溶液，加入3.0-4.5mg/L的十二烷基磺酸钠、5-15mg/L的亚硫酸钠，调节pH值后，加入((4-氯苯基)硫代)(10-甲基吖啶-9(10H)-亚基)甲基磷酸二钠和光泽精。
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