CN108522425A - 一种前列腺癌高脂饮食模型的建立方法及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明属生物医药和基因工程领域，涉及一种建立TRAMP小鼠高脂饮食模型的方法及其在用于预防和治疗前列腺癌过程研究平台中的应用。本发明建立以40%脂肪供能饲料为干预措施、以转基因前列腺癌小鼠（TRAMP）为基础的前列腺癌肥胖模型，该模型小鼠前列腺组织肿瘤形成，分化和转移均高于普通饲料喂养的TRAMP小鼠，通过物理学测量、血液生化检查、影像学检查等综合手段，评估前列腺癌肥胖模型的稳定性，建立一个前列腺癌发生与发展中肥胖相关因素的客观、统一、稳定、精准的模型和实验平台，该模型能较好反映高脂饮食对前列腺癌发生发展的影响，在前列腺癌机制研究以及相应的药物筛选、药效评估领域具有广泛的应用价值。
Description
技术领域
本发明属生物医药和基因工程领域，涉及高脂饮食模型的建立方法，具体涉及一种建立TRAMP小鼠高脂饮食模型的方法及其在用于预防和治疗前列腺癌过程中的应用。
背景技术
转基因前列腺癌小鼠（transgenic adenocarcinoma of mouse prostate,TRAMP）模型是目前最常使用的转基因前列腺癌模型之一，1995年Greenberg等首先报道该动物模型的建立，其包括，通过转基因方法将受雄激素调控的probasin启动子结合猴病毒40（SV40）T抗原转入小鼠，特异性诱导小鼠前列腺发生肿瘤，T抗原在4-6周即开始表达，SV40产生的肿瘤蛋白可阻断抑癌基因P53和RB通路，从而导致肿瘤形成，以及病理进展与人前列腺癌类似（Greenberg NM et al. 1995, Gingrich JR et al. 1996）。
资料显示，高脂肪、高蛋白、高热量摄入是西方饮食习惯的主要特点，长期高脂饮食会导致代谢综合征(metabolic syndrome, MS)的发生，即肥胖、高血压、高血糖、血脂异常等多种代谢危险因素在同一个体中同时存在的临床症候群，包括胰岛素抵抗、代偿性高胰岛素血症、激素水平失调、血液高凝和全身慢性炎症状态等(Pu YS et al. 2004)。众多研究发现高脂饮食与前列腺癌发生进展密切相关(Lund HL et al. 2006, De Nunzio Cet al. 2011)，表现为增加前列腺癌的发生率，并增加肿瘤的侵袭和转移。研究显示，高脂饮食和肥胖促进前列腺癌发生和进展，其机制是复杂且互相关联的，在众多机制中，机体循环雄激素水平(Severi G et al. 2006)、胰岛素及胰岛素样生长因子-1(insulin-likegrowth factor-1, IGF-1)( Rowlands MA et al. 2012)、炎症因子(Kundu JK et al.2008)、脂肪因子(Rajala MW et al. 2003)等表达水平的改变越来越受到重视。研究表明高脂饮食导致肥胖，会造成体内白色脂肪组织慢性炎症过程，表现为脂肪细胞肥大增生，且前脂肪细胞增多，直接导致局部和体循环的脂肪因子增多，介导免疫过程和促炎、促瘤微环境(Vona-Davis L et al. 2009)；白色脂肪组织可以分泌超过 50 种不同的细胞因子(Balistreri CR et al. 2010)，包括 IL-6、 IL-8、 IL-1β、 IL-17、 TNF-α、 VEGF、 CCL-2、 CCL-5等，有助于促有丝分裂、促血管新生、召集免疫细胞，除此之外，还具有刺激上皮间质转变(epithelial-mesenchymal transition, EMT)、增加肿瘤细胞侵袭、增加脂肪细胞和肿瘤干细胞的交互作用等；研究进一步发现，肥胖者中除局部脂肪组织中细胞因子含量发生变化，血清中循环的促炎症细胞因子水平也有明显上升，如TNF-α、IL-6、IL-8、VEGF等，可能对远处促瘤转移环境的形成造成重要影响。
目前业内关于肥胖和前列腺癌诊断、病理结局、预后等关系尚未明确，尤其在亚洲人群中报道较少；且肥胖和高脂饮食对前列腺癌影响的相关机制尚未完全阐明，尤其是高脂饮食介导的体内循环细胞因子变化。基于此，本申请的发明人拟提供一种TRAMP小鼠高脂饮食模型的建立方法，进一步用于研究前列腺癌与代谢综合征的关系，预防和治疗等等。
发明内容
本发明的目的在于居于现有技术的现状，提供一种转基因前列腺癌小鼠（transgenic adenocarcinoma of mouse prostate,TRAMP）小鼠高脂饮食模型的建立方法，进一步用于建立前列腺癌与代谢综合征的关系，预防和治疗等研究平台。
鉴于现有技术公开的的不同规格饲料诱导小鼠肥胖的效果相差较大，且因缺乏客观、统一、稳定、精准的前列腺癌肥胖模型，使得不同研究之间的可比性降低，可信度不高；另外，传统的细胞学实验难以模拟肥胖引起的内环境变化，而利用裸鼠移植瘤模型进行肥胖建模又难以模仿前列腺癌的发生过程等等缺陷；
本发明建立以40%脂肪供能饲料为干预措施、以转基因前列腺癌小鼠（TRAMP）为基础的前列腺癌肥胖模型，通过物理学测量、血液生化检查、影像学检查等综合手段，评估前列腺癌肥胖模型的稳定性，建立一个为研究前列腺癌发生与发展中肥胖相关因素的客观、统一、稳定、精准的模型和实验平台，为进一步深入研究前列腺癌发生与发展的机制奠定基础。
本发明的一种转基因前列腺癌小鼠高脂饮食模型的建立方法，其包括，构建TRAMP前列腺癌小鼠模型以及构建TRAMP小鼠高脂饮食模型。
本发明中，基于C57BL/6品系的小鼠模型建立前列腺癌肥胖小鼠模型；
本发明中，通过转基因方法将受雄激素调控的probasin启动子结合猴病毒40（SV40）T抗原转入小鼠，特异性诱导小鼠前列腺发生肿瘤。
具体的，本发明的一种前列腺癌高脂饮食模型的建立方法，通过以下技术方案实现：
1）小鼠出生后即断趾进行基因检测，
基因型检测采用PCR方法，采用Sv40引物和tcrd引物作为内参，Sv40上游引物CAGAG-CAGAATTGTGGAGTGG，下游引物GGACAAACCA-CAACTAGAATGCAGTG，内参 tcrd 上游引物：CAAATGTTGCTTGTCTGGTG，下游引物：GTCAGTC-GAGTGCACAGTTT，PCR产物行1％琼脂糖凝胶电泳，根据片段大小确定基因型；
子代小鼠均行基因型检测，保留带有目标基因雄鼠，其余小鼠按常规另处理；
2）采用携带基因的雄鼠为实验所需小鼠，
小鼠出生20天断奶后分笼，并随机分入实验组（高脂饲料喂养组）和对照组（普通饲料喂养组）进行饲料喂养，高脂饲料成分如表1所示；
表1：高脂饲料信息
结果显示，本方法中通过喂养TRAMP小鼠40%脂肪供能的肥胖诱导饲料，能显著地促进TRAMP小鼠体重的增加，且具有如下有益的技术效果：
（1）、本发明提供的TRAMP小鼠肥胖模型建立方法建模操作简单，成功率高（超过80%）；
（2）、本发明提供的TRAMP小鼠肥胖模型不依赖于宿主免疫缺陷或特定的遗传学背景；
（3）、本发明提供的TRAMP小鼠肥胖模型中的组织与血清标本可用于检测多种肿瘤标志物，比较实验组与对照组差异，用途广泛；
（4）、本发明建立的的TRAMP小鼠肥胖模型可进一步用于抗肿瘤药物筛选和药物安全性评价等，如相应的药物筛选、药效评估等研发领域。
本发明提供了一种简便实用的转基因前列腺癌小鼠高脂饮食模型的建立方法，可进一步用于建立前列腺癌与代谢综合征的关系，预防和治疗等研究平台。
附图说明
图1显示TRAMP小鼠基因型检测结果，
其中，根据PCR结果，以tcrd作为内参，见1、2号小鼠在474bp阳性条带，验证SV40 Tag阳性，即该TRAMP小鼠携带SV40 Tag基因；而3、4号小鼠为阴性，即该TRAMP小鼠未携带SV40Tag基因。
图2显示大体解剖：TRAMP前列腺癌局部巨大包块、精囊侵犯。
图3显示Micro-CT：TRAMP前列腺癌局部占位，肺部转移灶。
图4 TRAMP小鼠前列腺HE染色(200X光镜)，确诊为前列腺癌，证实成瘤。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。除非另有描述，本发明的实施将采用免疫学、分子生物学、微生物学和重组DNA等常规技术，这些均是本领域技术人员所知的。这些技术在下列文献中有完整的描述：例如，Sambrook《分子克隆实验指南》第2版(1989)；《DNA克隆》第I和II卷(D.N.Glover编辑，1985)；《寡核苷酸合成》(M.J. Gait编辑，1984)；以及《实验免疫学手册》I-IV卷(D.C. Weir和C.C. Blackwell编辑，1986)。或者，可按照试剂生产商所提供的说明书进行。
实施例1：构建TRAMP前列腺癌小鼠模型
采用TRAMP 小鼠（transgenic adenocarcinoma of mouse prostate,TRAMP，购自美国Jackson 实验室，于复旦大学发育生长研究所饲养并配种繁殖），出生后即刻断趾行基因检测，将断趾置于 EP 管内，加入 500 ul 裂解液(50mM Tris, 100mM EDTA, 0.5% SDS)和25ul 蛋白酶 K(10mg/ml)后混匀，55d℃温箱过夜；次日加入 500ul 酚氯仿， 13200 转/分离心两分钟，弃去沉淀，将 200ul上清移至 EP 管，加入 200ul 酚氯仿混匀， 13200 转/分离心 1 分钟，再次弃去沉淀，将 100ul 上清转移至 EP 管，加入无水酒精 250ul 及 3M醋酸钠 25ul 混匀，13200 转/分离心 1 分钟，弃上清，沉淀用 75%酒精洗两次后于室温10 分钟晾干，后加入 100ul TE 溶解， PCR 扩增目的基因，凝胶电泳检测小鼠基因型，TRAMP小鼠基因检测采用 Sv40 引物和 Tcrd 引物作为内参；
PCR 步骤：模板在 PCR 仪上以 94℃预加热五分钟，使模板 DNA 充分变性，进入扩增循环。首先重复扩增循环 12 次，每一个循环中先于 94℃保持 20 秒使模板变性，后降温至复性温度 64℃(每个循环减少 0.5℃)，保持 30 秒，使引物与模板充分退火； 72℃保持35 秒，使引物在模板上延伸，合成 DNA，完成单次循环；其次重复扩增循环 25 次，在每一个循环中，先于 94℃保持 20 秒使模板变性，后将温度降到复性温度 58℃，保持 30 秒，使引物与模板充分退火；在 72℃保持 35 秒，使引物在模板上延伸，合成 DNA，完成单次循环；经过上述扩增循环使得扩增的 DNA 片段大量累积，最后在 72℃保持 7 分钟，使产物延伸完整，4℃保存， PCR 产物行 1%琼脂糖凝胶电泳，根据片段大小确定基因型，子代小鼠均行基因型检测，仅保留带有目的基因雄鼠。
实施例2：构建TRAMP小鼠高脂饮食模型
经基因型鉴定，仅保留携带目的基因雄鼠；小鼠出生 20 天断奶后分笼，分对照组及实验组后分别予以普通饲料和高脂饲料喂养，饲料成分如表1所示，小鼠饲料喂养起自断奶当天至处死取材前日，动物室内温度维持于 23℃±1℃，湿度维持于 60%±10%，小鼠自由饮水、进食，采用 12h 明暗交替照明，每周换 3 次水、 3 次垫料，处死前禁食不禁水 10 小时，于20w、 24w、 28w 时，分3 批处死小鼠；
普通饲料和高脂饲料（如表1所示高脂饲料）喂养组TRAMP 小鼠的基本情况及肿瘤形成、肿瘤分化、肿瘤转移情况如表 2 所示，结果显示，随着周龄上升，普通饲料组 TRAMP 小鼠和高脂饲料组 TRAMP 小鼠均出现体重上升和体脂上升，而同周龄时高脂饲料组 TRAMP体重高于普通饲料组，20和24周体脂高于普通饲料组，各组间血糖未见明显差异；
在肿瘤形成方面，肿瘤形成比例随周龄增加而上升；对于同周龄时，高脂组在 20 周时高于普通饲料组， 24 周和 28 周时两组未见明显差异；
肿瘤分化方面，随周龄增加各组肿瘤分化变差，高分化比例下降，而中低分化比例增加；对于同周龄时，高脂组分化较普通饲料组差；
肿瘤转移方面，随周龄增加各组肿瘤转移率均上升；对于同周龄时， 20 周与 24 周时两组未见明显差异，28 周时高脂组高于普通饲料组。
表1：高脂饲料信息
表2 不同饲料喂养TRAMP 小鼠基本情况及肿瘤形成比较
本发明提供了TRAMP小鼠高脂饮食模型的建立方法。该模型小鼠前列腺组织肿瘤形成，分化和转移均高于普通饲料喂养的TRAMP小鼠。因此，该模型能够较好反映高脂饮食对前列腺癌发生发展的影响，从而在前列腺癌机制研究以及相应的药物筛选、药效评估等研发领域具有广泛的应用价值。
SEQUENCE LISTING
<110> 复旦大学附属华山医院
<120> 一种前列腺癌高脂饮食模型的建立方法及其用途
<130> 20170306
<160> 4
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 21
<212> DNA
<213> Sv40上游引物
<400> 1
cagagcagaa ttgtggagtg g 21
<210> 2
<211> 26
<212> DNA
<213> Sv40下游引物
<400> 2
ggacaaacca caactagaat gcagtg 26
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 内参tcrd上游引物
<400> 3
caaatgttgc ttgtctggtg 20
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 内参tcrd下游引物
<400> 4
gtcagtcgag tgcacagttt 20
Claims (7)
1.一种前列腺癌高脂饮食模型的建立方法，其特征在于，其包括，构建TRAMP前列腺癌小鼠模型以及构建TRAMP小鼠高脂饮食模型；
其中，基于C57BL/6品系的小鼠模型建立前列腺癌肥胖小鼠模型；
通过转基因方法将受雄激素调控的probasin启动子结合猴病毒40（SV40）T抗原转入小鼠，特异性诱导小鼠前列腺发生肿瘤。
2.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的构建TRAMP前列腺癌小鼠模型方法中包括：
1）小鼠基因检测，
基因型检测采用PCR方法，采用Sv40引物和tcrd引物作为内参，
Sv40上游引物CAGAG-CAGAATTGTGGAGTGG，
下游引物GGACAAACCA-CAACTAGAATGCAGTG，
内参tcrd上游引物：CAAATGTTGCTTGTCTGGTG，
下游引物：GTCAGTC-GAGTGCACAGTTT，
PCR产物行1％琼脂糖凝胶电泳，根据片段大小确定基因型；
子代小鼠均行基因型检测，保留带有目标基因雄鼠；
2）采用携带目标基因的雄鼠为高脂饲料实验所需小鼠。
3.按权利要求所述1的方法，其特征在于，所述的建立前列腺癌肥胖小鼠模型方法中包括：
采用出生20天断奶后的携带目标基因的雄鼠小鼠，随机分高脂饲料喂养组入实验组和普通饲料喂养组对照组进行饲料喂养，其中，高脂饲料成分如表1所示；
表1：高脂饲料信息
数周后比较试验组与对照组的基本情况及肿瘤形成、肿瘤分化、肿瘤转移情况，确定构建获得的前列腺癌高脂饮食模型。
4.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的构建前列腺癌肥胖小鼠模型不依赖于宿主免疫缺陷或特定的遗传学背景。
5.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的构建的前列腺癌肥胖小鼠模型的组织与血清标本在用于制备检测肿瘤标志物的制剂中的用途。
6.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的构建的前列腺癌肥胖小鼠模型在用于筛选抗肿瘤药物和药物安全性评价中的用途。
7.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的构建的前列腺癌肥胖小鼠模型在用于建立前列腺癌与代谢综合征的关系，预防和治疗研究平台中的用途。
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|---|---|
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Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103060434A (zh) * | 2012-10-19 | 2013-04-24 | 卫生部北京医院 | 一种预测前列腺癌易感性的试剂和方法 |
| US20130142861A1 (en) * | 2011-12-05 | 2013-06-06 | National Yang Ming University | Compositions And Method For Detecting And Treating Abnormal Liver Homeostasis And Hepatocarcinogenesis |
| CN104705258A (zh) * | 2015-02-10 | 2015-06-17 | 陕西师范大学 | 一种饮食诱导胰岛素抵抗模型的构建方法及应用 |
| CN105850867A (zh) * | 2016-03-28 | 2016-08-17 | 大连大学 | 一种非酒精性脂肪肝小鼠模型的建立方法 |
| CN106070064A (zh) * | 2016-07-13 | 2016-11-09 | 武汉大学 | 一种多囊卵巢综合征伴2型糖尿病大鼠模型的构建方法 |
-
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- 2017-03-06 CN CN201710126711.7A patent/CN108522425A/zh active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20130142861A1 (en) * | 2011-12-05 | 2013-06-06 | National Yang Ming University | Compositions And Method For Detecting And Treating Abnormal Liver Homeostasis And Hepatocarcinogenesis |
| CN103060434A (zh) * | 2012-10-19 | 2013-04-24 | 卫生部北京医院 | 一种预测前列腺癌易感性的试剂和方法 |
| CN104705258A (zh) * | 2015-02-10 | 2015-06-17 | 陕西师范大学 | 一种饮食诱导胰岛素抵抗模型的构建方法及应用 |
| CN105850867A (zh) * | 2016-03-28 | 2016-08-17 | 大连大学 | 一种非酒精性脂肪肝小鼠模型的建立方法 |
| CN106070064A (zh) * | 2016-07-13 | 2016-11-09 | 武汉大学 | 一种多囊卵巢综合征伴2型糖尿病大鼠模型的构建方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 许华: "IGF-1相关通路在高脂饮食对前列腺癌发生及进展影响中的作用", 《中国博士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 * |
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