CN109432287A - 一种防治家禽气分热盛证的中药口服液及其制备方法 - Google Patents

一种防治家禽气分热盛证的中药口服液及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种防治家禽气分热盛证的中药口服液及其制备方法。该中药口服液由下述原料药制成：生石膏、栀子、大青叶、黄芩、连翘和知母。其组方精炼，与双黄连口服液相比，能更快降低体温，缓解体温升高带来的各种不适症状，更快恢复食欲，增加采食量，可以用于治疗气分热盛所致的发热、精神萎靡、羽毛松乱、采食量下降等。本发明采用的中药材简单易得，制备方法简单，质量可控性强，临床效果稳定，使用方便、安全。

Description

一种防治家禽气分热盛证的中药口服液及其制备方法
技术领域
本发明属于兽用中药制剂技术领域，特别涉及一种防治家禽气分热盛证的中药口服液。
背景技术
家禽气分热盛证是感受温热病邪引起的临床常见病症，可见发热、咳嗽、精神萎靡、羽毛松乱、采食量下降等，治疗当以清热解毒、凉血生津为主。
目前针对家禽高热的治疗主要是：使用解热镇痛、抗病毒药、抗生素和中药。大量抗生素的使用，造成家禽耐药性、多重抗药性问题严重，多重病原菌感染趋势加重，家禽肠道菌群严重失调，同时抗生素对内毒素释放的影响也日益引起人们的重视。随着常规抗病毒西药的禁用，家禽疾病预防存在无抗病毒药物可用的窘境，给家禽养殖业造成了严重的经济损失。中药预防和治疗温热病具有扎实的理论基础和丰富的临床经验，中药具有清热解毒、凉血止血、生津止渴等功效，治疗温热病具有独特疗效，已成为温热病预防和治疗的首选。研制与开发家禽温热病的中兽药不但具有极大的经济效益，也具有极大的社会效益和生态效益。
针对家禽温热病的治疗，目前市场上应用最多的是双黄连口服液。双黄连口服液是2010版《中国兽药典》记载的一个主治兽类感冒的常用组方，是由黄芩、连翘和金银花三味药材制备而成的纯中药制剂，具有辛凉解表、清热解毒之功效。在实际应用中发现：发病鸡只服用双黄连口服液后退热慢，鸡群采食量恢复也慢，体质恢复期较长，对养殖效益影响较大，因此研发一种可以替代双黄连口服液的中药组方是当前中兽药发展的需要。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供了一种防治家禽气分热盛证的中药口服液及其制备方法。该中药口服液是以石膏、栀子、大青叶、黄芩、连翘和知母六味中药组方，组方精炼，防治家禽气分热盛证疗效显著，无毒副作用。
为解决上述问题，本发明采用的技术方案为：一种防治家禽气分热盛证的中药口服液，由以下重量份的原料药制成：石膏(生石膏)10～50份，栀子5～30份，大青叶5～30份，黄芩5～30份，连翘1～20份，知母1～20份。
优选配比：石膏15～25份，栀子8～12份，大青叶8～12份，黄芩8～12份，连翘3～8份，知母3～8份。
最佳配比：石膏20份、栀子10份、大青叶10份、黄芩10份、连翘6份和知母6份。
制备方法：水煎煮，制备成口服液的形式使用，具体为：水煎煮制备成每1ml药液含有0.1-5g(优选0.5-1.5g)生药的口服液。在上述口服液中可以根据具体情况，选择加入防腐剂(如山梨酸钾)进行防腐。
优选的制备方法：将原料药加入8～12倍重量水煎煮2～3次，每次1.0～2.0小时，滤过，合并煎液，减压浓缩至适量，加入终体积(即以最终口服液的体积计算的，下同)0.2％-0.4％(W/V)的山梨酸钾混匀，加水定容，搅匀，滤过，灌装，即得。
本发明所选中草药的药性及药理分析如下：
生石膏：本品为硫酸盐类矿物石膏族石膏，主含含水硫酸钙，味辛、甘、性大寒。归肺、胃经。具清热泻火，生津止渴之功效，为清解气分实热的要药。
栀子：本品为茜草科植物栀子Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果实。味苦，性寒，归心、肺、三焦经。具泻火除烦、清热利湿、凉血解毒之功效。药理作用：增加胆汁分泌量，有利胆作用；具有解热，降压，镇静，止血的作用。
大青叶：本品为十字花科植物菘蓝Isatis indigotica Fort.的干燥叶。味苦，性寒。归肝，心，胃，脾经。具有清热解毒，凉血消斑之功效。主要成分含有靛蓝、靛玉红、尿嘧啶等。药理作用：水煎液对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌及流感病毒均有抑制作用；可增强免疫功能，具有明显解热效果。
黄芩：本品为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根。味苦、性寒。归肺、胆、脾、大肠、小肠经。具清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎之功效。主治肺热咳嗽、胃肠湿热、泻痢、黄胆、高热贪饮、便血、目赤肿痛、痈肿疮毒、胎动不安等症状。化学成分为黄酮类物质，主要有黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素和黄芩新素等。药理研究：经动物试验证明有解热、镇静、降压、利尿、降低毛细血管的通透性和抑制肠管蠕动等作用。
连翘：本品为木犀科植物连翘Forsythia suspense(Thunb.)Vahl的干燥果实。味苦、微寒归肺、心、小肠经。具有清热解毒、消肿散结之功效。主要成分含有连翘苷、连翘酚、皂苷、香豆精类等。药理研究：有显著的解热作用；水煎剂有镇吐作用，还有抗肝损伤的作用。
知母：本品为百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides Bge.的干燥根茎。味苦、甘、寒。归肺、胃、肾经。具清热泻火，滋阴润燥之功效。用于外感热病，高热烦渴，肺热燥咳，骨蒸潮热，内热消渴，肠燥便秘。主要含有皂苷、木质素类、多糖类、有机酸类及微量元素类等。药理研究：有试验证明知母浸膏具有解热、祛痰及利尿作用。
温热病是感受温热病邪所引起的多种急性热病的总称，是外感病的一大类别，以发展迅速，变化较多，热象偏重，易化燥伤阴为特征。卫气营血是对温热病四类证候的概括，同时又代表着温热病过程中由浅入深，由轻转重的四个阶段。其中气分主里，病在肺、肠、胃等脏腑，是温热病邪深入脏腑，正盛邪实，正邪相争激烈，阳热亢盛的里热证，多由卫分病传来，或由温热病邪直入气分所致。主要表现为但热不寒，呼吸喘粗，口干津少，口色鲜红等。温热病的一般治法，病在气分热盛时宜清热生津。
本发明方中石膏甘、辛，大寒，具清热泻火，除烦止渴之功效，为清解气分实热的要药，与味苦，性寒，具泻火除烦、清热利湿、凉血解毒之功效的栀子共为主药；黄芩、大青叶具有清热解毒、燥湿之功，使热邪无以附着，助主药清热之功为辅药；佐以苦润之知母，“泻无根之肾火”、“润肾燥而滋阴”，与石膏同用即为清热保津法，既可补充气分热盛消耗的大量津液，亦可防大量苦味药对津液的损伤；使以开泄宣散、透表泄热的连翘，使气分之热透表而出。诸药配伍共凑清热解毒、凉血生津之功效，用于治疗气分热盛所致的发热、精神萎靡、羽毛松乱、采食量下降等。
本发明所述的中药口服液的优选使用方法及用量是：每1kg体重，鸡，0.5-2ml，连用5-7天。
本发明以石膏、栀子、大青叶、黄芩、连翘和知母六味中药组方，组方精炼，采用的中药材简单易得，制备方法简单，质量可控性强，临床效果稳定，使用方便、安全。其对鸡只的治愈率和存活率要优于双黄连口液，远高于其他试验组方(见本发明的表1)。
本发明的中药口服液和双黄连口服液的扩大临床试验表明：本发明的临床试验疗效优于双黄连口服液，本发明中药口服液临床症状改善快(用药5天后存活鸡仅有零星未治愈，用药8天后，存活鸡全部治愈，双黄连口服液用药5天后还有部分未治愈，用药8天后仍有零星发病鸡，用药12天后存活鸡全部治愈)、治愈率高(用药3天后，该试验药物治疗组的治愈率为73.7％，双黄连口服液组治愈率为44.7％)。采用χ2检验比较试验药物治疗组和双黄连口服液治疗组的治愈率，发现用药后3天、5天和8天，本发明中药口服液试验药物组的治愈率极显著高于双黄连口服液组。
本发明的中药口服液与双黄连口服液比较，既能清热解毒又能凉血生津，尤其清热效果更佳，能更快降低鸡只体温，缓解体温升高带来的各种不适症状，更快恢复食欲，增加采食量。其临床试验证实疗效优于双黄连口服液，且产品成本远低于双黄连口服液，更适应于家禽气分热盛证的预防和治疗。
具体实施方式
实施例1：本发明一种防治家禽气分热盛证的中药口服液最佳组方筛选实验
1.材料与方法
1.1材料
SPF鸡：19日龄，购自山东昊泰繁育有限公司。
菌株：禽源大肠杆菌菌株E.coli c84008(编号CVCC2941)，购自中国兽药监察所，由山东省农业科学院家禽研究所保存。
SPF鸡饲养隔离器：苏州冯氏实验动物设备有限公司产品。
试验药物：自拟3个中药组方为待选方，按以下组方制成1000ml的水煎液。
试验方一：石膏200g、栀子100g、大青叶100g、黄芩100g、连翘60g、知母60g。
试验方二：大青叶100g，栀子200g，黄芪150g，贯众150g，紫苏叶200g，鱼腥草200g。
试验方三：石膏300g、知母200g、鱼腥草200g、黄芪100g、贯众100g。
对照药物：双黄连口服液(济南亿民动物药业有限公司)。
1.2试验方法
1.2.1菌液制备
大肠杆菌菌种经过SPF鸡连续两代体内传代复苏后，取菌液0.2ml接种于50ml营养肉汤培养基中，37℃摇床培养24h，用平板计数方法进行细菌计数。菌液低温离心，取白色沉淀，用无菌PBS液洗涤两次后，制成细菌含量为3.0×109cfu/ml的菌液备用。
1.2.2试验分组
选取19日龄SPF鸡，随机分为试验方一组、试验方二组、试验方三组、药物(双黄连口服液)对照组、模型对照组、阴性对照组，每组30只鸡，逐只编号、称重。各给药组与模型对照组腹腔接种离心菌液0.2ml/只，阴性对照组腹腔注射等量生理盐水。各试验组攻菌后按1ml/kg体重分上下午两次灌服各组的药物，连用5天。模型对照组与阴性对照组，灌服等量生理盐水。
1.3临床观察指标
1.3.1临床表现
从攻菌后开始至用药结束7天，每天观察并记录各组鸡的临床症状(包括精神、采食、饮水、粪便情况)、死亡时间、死亡数量、发病数量、健康数量。
1.3.2体温
将各试验组死亡率、临床症状、体温分别与模型对照组、药物对照组进行比较，检验其差异性，确定最佳组方。
1.4疗效判断标准
1.4.1治愈率
经治疗病鸡精神、采食、活动、粪便恢复正常，体温与阴性对照组无显著性差异既可判为治愈。每组治愈鸡数占每组试验鸡数的百分率为治愈率。
1.4.2存活率
每组存活鸡数占每组试验鸡数的百分率为存活率。
2数据分析
利用SPSS 21.0软件，对试验数据进行统计分析，P<0.05表示差异显著，P<0.01表示差异极显著。
3试验结果
3.1临床表现
人工感染大肠杆菌1h后，各攻菌组开始出现发病症状，6h后鸡只开始出现死亡。雏鸡精神沉郁，闭目缩头，羽毛逆立，饮食欲下降或废绝，重者翅下垂，呆立或瘫痪。
开始用药1天后，试验方一组和双黄连对照组的大群临床表现明显优于模型对照组和其他组。开始用药8天后，试验方一组存活鸡仅有零星发病，双黄连对照组有少数发病鸡，其他组还有部分发病鸡。开始用药12天后，试验方一组和双黄连对照组均只有零星发病鸡，大部分恢复正常，其他组有部分未恢复正常，还有部分瘫痪或精神、食欲不振的病鸡。
3.2治疗效果
从表1可见，比较各组的治愈率和存活率，检验有无差异性。各用药组的治愈率均显著高于模型对照组(P＜0.05)，其中试验方一组和双黄连口服液对照组的治愈率与模型对照组间差异极显著(P＜0.01)；试验方一组和双黄连口服液对照组的存活率显著高于模型对照组(P＜0.05)，而试验方二组和试验方三组的存活率与模型对照组无显著性差异(P＞0.05)。
综合治愈率和存活率各项指标结果，表明试验方一对鸡气分热盛证的治疗效果显著优于试验方二、试验方三，也优于双黄连口服液，但差异不显著。
表1 各组对鸡气分热盛证治疗效果的影响(n＝30)
注1：模型对照组治愈数指自行痊愈的鸡只数；
注2：与模型对照组比较小写字母不同差异显著(P＜0.05)，小写字母相同差异不显著(P＞0.05)。
3.3各组体温变化
各组鸡平均体温变化见表2。
表2 攻菌0-120h各组鸡平均体温(℃)
将各组每个时间点的体温与模型对照组进行同列对比，检验有无差异性。从表2的结果可以看出，攻菌24h后，双黄连口服液对照组、试验方一组的平均体温显著低于模型对照组(P＜0.05)，试验方二组、试验方三组的平均体温与模型对照组无差异；48h后，试验方一组的体温与阴性对照组无显著性差异，双黄连口服液对照组、试验方二组、试验方三组及模型对照组的平均体温依然偏高，与阴性对照组差异显著；120h后，双黄连口服液对照组、试验方一组的体温与阴性对照组体温无显著差异，与模型对照组差异显著，试验方二组、试验方三组、模型对照组的体温与阴性对照组差异显著。
结果表明，试验方一在48h内能够迅速的降低发病鸡体温，退热效果显著优于双黄连口服液。
4结论
通过对鸡气分热盛证的治疗试验，最终综合考评研究结果得出，试验方一作用效果最好。其处方组成为石膏200g、栀子100g、大青叶100g、黄芩100g、连翘60g、知母60g。
本发明一种防治家禽气分热盛证的中药口服液，其生产工艺为：取处方量药材，加10倍重量水(每次用量)煎煮三次，每次1.5小时，滤过，合并煎液，减压浓缩至适量，加入终体积0.3％(W/V)山梨酸钾，混匀，加水至1000ml，搅匀，滤过，灌装，即得。
实施例2：体外抗菌作用研究
1材料与方法
1.1菌株
金黄色葡萄球菌(CICC 10307)、大肠埃希氏菌(CICC 10302)、肠炎沙门菌(CICC24119)，以上实验菌株冻干品均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心，冷冻保存，试验前传代培养。1.2试验方法
将37℃、24小时培养的金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、肠炎沙门菌接种于肉汤，置普通培养箱37℃、24小时培养，比浊法进行细菌计数，用肉汤调配成106cfu/ml菌液备用。将试验药物(实施例1提供)、双黄连口服液(阳性对照)用肉汤由10％(200mg生药/ml)为起点进行连续二倍梯度稀释，依次加入96孔细胞培养板中，0.2ml/孔。再分别加入浓度为106cfu/ml的各试验菌菌液0.01ml/孔。同时设立细菌以及培养基对照孔。先置4℃环境中作用12小时后，再置普通培养箱37℃、48小时培养，肉眼观察结果。以无菌生长(不混浊)孔的最小药物浓度为最低抑菌浓度(MIC)。依次将各无细菌生长孔的培养基用无菌蒸馏水稀释10倍，吸取0.01ml接种在普通琼脂平板上，置普通培养箱37℃、48小时培养，以接种区域无细菌生长所对应的最小药物浓度为最低杀菌浓度(MBC)。
2试验结果及分析
表3 试验药物对金黄色葡萄球菌、肠炎沙门氏菌、大肠埃希菌的MIC和MBC(mg生药/ml)
从表3分析可见，试验药物、双黄连口服液对肠炎沙门氏菌的MIC、MBC均为12.5mg生药/ml、25.0mg生药/ml；试验药物对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的MIC、MBC均为双黄连口服液的2倍。由此得出试验药物对金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、肠炎沙门氏菌均有一定的抑菌和杀菌作用，与双黄连口服液相比，对肠炎沙门氏菌的抑菌效果两药相当，对金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌抑菌作用，双黄连口服液优于试验药物。
实施例3：解热作用研究
1材料与方法
1.1试验动物SPF级Wistar大鼠(雌雄各半，体重180～220g)，由山东大学试验动物中心提供，实验动物许可证号：SCXK(鲁)2013 0009。
1.2试验方法
取SPF级Wistar大鼠60只，置于恒温的实验室环境中饲养，造模前，每日早晚测量各组大鼠的肛温，将体温计于探头后3cm处标记，确保体温计每次伸入动物体内的长度一致。测定时间为上午9:00和下午2:00，连续测定5天。选取体温在36.6～38.0℃，且连续体温变化小于0.3℃的大鼠，取其平均值作为正常基础体温。
按照体温基础值和体重均衡随机分成5组，分别为模型对照组、双黄连口服液(1ml/kg.bw)和试验药物(实施例1提供)高、中、低剂量组(2ml/kg.bw、1ml/kg.bw、0.5g/kg.bw)。称质量后各组动物以20mg/kg剂量皮下注射2％的2，4-二硝基苯酚溶液，空白对照组注射同体积生理盐水，造模同时给予双黄连口服液、试验药物不同剂量组灌胃，空白对照组、模型对照组分别给予同体积的生理盐水。于给药后0.5、1.0、2.0、4.0、6.0h后测定肛温，记录各组体温数据，与基础体温比较，计算各时段体温差，组间比较差异性。
2试验结果及分析
表4 试验药物对2,4-二硝基苯酚所致发热大鼠的体温差(℃)的影响(X±S，n＝10)
注：与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01
从表4可见，模型对照组大鼠体温在0.5h即升高明显，1h到达高峰，随后逐渐回落，至6h时体温比基础体温仅升高0.4℃左右。试验药物2ml/kg剂量组给药1h、2h体温差分别显著低于(P＜0.05)和极显著低于模型组(P＜0.01)；试验药物1ml/kg剂量组给药2h体温差显著低于模型组(P＜0.05)；其余组均无显著性差异(P>0.05)。
以上结果表明，试验药物2ml/kg、1ml/kg剂量组1h、2h解热作用显著。试验药物0.5ml/kg组虽有一定解热作用，但与模型组差异不显著，可能与用药量低有关。试验药物的组方及配伍表明其具有清热解毒、凉血生津之功效，本试验进一步验证了试验药物具有较强的解热作用。
实施例4：抗炎作用研究一
1材料与方法
1.1试验动物SPF级昆明小鼠(体重20±2g)，由山东大学试验动物中心提供，实验动物许可证号：SCXK(鲁)20130009。
1.2试验方法
取SPF级昆明小鼠50只，体重20±2g，适应性饲养1周后，随机分为模型对照组、试验药物(实施例1提供)高、中、低剂量组和双黄连口服液组5组，每组10只，雌雄各半，分笼饲养。模型对照组用0.9％生理盐水灌胃，试验药物高、中、低剂量组给药剂量分别为8ml/kg.bw、4ml/kg.bw、2ml/kg.bw，双黄连口服液组每天给药剂量为4ml/kg.bw，连续灌胃给药7天，在末次给药2h后，各鼠右耳两面涂布30μl二甲苯致炎剂，左耳不做处理为正常耳对照。致炎30min后，颈椎脱臼处死小鼠，沿耳廓基线剪下两耳，用直径8mm打孔器分别在两耳的同一部位取下耳片，于电子分析天平上分别称重，计算肿胀度、耳廓肿胀率及耳廓肿胀抑制率。
2试验结果及分析
表5 试验药物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响(X±S，n＝10)
注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
根据公式计算各组小鼠耳肿胀度、肿胀率和肿胀抑制率，如表5所示，各给药组对小鼠耳廓肿胀均有一定程度的抑制作用，试验药物8ml/kg.bw、4ml/kg.bw剂量组和双黄连口服液组抑制作用最为明显，与模型对照组比较差异显著(P＜0.05)。试验药物8ml/kg.bw、4ml/kg.bw剂量组优于双黄连口服液组。由以上结果得出，试验药物能够显著抑制二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀，具有显著的抗炎作用。
实施例5：抗炎作用研究二
1材料与方法
1.1试验动物SPF级昆明小鼠(体重20±2g)，由山东大学试验动物中心提供，实验动物许可证号：SCXK(鲁)2013 0009。
1.2试验方法
取SPF级昆明小鼠50只，体重20±2g，适应性饲养1周后，随机分为模型对照组、试验药物(实施例1提供)高、中、低剂量组和双黄连口服液组5组，每组10只，雌雄各半，分笼饲养。模型对照组用0.9％生理盐水灌胃，试验药物高、中、低剂量组给药剂量分别为8ml/kg.bw、4ml/kg.bw、2ml/kg.bw，双黄连口服液组每天给药剂量为4ml/kg.bw，连续灌胃给药7天，末次给药1h后，每只小鼠腹腔注射0.8％醋酸溶液0.2ml/只，30min后尾静脉注射0.5％伊文氏蓝生理盐水0.2ml/只，20min后脱颈处死小鼠，腹腔注射生理盐水5.0ml，轻揉腹部0.5min，5min后剪开腹部肌肉，吸出腹腔洗涤液，3000rpm离心15min，取上清液于590nm波长处测吸光度值A，并计算渗出抑制率。
渗出抑制率＝(空白组吸光度一给药组吸光度)/空白组吸光度×100％
2试验结果及分析
表6 试验药物对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响(X±SD，n＝10)
注：与对照组相比，**P＜0.01，*P＜0.05.
结果如表6所示，与模型对照组比较，试验药物4ml/kg.bw剂量组和双黄连口服液组均能显著对抗小鼠腹腔毛细血管通透性的亢进(P＜0.05)，试验药物8ml/kg.bw剂量组极显著对抗小鼠腹腔毛细血管通透性的亢进(P＜0.01)。各用药组腹腔洗出液的伊文思蓝浓度显著下降，其肿胀抑制百分率均在20.0％以上，且同剂量时试验药物的抑制效果优于双黄连口服液。由以上结果得出，试验药物能显著对抗小鼠腹腔毛细血管通透性的亢进。
实施例6：试验性临床试验
1材料与方法
1.1试验动物：22日龄SPF健康公雏鸡，山东昊泰实验动物繁育中心提供。选择体重在平均重量上下10％、体温连续测定变化在0.3℃的雏鸡作为试验鸡，饲养在SPF隔离器内。
1.2菌株
禽源大肠杆菌菌株E.coli C84008(编号CVCC2941)，购自中国兽药监察所，由山东省农科院家禽研究所复壮保存。
1.3试验方法
首先通过22日龄SPF鸡人工感染大肠杆菌建立气分热盛证模型，利用模型来进行该中药口服液治疗试验。试验分为试验药物(实施例1提供)高、中、低剂量组、双黄连口服液对照组、模型对照组、阴性对照组共6个组。试验药物高(2.0ml/kg.bw)、中(1.0ml/kg.bw)、低剂量组(0.5ml/kg.bw)、双黄连口服液(1.0ml/kg.bw)对照组和模型对照组每只鸡腹腔注射E.coli C84008株0.2ml(3×109CFU/ml)，阴性对照组不攻菌。攻菌后试验药物组每天灌服药物2次，模型对照组和阴性对照组每天灌服生理盐水2次，连续灌服5天，停药后继续观察7天。详细记录各组鸡临床症状、体温变化等指标，统计各组存活率、治愈率、有效率、体温变化的差异性。
2试验结果及分析
2.1试验药物治疗对治疗效果的影响
表7 不同剂量试验药物对鸡气分热盛证治疗效果的影响(n＝30)
注1：模型对照组治愈数指自行痊愈的鸡只数，有效数指自行好转的鸡只数；
注2：与模型对照组比较小写字母不同差异显著(P＜0.05)，小写字母相同差异不显著(P＞0.05)。
从表7可见，比较各组的治愈率、有效率和存活率，检验有无差异性。试验药物高剂量组、中剂量组、双黄连对照组的存活率、有效率和治愈率均显著高于模型对照组(P＜0.05)；试验药物低剂量组存活率和有效率高于模型对照组，但差异不显著(P>0.05)；试验药物高剂量组、中剂量组、双黄连对照组之间的存活率、有效率和治愈率差异均不显著。
2.2试验药物治疗对鸡体温的影响
表8 试验药物对鸡体温(℃)的影响(n＝30,±s)
注：与模型对照组比较小写字母不同差异显著(P＜0.05)，小写字母相同差异不显著(P>0.05)。
由表8可见，攻菌24h，各组体温均显著高于阴性对照组(P＜0.05)，但试验药物高剂量组、中剂量组的体温显著低于模型对照组(P＜0.05)，双黄连对照组的体温也低于模型对照组，但差异不显著；攻菌48h试验药物高、中剂量组的体温虽然仍高于阴性对照组，但差异不显著(P＞0.05)，双黄连对照组的体温仍显著高于阴性对照组(P＜0.05)；攻菌72h试验药物高、中剂量组、双黄连组体温与阴性对照组差异均不显著(P＞0.05)，但试验药物低剂量组、模型对照组体温仍显著高于阴性对照组(P＜0.05)；攻菌96h后，各用药组体温与阴性对照组体温均无显著性差异(P＞0.05)，但模型对照组与阴性对照组之间仍具有显著性差异(P＜0.05)。综上，攻菌24h以后，试验药物高、中剂量组的体温均低于双黄连对照组，但组间无显著性差异(P＞0.05)。
实施例7：扩大临床试验
1材料与方法
1.1试验动物
莒县某农场饲养的10000只22日龄AA肉仔鸡，出现精神沉郁、羽毛蓬乱、翅下垂、闭目嗜睡、独居一隅或聚堆，采食速度慢，采食量由1100kg降至930kg，降低15.5％，发病鸡的数量占整个鸡群20％左右，每日死亡30余只。发病鸡翅下和大腿内侧烫手，随机抽样发病鸡测量肛门体温为42.6℃以上，较正常鸡高0.8℃以上。大群抽样检测新城疫、禽流感HI效价分别为Log25、Log24，且个体间抗体均匀一致。
1.2试验方法
从诊断为气分热盛证的10000只22日龄的AA肉仔鸡群中，随机选择600只发病鸡，随机分为试验药物(实施例1提供)治疗组和双黄连口服液(济南亿民动物药业有限公司)治疗组，每组300只鸡，均按每kg体重1ml的药量连续饮水给药5天。
1.3临床观察指标
从开始给药到用药结束后7天连续观察12天，详细观察和记录鸡群的外观表现，行为活动，精神状况，采食量、饮水量、粪便情况，发病数和死亡数等。
经治疗病鸡精神、采食、活动、粪便恢复正常，体温接近正常体温，临床评分为一级(0分)，既可判为治愈。每组治愈鸡数占每组试验鸡数的百分率为治愈率。
2数据处理
数据以表示，用SPSS 21.0应用软件进行组间显著性检验。采用t检验或χ2检验比较实验组与对照组间临床评分、治愈率、有效率、增重率、死亡率、体温的差异性。
3试验结果
3.1临床症状
试验药物组用药2天后，鸡群精神状况开始好转，死亡数开始下降。用药5天后，死亡停止，鸡群基本恢复正常。
双黄连口服液对照组用药3天后，鸡群精神状况开始好转，死亡开始减少。用药5天后，鸡仍有零星死亡。用药后7天，鸡群基本恢复正常。
3.2对气分热盛证鸡的治疗效果
从表9可见，用药3天后，试验药物治疗组的治愈率为73.7％，用药5天后存活鸡仅有零星未治愈，用药8天后，存活鸡全部治愈，总治愈率为93.3％。双黄连口服液组用药3天后治愈率为44.7％，用药5天后还有部分未治愈，用药8天后仍有零星发病鸡，用药12天后存活鸡全部治愈，总治愈率为89.3％。采用χ2检验比较试验药物治疗组和双黄连口服液治疗组的治愈率，发现用药后3天、5天和8天，试验药物组的治愈率极显著高于双黄连口服液组(P＜0.01)。试验药物组的有效率和存活率也高于双黄连口服液组，但差异不显著(P＞0.05)。
以上结果表明，试验药物能够更快的改善发病鸡的症状，治疗效果(治愈率、有效率和存活率)优于双黄连口服液。
表9 对鸡气分热盛证存活率的影响
3.3对气分热盛证鸡体温的影响
从表10可见，试验药物组用药第2天平均体温即接近正常体温，最高体温表明用药3天后存活鸡体温均降至正常温度。双黄连组用药第3天平均体温接近正常体温，但用药6天后还有部分鸡体温偏高。采用t检验比较试验药物治疗组和双黄连口服液治疗组不同时间的平均体温，开始用药后第4、5、6三天，试验药物组的平均体温均显著低于双黄连口服液组(P＜0.05)，其中第4天和第6天的平均体温存在极显著差异(P＜0.01)。
以上结果表明，与双黄连口服液相比，试验药物降低发病鸡体温的速度更快，效果更明显，解热效果更好。
表10 对鸡气分热盛证体温的影响(n＝50,)
3.4对气分热盛证鸡采食比率的影响
从表11可见，用药后两组的采食量逐渐恢复，试验药物组用药第2天即恢复至正常采食量的90.2％，第5天恢复至正常采食量的99.7％，而双黄连组第2天仅恢复至正常采食量的80.3％，第9天才恢复到正常采食量的99.7％左右。试验药物组能够更快的恢复发病鸡的采食，可能与试验药物更强的解热作用有关。
表11 对气分热盛证鸡采食比率的影响
3.5对气分热盛证鸡增重率的影响
从表12可见，用药结束7天后，试验药物组平均体重比双黄连口服液组高7.9％，增重率较双黄连口服液组高19.8个百分点。根据文献数据，试验药物组的平均体重与正常鸡的平均体重无差异。试验药物在较短的时间内恢复发病鸡的采食量，使发病鸡的生长受到较小的影响，到34日龄(用药结束7天后)体重恢复到了正常水平。
表12 对鸡气分热对气分热盛证鸡增重率的影响
4结果分析
(1)从以上结果可以发现，气分热盛证发病鸡群经试验药物治疗后，治愈率为93.3％，用药5天后存活鸡即基本治愈；用药第2天发病鸡平均体温即降至正常范围；采食量在用药第2天恢复至正常采食量的90.2％，第5天即恢复至正常水平，发病鸡群在34日龄时，体重与正常鸡体重一致。结果表明，该试验药物具有良好的解热作用，对鸡气分热盛证具有良好的治疗效果。
(2)气分热盛证属里证，病在肺、肠、胃等脏腑，是温热病邪深入脏腑，正盛邪实，正邪相争激烈，阳热亢盛的里热证，多由卫分病传来，或由温热病邪直入气分所致。主要表现为但热不寒，呼吸喘粗，口干津少，口色鲜红等。气分热盛证的一般治法宜清热生津。
该试验药物中石膏甘、辛，大寒，具清热泻火，除烦止渴之功效，为清解气分实热的要药，与味苦，性寒，具泻火除烦、清热利湿、凉血解毒之功效的栀子共为主药；黄芩、大青叶具有清热解毒、燥湿之功，使热邪无以附着，助主药清热之功为辅药；佐以苦润之知母，“泻无根之肾火”、“润肾燥而滋阴”，与石膏同用即为清热保津法，既可补充气分热盛消耗的大量津液，亦可防大量苦味药对津液的损伤；使以开泄宣散、透表泄热的连翘，使气分之热透表而出。诸药配伍共凑清热解毒、凉血生津之功效。
(3)与双黄连口服液相比，本试验药物能更快降低体温，缓解体温升高带来的各种不适症状，更快恢复食欲，增加采食量，通过脾胃运化，水谷精微涵养机体，促进抵御邪气的功能，故病情恢复快，死亡率低，增重率高。
以上结果表明，与双黄连口服液相比，该中药口服液降低发病鸡体温的速度更快，解热效果更好，病情恢复更快，在替代双黄连口服液方面具有良好的应用前景。
实施例8
配方(重量)：石膏150g，栀子110g，大青叶110g，黄芩110g，连翘70g，知母70g。
制备方法：取上述原料药加8倍重量水(每次用量)煎煮三次，每次1.5小时，滤过，合并煎液，减压浓缩至适量，加入终体积0.3％(W/V)山梨酸钾，混匀，加水至1000ml，搅匀，滤过，灌装，即得。
实施例9
配方(重量)：石膏250g，栀子90g，大青叶90g，黄芩90g，连翘50g，知母50g。
制备方法：取上述原料药加12倍重量水(每次用量)煎煮2次，每次2小时，滤过，合并煎液，减压浓缩至适量，加入终体积0.3％(W/V)山梨酸钾，混匀，加水至1000ml，搅匀，滤过，灌装，即得。

Claims (7)

1.一种防治家禽气分热盛证的中药口服液，其特征是，由以下重量份的原料药制成：石膏10～50份，栀子5～30份，大青叶5～30份，黄芩5～30份，连翘1～20份，知母1～20份。
2.如权利要求1所述的一种防治家禽气分热盛证的中药口服液，其特征是，由以下重量份的原料药制成：石膏15～25份，栀子8～12份，大青叶8～12份，黄芩8～12份，连翘3～8份，知母3～8份。
3.如权利要求2所述的一种防治家禽气分热盛证的中药口服液，其特征是，由以下重量份的原料药制成：石膏20份、栀子10份、大青叶10份、黄芩10份、连翘6份和知母6份。
4.权利要求1-3中任意一项所述的中药口服液的制备方法，其特征是，水煎煮。
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征是，水煎煮制备成每1ml药液含有0.1-5g生药的口服液。
6.如权利要求5所述的制备方法，其特征是，所述口服液中加入防腐剂进行防腐。
7.如权利要求6所述的制备方法，其特征是，将原料药加入8～12倍重量水煎煮2～3次，每次1.0～2.0小时，滤过，合并煎液，减压浓缩，加山梨酸钾混匀，加水定容，搅匀，滤过，灌装，即得。
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