CN108535384A - 一种测定沉积物样品中7种磺胺类抗生素残留的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及沉积物中抗生素测定技术领域，具体是涉及一种测定沉积物样品中7种磺胺类残留的方法。本发明利用高效液相色谱‑质谱联用技术结合加速溶剂萃取和固相萃取检测沉积物中7种磺胺类抗生素残留的方法。沉积物样品经加速溶剂萃取和固相萃取净化，用高效液相色谱‑质谱联用仪MRM监测离子模式分析，外标法定量。本发明的方法检出限低，稳定性好，回收率高，检测灵敏度高，用于沉积物中7种磺胺类抗生素的快速筛查，基本能够满足沉积物中目标物残留的检测要求。

Description

一种测定沉积物样品中7种磺胺类抗生素残留的方法

技术领域

本发明涉及水环境检测技术领域，具体是涉及一种测定沉积物样品中7种磺胺类抗生素残留的方法。

背景技术

抗生素除用作人类健康外，还用于动物生产促进剂，据报道我国每年抗生素原材料的用量约为180000吨，相当于人均年用量为138g，相当于美国的10倍。磺胺类抗生素是应用最广泛的一类抗生素之一，是一类含对氨基苯磺酰胺结构的衍生物。该类药物抗菌谱较广泛，对大多数革兰阳性菌和革兰氏阴性菌都有抑制作用。主要包含乙酰磺胺、磺胺二甲基嘧啶、周效磺胺、磺胺甲氧哒嗪、磺胺苯吡唑等抗生素。由于此类物质的广泛使用以及在目标生物中的吸收和代谢不完全，磺胺类抗生素持续进入环境，并经过吸附、水解、光降解及生物降解等过程产生一系列代谢及降解产物，而这些产物往往具有更大的毒性。进入环境中的抗生素及其代谢产物可以影响生物等的正常生命活动，并通过食物链最终影响到人类健康。如长期滥用磺胺类抗生素会导致动物体内及环境中耐药菌(ARB)大量繁殖，诱导产生抗生素抗性基因(ARGs)，一旦传递进入人类致病菌中，将降低感染性疾病治愈的可能，对人类健康产生严重影响。我国作为抗生素生产与使用大国，对此类物质在环境中的分布及污染开展调查具有十分重要的意义。目前，我国不同水体中持续检出了抗生素包括磺胺类抗生素的普遍存在，通常在ng·L^-L水平，表明了磺胺类抗生素是我国地表水中污染最严重的抗生素种类。

针对以上现状，本发明人拟利用高效液相色谱-串联质谱检测法并结合液液萃取和固相萃取的前处理方法，建立一种沉积物中痕量的7种磺胺类抗生素残留定量分析方法，可以基本满足快速筛查和检测要求。液相色谱-质谱联用法因具有高灵敏度和高选择性，抗干扰能力强，可以成为磺胺类抗生素残留定性定量分析的有效工具。

发明内容

本发明解决的技术问题是:针对现有的检测方法存在一定的局限性，灵敏度不够高，抗干扰能力差等问题，提供一种测定沉积物样品中7种磺胺类抗生素残留的方法，该方法检出限低，稳定性好，基本能够满足沉积物样品7种磺胺类抗生素残留的检测要求。

本发明的技术方案是:一种测定沉积物样品中7种磺胺类抗生素残留的方法，包括以下步骤：

S1：样品采集：

在采样点采集沉积物样品，去杂，冷冻干燥后，置于研磨保存装置进行研磨并保存待测，研磨条件为过60目筛，保存温度为-20℃；

S2：样品前处理：

准确称取5±0.01g上述经研磨的沉积物样品，与2g±0.05g硅藻土混合装入33ml萃取池中，使用戴安300加速溶剂萃取(ASE)系统进行提取,用甲醇/丙酮(50/50，V/V)循环提取2次后得到提取液；该方法提高目标物的提取效率，进而提高检测的精确度；

将提取液旋转蒸发浓缩至2mL左右，用超纯水稀释到100mL；用4mol/L硫酸调节pH值为4，然后用经6mL甲醇、6mL超纯水依次活化Oasis HLB固相萃取小柱萃取，上样速度为2～5mL/min；接着用10mL的超纯水淋洗Oasis HLB小柱，并在负压条件下抽真空30分钟进行干燥，用2mL的2％氨水/甲醇洗脱两次，洗脱液氮气吹干，然后用10％的乙腈/水溶液定容至1mL，涡旋震荡2～3min；由于激素类药物过膜后会因吸附而发生损失，样品定容后10000g/min离心10min并过0.22μm滤膜去除可能存在的颗粒物；保存待HPLC-MS/MS测定分析；该方法制备至待测液，可以提高部分目标物的响应，甲醇/丙酮(1:1，v/v)对磺胺和激素的提取效果最好，有效提高检测灵敏度和抗干扰能力；

S3：配制混合标准溶液：

a.配制单标准储备液(10mg/L)：准确称取7种磺胺类抗生素各0.01g，用甲醇溶解定容于10mL容量瓶中，配成质量浓度为1000mg/L的标准储备液；分别取100μL(1000mg/L)标准储备液于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制质量浓度为10mg/L的标准储备液，储存于4℃冰箱中；

b.配制混合标准储备液(200μg/L)：准确吸取200μL各单标准储备液(10mg/L)于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制质量浓度为200μg/L的混合标准储备液，于4℃下保存；

c.用甲醇作为溶剂，将上述混合标准储备液(200μg/L)按比例稀释后配成质量浓度分别为0.2、1、2、5、10、20、50、100μg/L的混合标准溶液，于4℃下保存；

S4：绘制标准曲线：

用甲醇配制质量浓度分别为0.2,1,2,5,10,20,50和100μg/L的7种磺胺类抗生素混合标准溶液，以峰面积(y)对目标物的质量浓度(x)绘制标准曲线；

S5：高效液相色谱质谱联用仪MRM监测离子模式分析；

S6：外标法定量：通过步骤S5分析后，根据绘制的色谱图计算出样品溶液的峰面积，并通过步骤S2所述的标准曲线计算出样品溶液中的7种磺胺类抗生素的浓度，目标物在1～100μg/L范围内呈良好的线性关系，以信噪比S/N＝3计算仪器方法检出限(LOD)，S/N＝10作为仪器方法定量限(LOQ)，同时对100μg/L的标准溶液连续测定3天，每天测定3次，计算日内和日间精密度。

根据本发明的一个方面，所述步骤S2为:准确称取5±0.01g上述经研磨的沉积物样品，于室温下暗处放置24h，后将加标的沉积物样品加入质量比为1:7的乙醇溶剂，乙醇溶剂的体积浓度为45％，先将液体升温至18℃超声处理4min，后以2℃/min的速度升温至42℃，升温期间保持超声处理，并在42℃保持一段时间，超声处理后过0.22μm滤膜，收集滤液a，并保留滤渣进行待用；将滤渣与2g±0.05g硅藻土混合装入33ml萃取池中，使用戴安300加速溶剂萃取(ASE)系统进行提取,用甲醇/丙酮(50/50，V/V)循环提取2次后得到滤液b,将滤液a与滤液b混合并震荡2～3分钟后得到提取液；该方法能够大幅缩短提取时间，提高目标物的提取效率，回收率高，沉积物成分提取充分，进而提高检测的精确度。

进一步地，所述7种磺胺类抗生素包括磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺甲二唑、磺胺噻唑、磺胺甲嘧啶、磺胺苯吡唑、磺胺二甲嘧啶。

进一步地，所述步骤S2中提取条件为压力1400～1600psi，温度70～90℃，保持10分钟，60％的冲洗体积，冲洗50～70s。

进一步地，所述步骤S2中超声处理的条件为:超声功率为180～350W，超声时间为20～30min，间歇时间为5～45s。该范围区间下进行超声处理，提取效果最好，且不会影响待测物质损失。

进一步地，所述高效液相色谱质谱联用仪MRM监测离子模式分析的条件为:

a.高效液相色谱条件：色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18(150mm×2.1mm,3.5um)；流动相：0.2％(V/V)甲酸(A)和甲醇(B)；流速为0.3mL/min；柱温：30℃；进样体积：5uL；梯度洗脱程序：0min 99％A，5min变为90％A，25min变为50％A，26min变为60％A，26.5min变为99％A，26.5-30min 99％A；

b.质谱条件：选择电喷雾离子(ESI)源正离子模式扫描，采用半自动进样方式，以5μL/min的流速将500μg/L的标准储备液分别注入离子源；监测模式为多反应离子监测(MRM)；选取对应的母离子峰，对其子离子进行二级质谱分析，得到碎片离子信息；

更进一步地，所述质谱分析过程中，离子源温度：500℃，离子喷雾电压：5500V；气帘气(curtain gas,CUR)压力为206 851.8Pa；喷雾气(ion source gas 1,GS1)压力为241327.1Pa；辅助加热气(ion source gas 2,GS2)压力为275 802.4Pa；得到碎片离子信息后，接着对目标化合物二级质谱的CE、DP、EP、CXP等质谱参数进行优化，质谱多反应监测参数见表2。

进一步地，所述研磨保存装置主要包括主舱体、进料斗和存放仓；所述进料斗位于主舱体的上端，所述存放仓位于主舱体的下端；所述主舱体与进料斗的连接处内设有三个并列排放的粗研磨轮，所述粗研磨轮通过粗研磨电机板与进料斗两端内壁连接，进料斗的左侧面下端设有粗研磨电机控制器，所述粗研磨电机控制器与所述粗研磨电机板进行连接；主舱体内部中间位置设有震荡筛分板，所述震荡筛分板的左侧设有震动控制器，所述震荡控制器固定于主舱体的外左侧面上，震荡控制器与震荡筛分板进行连接，震荡筛分板的右侧设有移料装置，所述移料装置的下端固定于主舱体的外右侧面，移料装置的上端与进料斗的右顶端连接，震荡筛分板的下端设有精研磨装置，所述精研磨装置从上到下依次分为一级研磨盘、二级研磨盘和三级研磨盘，所述一级研磨盘上围绕圆心阵列有多个集料条孔，所述二级研磨盘上等间距排列有多个球孔，每个球孔内都置有一个小球，所述三级研磨盘上围绕圆心阵列设有多个研磨条，所述每个研磨条之间均设有一个筛网，所述精研磨装置中心设有精研磨电机，精研磨电机带动一级研磨盘、二级研磨盘和三级研磨盘进行转动，精研磨装置的左端设有精研磨电机控制器，所述精研磨电机控制器固定于主舱体的外左侧面上，精研磨电机控制器与精研磨电机进行连接，主舱体的下底面中心设有出料口，所述出料口的下端设有电动闸门，出料口上设有固定架，所述固定架和精研磨电机通过固定杆固定连接；所述存放仓的下底面中心设有取料口，存放仓的左侧面上设有温湿度控制器。本装置采用粗研磨和精研磨的二次研磨提高了研磨存放装置的使用寿命和研磨精度，设置的移料装置可以将未过震荡筛分板的研磨样品进行二次粗研磨，提高研磨样品使用率和研磨质量，精研磨装置通过一级研磨盘、二级研磨盘和三级研磨盘的相互配合通过球磨、挤压等共同作用来提高研磨效率和研磨精度，在主舱体下端设有的存放仓可以将研磨好的研磨样品进行存放，保证研磨样品不会因不适宜的温湿度而出现问题，进而影响后期实验检测的准确度。

更进一步地，所述一级研磨盘和三级研磨盘与二级研磨盘转动方向相反。可以有效提高研磨效率，并提高精研磨装置运转的稳定性。

更进一步地，所述进料斗内壁中间位置环绕有挡料块，可以阻隔研磨样品从侧壁缝隙通过而影响研磨效率。

上述研磨保存装置的工作方法为:将待研磨样品加入到进料斗，通过环绕的挡料块使待研磨样品落入粗研磨轮处进行粗研磨，待粗研磨后落入震荡筛分板进行震荡筛分，通过移料装置将未过震荡筛分板的研磨样品移至进料斗进行二次粗研磨，通过震荡筛分板后落入精研磨装置，依次通过一级研磨盘的集料条孔使研磨样品均匀落入二级研磨盘，通过球孔和小球的挤压球磨对研磨样品进行精研磨，并通过三级研磨盘的研磨条对三级研磨盘进行区域分隔并配合筛网对研磨进行更快速的筛分研磨，通过出料口落入存放仓，研磨完成后电动闸门关闭，通过温湿度控制器对存放仓内温湿度进行调节，保存研磨样品。

本发明的有益效果是:相比于现有技术，采用本发明方法能够大幅缩短提取时间，提高了提取成分的含量，进而提高检测的精确度，检测灵敏度高，抗干扰能力强，检出限低，回收率高，稳定性好，基本能够满足沉积物样品7种磺胺类抗生素残留的检测要求；本发明装置通过二次研磨提高了研磨存放装置的使用寿命和研磨精度，并通过精研磨装置提高研磨效率，可以将研磨好的研磨样品及时进行存放，保证研磨样品不会因不适宜的温湿度而出现问题，进而影响后期实验检测的准确度；本发明的研磨保存装置通过粗研磨和精研磨的各级研磨盘相互配合，提高研磨效率和研磨精度，使之后实验提取等过程提取成分更加充分，进而提高实验检测的准确度。

附图说明

图1是不同流动相下7种磺胺类抗生素混合标准溶液(100μg/L)的总离子色谱图，

其中1-磺胺嘧啶、2-磺胺噻唑、3-磺胺甲嘧啶、4-磺胺二甲嘧啶、5-磺胺甲二唑、6-磺胺甲恶唑、7-磺胺苯吡唑。

图2是本发明研磨保存装置整体结构示意图。

图3是本发明一级研磨盘俯视图。

图4是本发明二级研磨盘俯视图。

图5是本发明三级研磨盘俯视图。

图6是本发明出料口俯视图。

其中，1-主舱体、2-进料斗、21-挡料块、3-存放仓、31-温湿度控制器、4-移料装置、5-粗研磨轮、51-粗研磨电机控制器、52-粗研磨电机板、6-震荡筛分板、61-震荡控制器、7-精研磨装置、71-一级研磨盘、711-集料条孔、72-二级研磨盘、721-小球、722-球孔、73-三级研磨盘、731-研磨条、732-筛网、8-精研磨电机、81-精研磨电机控制器、82-固定杆、9-出料口、91-电动闸门、92-固定架、10-取料口。

具体实施方式

实施例1

一种测定沉积物样品中7种磺胺类抗生素残留的方法，7种磺胺类抗生素包括磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺甲二唑、磺胺噻唑、磺胺甲嘧啶、磺胺苯吡唑、磺胺二甲嘧啶，包括以下步骤：

S1：样品采集：

在采样点采集沉积物样品，去杂，冷冻干燥后，置于研磨保存装置进行研磨并保存待测，研磨条件为过60目筛，保存温度为-20℃；

S2：样品前处理：

准确称取5±0.01g上述经研磨的沉积物样品，与2g±0.05g硅藻土混合装入33ml萃取池中，使用戴安300加速溶剂萃取(ASE)系统进行提取,提取条件为压力1400psi，温度70℃，保持10min，60％的冲洗体积，冲洗50s，用甲醇/丙酮(50/50，V/V)循环提取2次后得到提取液；该方法提高目标物的提取效率，进而提高检测的精确度；

将提取液旋转蒸发浓缩至2mL左右，用超纯水稀释到100mL；用4mol/L硫酸调节pH值为4，然后用经6mL甲醇、6mL超纯水依次活化Oasis HLB固相萃取小柱萃取，上样速度为2mL/min；接着用10mL的超纯水淋洗Oasis HLB小柱，并在负压条件下抽真空30分钟进行干燥，用2mL的2％氨水/甲醇洗脱两次，洗脱液氮气吹干，然后用10％的乙腈/水溶液定容至1mL，涡旋震荡2min；由于激素类药物过膜后会因吸附而发生损失，样品定容后10000g/min离心10min并过0.22μm滤膜去除可能存在的颗粒物；保存待HPLC-MS/MS测定分析；该方法制备至待测液，可以提高部分目标物的响应，甲醇/丙酮(1:1，v/v)对磺胺和激素的提取效果最好，有效提高检测灵敏度和抗干扰能力；

S3：配制混合标准溶液：

a.配制单标准储备液(10mg/L)：准确称取7种磺胺类抗生素各0.01g，用甲醇溶解定容于10mL容量瓶中，配成质量浓度为1000mg/L的标准储备液；分别取100μL(1000mg/L)标准储备液于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制质量浓度为10mg/L的标准储备液，储存于4℃冰箱中；

b.配制混合标准储备液(200μg/L)：准确吸取200μL各单标准储备液(10mg/L)于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制质量浓度为200μg/L的混合标准储备液，于4℃下保存；

c.用甲醇作为溶剂，将上述混合标准储备液(200μg/L)按比例稀释后配成质量浓度分别为0.2、1、2、5、10、20、50、100μg/L的混合标准溶液，于4℃下保存；

S4：绘制标准曲线：

用甲醇配制质量浓度分别为0.2,1,2,5,10,20,50和100μg/L的7种磺胺类抗生素混合标准溶液，以峰面积(y)对目标物的质量浓度(x)绘制标准曲线；

S5：高效液相色谱质谱联用仪MRM监测离子模式分析:

a.高效液相色谱条件：色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18(150mm×2.1mm,3.5um)；流动相：0.2％(V/V)甲酸(A)和甲醇(B)；流速为0.3mL/min；柱温：30℃；进样体积：5uL；梯度洗脱程序：0min 99％A，5min变为90％A，25min变为50％A，26min变为60％A，26.5min变为99％A，26.5-30min 99％A；

b.质谱条件：选择电喷雾离子(ESI)源正离子模式扫描，采用半自动进样方式，以5μL/min的流速将500μg/L的标准储备液分别注入离子源；监测模式为多反应离子监测(MRM)；选取对应的母离子峰，对其子离子进行二级质谱分析，得到碎片离子信息；

c.质谱分析过程中，离子源温度：500℃，离子喷雾电压：5500V；气帘气(curtaingas,CUR)压力为206 851.8Pa；喷雾气(ion source gas 1,GS1)压力为241 327.1Pa；辅助加热气(ion source gas 2,GS2)压力为275 802.4Pa；得到碎片离子信息后，接着对目标化合物二级质谱的CE、DP、EP、CXP等质谱参数进行优化；

S6：外标法定量：通过步骤S5分析后，根据绘制的色谱图计算出样品溶液的峰面积，并通过步骤S2所述的标准曲线计算出样品溶液中的7种磺胺类抗生素的浓度，目标物在1～100μg/L范围内呈良好的线性关系，以信噪比S/N＝3计算仪器方法检出限(LOD)，S/N＝10作为仪器方法定量限(LOQ)，同时对100μg/L的标准溶液连续测定3天，每天测定3次，计算日内和日间精密度。

实施例2

一种测定沉积物样品中7种磺胺类抗生素残留的方法，7种磺胺类抗生素包括磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺甲二唑、磺胺噻唑、磺胺甲嘧啶、磺胺苯吡唑、磺胺二甲嘧啶，包括以下步骤：

S1：样品采集：

在采样点采集沉积物样品，去杂，冷冻干燥后，置于研磨保存装置进行研磨并保存待测，研磨条件为过60目筛，保存温度为-20℃；

S2：样品前处理：

准确称取5±0.01g上述经研磨的沉积物样品，与2g±0.05g硅藻土混合装入33ml萃取池中，使用戴安300加速溶剂萃取(ASE)系统进行提取,提取条件为压力1500psi，温度80℃，保持10min，60％的冲洗体积，冲洗60s，用甲醇/丙酮(50/50，V/V)循环提取2次后得到提取液；该方法提高目标物的提取效率，进而提高检测的精确度；

将提取液旋转蒸发浓缩至2mL左右，用超纯水稀释到100mL；用4mol/L硫酸调节pH值为4，然后用经6mL甲醇、6mL超纯水依次活化Oasis HLB固相萃取小柱萃取，上样速度为4mL/min；接着用10mL的超纯水淋洗Oasis HLB小柱，并在负压条件下抽真空30分钟进行干燥，用2mL的2％氨水/甲醇洗脱两次，洗脱液氮气吹干，然后用10％的乙腈/水溶液定容至1mL，涡旋震荡2min；由于激素类药物过膜后会因吸附而发生损失，样品定容后10000g/min离心10min并过0.22μm滤膜去除可能存在的颗粒物；保存待HPLC-MS/MS测定分析；该方法制备至待测液，可以提高部分目标物的响应，甲醇/丙酮(1:1，v/v)对磺胺和激素的提取效果最好，有效提高检测灵敏度和抗干扰能力；

S3：配制混合标准溶液：

a.配制单标准储备液(10mg/L)：准确称取7种磺胺类抗生素各0.01g，用甲醇溶解定容于10mL容量瓶中，配成质量浓度为1000mg/L的标准储备液；分别取100μL(1000mg/L)标准储备液于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制质量浓度为10mg/L的标准储备液，储存于4℃冰箱中；

b.配制混合标准储备液(200μg/L)：准确吸取200μL各单标准储备液(10mg/L)于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制质量浓度为200μg/L的混合标准储备液，于4℃下保存；

c.用甲醇作为溶剂，将上述混合标准储备液(200μg/L)按比例稀释后配成质量浓度分别为0.2、1、2、5、10、20、50、100μg/L的混合标准溶液，于4℃下保存；

S4：绘制标准曲线：

用甲醇配制质量浓度分别为0.2,1,2,5,10,20,50和100μg/L的7种磺胺类抗生素混合标准溶液，以峰面积(y)对目标物的质量浓度(x)绘制标准曲线；

S5：高效液相色谱质谱联用仪MRM监测离子模式分析:

a.高效液相色谱条件：色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18(150mm×2.1mm,3.5um)；流动相：0.2％(V/V)甲酸(A)和甲醇(B)；流速为0.3mL/min；柱温：30℃；进样体积：5uL；梯度洗脱程序：0min 99％A，5min变为90％A，25min变为50％A，26min变为60％A，26.5min变为99％A，26.5-30min 99％A；

b.质谱条件：选择电喷雾离子(ESI)源正离子模式扫描，采用半自动进样方式，以5μL/min的流速将500μg/L的标准储备液分别注入离子源；监测模式为多反应离子监测(MRM)；选取对应的母离子峰，对其子离子进行二级质谱分析，得到碎片离子信息；

c.质谱分析过程中，离子源温度：500℃，离子喷雾电压：5500V；气帘气(curtaingas,CUR)压力为206 851.8Pa；喷雾气(ion source gas 1,GS1)压力为241 327.1Pa；辅助加热气(ion source gas 2,GS2)压力为275 802.4Pa；得到碎片离子信息后，接着对目标化合物二级质谱的CE、DP、EP、CXP等质谱参数进行优化；

S6：外标法定量：通过步骤S5分析后，根据绘制的色谱图计算出样品溶液的峰面积，并通过步骤S2所述的标准曲线计算出样品溶液中的7种磺胺类抗生素的浓度，目标物在1～100μg/L范围内呈良好的线性关系，以信噪比S/N＝3计算仪器方法检出限(LOD)，S/N＝10作为仪器方法定量限(LOQ)，同时对100μg/L的标准溶液连续测定3天，每天测定3次，计算日内和日间精密度。

实施例3

一种测定沉积物样品中7种磺胺类抗生素残留的方法，7种磺胺类抗生素包括磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺甲二唑、磺胺噻唑、磺胺甲嘧啶、磺胺苯吡唑、磺胺二甲嘧啶，包括以下步骤：

S1：样品采集：

在采样点采集沉积物样品，去杂，冷冻干燥后，置于研磨保存装置进行研磨并保存待测，研磨条件为过60目筛，保存温度为-20℃；

S2：样品前处理：

准确称取5±0.01g上述经研磨的沉积物样品，与2g±0.05g硅藻土混合装入33ml萃取池中，使用戴安300加速溶剂萃取(ASE)系统进行提取,提取条件为压力1600psi，温度90℃，保持10min，60％的冲洗体积，冲洗70s，用甲醇/丙酮(50/50，V/V)循环提取2次后得到提取液；该方法提高目标物的提取效率，进而提高检测的精确度；

将提取液旋转蒸发浓缩至2mL左右，用超纯水稀释到100mL；用4mol/L硫酸调节pH值为4，然后用经6mL甲醇、6mL超纯水依次活化Oasis HLB固相萃取小柱萃取，上样速度为5mL/min；接着用10mL的超纯水淋洗Oasis HLB小柱，并在负压条件下抽真空30分钟进行干燥，用2mL的2％氨水/甲醇洗脱两次，洗脱液氮气吹干，然后用10％的乙腈/水溶液定容至1mL，涡旋震荡3min；由于激素类药物过膜后会因吸附而发生损失，样品定容后10000g/min离心10min并过0.22μm滤膜去除可能存在的颗粒物；保存待HPLC-MS/MS测定分析；该方法制备至待测液，可以提高部分目标物的响应，甲醇/丙酮(1:1，v/v)对磺胺和激素的提取效果最好，有效提高检测灵敏度和抗干扰能力；

S3：配制混合标准溶液：

a.配制单标准储备液(10mg/L)：准确称取7种磺胺类抗生素各0.01g，用甲醇溶解定容于10mL容量瓶中，配成质量浓度为1000mg/L的标准储备液；分别取100μL(1000mg/L)标准储备液于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制质量浓度为10mg/L的标准储备液，储存于4℃冰箱中；

b.配制混合标准储备液(200μg/L)：准确吸取200μL各单标准储备液(10mg/L)于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制质量浓度为200μg/L的混合标准储备液，于4℃下保存；

c.用甲醇作为溶剂，将上述混合标准储备液(200μg/L)按比例稀释后配成质量浓度分别为0.2、1、2、5、10、20、50、100μg/L的混合标准溶液，于4℃下保存；

S4：绘制标准曲线：

用甲醇配制质量浓度分别为0.2,1,2,5,10,20,50和100μg/L的7种磺胺类抗生素混合标准溶液，以峰面积(y)对目标物的质量浓度(x)绘制标准曲线；

S5：高效液相色谱质谱联用仪MRM监测离子模式分析:

a.高效液相色谱条件：色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18(150mm×2.1mm,3.5um)；流动相：0.2％(V/V)甲酸(A)和甲醇(B)；流速为0.3mL/min；柱温：30℃；进样体积：5uL；梯度洗脱程序：0min 99％A，5min变为90％A，25min变为50％A，26min变为60％A，26.5min变为99％A，26.5-30min 99％A；

b.质谱条件：选择电喷雾离子(ESI)源正离子模式扫描，采用半自动进样方式，以5μL/min的流速将500μg/L的标准储备液分别注入离子源；监测模式为多反应离子监测(MRM)；选取对应的母离子峰，对其子离子进行二级质谱分析，得到碎片离子信息；

c.质谱分析过程中，离子源温度：500℃，离子喷雾电压：5500V；气帘气(curtaingas,CUR)压力为206 851.8Pa；喷雾气(ion source gas 1,GS1)压力为241 327.1Pa；辅助加热气(ion source gas 2,GS2)压力为275 802.4Pa；得到碎片离子信息后，接着对目标化合物二级质谱的CE、DP、EP、CXP等质谱参数进行优化；

S6：外标法定量：通过步骤S5分析后，根据绘制的色谱图计算出样品溶液的峰面积，并通过步骤S2所述的标准曲线计算出样品溶液中的7种磺胺类抗生素的浓度，目标物在1～100μg/L范围内呈良好的线性关系，以信噪比S/N＝3计算仪器方法检出限(LOD)，S/N＝10作为仪器方法定量限(LOQ)，同时对100μg/L的标准溶液连续测定3天，每天测定3次，计算日内和日间精密度。

实施例4

一种测定沉积物样品中7种磺胺类抗生素残留的方法，7种磺胺类抗生素包括磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺甲二唑、磺胺噻唑、磺胺甲嘧啶、磺胺苯吡唑、磺胺二甲嘧啶，包括以下步骤：

S1：样品采集：

在采样点采集沉积物样品，去杂，冷冻干燥后，置于研磨保存装置进行研磨并保存待测，研磨条件为过60目筛，保存温度为-20℃；

S2：样品前处理：

准确称取5±0.01g上述经研磨的沉积物样品，于室温下暗处放置24h，后将加标的沉积物样品加入质量比为1:7的乙醇溶剂，乙醇溶剂的体积浓度为45％，先将液体升温至18℃超声处理4min，后以2℃/min的速度升温至42℃，升温期间保持超声处理，并在42℃保持一段时间，超声功率为180W，超声时间为20min，间歇时间为5s。该范围区间下进行超声处理，提取效果最好，且不会影响待测物质损失。超声处理后过0.22μm滤膜，收集滤液a，并保留滤渣进行待用；将滤渣与2g±0.05g硅藻土混合装入33ml萃取池中，使用戴安300加速溶剂萃取(ASE)系统进行提取,提取条件为压力1400psi，温度70℃，保持10min，60％的冲洗体积，冲洗50s，用甲醇/丙酮(50/50，V/V)循环提取2次后得到滤液b,将滤液a与滤液b混合并震荡2分钟后得到提取液；该方法能够大幅缩短提取时间，提高目标物的提取效率，回收率高，沉积物成分提取充分，进而提高检测的精确度；

将提取液旋转蒸发浓缩至2mL左右，用超纯水稀释到100mL；用4mol/L硫酸调节pH值为4，然后用经6mL甲醇、6mL超纯水依次活化Oasis HLB固相萃取小柱萃取，上样速度为2mL/min；接着用10mL的超纯水淋洗Oasis HLB小柱，并在负压条件下抽真空30分钟进行干燥，用2mL的2％氨水/甲醇洗脱两次，洗脱液氮气吹干，然后用10％的乙腈/水溶液定容至1mL，涡旋震荡2min；由于激素类药物过膜后会因吸附而发生损失，样品定容后10000g/min离心10min并过0.22μm滤膜去除可能存在的颗粒物；保存待HPLC-MS/MS测定分析；该方法制备至待测液，可以提高部分目标物的响应，甲醇/丙酮(1:1，v/v)对磺胺和激素的提取效果最好，有效提高检测灵敏度和抗干扰能力；

S3：配制混合标准溶液：

a.配制单标准储备液(10mg/L)：准确称取7种磺胺类抗生素各0.01g，用甲醇溶解定容于10mL容量瓶中，配成质量浓度为1000mg/L的标准储备液；分别取100μL(1000mg/L)标准储备液于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制质量浓度为10mg/L的标准储备液，储存于4℃冰箱中；

b.配制混合标准储备液(200μg/L)：准确吸取200μL各单标准储备液(10mg/L)于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制质量浓度为200μg/L的混合标准储备液，于4℃下保存；

c.用甲醇作为溶剂，将上述混合标准储备液(200μg/L)按比例稀释后配成质量浓度分别为0.2、1、2、5、10、20、50、100μg/L的混合标准溶液，于4℃下保存；

S4：绘制标准曲线：

用甲醇配制质量浓度分别为0.2,1,2,5,10,20,50和100μg/L的7种磺胺类抗生素混合标准溶液，以峰面积(y)对目标物的质量浓度(x)绘制标准曲线；

S5：高效液相色谱质谱联用仪MRM监测离子模式分析:

a.高效液相色谱条件：色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18(150mm×2.1mm,3.5um)；流动相：0.2％(V/V)甲酸(A)和甲醇(B)；流速为0.3mL/min；柱温：30℃；进样体积：5uL；梯度洗脱程序：0min 99％A，5min变为90％A，25min变为50％A，26min变为60％A，26.5min变为99％A，26.5-30min 99％A；

b.质谱条件：选择电喷雾离子(ESI)源正离子模式扫描，采用半自动进样方式，以5μL/min的流速将500μg/L的标准储备液分别注入离子源；监测模式为多反应离子监测(MRM)；选取对应的母离子峰，对其子离子进行二级质谱分析，得到碎片离子信息；

c.质谱分析过程中，离子源温度：500℃，离子喷雾电压：5500V；气帘气(curtaingas,CUR)压力为206 851.8Pa；喷雾气(ion source gas 1,GS1)压力为241 327.1Pa；辅助加热气(ion source gas 2,GS2)压力为275 802.4Pa；得到碎片离子信息后，接着对目标化合物二级质谱的CE、DP、EP、CXP等质谱参数进行优化；

S6：外标法定量：通过步骤S5分析后，根据绘制的色谱图计算出样品溶液的峰面积，并通过步骤S2所述的标准曲线计算出样品溶液中的7种磺胺类抗生素的浓度，目标物在1～100μg/L范围内呈良好的线性关系，以信噪比S/N＝3计算仪器方法检出限(LOD)，S/N＝10作为仪器方法定量限(LOQ)，同时对100μg/L的标准溶液连续测定3天，每天测定3次，计算日内和日间精密度。

实施例5

一种测定沉积物样品中7种磺胺类抗生素残留的方法，7种磺胺类抗生素包括磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺甲二唑、磺胺噻唑、磺胺甲嘧啶、磺胺苯吡唑、磺胺二甲嘧啶，包括以下步骤：

S1：样品采集：

在采样点采集沉积物样品，去杂，冷冻干燥后，置于研磨保存装置进行研磨并保存待测，研磨条件为过60目筛，保存温度为-20℃；

S2：样品前处理：

准确称取5±0.01g上述经研磨的沉积物样品，于室温下暗处放置24h，后将加标的沉积物样品加入质量比为1:7的乙醇溶剂，乙醇溶剂的体积浓度为45％，先将液体升温至18℃超声处理4min，后以2℃/min的速度升温至42℃，升温期间保持超声处理，并在42℃保持一段时间，超声功率为240W，超声时间为25min，间歇时间为40s。该范围区间下进行超声处理，提取效果最好，且不会影响待测物质损失。超声处理后过0.22μm滤膜，收集滤液a，并保留滤渣进行待用；将滤渣与2g±0.05g硅藻土混合装入33ml萃取池中，使用戴安300加速溶剂萃取(ASE)系统进行提取,提取条件为压力1500psi，温度80℃，保持10min，60％的冲洗体积，冲洗60s，用甲醇/丙酮(50/50，V/V)循环提取2次后得到滤液b,将滤液a与滤液b混合并震荡3分钟后得到提取液；该方法能够大幅缩短提取时间，提高目标物的提取效率，回收率高，沉积物成分提取充分，进而提高检测的精确度；

将提取液旋转蒸发浓缩至2mL左右，用超纯水稀释到100mL；用4mol/L硫酸调节pH值为4，然后用经6mL甲醇、6mL超纯水依次活化Oasis HLB固相萃取小柱萃取，上样速度为4mL/min；接着用10mL的超纯水淋洗Oasis HLB小柱，并在负压条件下抽真空30分钟进行干燥，用2mL的2％氨水/甲醇洗脱两次，洗脱液氮气吹干，然后用10％的乙腈/水溶液定容至1mL，涡旋震荡2min；由于激素类药物过膜后会因吸附而发生损失，样品定容后10000g/min离心10min并过0.22μm滤膜去除可能存在的颗粒物；保存待HPLC-MS/MS测定分析；该方法制备至待测液，可以提高部分目标物的响应，甲醇/丙酮(1:1，v/v)对磺胺和激素的提取效果最好，有效提高检测灵敏度和抗干扰能力；

S3：配制混合标准溶液：

a.配制单标准储备液(10mg/L)：准确称取7种磺胺类抗生素各0.01g，用甲醇溶解定容于10mL容量瓶中，配成质量浓度为1000mg/L的标准储备液；分别取100μL(1000mg/L)标准储备液于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制质量浓度为10mg/L的标准储备液，储存于4℃冰箱中；

b.配制混合标准储备液(200μg/L)：准确吸取200μL各单标准储备液(10mg/L)于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制质量浓度为200μg/L的混合标准储备液，于4℃下保存；

c.用甲醇作为溶剂，将上述混合标准储备液(200μg/L)按比例稀释后配成质量浓度分别为0.2、1、2、5、10、20、50、100μg/L的混合标准溶液，于4℃下保存；

S4：绘制标准曲线：

用甲醇配制质量浓度分别为0.2,1,2,5,10,20,50和100μg/L的7种磺胺类抗生素混合标准溶液，以峰面积(y)对目标物的质量浓度(x)绘制标准曲线；

S5：高效液相色谱质谱联用仪MRM监测离子模式分析:

a.高效液相色谱条件：色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18(150mm×2.1mm,3.5um)；流动相：0.2％(V/V)甲酸(A)和甲醇(B)；流速为0.3mL/min；柱温：30℃；进样体积：5uL；梯度洗脱程序：0min 99％A，5min变为90％A，25min变为50％A，26min变为60％A，26.5min变为99％A，26.5-30min 99％A；

b.质谱条件：选择电喷雾离子(ESI)源正离子模式扫描，采用半自动进样方式，以5μL/min的流速将500μg/L的标准储备液分别注入离子源；监测模式为多反应离子监测(MRM)；选取对应的母离子峰，对其子离子进行二级质谱分析，得到碎片离子信息；

c.质谱分析过程中，离子源温度：500℃，离子喷雾电压：5500V；气帘气(curtaingas,CUR)压力为206 851.8Pa；喷雾气(ion source gas 1,GS1)压力为241 327.1Pa；辅助加热气(ion source gas 2,GS2)压力为275 802.4Pa；得到碎片离子信息后，接着对目标化合物二级质谱的CE、DP、EP、CXP等质谱参数进行优化；

S6：外标法定量：通过步骤S5分析后，根据绘制的色谱图计算出样品溶液的峰面积，并通过步骤S2所述的标准曲线计算出样品溶液中的7种磺胺类抗生素的浓度，目标物在1～100μg/L范围内呈良好的线性关系，以信噪比S/N＝3计算仪器方法检出限(LOD)，S/N＝10作为仪器方法定量限(LOQ)，同时对100μg/L的标准溶液连续测定3天，每天测定3次，计算日内和日间精密度。

实施例6

一种测定沉积物样品中7种磺胺类抗生素残留的方法，7种磺胺类抗生素包括磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺甲二唑、磺胺噻唑、磺胺甲嘧啶、磺胺苯吡唑、磺胺二甲嘧啶，包括以下步骤：

S1：样品采集：

在采样点采集沉积物样品，去杂，冷冻干燥后，置于研磨保存装置进行研磨并保存待测，研磨条件为过60目筛，保存温度为-20℃；

S2：样品前处理：

准确称取5±0.01g上述经研磨的沉积物样品，于室温下暗处放置24h，后将加标的沉积物样品加入质量比为1:7的乙醇溶剂，乙醇溶剂的体积浓度为45％，先将液体升温至18℃超声处理4min，后以2℃/min的速度升温至42℃，升温期间保持超声处理，并在42℃保持一段时间，超声功率为350W，超声时间为30min，间歇时间为45s。该范围区间下进行超声处理，提取效果最好，且不会影响待测物质损失。超声处理后过0.22μm滤膜，收集滤液a，并保留滤渣进行待用；将滤渣与2g±0.05g硅藻土混合装入33ml萃取池中，使用戴安300加速溶剂萃取(ASE)系统进行提取,提取条件为压力1600psi，温度90℃，保持10min，60％的冲洗体积，冲洗70s，用甲醇/丙酮(50/50，V/V)循环提取2次后得到滤液b,将滤液a与滤液b混合并震荡2分钟后得到提取液；该方法能够大幅缩短提取时间，提高目标物的提取效率，回收率高，沉积物成分提取充分，进而提高检测的精确度；

将提取液旋转蒸发浓缩至2mL左右，用超纯水稀释到100mL；用4mol/L硫酸调节pH值为4，然后用经6mL甲醇、6mL超纯水依次活化Oasis HLB固相萃取小柱萃取，上样速度为5mL/min；接着用10mL的超纯水淋洗Oasis HLB小柱，并在负压条件下抽真空30分钟进行干燥，用2mL的2％氨水/甲醇洗脱两次，洗脱液氮气吹干，然后用10％的乙腈/水溶液定容至1mL，涡旋震荡3min；由于激素类药物过膜后会因吸附而发生损失，样品定容后10000g/min离心10min并过0.22μm滤膜去除可能存在的颗粒物；保存待HPLC-MS/MS测定分析；该方法制备至待测液，可以提高部分目标物的响应，甲醇/丙酮(1:1，v/v)对磺胺和激素的提取效果最好，有效提高检测灵敏度和抗干扰能力；

S3：配制混合标准溶液：

a.配制单标准储备液(10mg/L)：准确称取7种磺胺类抗生素各0.01g，用甲醇溶解定容于10mL容量瓶中，配成质量浓度为1000mg/L的标准储备液；分别取100μL(1000mg/L)标准储备液于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制质量浓度为10mg/L的标准储备液，储存于4℃冰箱中；

b.配制混合标准储备液(200μg/L)：准确吸取200μL各单标准储备液(10mg/L)于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制质量浓度为200μg/L的混合标准储备液，于4℃下保存；

c.用甲醇作为溶剂，将上述混合标准储备液(200μg/L)按比例稀释后配成质量浓度分别为0.2、1、2、5、10、20、50、100μg/L的混合标准溶液，于4℃下保存；

S4：绘制标准曲线：

用甲醇配制质量浓度分别为0.2,1,2,5,10,20,50和100μg/L的7种磺胺类抗生素混合标准溶液，以峰面积(y)对目标物的质量浓度(x)绘制标准曲线；

S5：高效液相色谱质谱联用仪MRM监测离子模式分析:

a.高效液相色谱条件：色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18(150mm×2.1mm,3.5um)；流动相：0.2％(V/V)甲酸(A)和甲醇(B)；流速为0.3mL/min；柱温：30℃；进样体积：5uL；梯度洗脱程序：0min 99％A，5min变为90％A，25min变为50％A，26min变为60％A，26.5min变为99％A，26.5-30min 99％A；

b.质谱条件：选择电喷雾离子(ESI)源正离子模式扫描，采用半自动进样方式，以5μL/min的流速将500μg/L的标准储备液分别注入离子源；监测模式为多反应离子监测(MRM)；选取对应的母离子峰，对其子离子进行二级质谱分析，得到碎片离子信息；

c.质谱分析过程中，离子源温度：500℃，离子喷雾电压：5500V；气帘气(curtaingas,CUR)压力为206 851.8Pa；喷雾气(ion source gas 1,GS1)压力为241 327.1Pa；辅助加热气(ion source gas 2,GS2)压力为275 802.4Pa；得到碎片离子信息后，接着对目标化合物二级质谱的CE、DP、EP、CXP等质谱参数进行优化；

S6：外标法定量：通过步骤S5分析后，根据绘制的色谱图计算出样品溶液的峰面积，并通过步骤S2所述的标准曲线计算出样品溶液中的7种磺胺类抗生素的浓度，目标物在1～100μg/L范围内呈良好的线性关系，以信噪比S/N＝3计算仪器方法检出限(LOD)，S/N＝10作为仪器方法定量限(LOQ)，同时对100μg/L的标准溶液连续测定3天，每天测定3次，计算日内和日间精密度。

选用实施例2的方法数据对本发明做进一步的实验论证，以2016年太湖24个采样点所采集的沉积物样品为例，进行测定沉积物样品中以下7种磺胺类抗生素残留，7种磺胺类抗生素包括：磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺甲嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲二唑、磺胺甲恶唑及磺胺苯吡唑；得到以下数据:

1)7种磺胺类抗生素的线性方程、相关系数、日内和日间精密度、检出限和定量限，见表1:

表1

2)7种磺胺类抗生素的参数及其LC-MS检测参数，见表2:

表2

选用实施例5的方法数据对本发明做进一步的实验论证，以2016年太湖24个采样点所采集的沉积物样品为例，进行测定沉积物样品中以下7种磺胺类抗生素残留，7种磺胺类抗生素包括：磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺甲嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲二唑、磺胺甲恶唑及磺胺苯吡唑；得到以下数据:

1)7种磺胺类抗生素的线性方程、相关系数、日内和日间精密度、检出限和定量限，见表3:

表3

2)7种磺胺类抗生素的参数及其LC-MS检测参数，见表4:

表4

研磨保存装置主要包括主舱体1、进料斗2和存放仓3；进料斗2位于主舱体1的上端，存放仓3位于主舱体1的下端；主舱体1与进料斗2的连接处内设有三个并列排放的粗研磨轮5，粗研磨轮5通过粗研磨电机板52与进料斗2两端内壁连接，进料斗2的左侧面下端设有粗研磨电机控制器51，粗研磨电机控制器51与粗研磨电机板52进行连接，进料斗2内壁中间位置环绕有挡料块21，可以阻隔研磨样品从侧壁缝隙通过而影响研磨效率；主舱体1内部中间位置设有震荡筛分板6，震荡筛分板6的左侧设有震动控制器61，震荡控制器61固定于主舱体1的外左侧面上，震荡控制器61与震荡筛分板6进行连接，震荡筛分板6的右侧设有移料装置4，移料装置4的下端固定于主舱体1的外右侧面，移料装置4的上端与进料斗2的右顶端连接，震荡筛分板6的下端设有精研磨装置7，精研磨装置7从上到下依次分为一级研磨盘71、二级研磨盘72和三级研磨盘73，一级研磨盘71上围绕圆心阵列设有多个集料条孔711，二级研磨盘72上等间距排列有多个球孔722，每个球孔722内都置有一个小球721，三级研磨盘73上围绕圆心阵列有多个研磨条731，每个研磨条731之间均设有一个筛网732，精研磨装置7中心设有精研磨电机8，精研磨电机8带动一级研磨盘71、二级研磨盘72和三级研磨盘73进行转动，一级研磨盘71和三级研磨盘73与二级研磨盘72转动方向相反。可以有效提高研磨效率，并提高精研磨装置7运转的稳定性。精研磨装置7的左端设有精研磨电机控制器81，精研磨电机控制器81固定于主舱体1的外左侧面上，精研磨电机控制器81与精研磨电机8进行连接，主舱体1的下底面中心设有出料口9，出料口9的下端设有电动闸门91，出料口9上设有固定架92，固定架92和精研磨电机8通过固定杆82固定连接；存放仓3的下底面中心设有取料口10，存放仓3的左侧面上设有温湿度控制器31。本装置采用粗研磨和精研磨的二次研磨提高了研磨存放装置的使用寿命和研磨精度，设置的移料装置4可以将未过震荡筛分板6的研磨样品进行二次粗研磨，提高研磨样品使用率和研磨质量，精研磨装置7通过一级研磨盘71、二级研磨盘72和三级研磨盘73的相互配合通过球磨、挤压等共同作用来提高研磨效率和研磨精度，在主舱体1下端设有的存放仓3可以将研磨好的研磨样品进行存放，保证研磨样品不会因不适宜的温湿度而出现问题，进而影响后期实验检测的准确度。

上述研磨保存装置的工作方法为:将待研磨样品加入到进料斗2，通过环绕的挡料块21使待研磨样品落入粗研磨轮5处进行粗研磨，待粗研磨后落入震荡筛分板6进行震荡筛分，通过移料装置4将未过震荡筛分板6的研磨样品移至进料斗2进行二次粗研磨，通过震荡筛分板6后落入精研磨装置7，依次通过一级研磨盘71的集料条孔711使研磨样品均匀落入二级研磨盘72，通过球孔722和小球721的挤压球磨对研磨样品进行精研磨，并通过三级研磨盘73的研磨条731对三级研磨盘73进行区域分隔并配合筛网732对研磨进行更快速的筛分研磨，通过出料口9落入存放仓3，研磨完成后电动闸门91关闭，通过温湿度控制器31对存放仓3内温湿度进行调节，保存研磨样品。

为了进一步说明本发明装置，选用实施例2的方法数据，添加10μg/kg浓度的目标物，采用传统研磨装置和本发明研磨保存装置来进行样品前处理，以沉积物样品中7种磺胺类抗生素的回收率与精密度，进行数据对比:

本发明研磨装置结果见表5:

表5

传统研磨装置结果见表6:

表6

由以上数据对比可以看出，本发明装置相对于传统研磨装置，对检测结果产生了一定影响，使用本装置的一组检测更加准确，添加回收样品间的相对偏差低，实验误差小，一定程度上提高了本发明方法检测的精确度。

实验验证：

1.流动相的选择：一般情况下，酸性条件下可提高化合物[M+H]+的正离子响应，本实验采用ESI+模式，分别用乙腈-水溶液、甲醇-水溶液、甲醇-0.2％甲酸水溶液作为流动相，对7种磺胺类抗生素(100μg/L)的分离效果进行比较，其总离子流色谱图见图1。结果发现以甲醇-水为流动相时目标物峰的质谱响应和分离度更好，而添加甲酸对目标物的分离影响不大，但是可以提高部分目标物的响应，因此选择甲醇-0.2％甲酸水溶液为流动相。

2.提取溶剂的选择：比较了常用提取试剂甲醇、乙酸乙酯和甲醇/丙酮(1:1，v/v)对磺胺类抗生素的提取效果，结果发现三种提取溶剂中乙酸乙酯提取回收率最低，发现甲醇/丙酮(1:1，v/v)对磺胺和激素的提取效果最好，磺胺类抗生素的回收率达到68.7％～106.6％。

3.回收率与精密度：以目标物极低的沉积物作为对照组，且将其浓度作为空白控制的基线值。分别添加低(1μg/kg)、中(5μg/kg)、高(50μg/kg)3个不同浓度的目标物，每个浓度设置3个平行样，检测结果扣除替代样品的基线值。沉积物样品中7种磺胺类抗生素的平均加标回收率为68.7％～106.6％。见表7:

表7

4、对2016年太湖24个采样点的沉积物样品中7种目标化合物的检测分析，7种磺胺类抗生素在太湖沉积物中的暴露浓度(μg/kg)，结果见表8:

表8

结论:本发明建立的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)同时测定农田沉积物中7种磺胺类抗生素残留的分析方法。本发明的方法检出限低，稳定性好，检测灵敏度高，用于沉积物样品中磺胺类抗生素快速筛查，基本能够满足沉积物样品中7种磺胺类抗生素残留的检测要求。

最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明实施例技术方案的精神和范围。

Claims (9)

1.一种测定沉积物样品中7种磺胺类抗生素残留的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：样品采集：

在采样点采集沉积物样品，去杂，冷冻干燥后，置于研磨保存装置进行研磨并保存待测，研磨条件为过60目筛，保存温度为-20℃；

S2：样品前处理：

准确称取5±0.01g上述经研磨的沉积物样品，与2g±0.05g硅藻土混合装入33ml萃取池中，使用戴安300加速溶剂萃取系统进行提取，用甲醇/丙酮(50/50，V/V)循环提取2次后得到提取液；

将提取液旋转蒸发浓缩至2mL左右，用超纯水稀释到100mL；用4mol/L硫酸调节pH值为4，然后用经6mL甲醇、6mL超纯水依次活化的Oasis HLB固相萃取小柱萃取，上样速度为2～5mL/min；接着用10mL的超纯水淋洗Oasis HLB小柱，并在负压条件下抽真空30分钟进行干燥，用2mL的2％氨水/甲醇洗脱两次，洗脱液氮气吹干，然后用10％的乙腈/水溶液定容至1mL，涡旋震荡2～3min；

样品定容后10000g/min离心10min并过0.22μm滤膜，保存待HPLC-MS/MS测定分析；

S3：配制混合标准溶液：

a.配制单标准储备液(10mg/L)：将7种磺胺类抗生素各配制成质量浓度为10mg/L的单标准储备液，储存于4℃环境下备用；

b.配制混合标准储备液(200μg/L)：准确吸取200μL各单标准储备液(10mg/L)于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制质量浓度为200μg/L的混合标准储备液，于4℃下保存；

c.用甲醇作为溶剂，将上述混合标准储备液(200μg/L)按比例稀释后配成质量浓度分别为0.2、1、2、5、10、20、50、100μg/L的混合标准溶液，于4℃下保存；

S4：绘制标准曲线：

用甲醇配制质量浓度分别为0.2,1,2,5,10,20,50和100μg/L的7种磺胺类抗生素混合标准溶液，以峰面积(y)对目标物的质量浓度(x)绘制标准曲线；

S5：高效液相色谱质谱联用仪MRM监测离子模式分析；

S6：外标法定量：通过步骤S5分析后，根据绘制的色谱图计算出样品溶液的峰面积，并通过步骤S2所述的标准曲线计算出样品溶液中的7种磺胺类抗生素的浓度，目标物在1～100μg/L范围内呈良好的线性关系，以信噪比S/N＝3计算仪器方法检出限，S/N＝10作为仪器方法定量限，同时对100μg/L的标准溶液连续测定3天，每天测定3次，计算日内和日间精密度。

2.根据权利要求1所述的一种测定沉积物中7种磺胺类抗生素残留的分析方法，其特征在于，所述7种磺胺类抗生素包括磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺甲二唑、磺胺噻唑、磺胺甲嘧啶、磺胺苯吡唑、磺胺二甲嘧啶。

3.根据权利要求1所述的一种测定沉积物中7种磺胺类抗生素残留的分析方法，其特征在于，所述步骤S2中提取条件为压力1400～1600psi，温度70～90℃，保持10分钟，60％的冲洗体积，冲洗50～70s。

4.根据权利要求1所述的一种测定沉积物中7种磺胺类抗生素残留的分析方法，其特征在于，所述高效液相色谱质谱联用仪MRM监测离子模式分析的条件为:

a.高效液相色谱条件：色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18(150mm×2.1mm,3.5um)；流动相：0.2％(V/V)甲酸(A)和甲醇(B)；流速为0.3mL/min；柱温：30℃；进样体积：5uL；

b.质谱条件：选择电喷雾离子源正离子模式扫描，采用半自动进样方式，以5μL/min的流速将500μg/L的标准储备液分别注入离子源；选取对应的母离子峰，对其子离子进行二级质谱分析，得到碎片离子信息。

5.根据权利要求4所述的一种测定沉积物中7种磺胺类抗生素残留的分析方法，其特征在于，所述质谱分析过程中，离子源温度：500℃，离子喷雾电压：5500V；气帘气压力为206851.8Pa；喷雾气压力为241 327.1Pa；辅助加热气压力为275 802.4Pa。

6.根据权利要求1所述的一种测定沉积物中7种磺胺类抗生素残留的分析方法，其特征在于，所述步骤S2中使用戴安300加速溶剂萃取系统进行提取时温度条件为70～90℃。

7.根据权利要求1所述的一种测定沉积物中7种磺胺类抗生素残留的分析方法，其特征在于，所述研磨保存装置主要包括主舱体(1)、进料斗(2)和存放仓(3)；所述进料斗(2)位于主舱体(1)的上端，所述存放仓(3)位于主舱体(1)的下端；所述主舱体(1)与进料斗(2)的连接处内设有三个并列排放的粗研磨轮(5)，所述粗研磨轮(5)通过粗研磨电机板(52)与进料斗(2)两端内壁连接，进料斗(2)的左侧面下端设有粗研磨电机控制器(51)，所述粗研磨电机控制器(51)与所述粗研磨电机板(52)进行连接；主舱体(1)内部中间位置设有震荡筛分板(6)，所述震荡筛分板(6)的左侧设有震动控制器(61)，所述震荡控制器(61)固定于主舱体(1)的外左侧面上，震荡控制器(61)与震荡筛分板(6)进行连接，震荡筛分板(6)的右侧设有移料装置(4)，所述移料装置(4)的下端固定于主舱体(1)的外右侧面，移料装置(4)的上端与进料斗(2)的右顶端连接，震荡筛分板(6)的下端设有精研磨装置(7)，所述精研磨装置(7)从上到下依次分为一级研磨盘(71)、二级研磨盘(72)和三级研磨盘(73)，所述一级研磨盘(71)上围绕圆心阵列设有多个集料条孔(711)，所述二级研磨盘(72)上等间距排列有多个球孔(722)，每个球孔(722)内都置有一个小球(721)，所述三级研磨盘(73)上围绕圆心阵列有多个研磨条(731)，所述每个研磨条(731)之间均设有一个筛网(732)，所述精研磨装置(7)中心设有精研磨电机(8)，精研磨电机(8)带动一级研磨盘(71)、二级研磨盘(72)和三级研磨盘(73)进行转动，精研磨装置(7)的左端设有精研磨电机控制器(81)，所述精研磨电机控制器(81)固定于主舱体(1)的外左侧面上，精研磨电机控制器(81)与精研磨电机(8)进行连接，主舱体(1)的下底面中心设有出料口(9)，所述出料口(9)的下端设有电动闸门(91)，出料口(9)上设有固定架(92)，所述固定架(92)和精研磨电机(8)通过固定杆(82)固定连接；所述存放仓(3)的下底面中心设有取料口(10)，存放仓(3)的左侧面上设有温湿度控制器(31)。

8.根据权利要求7所述的一种测定沉积物中7种磺胺类抗生素残留的分析方法，其特征在于，所述一级研磨盘(71)和三级研磨盘(73)与二级研磨盘(72)转动方向相反。

9.根据权利要求7所述的一种测定沉积物中7种磺胺类抗生素残留的分析方法，其特征在于，所述进料斗(2)内壁中间位置环绕有挡料块(21)。