CN108553531A - 一种抑菌的药物组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种抑菌的药物组合物及其制备方法和应用,属于抑菌组合物领域。所述抑菌的药物组合物主要由下列重量份的原料药制备得到:五倍子4份,地榆6~12份,黄芩1~5份,苏木1~5份。本发明还提供一种该药物组合物的制备方法,包括如下步骤:将所述原料药粉碎后按比例混合;或者,制备包含所述原料药的有效成分的醇提取液或者水提取液,然后按比例混合;制成药学上可接受的制剂。本发明还提供一种该药物组合物在制备用于预防和/或治疗维氏气单胞菌感染引起的淡水水产动物细菌病的药物中的应用。本发明的组合物可特别应用于罗非鱼细菌病的防治,由此降低水产动物细菌性疾病给渔业生产造成的危害以及经济损失。
Description
技术领域
本发明涉及抑菌组合物的领域,具体地,涉及一种抑菌的药物组合物及其制备方法和应用。
背景技术
维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)为革兰氏阴性菌,属于弧菌科气单胞菌属,致病能力强,分布广泛,给水产养殖业、禽类以及人类健康带来严重的危害。维氏气单胞菌作为一种条件致病菌,寄主范围广泛,可引起人的伤口感染、腹泻和败血症等多种疾病。因此,维氏气单胞菌已成为我国淡水养殖鱼类暴发性疾病的主要病原菌,引起鱼类及其他水生动物多种疾病,给水产养殖业带来了严重的损失
罗非鱼隶属于鲈形目、鲈形亚目、丽鱼科、罗非鱼属(亦称丽鲷科,丽鲷属)。该属鱼类原产非洲,现已成为世界性养殖品种。目前,我国主要的养殖品种吉富罗非鱼(GeneticImprovement of Farmed Tilapia)。抗病力强是罗非鱼被广泛养殖的一个重要因素。但近年来罗非鱼的病害日趋严重,2009年广东海南养殖罗非鱼链球菌病的暴发造成了巨大损失,病害已成为制约罗非鱼健康养殖发展的一个关键因素,因此有必要对养殖罗非鱼的病害进行严密监控。
目前大多采用各种化学药物进行治疗,然而化学药物不仅容易导致病原菌产生耐药性,而且因药物蓄积而导致鱼体药物残留及水环境污染。中草药是中华传统文化的瑰宝,在人类繁衍生息、不断发展壮大过程中发挥着重要的作用。是指对人、动物体具有治病作用的天然药物。相对于化学药物而言,天然中草药具有无毒、无副作用、无残留、无污染环境的优势,且具有抑菌杀菌、清热解毒、促进康复、增强非特异性免疫功能等作用。
建立在传统中医药理论和现代药剂学基础上的天然中草药,具有原料多样性,成分复杂性的特点。其中既有蛋白质、氨基酸、糖类、脂类、维生素和微量元素等营养物质,又含有生物碱类、黄酮类、挥发油类、鞣质、色素、皂苷等多种生物活性物质。因此,中草药既有营养功能,又具有促进机体糖代谢、蛋白质和酶的合成,提高抗原抗体反应,调节免疫机能,缓解应激,改善体内色素和风味物质沉积,以及特异和非特异抑菌杀菌等功能,不但在体外显示了对细菌有很强的杀灭作用,而且在体内也可通过提高机体的免疫力,间接地杀灭病原体。这种多成分、多功能特点使得天然中草药添加剂更能符合动物机体脏腑功能的相互协调和整体统一规律,其作用的全面性是其他单一化学添加剂不能比拟的。今后还需进一步研究提取物中各成分的抑菌活性,以及药物在体内的药效学和毒理研究,提高其在生产应用中的安全性,有关进一步研究将会继续报道。
近年来,关于中草药提取物用于鱼类常见致病菌的抑菌研究,以及中草药用于鱼类免疫增强剂的研究已成为当下鱼类病害防治的研究热点。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于抑菌的有效中草药药物组合物,该组合物可有效地抑制致病性维氏气单胞菌(Aeromonas veronii),从而可用于该菌引起的鱼类细菌病的预防和治疗。
本发明的另一个目的是提供一种抑菌的药物组合物的制备方法。
本发明的第三个目的是提供一种抑菌的药物组合物的应用。
为解决上述技术问题,本发明采用如下技术方案:
本发明提供一种抑菌的药物组合物,主要由下列重量份的原料药制备得到:五倍子4份,地榆6~12份,黄芩1~5份,苏木1~5份。
进一步地,主要由下列重量份的原料药制备得到:五倍子4份,地榆7~9份,黄芩1~3份,苏木1~3份。
在本发明的一个优选实施方案中,主要由下列重量份的原料药制备得到:五倍子4份,地榆8份,黄芩2份,苏木2份。
进一步地,所用的原料药还可进一步包括选自1~10重量份的黄莲、艾叶、虎杖以及大黄中的一种或多种。
另一方面,提供一种所述的抑菌的药物组合物的制备方法,包括如下步骤:
1)将所述原料药粉碎后按比例混合;
或者制备包含所述原料药的有效成分的醇提取液或者水提取液,然后按比例混合;
2)制成药学上可接受的制剂。
进一步地,原料药中的有效成分为水提取,水提取液的制备方法为:
1)取原料药50重量份加入500重量份的无菌蒸馏水中,液面浸过原料药,浸泡一段时间,然后高温煎煮1~1.5h;
2)用纱布过滤药液,收集滤液,药渣加无菌蒸馏水500重量份,继续煎煮30~45min,过滤药液,混合两次药液进行旋蒸浓缩,最终定容至50重量份,则原料药的浓度为1g/mL,获得原料药原液,低温保存备用。
进一步地,所述步骤1)的浸泡时间为30min~1h;所述步骤2)的纱布采用4层纱布。
在上述方法中,所述步骤1)之前还包括如下步骤:采用维氏气单胞菌(Aeromonasveronii biovar sobria,TE151228)来筛选所述原料药的比例。
再一方面,提供一种所述的抑菌的药物组合物的应用,所述的药物组合物在制备用于预防和/或治疗维氏气单胞菌感染引起的细菌病的药物中的应用,尤其在预防和/或治疗维氏气单胞菌感染引起的淡水水产动物的细菌病的应用效果更好。
进一步地,所述淡水水产动物为淡水鱼类,所述淡水鱼类为罗非鱼。
进一步地,尤其在预防和/或防治维氏气单胞菌TE151228(Aeromonasveroniibiovar sobria)TE151228引起的细菌病的应用方面效果显著。
由于采用上述技术方案,本发明至少具有以下优点:
本发明的药物组合物得到的中草药提取物,分别对维罗纳气单胞菌的体外抑菌活性进行了研究,并筛选出优势组方,提供了一种有效应用于水产动物养殖病害防治的中药组合物,该组合物可特别应用于罗非鱼细菌病的防治,由此降低水产动物细菌性疾病给渔业生产造成的危害以及经济损失。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明,但本发明不局限于下述实施例,任何在本发明的启示下得出的与本发明相同或相近似的产品,均在保护范围之内。
本发明人选择大量单味中药进行鱼类细菌性疾病的抑菌试验,从中获得抑菌效果好的单味药,用其不同种类、数量、比例进行组方,再采用抑菌效果试验从多种复方中筛选出抑菌效果最好的复方。本发明人还进行了本发明组合物的体内药效学和毒理试验,因此提高了其在生产应用中的有效性和安全性。
本发明所提供的用于抑菌的药物组合物是由包括下列重量份的原料药制备得到:五倍子4份,地榆6~12份,黄芩1~5份,苏木1~5份。
体外抑菌效果试验结果表明,本发明的复合方剂的抑菌活性和MIC较单味药均有不同程度的增强,这表明这四味药在抗菌活性方面具有协同作用。
本发明的药物组合物可应用于制备用于抑制维罗纳气单胞菌的药物,因此可应用于制备用于预防和/或治疗维罗纳气单胞菌感染引起的淡水水产动物细菌病的药物。所述淡水水产动物包括淡水鱼类等,例如罗非鱼。
以下为本发明的优选实施例,其中所用原材料如无特别说明,均为市售购买产品。
实施例1:
药物组合物的制备:
药物组合物配方:五倍子4份、地榆8份、苏木2份、黄芩2份,药剂制备方法为:
将原料药五倍子、地榆、苏木、黄芩各50g分别加入500ml无菌蒸馏水,液面浸过原料药,浸泡30min后,然后用文火煎煮1h;用四层纱布过滤药液,收集滤液,药渣加无菌蒸馏水500mL,继续煎煮30min,过滤药液,混合两次药液进行旋蒸浓缩,最终定容至50g,则原料药的浓度为1g/mL,获得原料药原液,将各原料药的提取液按体积比4:8:2:2混合(对应于各原料药的重量比),浓缩、喷雾干燥,获得干燥提取物,得到组合物1。
实施例2:
药物组合物的制备:
药物组合物配方:五倍子4份、地榆6份、苏木1份、黄芩5份,药剂制备方法为:
将原料药五倍子、地榆、苏木、黄芩各50g分别加入500ml无菌蒸馏水,液面浸过原料药,浸泡30min后,然后用文火煎煮1h;用四层纱布过滤药液,收集滤液,药渣加无菌蒸馏水500mL,继续煎煮30min,过滤药液,混合两次药液进行旋蒸浓缩,最终定容至50g,则原料药的浓度为1g/mL,获得原料药原液,将各原料药的提取液按体积比4:6:1:1混合(对应于各原料药的重量比),浓缩、喷雾干燥,获得干燥提取物,得到组合物2。
实施例3:
药物组合物的制备:
药物组合物配方:五倍子4份、地榆12份、苏木5份、黄芩1份,药剂制备方法为:
将原料药五倍子、地榆、苏木、黄芩各50g分别加入500ml无菌蒸馏水,液面浸过原料药,浸泡30min后,然后用文火煎煮1h;用四层纱布过滤药液,收集滤液,药渣加无菌蒸馏水500mL,继续煎煮30min,过滤药液,混合两次药液进行旋蒸浓缩,最终定容至50g,则原料药的浓度为1g/mL,获得原料药原液,将各原料药的提取液按体积比4:12:5:1混合(对应于各原料药的重量比),浓缩、喷雾干燥,获得干燥提取物,得到组合物3。
实施例4:
药物组合物的制备:
药物组合物配方:五倍子4份、地榆12份、苏木5份、黄芩1份、艾叶4份,药剂制备方法为:
将原料药五倍子、地榆、苏木、黄芩、艾叶4份各50g分别加入500ml无菌蒸馏水,液面浸过原料药,浸泡30min后,然后用文火煎煮1h;用四层纱布过滤药液,收集滤液,药渣加无菌蒸馏水500mL,继续煎煮30min,过滤药液,混合两次药液进行旋蒸浓缩,最终定容至50g,则原料药的浓度为1g/mL,获得原料药原液,将各原料药的提取液按体积比4:12:5:1:4混合(对应于各原料药的重量比),浓缩、喷雾干燥,获得干燥提取物,得到组合物4。
实施例5:
药物组合物的制备:
药物组合物配方:五倍子4份、地榆8份、苏木2份、黄芩2份,药剂制备方法为:
用球磨粉碎机把上述各种原料药分别进行微粉化处理,达到200目,按上述比例进行混合,得到组合物5。
实施例6:
药物组合物的制备:
药物组合物配方:五倍子4份、地榆8份、苏木2份、黄芩2份,药剂制备方法为:
用球磨粉碎机把上述各种原料药分别进行微粉化处理,达到80目,按上述比例进行混合,得到组合物6。
实施例7:
药物组合物的制备:
药物组合物配方:五倍子4份、地榆7份、苏木3份、黄芩3份,药剂制备方法为:
用球磨粉碎机把上述各种原料药分别进行微粉化处理,达到200目,按上述比例进行混合,得到组合物7。
实施例8:
药物组合物的制备:
药物组合物配方:五倍子4份、地榆9份、苏木1份、黄芩1份,药剂制备方法为:
用球磨粉碎机把上述各种原料药分别进行微粉化处理,达到200目,按上述比例进行混合,得到组合物8。
对比例1:
将五倍子4份用球磨粉碎机把上述各种原料药分别进行微粉化处理,达到200目,按上述比例进行混合,得到组合物9。
效果试验例1体外抑菌实验
1材料与方法
1.1材料
1.1.1试验选取的中草药材中草药黄莲、地榆、连翘、艾叶、金银花、苏木、五倍子、虎杖、黄芩、百部、大黄、蛇床子、鱼腥草、青蒿、苦参、莪术、秦皮、知母、炒山楂、菊花、板蓝根、郁金、三棱、厚朴、石榴皮、余苷子等中草药,购自北京同仁堂药房。
1.1.2试验菌种维氏气单胞菌(Aeromonas veronii biovar sobria)TE151228,由北京市水产科学研究所保存。已对菌种进行了形态、颜色、生理反应和16S rRNA基因序列分析等鉴定。
1.1.3主要试剂和仪器
普通营养琼脂培养基、普通营养肉汤培养基购自北京奥博星生物技术有限公司;NaCl购自北京化学试剂公司。
微波炉(G80F23N 1P-M8CS0,格兰仕);高压灭菌锅(YXQLS-50S,上海博迅实业有限公司医疗设备厂);生化培养箱(HPS-280,哈尔滨市东联电子技术开发有限公司);冰箱(BCD-215KA GA,海尔);摇床(THZ-C,江苏太仓市实验设备厂);旋转蒸发仪(RE52CS-1,上海亚荣生化仪器厂);全自动中药壶(JYH-A30A1,广东小熊电器有限公司);纯水器(F6EN61663,法国MILLI-PORE);电子天平(1712,德国Sarto rius);烘箱(101型,北京利康);生物安全柜(96220,美国BAKER);及纱布、玻璃器皿等。
1.2中草药提取物的制备分别取上述26种中草药各50g加入500mL无菌蒸馏水,液面浸过中草药,浸泡30min后,用全自动中药壶煎煮1h,用4层纱布过滤药液,收集滤液。药渣加水500mL,继续煎煮30min,过滤药液;合并两次药液到旋蒸仪中进行旋蒸浓缩,最终定容至50mL(此时中草药原药浓度为1g/mL),即为100%中草药原液。高压灭菌后置4℃冰箱中保存待用。
1.3体外抑菌试验
1.3.1菌悬液的制备用接种针挑取1环琼脂固体培养基培养的罗非鱼维氏气单胞菌(Aeromonas veronii biovar sobria)TE151228于3mL营养肉汤培养基中,220r/min、30℃振荡培养过夜。取过夜培养的菌液3μL至3mL营养肉汤培养基中,220r/min、30℃振荡培养18h,作为试验菌。用紫外分光光度计测定菌弄,并以无菌生理盐水将菌悬液调至3作为试8CFU/mL。
1.3.2最低抑菌浓度(MIC)的测定采用中药抗菌试验试管法。做每种中草药抑菌试验时,需取无菌试管44支,分成4组,每组11支,每种中草药做3组平行,1组阴性对照(只加药不加菌),将所有试管中提前加入2.5mL的营养肉汤培养基。前3组每组的第1管加2.5mL试验药液混匀后,依次进行2倍稀释,使1-10管药液浓度分别为500、250、125、62.5、31.25、15.63、7.8、3.91、1.95、0.97mg/mL,第11管不加任何药液只作为菌液对照管。其中3组试管中每管加菌液125μL,充分混匀后均放入恒温振荡培养箱中,220r/min、30℃振荡培养24h,观察试验结果。药液对照管均无细菌生长,菌液对照管第11管都有细菌生长,试验方为有效。以抑制试验菌生长的药液最高稀释度为该药物对该试验菌的抗菌效价,以其相应药物浓度为最低抑菌浓度(Minimal Inhibitory Concentration,简称MIC),试验结果如表1所示。
表1中草药提取物对维氏气单胞菌的最低抑菌浓度检测结果
注:“+”表示有细菌生长,“-”示有表示无细菌生长。
由表1试验结果可知,26种中草药提取物对罗非鱼维氏气单胞菌(Aeromonasveronii biovar sobria)TE151228均表现出不同的抑菌活性,且MIC为0.97~250mg/mL。其中,中草药抑菌效果最好的是五倍子和黄芩,其MIC是0.97mg/mL,其次为苏木和黄莲,两者的MIC均为均为1.95mg/mL,地榆的抑菌效果次之,其MIC为3.91mg/mL,而艾叶、虎杖、秦皮以及大黄的抑菌效果次之,他们的MIC为7.80mg/mL;而知母的MIC最低,仅为250mg/mL。
1.3.3最小杀菌浓度(MBC)的测定在MIC实验的基础上,取各种药物的MIC和浓度高于MIC的各个梯度试管中的培养物0.1mL置于营养琼脂平板上进行涂布,在30℃培养箱中培养36h,然后观察有无菌落形成,无菌落形成试管的最低药物浓度即为该种药物对病原菌的最小杀菌浓度(Minimal Bactericidal Concentration,简称MBC),试验结果如表2所示。
表2中草药提取物对维氏气单胞菌的最小杀菌浓度检测结果
“+”表示有细菌生长,“-”示有表示无细菌生长。
由表2试验结果可知,26种中草药提取物对罗非鱼维氏气单胞菌均表现出不同的杀菌活性,且MBC为0.97~500mg/mL。其中,中草药杀菌效果最好的是五倍子和黄芩,其MBC是0.97mg/mL;其次为黄莲,MBC均为均为1.95mg/mL,苏木、地榆次之,分别为3.91mg/mL、7.80mg/mL;而苦参的MBC最低,仅为500mg/mL。
综合表1和表2的实验结果,拟选取五倍子、黄芩、苏木和地榆进行组方,考虑到黄莲口适性较差(味苦)的原因,仅将黄莲作为备选成分,艾叶、虎杖以及大黄也可以作为备选添加组分。
1.3.4组方试验注:中药复方是中医临床用药的主要形式,在中医理论的指导下,依传统配伍法则(君、臣、佐、使)根据不同药效将多种中药进行组方,使各种药材的有效成分联为一体,发挥整体复合作用,以达到中医整体治疗的目的。按中药配伍原则,并根据中草药提取物对罗非鱼维氏气单胞菌的最低抑菌浓度(MIC)结果,最后试验筛选4种中草药进行组方。按L9(34)对所选4种中草药在组方中的浓度设计正交试验,各因素(药物)和水平(药物浓度)见表3。抑菌试验采用打孔法。试验菌培养同1.3.1,计算试验菌浓度。取试验菌液0.1mL均匀涂布于灭菌营养琼脂培养基表面,然后每个平板用玻璃打孔器打3个直径6mm的圆孔,保持相邻两孔的距离大于2cm,以免相邻的抑菌圈重叠而影响测量准确性向,每个圆孔里滴加50uL的不同组方药液。30℃培养24h后,测量平板上中草药抑菌圈直径大小。每个试验组方做6个重复,结果取平均值,以代表该种组合药液的抑菌效果。
表3正交试验因素水平表
按照表3的正交试验因素水平表进行正交设计,确定五倍子、黄芩、苏木和地榆四种中草药的最佳组合,结果见表4。采用SPSS软件对实验数据进行方差分析,结果见表5。
表4 L9(35)正交试验结果
表5方差分析表
因变量:抑菌圈直径(mm)
从表6方差分析结果可以看出,因素A(中药五倍子)对实验结果影响极为显著(P<0.01),因素C和D对实验结果影响不大,所以对维氏气单胞菌抑制效果的影响作用为五倍子(A)>地榆(B)>苏木(D)>黄芩(C),其中A(五倍子)在复方中对维氏气单胞菌的抑制作用起着主要作用。因此确定最佳配方组合为A3B3C2D2。
根据正交试验结果,选取A3B3C2D2为中草药组方的最佳水平,按该组方与正交试验中抑菌效果较好的第2组(A3B2C1D2)和第8组(A3B1C1D3)配方再次进行抑菌试验对比验证,同时以抗生素左氧氟沙星作为阳性参照。结果如表7所示,A3B3C2D2组方的抑菌效果最好;且其浓度为1mg/mL时的抑菌效果与阳性对照药物左氧氟沙星相当(≥的抑菌效果)。综合考虑各因素水平,确定抑制维氏气单胞菌TE151228的最优配方组合为A3B3C2D2,即最佳组方为五倍子:地榆:黄芩:苏木(4:8:2:2)
表7各组方抑菌实验对比
效果试验例2本发明组合物对罗非鱼细菌病的预防或治疗效果试验
1.1药物组合物制剂的制备
将各组合物1~9微粉按占总饵料重量的5%添加比例拌料投喂。
1.2中草药制剂在罗非鱼暴发性细菌病防治中使用的有效性评价
1.2.1预防性试验:
实验分为3种处理:
空白处理饵料:将面粉按占总饵料重量的5%添加比例搅拌料作为空白组饵料;
对照处理饵料:将组合物9分别按占饵料重量5%添加比例搅拌分别作为对照组的药饵;
实验处理饵料:将组合物1~8分别按占饵料重量5%添加比例搅拌分别作为实验组1~8药饵。
空白组饵料、对照组药饵处理分别有4个重复,选取实验组1和5药饵处理分别有4个重复,每个桶(即每个重复)15尾罗非鱼,初始体重150g左右。每天投喂两次药饵,上、下午各1次,连喂7天,7天为一个疗程,隔一个星期后(期间喂空白组饵料),再进行一个疗程的投喂,两个疗程结束后取样测定生长指标和特异性免疫指标。两个疗程结束后,剩下的罗非鱼用维氏气单胞菌TE151228进行背鳍基部攻毒,测定药物组合物对其抗病能力的影响,实验结果见表8,可知,本发明的组合物相对对照组的单个五倍子的预防效果更优,说明本发明的组合物具有明显的复配增效效果。
表8预防性实验结果
注:每一行上标字母不同表示有显著差异(P<0.05)。
通过记录预防性实验10日攻毒累计成活率,空白组的罗非鱼在第五天开始出现比较集中的死亡率,而实验组出现死亡较低且时机并不固定,即本发明的药物组合物对增加罗非鱼的抵抗力具有普适性。
需要说明的是,在实验及应用阶段,本发明的各实验组组的药饵对维氏气单胞菌病的预防效果均显著,预防后的成活率高达96±3.42%。本发明的发明人认为本发明所披露的配方组合物在预防罗非鱼维氏气单胞菌病方面效果显著,具有复配增效效果。
选取空白组、对照组、实验组1、实验组5的对各组实验的罗非鱼进行非特异性免疫指标的检测,如表9所示,试验结果显示,各组的非特异性免疫指标之间差异不大,说明各组在接触到致病菌之前处于免疫稳态,但从表8感染成活率来看,添加药物组合物的对照组和实验组对罗非鱼维氏气单胞菌具有一定的保护力,且实验组的作用明显强于对照组,进一步说明本发明的组合物具有明显的复配增效效果。
表9预防性实验的非特异性免疫指标检测
注:每一行上标字母不同表示有显著差异(P<0.05)。
为了进一步验证药物组合物对感染细菌的罗非鱼的治疗作用,进行治疗性试验。
1.2.2治疗性试验:
实验分为3个处理:
空白处理饵料:将面粉按占总饵料重量的5%添加比例搅拌料作为空白组饵料;
对照处理饵料:将组合物9分别按占饵料重量5%添加比例搅拌分别作为对照组的药饵;
实验处理饵料:将组合物1、组合物5分别按占饵料重量5%添加比例搅拌分别作为实验组1、5药饵。
空白组饵料、对照组药饵、实验组药饵处理分别有4个重复,每个桶(即每个重复)15尾罗非鱼,初始体重150g左右。所有实验鱼均先用维氏气单胞菌TE151228进行感染,感染浓度为3.7×105CUF/ml,注射剂量0.2ml,期间饲喂空白组饲料,观察10日后,死掉的鱼取肝脏样品分离菌种,保存在试管中待鉴定。存活的鱼就在实验桶中开始投喂各组相对应的饲料。添加量5%重量,每天投喂两次药饵,上下午各1次,连喂7天,7天为一个疗程。隔一个星期后(期间喂空白组饲料),再进行一个疗程的投喂。两个疗程结束后,每个重复取鱼3尾测定生长指标和非特异性免疫指标。
表10预防性实验的非特异性免疫指标检测
注:每一行上标字母不同表示有显著差异(P<0.05)。
从表10中结果可见,各组的非特异性免疫指标之间均无显著差异,但对于一个药物的评价,最有力的证据就是感染后的存活率。在用致病菌感染并经过两个疗程的治疗后,药饵组的终末存活率明显高于空白组,因此说明该中草药组合物对罗非鱼的维氏气单胞菌病有一定的治疗效果,且实验组的终末存活率明显强于空白组、对照组终末存活率,说明实验组的药物组合物针对罗非鱼的维氏气单胞菌病的治疗效果更加显著,而且本发明的组合物相对对照组的单个五倍子的预防效果更优,说明本发明的组合物具有明显的复配增效效果。
需要说明的是,在实验及应用阶段,本发明的各实验组组的药饵对维氏气单胞菌病具有不错的治疗效果,治疗效果与表10的实验组相当。本发明的发明人认为本发明所披露的配方组合物在治疗罗非鱼维氏气单胞菌病方面效果显著,具有复配增效效果。
综上所述,本发明的药物组合物相对于单组份的中药组合物对罗非鱼的维氏气单胞菌病的预防和治疗都有显著的增益效果,降低水产动物细菌性疾病给渔业生产造成的危害以及经济损失。
以上所述,仅是本发明的较佳实施例而已,并非对本发明作任何形式上的限制,本领域技术人员利用上述揭示的技术内容做出些许简单修改、等同变化或修饰,均落在本发明的保护范围内。
Claims (10)
1.一种抑菌的药物组合物,其特征在于,主要由下列重量份的原料药制备得到:五倍子4份,地榆6~12份,黄芩1~5份,苏木1~5份。
2.根据权利要求1所述的抑菌的药物组合物,其特征在于,主要由下列重量份的原料药制备得到:五倍子4份,地榆7~9份,黄芩1~3份,苏木1~3份。
3.根据权利要求2所述的抑菌的药物组合物,其特征在于,主要由下列重量份的原料药制备得到:五倍子4份,地榆8份,黄芩2份,苏木2份。
4.根据权利要求1至3任一所述的抑菌的药物组合物,其特征在于,所用的原料药还选自1~10重量份的黄莲、艾叶、虎杖以及大黄中的一种或多种。
5.一种权利要求1至4任一所述的抑菌的药物组合物的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
1)将所述原料药粉碎后按比例混合;
或者,制备包含所述原料药的有效成分的醇提取液或者水提取液,然后按比例混合;
2)制成药学上可接受的制剂。
6.根据权利要求5所述的抑菌的药物组合物的制备方法,其特征在于,原料药中的有效成分为水提取,水提取液的制备方法为:
1)取原料药50重量份加入500重量份的无菌蒸馏水中,液面浸过原料药,浸泡一段时间,然后高温煎煮1~1.5h;
2)用纱布过滤药液,收集滤液,药渣加无菌蒸馏水500重量份,继续煎煮3045min,过滤药液,混合两次药液进行旋蒸浓缩,最终定容至50重量份,获得原料药原液,低温保存备用。
7.一种权利要求1至4任一所述的抑菌的药物组合物的应用,其特征在于,所述的药物组合物在制备用于预防和/或治疗维氏气单胞菌感染引起的细菌病的药物中的应用。
8.根据权利要求7所述的抑菌的药物组合物的应用,其特征在于,所述的药物组合物在制备用于预防和/或治疗维氏气单胞菌感染引起的淡水水产动物细菌病的药物中的应用。
9.根据权利要求8所述的抑菌的药物组合物的应用,其特征在于,所述淡水水产动物为淡水鱼类,所述淡水鱼类为罗非鱼。
10.根据权利要求7至9任一所述的抑菌的药物组合物的应用,其特征在于,所述维氏气单胞菌为维氏气单胞菌(Aeromonas veronii biovar sobria)TE151228。
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CN102240323A (zh) * | 2011-05-11 | 2011-11-16 | 浙江海洋学院 | 用于防控水生动物嗜水气单胞菌病的中药及其使用方法 |
CN105596419A (zh) * | 2016-01-06 | 2016-05-25 | 广东省农业科学院动物卫生研究所 | 一种能提高罗非鱼抗病能力的复方中草药制剂及其应用 |
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102038781A (zh) * | 2010-11-19 | 2011-05-04 | 北京市水产科学研究所 | 用于抑菌的药物组合物及其制备方法和应用 |
CN102240323A (zh) * | 2011-05-11 | 2011-11-16 | 浙江海洋学院 | 用于防控水生动物嗜水气单胞菌病的中药及其使用方法 |
CN105596419A (zh) * | 2016-01-06 | 2016-05-25 | 广东省农业科学院动物卫生研究所 | 一种能提高罗非鱼抗病能力的复方中草药制剂及其应用 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
李旋珠: "《活血化瘀理论与临床研究》", 30 April 2018, 云南科技出版社 * |
谢新才等: "《中药临床》", 31 January 2017, 中国中医药出版社 * |
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