CN108524901B - 缓解宫寒的发酵清液及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种缓解宫寒的发酵清液及其制备方法和用途。所述发酵清液由包括如下组分的原料制备得到：重瓣红玫瑰180～250重量份，玫瑰茄100～140重量份，枸杞60～100重量份，生姜140～180重量份，果蔬液600～1200重量份，发酵剂0.2～0.8重量份，酶制剂12～20重量份和水2000～2600重量份。本发明的发酵清液具有良好的缓解宫寒作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种缓解宫寒的发酵清液，还涉及该发酵清液的制备方法和用途。
背景技术
宫寒即“胞宫寒冷”，是中医对女性疾病证候的一种阐述，特别是基于寒凝胞宫，阻痹经络，气血失荣的病机而阐述的。从西医角度，宫寒是由于盆腔微循环障碍引起的盆腔淤血，盆腔供血不好导致盆腔缺血缺氧后出现的一系列症状，包括经前小腹有坠胀感，白带清晰量多，月经来迟，月经期间月经量少，月经色黑有血块，并伴有腰酸或痛、两乳胀痛等现象，少数有反胃、作呕反应；严重者会导致不孕或慢性盆腔炎、子宫内膜异位症、阴道炎等妇科疾病。
由于西药对人体有一定的副作用，因而针对宫寒的治疗多采用中药或食疗方式进行调理。常用中药包括温经汤、桂枝茯苓丸、艾附暖宫丸、金匮肾气丸等，食疗包括在月经期间采用红糖、艾叶煮水，食用阿胶枸杞鸡，以及食用当归羊肉汤等。而又由于中药在一定程度上存在口感差、难以吞咽等问题，因而大多女性多采用食疗方式进行调理。
CN101879294B公开了一种治疗宫寒的中药组合物，由阿胶、当归、川芎、红花、远志、苏木为君药，以白芨、鲜地黄、艾叶、杏仁、韭菜为臣药，佐以乌贼骨、白芷、鹿茸、甘草、党参，使药以杜仲、砂仁、熟地黄、黄芩、麝香和乳香制备得到。该中药组合物组方重在“活血散结、行气解郁”，从而达到调节内分泌，起到调经、止血、止痛、消炎、恢复卵巢功能的治疗作用，防止了更为严重的妇科病变。该组合物药物众多，且需要多种名贵药物，成本较高。
CN103203006B公开了一种治疗宫寒的中药汤剂，其原料药组成为：生姜、大枣、当归、黄芪、益母草、续断、川芎、藏红花、远志、肉苁蓉、枸杞、葱白、陈皮、制附片、生地、阿胶和金银花。该汤剂旨在从温阳化气，固本添精，调理冲任的角度治疗宫寒。该组合物同样存在处方量大，药物过多的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明的第一个目的在于提供一种发酵清液，其具有良好的缓解宫寒作用，且药用原料种类少，成本低。
本发明的第二个目的在于提供上述发酵清液的制备方法，其发酵周期较短，利于推广应用。
本发明的第三个目的在于提供一种发酵饮品，其适用人群较广，且具有良好的缓解宫寒作用。
本发明的第四个目的在于提供上述发酵清液的用途。
本发明提供一种缓解宫寒的发酵清液，其由包括如下组分的原料制备得到：重瓣红玫瑰180～250重量份，玫瑰茄100～140重量份，枸杞60～100重量份，生姜140～180重量份，果蔬液600～1200重量份，发酵剂0.2～0.8重量份，酶制剂12～20重量份和水2000～2600重量份。
根据本发明的发酵清液，优选地，所述果蔬浆是将如下水果和蔬菜破碎打浆后得到：苹果150～240重量份、梨150～240重量份、桃100～210重量份、香蕉50～130重量份、胡萝卜20～60重量份、西红柿30～70重量份、西葫芦20～45重量份和西兰花20～45重量份。
根据本发明的发酵清液，优选地，所述酶制剂包括纤维素酶和果胶酶；所述发酵剂选自乳酸菌、酵母、红曲霉或枯草芽孢杆菌的一种或多种。
根据本发明的发酵清液，优选地，所述酶制剂包括纤维素酶6～12重量份和果胶酶5～11重量份；所述发酵剂包括肠膜明串珠菌0.1～0.3重量份和鼠李糖乳杆菌0.15～0.35重量份。
根据本发明的发酵清液，优选地，所述发酵清液的原料还包括氮源30～60重量份；所述氮源选自小麦低聚肽、大豆蛋白肽和酵母抽提物中的一种或几种。
本发明还提供所述发酵清液的制备方法，包括如下步骤：
(1)将所述的重瓣红玫瑰、玫瑰茄、枸杞、生姜、果蔬浆和水混合形成混合物，将所述混合物在酶制剂的作用下进行酶解得到酶解液；
(2)将所述酶解液进行灭酶提取处理，得到灭酶提取液；
(3)将所述的灭酶提取液调节pH值至5.5～6.0，灭菌处理得到灭菌产物；将所述灭菌产物在发酵剂的作用下进行发酵处理得到发酵产物；将所述发酵产物进行固液分离，得到所述发酵清液。
在某些实施方案中，将所述的灭酶提取液和氮源混合均匀，然后调节pH值至5.5～6.0，灭菌处理得到灭菌产物；将所述灭菌产物在发酵剂的作用下进行发酵处理得到发酵产物；将所述发酵产物进行固液分离，得到所述发酵清液，
根据本发明的制备方法，优选地，步骤(1)中，所述混合物调节pH值为4～6，酶解温度为40～60℃，酶解时间为60～180min；步骤(2)中，灭酶提取温度为80～100℃，灭酶提取时间为0.4～1.0h。
根据本发明的制备方法，优选地，步骤(3)中，所述发酵处理方法为：首先将肠膜明串珠菌0.1～0.3重量份接种至所述灭菌产物，在温度为25～40℃且搅拌速度为20～100r/min下发酵12～16d，得到第一发酵液；将鼠李糖乳杆菌0.15～0.35重量份和短双歧杆菌0.1～0.35重量份接种至第一发酵液，在温度为25～40℃且搅拌速度为20～100r/min下发酵4～8d，得到作为所述发酵产物的第二发酵液。
本发明还提供一种缓解宫寒的发酵饮品，包含上述发酵清液和调配剂，且所述发酵清液和调配剂的重量比为1～3:1；所述调配剂包括低聚半乳糖250～350重量份、低聚木糖150～300重量份、乙二胺四乙酸铁钠0.5～1.5重量份、干姜粉8～15重量份、食品香精70～120重量份、赤藓糖醇200～500重量份、柠檬酸钠8～15重量份、食用盐3～7重量份、浓缩草莓清汁350～480重量份、增稠剂10～15重量份和玫瑰香精8～15重量份。
本发明还提供所述发酵清液用于制备缓解宫寒的药物、食品或饮品的用途。
本发明的发酵清液选择药用原料重瓣红玫瑰、玫瑰茄、枸杞和生姜为基础，采用果蔬浆为底物，发酵剂发酵，并合理配置各组分含量，各原料之间相互配合，协同作用，得到的发酵液具有良好的缓解女性宫寒的作用，且药用原料种类少，成本低。本发明通过加入优选的果蔬浆，使反应底物营养丰富，通过酶解和发酵处理后，更有利于营养成分的吸收利用，同时果蔬浆各原料本身的凉性显著缓解。采用本发明优选的发酵剂进行发酵，能够更有效地提高本发明药用原料和果蔬浆转化为可吸收的小分子物质的转化率，有效促进人体肠道吸收，使得发酵液整体具有更佳的缓解宫寒作用。采用本发明优选的氮源种类及用量，对本发明菌种的发酵过程控制和酶量表达具有显著正面影响，并有助于抑制杂菌的生长，保证发酵物的质量稳定。本发明的制备方法工艺简单，周期较短，适合工业化生产。本发明的发酵清液的药用原料均为药食两用，服用安全；改善宫寒效果明显且持久，无明显不良反应。
附图说明
图1为实施例1的发酵清液在发酵过程中活菌数变化趋势图。
图2为实施例1的发酵清液在发酵过程中总酸变化趋势图。
图3为实施例1的发酵清液在发酵过程中pH变化趋势图。
图4为实施例1的发酵清液在发酵过程中总糖含量变化趋势图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围并不限于此。
本发明中，重瓣红玫瑰为蔷薇科植物重瓣红玫瑰Rose rugosa cv.Plena的干燥花蕾。玫瑰茄为锦葵科木槿属植物玫瑰茄Hibiscus sabdariffa Linn.的花萼。
<发酵清液>
本发明的发酵清液具有缓解宫寒作用，其由包括如下组分的原料制备得到：重瓣红玫瑰180～250重量份，玫瑰茄100～140重量份，枸杞60～100重量份，生姜140～180重量份，果蔬液600～1200重量份，发酵剂0.2～0.8重量份，酶制剂12～20重量份和水2000～2600重量份。根据本发明的一个实施方式，本发明的发酵清液的活性成分仅由上述原料制备得到。
本发明中，优选地，发酵清液由包括如下组分组成的原料制备得到：重瓣红玫瑰200～240重量份，玫瑰茄120～130重量份，枸杞80～90重量份，生姜150～170重量份，果蔬浆700～900重量份，发酵剂0.3～0.6重量份，酶制剂14～18重量份和水2200～2500重量份。根据本发明的一个实施方式，本发明的发酵清液仅由上述原料制备得到。
本发明选择药用原料重瓣红玫瑰、玫瑰茄、枸杞和生姜为基础，果蔬浆为底物，发酵剂发酵，并合理配置各组分含量，各原料之间相互配合，协同作用，得到的发酵液具有良好的缓解女性宫寒的作用。另外，上述药用原料均可食用，服用安全。
在本发明中，所述药用原料重瓣红玫瑰和玫瑰茄可以以粉末的形式投料，细度可以分别为120～250微米，优选为150～180微米。枸杞和生姜均可以分别破碎打浆后以浆液形式投料。另外，枸杞和生姜也可以经浸泡后不经打浆处理而直接投料。
在本发明中，所述果蔬浆是将新鲜水果和蔬菜破碎打浆后得到的。所述果蔬浆的细度可以为40～80目，从而有利于后续发酵程序中菌种与营养底物的充分作用。所述水果选自苹果、梨、桃、香蕉中的一种或几种。所述蔬菜选自胡萝卜、西红柿、西葫芦、西兰花、黄瓜、莲藕中的一种或几种。根据本发明的一个实施方式，所述果蔬浆是将如下水果和蔬菜破碎打浆后得到：苹果150～240重量份、梨150～240重量份、桃100～210重量份、香蕉50～130重量份、胡萝卜20～60重量份、西红柿30～70重量份、西葫芦20～45重量份和西兰花20～45重量份。优选地，所述果蔬浆是将如下水果和蔬菜破碎打浆后得到：苹果180～210重量份、梨180～210重量份、桃120～160重量份、香蕉70～110重量份、胡萝卜30～50重量份、西红柿40～60重量份、西葫芦30～45重量份和西兰花30～45重量份。根据本发明一个优选的实施方式，所述果蔬浆是将如下水果和蔬菜破碎打浆后得到：苹果190重量份、梨190重量份、桃150重量份、香蕉90重量份、胡萝卜40重量份、西红柿50重量份、西葫芦40重量份和西兰花40重量份。
本发明通过加入果蔬浆，使反应底物营养丰富，通过酶解和发酵处理后，更有利于营养成分的吸收利用。经过发酵处理，果蔬浆各原料本身的凉性显著缓解，避免了对宫寒的负面作用。此外，本发明的果蔬浆作为后续发酵过程中的碳源，避免了发酵过程中额外添加蔗糖等，因而更加健康。
本发明的酶制剂用于将果蔬浆进行酶解，分解果胶和降解细胞壁中的纤维素，从而使得各成分中的营养成分释放得更加充分，物料体系的流动性更好，有利于发酵过程中的传质、传热，发酵过程更稳定。所述酶制剂可以包括纤维素酶6～12重量份和果胶酶5～11重量份；优选包括纤维素酶8～10重量份和果胶酶7～9重量份。纤维素酶的酶活力可以为1～3万U/g，优选为2～3万U/g。果胶酶的酶活力为1～3万U/g，优选为2～3万U/g。根据本发明一个优选的实施方式，所述酶制剂由纤维素酶6～12重量份和果胶酶5～11重量份组成；优选由纤维素酶8～10重量份和果胶酶7～9重量份组成。
本发明的发酵剂选自乳酸菌、酵母、红曲霉或枯草芽孢杆菌的一种或多种。所述乳酸菌可以选自干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、肠膜明串珠菌和短双歧杆菌的一种或多种。所述酵母选自酿酒酵母、乳酸克鲁维酵母中的一种或者多种。
根据本发明的一个实施方式，所述发酵剂可以包括肠膜明串珠菌0.1～0.3重量份、短双歧杆菌0.1～0.35重量份和鼠李糖乳杆菌0.15～0.35重量份；优选包括肠膜明串珠菌0.2～0.3重量份、短双歧杆菌0.15～0.3重量份和鼠李糖乳杆菌0.15～0.25重量份。根据本发明的一个优选的实施方式，所述发酵剂仅由肠膜明串珠菌0.1～0.3重量份、短双歧杆菌0.1～0.35重量份和鼠李糖乳杆菌0.15～0.35重量份组成；优选仅由肠膜明串珠菌0.2～0.3重量份、短双歧杆菌0.15～0.3重量份和鼠李糖乳杆菌0.15～0.25重量份组成。肠膜明串珠菌、短双歧杆菌和鼠李糖乳杆菌可以采用本领域已知的那些。肠膜明串珠菌的有效菌含量可以为1000～2000亿CFU/g，优选为1400～1600亿CFU/g。鼠李糖乳杆菌的有效菌含量可以为1000～2000亿CFU/g，优选为1200～1500亿CFU/g。短双歧杆菌的有效菌含量可以为400～1000亿CFU/g，优选为600～800亿CFU/g。本发明中，选择肠膜明串珠菌、短双歧杆菌和鼠李糖乳杆菌这三个菌种作为发酵剂，能够更有效地提高本发明药用原料和果蔬浆转化为可吸收的小分子物质的转化率，有效促进人体肠道吸收。此外，采用这三个菌种组成的发酵剂，发酵过程产生诸多对人体有益的代谢产物，从而使得发酵液整体具有更佳的缓解宫寒作用。
本发明的原料还可以包括氮源。所述氮源优选为有机氮源，更优选为小麦低聚肽、大豆蛋白肽和酵母抽提物中的一种或几种，并特别优选为小麦低聚肽。所述氮源的用量可以为30～60重量份；优选为小麦低聚肽35～50重量份。选择本发明优选的有机氮源的种类及用量，对本发明菌种的发酵过程控制和酶量表达具有显著正面影响，并抑制杂菌的生长，保证发酵物的质量稳定。小麦低聚肽是以小麦谷朊粉为原料，经调浆、蛋白酶酶解、分离、过滤、喷雾干燥等工艺制成的小分子多肽物质。
<制备方法>
下面描述上述发酵液的制备方法，其包括(1)酶解步骤、(2)灭酶步骤和(3)发酵步骤。
在步骤(1)中，将重瓣红玫瑰、玫瑰茄、枸杞、生姜、果蔬浆和水混合形成混合物；将所述混合物在酶制剂的作用下进行酶解得到酶解液。
本发明中，所述混合物的pH值为4～6，优选为4.5～5.5，更优选为4.8～5.2。可以采用磷酸氢二钾和磷酸二氢钾调节至上述pH值。磷酸氢二钾的用量可以为55～70重量份、优选为60～65重量份；磷酸二氢钾的用量可以为2～8重量份，优选为5～7重量份。本发明中，酶解温度为40～60℃，优选为45～50℃；酶解时间为60～180min，优选为90～120min。
在步骤(1)中，优选地，重瓣红玫瑰和玫瑰茄可以以粉末的形式使用，细度可以分别为120～250微米，优选为150～180微米；枸杞和生姜分别破碎打浆后以浆液形式投料。重瓣红玫瑰的用量可以为180～250重量份、优选为200～240重量份。玫瑰茄的用量可以为100～140重量份、优选为120～130重量份。枸杞的用量可以为60～100重量份、优选为80～90重量份。生姜的用量可以为140～180重量份、优选为150～170重量份。
本发明中，优选地，所述果蔬浆由新鲜的苹果、梨、桃、香蕉、胡萝卜、西红柿、西葫芦和西兰花破碎打浆制得。可以采用打浆机进行破碎打浆。在破碎打浆过程中，可以加入维生素C以防止破碎打浆过程中果蔬发生氧化，维生素C的用量可以为5～10重量份，优选为6～8重量份。所述果蔬浆中，苹果的用量可以为150～240重量份、优选为180～210重量份。梨的用量可以为150～240重量份、优选为180～210重量份。桃的用量可以为100～210重量份、优选为120～160重量份。香蕉的用量可以为50～130重量份、优选为70～110重量份。胡萝卜的用量可以为20～60重量份、优选为30～50重量份。西红柿的用量可以为30～70重量份、优选为40～60重量份。西葫芦的用量可以为20～45重量份、优选为30～45重量份。西兰花的用量可以为20～45重量份、优选为30～45重量份。
步骤(1)中，水的用量可以为2000～2600重量份，优选为2200～2500重量份。
步骤(1)中，酶解在酶制剂的存在下进行。本发明中，所述酶制剂包括纤维素酶和果胶酶，优选为仅由纤维素酶和果胶酶组成。酶制剂的用量可以为12～20重量份，优选为14～18重量份。纤维素酶可以为6～12重量份，优选为8～10重量份。果胶酶可以为5～11重量份；优选为7～9重量份。纤维素酶的酶活力可以为1～3万U/g，优选为2～3万U/g。果胶酶的酶活力为1～3万U/g，优选为2～3万U/g。
步骤(1)中，酶解温度为40～60℃，优选为45～55℃。酶解时间可以为60～180min，优选为90～150min。
根据本发明的一个具体实施方式，将重瓣红玫瑰220重量份、玫瑰茄125重量份，分别破碎至细度为180微米，得到重瓣红玫瑰粉和玫瑰茄粉；将枸杞85重量份和生姜160重量份分别进行破碎打浆得到枸杞浆液和生姜浆液；将新鲜的苹果190重量份、梨190重量份、桃150重量份、香蕉90重量份、胡萝卜40重量份、西红柿50重量份、西葫芦40重量份、西兰花40重量份和维生素C 7重量份进行破碎打浆得到果蔬浆。将上述重瓣红玫瑰粉、玫瑰茄粉、枸杞浆液、生姜浆液、果蔬浆、水2500重量份、纤维素酶(酶活力为2万U/g)8.0重量份和果胶酶(酶活力为2万U/g)8.0重量份加入到酶解罐中，然后加入磷酸氢二钾和磷酸二氢钾调节pH至5，在45℃下酶解90min，得到酶解液。
在步骤(2)中，将酶解液进行灭酶提取处理，得到灭酶提取液。灭酶提取温度可以为80～100℃，优选为90～95℃。灭酶提取时间可以为0.4～1.0h，优选为0.5～0.55h。
在步骤(3)中，将所述的灭酶提取液，可选地和氮源混合均匀，调节pH值至5.5～6.0，灭菌处理得到灭菌产物；将所述灭菌产物经发酵剂进行发酵处理得到发酵产物；将所述发酵产物进行固液分离，得到所述发酵清液。
步骤(3)中，所述氮源优选为有机氮源，更优选为小麦低聚肽、大豆蛋白肽和酵母抽提物中的一种或多种，并特别优选为小麦低聚肽。所述氮源的用量可以为30～60重量份；优选为小麦低聚肽35～50重量份。可以采用碳酸氢钠调节pH值；所述碳酸氢钠的用量为30～60重量份，优选为35～50重量份。
步骤(3)中，灭菌温度可以为90～155℃，优选为130～150℃。灭菌时间可以为3～15s，优选为5～8s。
在步骤(3)中，发酵剂的用量可以为0.2～0.8重量份、优选为0.5～0.7重量份。发酵剂可以包括肠膜明串珠菌0.1～0.3重量份、短双歧杆菌0.1～0.35重量份和鼠李糖乳杆菌0.15～0.35重量份；优选包括肠膜明串珠菌0.2～0.3重量份、短双歧杆菌0.15～0.3重量份和鼠李糖乳杆菌0.15～0.25重量份。肠膜明串珠菌的有效菌含量可以为1000～2000亿CFU/g，优选为1400～1600亿CFU/g。鼠李糖乳杆菌的有效菌含量可以为1000～2000亿CFU/g，优选为1200～1500亿CFU/g。短双歧杆菌的有效菌含量可以为400～1000亿CFU/g，优选为600～800亿CFU/g。
所述发酵为至少两个阶段的发酵，发酵条件有所不同。根据本发明的一个实施方式，首先将肠膜明串珠菌0.1～0.3重量份接种至所述灭菌产物，在温度为25～40℃且搅拌速度为20～100r/min下发酵12～16d，得到第一发酵液；将鼠李糖乳杆菌0.15～0.35重量份和短双歧杆菌0.1～0.35重量份接种至第一发酵液，在温度为25～40℃且搅拌速度为20～100r/min下发酵4～8d，得到作为所述发酵产物的第二发酵液。形成第一发酵液的发酵温度优选为27～30℃，搅拌速度优选为50～80r/min，发酵时间优选为13～15d。形成第二发酵液的发酵温度优选为27～30℃，搅拌速度优选为50～80r/min，发酵时间优选为5～7d。这样既可以缩短整体发酵周期，又可以保证发酵效果。
所述固液分离方法可以为过滤或离心，其为领域内常规操作，不再是赘述。
本发明的制备工艺简单，周期较短，适合工业化生产。
<发酵饮品及制备方法>
本发明的发酵饮品包括调配剂和如上所述的发酵清液。本发明的发酵饮品还可以包括水。发酵清液的原料及制备方法如前所述，这里不再赘述。
在本发明中，发酵清液和调配剂的重量比为1～3:1，优选为1.0～1.5:1，从而有利于改善口感。所述调配剂选自蔓越莓果粉、葡萄籽提取物、富马酸亚铁、焦磷酸铁、黄原胶、柠檬酸钠、低聚半乳糖、无水硫酸亚铁、乙二胺四乙酸铁钠、维生素B6、维生素B12、维生素C、低聚木糖、低聚果糖、食用香精、干姜粉、赤藓糖醇、食用盐、浓缩草莓清汁、增稠剂和玫瑰香精。所述增稠剂可以由果胶，瓜尔胶和柠檬酸钠制成。增稠剂可以由果胶1～3重量份，瓜尔胶6～9重量份和柠檬酸钠1～5重量份制成。例如，增稠剂由果胶2.5重量份，瓜尔胶8重量份和柠檬酸钠2重量份制成。组成调配剂的上述原料均可采用市售产品。
在本发明中，优选地，所述调配剂包括低聚半乳糖250～350重量份、低聚木糖150～300重量份、乙二胺四乙酸铁钠0.5～1.5重量份、干姜粉8～15重量份、食品香精70～120重量份、赤藓糖醇200～500重量份、柠檬酸钠8～15重量份、食用盐3～7重量份、浓缩草莓清汁350～480重量份、增稠剂10～15重量份和玫瑰香精8～15重量份。根据本发明的一个实施方式，所述调配剂包括低聚半乳糖300重量份，低聚木糖180重量份，乙二胺四乙酸铁钠0.65重量份，干姜粉10重量份，食品香精110重量份，赤藓糖醇400重量份，柠檬酸钠12重量份，食用盐5重量份，浓缩草莓清汁400重量份，增稠剂12.5重量份，玫瑰香精10重量份。所述发酵饮品还可以包括水1600～2600重量份。本发明的调配剂可以仅由上述组分组成。
本发明的发酵饮品的制备方法包括(1)酶解步骤、(2)混合步骤、(3)发酵步骤和(4)调配步骤。
在步骤(1)～(3)如上所述，不再赘述。步骤(4)中，将所述发酵清液、调配剂和水混合，得到发酵饮品。
采用本发明的发酵清液和调配剂按上述配比制成的发酵饮品色泽鲜艳，形态均匀，具有纯正的发酵香气，口感上佳，使人容易接受。
<用途>
本发明的上述发酵清液具有缓解女性宫寒的作用，因此，本发明提供上述发酵清液用于制备具有缓解宫寒作用的药物、食品或饮品的用途。药物、食品或饮品具有本领域常规的含义，且并不属于上下位概念。本发明的发酵清液的缓解宫寒作用，主要体现在改善肢体末端循环，缓解经期痛经、腰膝酸软、手脚冰凉等症状，改善食欲、睡眠状况等，效果显著且持久。
下面描述以下实施例的测试方法：
<活菌数>
参考GB 4789.35～2016进行测定。乳酸菌为一类可发酵糖主要产生大量乳酸的细菌的通称。
1、样品制备
样品的全部制备过程均遵循无菌操作程序。将液体样品先充分摇匀后以无菌吸管吸取样品25mL放入装有225mL生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分振摇，制成1:10的样品匀液。
2、乳酸菌计数
双歧杆菌计数：根据对待检样品双歧杆菌含量的估计，选择2～3个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取1mL样品匀液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。稀释液移入平皿后，将冷却至48℃的莫匹罗星锂盐和半胱氨酸盐酸盐改良的MRS培养基倾注入平皿约15mL，转动平皿使混合均匀。36℃±1℃厌氧培养72h±2h，培养后计数平板上的所有菌落数。从样品稀释到平板倾注要求在15min内完成。
乳杆菌计数：根据待检样品活菌总数的估计，选择2～3个连续的适宜稀释度，每个稀释吸取1mL样品匀液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。稀释液移入平皿后，将冷却至48℃的MRS琼脂培养基倾注入平皿约15mL，转动平皿使混合均匀。36℃±1℃厌氧培养72h±2h。从样品稀释到平板倾注要求在15min内完成。
乳酸菌总数：以上菌属总数之和。
3、计算方法
选取菌落数在30～300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。每个度的菌落数应采用两个平板的平均数。一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀即可。计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。
若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每克或每毫升中菌落总数结果。
若有两个连续稀释度的培养皿菌落数在适宜计数范围内时，应按下面公式进行计算：
N＝∑C/(n1+0.1n2)d
N—样品中菌落数；∑C—培养皿(含适宜范围菌落数的培养皿)菌落数之和；n1——第一稀释度(低稀释倍数)培养皿个数；n2——第二稀释度(高稀释倍数)培养皿个数；d——稀释因子(第一稀释度)。
若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU，则对稀释度最高的平板进行计数,其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长，则以小1乘以最低稀释倍数计算。
若所有稀释度的平板菌落数均不在30CFU～300CFU之间，其中一部分小于30CFU或大300CFU时，则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
<总酸测定>
按照GB/T 12456～2008进行测定。利用酸碱中和原理，用碱液滴定试液中的酸，以酚酞为指示剂确定滴定终点。按碱液的消耗量计算总酸含量
<pH值测定>
采用pH计测定发酵液的pH值。
<总糖测定>
糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。该物质在620nm处有最大吸收，在一定范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
1、葡萄糖标准液：称取100mg葡萄糖(粉末)于小烧杯内溶解(先溶解在50ml左右的水中转移时要用水多次冲洗)，100ml容量瓶定容(标准液浓度1mg/ml)。
2、浓硫酸(比重1.84)。
3、蒽酮试剂：0.2g蒽酮溶于100ml浓H2SO4中，当日配制使用(浓度0.2％)。
4、取6个25ml容量瓶，配制一系列不同浓度(0、10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml、50μg/ml、60μg/ml)的葡萄糖溶液。取2.5ml各浓度标准液于试管中(空白加2.5ml蒸馏水)，加入6.5ml蒽酮浓硫酸试剂，混匀，室温静置一小时，于波长620nm处比色，读出吸光度。以吸光度为横坐标，标准液浓度为纵坐标做标准曲线：Y＝KX+B(μg/ml)。
5、总糖测定
1)取10mL样品于50mL离心管，8500rpm/min离心10min。
2)取上清5mL于50mL离心管中作为待测液。
3)根据糖浓度确定稀释倍数，决定定容至50mL、100mL、250mL或500mL容量瓶或者定容好溶度太高继续稀释V1。
4)取2.5mL待测液于试管，加入0.2％蒽酮～浓硫酸试剂，混匀，室温静置一小时，620nm处得出OD值。
5)结果计算
X——样品中总糖含量[mg/ml]；
Y——样品测定液中葡萄糖的浓度(μg/ml)；
V1——样品定容总体积(ml)；
1000——μg/ml转换为mg/ml；
0.9——葡萄糖换算为粗多糖的系数。
制备例1-药材粉及果蔬浆
将重瓣红玫瑰220g和玫瑰茄125g分别破碎至细度为180微米，分别得到重瓣红玫瑰粉和玫瑰茄粉，将枸杞85g和生姜160g分别进行破碎打浆得到枸杞浆液和生姜浆液。
将新鲜的苹果190g、梨190g、桃150g、香蕉90g、胡萝卜40g、西红柿50g、西葫芦40g和西兰花40g置于打浆机内，加入维生素C 7g，破碎打浆得到果蔬浆。
实施例1-发酵清液
(1)将制备例1的重瓣红玫瑰粉、玫瑰茄粉、枸杞浆液、生姜浆液、果蔬浆加入酶解罐，加入水2500g、纤维素酶8g、果胶酶8g，再加入磷酸氢二钾和磷酸二氢钾调节pH值为4.8，于50℃下酶解90min，得到酶解液。
(2)将所述酶解液温度升高至90℃，灭酶处理30min，得到灭酶提取液。
(3)将上述灭酶提取液与小麦低聚肽40g混合，碳酸氢钠调节pH至5.6，均质，脱气，135℃灭菌5s，得到灭菌产物；将所述灭菌产物转移至发酵罐中，降温至28℃，将1500亿CFU/g的肠膜明串珠菌0.2g接种至发酵罐内的灭菌产物，在搅拌速度为50r/min下发酵15d，得到第一发酵液；然后将1400亿CFU/g的鼠李糖乳杆菌0.2g和700CFU/g的短双歧杆菌0.2g接种至第一发酵液，在搅拌速度为50r/min下发酵5d，得到作为所述发酵产物的第二发酵液。将第二发酵液离心，得到发酵清液。
对发酵过程中的发酵液进行监测，监测指标包括活菌数、总酸、pH值和总糖，结果参见图1～4。
如图1所示，发酵过程分为三个阶段：(1)发酵起始至发酵第4～6d，益生菌处于对数生长期，此时益生菌进入高速生长繁殖阶段，活菌数呈指数级增加并达到最高水平(10次方)；(2)发酵第6～10d，益生菌处于稳定期，活菌数保持相对稳定，维持在较高水平(9～10次方)；(3)发酵第10～20d，代谢产物乳酸等有机酸大量积累，活菌数逐渐下降至初始接种量水平(5～6次方)，但在发酵结束时仍可检出活菌。
由图2可知，随着发酵时间的延长，发酵液中总酸含量先急速后缓慢增加，直至增至最大值并趋于稳定。因此，在发酵过程中总酸含量的变化可大致分为以下两个阶段：
(1)微生物经过2～4d适应期后，大量繁殖，微生物活力维持在较高水平，细胞代谢旺盛。此阶段总酸含量迅速增加，在10d时达到最大值；一般此阶段结束后总酸含量可达到32～36g/L；(2)发酵第10～20d，活菌数开始下降，总酸含量维持在最高水平，波动较小。
由图3可知，发酵液pH值变化前期有个短暂的平稳期，随后逐渐下降，直至降至最小值并保持稳定。因此，在发酵过程中pH值的变化可大致分为以下三个阶段：
(1)发酵1～4d，益生菌进入生长适应期。此阶段pH较稳定；(2)发酵4～10d，pH值迅速下降，并达到最小值；一般此阶段结束后pH值可达到3.3～3.6；(3)发酵第10～20d，pH一直处于一个稳定水平，菌体开始逐渐死亡，pH值维持在最低值。
由图4可知，随着发酵时间的延长，发酵液中总糖含量在发酵前期较稳定，随后逐渐下降，直至降至最小值并保持稳定。因此，在发酵过程中总糖含量的变化可大致分为以下三个阶段：
(1)发酵1～4d左右，益生菌生长需要短暂的适应期，此阶段总糖水平变化不大。(2)发酵5～10d期间，总糖水平逐渐降低，用于微生物生长代谢。(3)发酵10～20d期间，微生物逐渐衰亡，代谢活力降低，总糖水平保持稳定；一般此阶段结束后总糖含量达到100～110g/L。
实施例2-发酵饮品
将实施例1的发酵液1700ml、低聚半乳糖300g、低聚木糖180g、乙二胺四乙酸铁钠0.65g、干姜粉10g、食品香精110g、赤藓糖醇400g、柠檬酸钠12g、食用盐5g、浓缩草莓清汁400g、增稠剂12.5g(果胶2.5g，瓜尔胶8g和柠檬酸钠2g)、玫瑰香精10g、水2300g混合均匀，得到发酵饮品。
实验例1-感官评价
对实施例2的发酵饮品进行风味口感测试，其感官评分标准参见表1。感官评价小组由50名志愿者组成，测试结果参见表2。
表1感官评分标准
表2测试结果
| 色泽 | 组织形态 | 香气 | 口感 | |
| 实施例2 | 22 | 21 | 25 | 24 |
注：分数为50份评分结果的平均值。
实验例2-功效评价
诊断标准：包括经前小腹坠胀，乳房胀痛；经期下腹凉，腰膝酸软，手脚冰冷，出冷汗，疲惫乏力，多数有不同程度的痛经；经血色暗，伴有血块；月经不规律；少量伴有头晕、恶心症状。
病例选择：确诊具有上述宫寒症状的女性病例50例，年龄22～42岁。
服用方法：服用实施例2的发酵饮品。末次月经结束后、下次月经来临前服用，每日早晚各1次，每次50ml，连续服用10日，观察服用期间身体反应和经期状况。
实验结果：
服用期间：93.7％的病例感到手脚、面部、耳部有明显麻痒、麻刺感，末端循环改善。87.5％的病例感到手脚变暖和。81.2％的病例感到全身发热，出汗。70.8％的病例出现胀气、排气、轻微肠鸣等，体感通畅、舒适。另外，患者的食欲、睡眠状况普遍改善。
月经期间：64.58％的病例自诉经期腰膝酸软症状改善；93.7％的病例感到经期小腹不凉，手脚变暖和。54.2％的病例自诉经血颜色改善，血块减少或无血块。有39例病例素有不同程度的痛经症状，服用后29例完全未发生痛经；4例病例仍有轻微痛经，但较平日明显减轻。
服用期间偶见口干、便秘外，无其他不良反应。
实验例3-长期功效评价
实验例2的服用方法作为一个疗程，连续服用3个疗程后停止服用，对全部48例病例在18个月内进行随访，66.67％的病例自诉经期腰膝酸软症状缓解或消失；85.42％的病例经期基本不发生小腹凉，手脚冰凉症状。75％的病例自诉经血颜色改善，血块减少或无血块。在39例素有痛经症状的病例中，35例经期不发生痛经或轻微痛经。随访18个月内未见明显不良反应。
本发明并不限于上述实施方式，在不背离本发明的实质内容的情况下，本领域技术人员可以想到的任何变形、改进、替换均落入本发明的范围。
Claims (7)
1.一种缓解宫寒的发酵清液，其特征在于，所述发酵清液由如下组分的原料制备得到：重瓣红玫瑰200～240重量份，玫瑰茄120～130重量份，枸杞80～90重量份，生姜150～170重量份，果蔬液700～900重量份，发酵剂0.3～0.6重量份，酶制剂14～18重量份和水2200～2500重量份；
其中，所述果蔬液是将如下水果和蔬菜破碎打浆后得到：苹果180～210重量份、梨180～210重量份、桃120～160重量份、香蕉70～110重量份、胡萝卜30～50重量份、西红柿40～60重量份、西葫芦30～45重量份和西兰花30～45重量份；
所述酶制剂包括纤维素酶8～10重量份和果胶酶7～9重量份；
所述发酵剂包括肠膜明串珠菌0.2～0.3重量份、短双歧杆菌0.15～0.3重量份和鼠李糖乳杆菌0.15～0.25重量份；
所述发酵清液的原料还包括氮源35～50重量份；所述氮源为小麦低聚肽。
2.根据权利要求1所述的发酵清液，其特征在于，所述发酵剂仅由肠膜明串珠菌0.2～0.3重量份、短双歧杆菌0.15～0.3重量份和鼠李糖乳杆菌0.15～0.25重量份组成。
3.根据权利要求1～2任一项所述的发酵清液的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
（1）将重瓣红玫瑰、玫瑰茄、枸杞、生姜、果蔬液和水混合形成混合物，将所述混合物在酶制剂的作用下进行酶解得到酶解液；
（2）将所述酶解液进行灭酶提取处理，得到灭酶提取液；
（3）将所述的灭酶提取液调节pH值至5.5～6.0，灭菌处理得到灭菌产物；将所述灭菌产物在发酵剂的作用下进行发酵处理得到发酵产物；将所述发酵产物进行固液分离，得到所述发酵清液。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述混合物的pH值为4～6，酶解温度为40～60℃，酶解时间为60～180min；步骤（2）中，灭酶提取温度为80～100℃，灭酶提取时间为0.4～1.0h。
5.根据权利要求3或4所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述发酵处理方法为：首先将肠膜明串珠菌0.2～0.3重量份接种至所述灭菌产物，在温度为25～40℃且搅拌速度为20～100r/min下发酵12～16d，得到第一发酵液；将鼠李糖乳杆菌0.15～0.25重量份和短双歧杆菌0.15～0.3重量份接种至第一发酵液，在温度为25～40℃且搅拌速度为20～100r/min下发酵4～8d，得到作为所述发酵产物的第二发酵液。
6.一种发酵制剂，包含根据权利要求1～2任一项所述的发酵清液或根据权利要求3～5任一项所述的制备方法制得的发酵清液，还包括调配剂，且所述发酵清液和调配剂的重量比为1～3:1；所述调配剂包括低聚半乳糖250～350重量份、低聚木糖150～300重量份、乙二胺四乙酸铁钠0.5～1.5重量份、干姜粉8～15重量份、食品香精70～120重量份、赤藓糖醇200～500重量份、柠檬酸钠8～15重量份、食用盐3～7重量份、浓缩草莓清汁350～480重量份、增稠剂10～15重量份和玫瑰香精8～15重量份。
7.根据权利要求1～2任一项所述的发酵清液或根据权利要求3～5任一项所述的制备方法制得的发酵清液用于制备缓解宫寒的药物的用途。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB02 | Change of applicant information | ||
| CB02 | Change of applicant information |
Address after: 224100 No. 51 Nanxiang West Road, Dafeng District, Yancheng City, Jiangsu Province Applicant after: Jiangsu Junyu Life Science and Technology Development Co., Ltd. Address before: 224100 No. 51 Nanxiang West Road, Dafeng District, Yancheng City, Jiangsu Province Applicant before: Jiangsu grain health life science & Technology Development Co Ltd |
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| CB02 | Change of applicant information | ||
| CB02 | Change of applicant information |
Address after: 224100 No. 51 Nanxiang West Road, Dafeng District, Yancheng City, Jiangsu Province Applicant after: Jiangsu Bacterial Key Life Science and Technology Development Co., Ltd. Address before: 224100 No. 51 Nanxiang West Road, Dafeng District, Yancheng City, Jiangsu Province Applicant before: Jiangsu grain health life science & Technology Development Co Ltd |
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| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |