CN108517363B - 一种基于二代测序的个体识别体系、试剂盒及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种基于二代测序的个体识别体系、试剂盒及其用途,个体识别体系包括针对112个STR位点和318个SNP位点设计的引物序列,112个STR位点包括53个常染色体STR位点、23个X染色体STR位点及35个Y染色体STR位点和一个性别决定位点AMEL;318个SNP位点包括186个常染色体SNP位点、69个X染色体SNP位点、57个Y染色体SNP位点、及6个血型表型相关SNP位点。本个体识别体系只需要一次扩增就能同时获得常染色体、X染色体、Y染色体上的二代或三代遗传标记信息,减少操作步骤,缩短实验时间,适用于全球不同国家不同地区人群的DNA分型检测。
Description
技术领域
本发明涉及基因技术领域,具体涉及一种基于二代测序的个体识别体系、试剂盒及其用途。
背景技术
短串联重复序列(Short Tandom Repeat,STR),又称微卫星DNA或简单序列重复(Simple Sequence Repeats,SSR),是一类广泛存在于人类基因组中的重复序列,它由2-6个碱基对构成核心序列,呈串联重复排列。STR在人类基因组中数量大、分布广泛、具有高度的遗传多态性、检测方法简单,因而被广泛应用于个体识别、亲权鉴定和群体遗传学研究。
SNP(Single Nucleotide Polymorphism,单核苷酸多态性)是指基因组内DNA中某一特定核苷酸位置上存在转换、颠换、插入、缺失等变化。SNP作为第三代遗传标记在法医学鉴定中具有一定的优势。第一,密度大、分布广,SNP的位点极其丰富,几乎遍及整个基因组,据估计基因组中大约平均每1000bp就会出现一个SNP;第二,相对稳定,SNP具有相对较低的自发突变率(10-8);第三,二等位基因,SNP标记在人群或生物群体中一般只有两种等位型(allele)故亦称为双等位标记(bi-allelic marker),也使其分型结果的分析简便易行;第四,片段短。单个的SNP位点扩增产物可以控制在150bp以下,容易实现多个位点的同时扩增,并有利于降解检材的分型。
目前DNA分型检测主要采用的技术是毛细管电泳(capillary electrophoresis,CE)。其原理是通过检测带有不同荧光基团的扩增片段长度对DNA进行分型,这就容易导致STR位点的一些杂合基因由于等位基因序列不同但长度相同而被判别为纯合。并且毛细管电泳采用多色荧光复合扩增技术,为在各色荧光中安置更多的位点,设计引物时一些位点会保留较长的侧翼序列,导致其扩增片段长,不利于降解检材的分型。此外,毛细管电泳技术一次只能检测少量样本的数十个位点。因此,利用毛细管电泳的一代STR分型技术难以处理诸如复杂的亲缘关系鉴定、大规模灾难的遗骸身份鉴定或者混合复杂的样本等。
二代测序技术又称为下一代测序技术(Next generation sequencing,NGS)。其高通量的特点可以实现在一次测序中同时对大量样本的STR、SNP、插入缺失多态性(Indel)等遗传标记进行检测,由于检测对象是核酸片段的序列多态性,测序可精确分析各位点的序列差异,适用于混合样本的分析。并且二代测序技术对各位点的长度没有限制,所以可以设计适当短的核酸片段,有利于降解检材的精确分型检测。
现有技术中,一代的毛细管电泳技术DNA分型方法,采用多色荧光复合扩增技术,通常扩增片段长,难以对陈年旧案、腐败尸体或大规模灾难的遗骸等陈旧、高腐的样本进行分型;同时一代毛细管电泳技术一次只检测常染色体STR或者X染色体STR或者Y染色体STR的数十个位点,难以对复杂的亲缘关系鉴定;同时一代的毛细管电泳技术DNA分型方法对长度多态性而非序列多态性进行分型,所以难以处理混合复杂的样本等。利用一代毛细管电泳技术一次只能处理少数样本,通量较低。基于二代测序技术的Illumina MiSeq FGx价格昂贵,且有些识别位点在中国群体中的多态性较差,并不适合中国人群的DNA分型。同时Illumina MiSeq FGx的平台兼容性不够且有些PCR产物长度长,难以处理陈旧、高度降解的样本。
发明内容
本申请提供一种通量大、适合不同群体及灵敏度高的个体识别体系、试剂盒及其用途。
根据第一方面,一种实施例中提供一种基于二代测序的个体识别体系,包括针对112个STR位点和318个SNP位点同时扩增设计的引物序列,112个STR位点包括53个常染色体STR位点、23个X染色体STR位点及35个Y染色体STR位点和一个性别决定位点AMEL;318个SNP位点包括186个常染色体SNP位点、69个X染色体SNP位点、57个Y染色体SNP位点、及6个血型表型相关SNP位点。
进一步地,所述53个常染色体STR位点对应的引物序列如SEQ ID NO.1至SEQ IDNO.106所示;
所述性别决定位点AMEL和23个X染色体STR位点、35个Y染色体STR位点对应的引物序列如SEQ ID NO.107至SEQ ID NO.224所示;
所述186个常染色体SNP位点对应的引物序列如SEQ ID NO.225至SEQ ID NO.596所示;
所述69个X染色体SNP位点对应的引物序列如SEQ ID NO.597至SEQ ID NO.734所示;
所述57个Y染色体SNP位点对应的引物序列如SEQ ID NO.735至SEQ ID NO.848所示;
所述6个血型表型相关SNP位点对应的引物序列如SEQ ID NO.849至SEQ IDNO.860所示。
进一步地,一个位点对应一对引物,采用3对引物分别扩增6个血型表型相关SNP位点。
根据第二方面,一种实施例中提供一种DNA分型检测的方法,其特征在于,采用权利要求1至3任一项的个体识别体系分型检测DNA。
进一步地,112个STR位点和318个SNP位点在同一个PCR扩增反应体系中同时扩增或者分开扩增。
进一步地,PCR扩增反应体系包括15ul的DNA聚合酶、5ul的引物混合物、1ul的DNA模板和4ul的去离子水。
进一步地,PCR扩增反应体系的温度循环包括四次循环,其中第一循环为在温度为95℃时间为5min条件下的1个循环;第二循环包括三个阶段的30个循环,所述三个阶段包括在温度为94℃时间为30s条件下的第一阶段、在温度为56℃时间为90s条件下的第二阶段、以及在温度为72℃时间为30s条件下的第三阶段;第三循环为在温度为72℃时间为10min条件下的1个循环;第四循环为在温度为4℃时间不限条件下的1个循环。
根据第三方面,一种实施例中提供一种试剂盒,包括引物混合物,引物混合物包括权利要求1至3的引物序列。
进一步地,试剂盒还包括缓冲液、DNA聚合酶、DNA模板和去离子水;
任选的,DNA模板来源于包括血液、血斑、血浆、毛囊和口腔拭子。
根据第四方面,一种实施例中提供一种上述试剂盒在个体身份识别、亲缘关系鉴定、母血分型、混合复杂样本分型、二代DNA档案建立和血型鉴定中的应用。
依据上述实施例的基于二代测序的个体识别体系、试剂盒及其用途,由于个体识别体系包括针对112个STR位点和318个SNP位点设计的引物序列,位点覆盖全基因组,只需要一次扩增就能同时获得常染色体、X染色体、Y染色体上的二代或三代遗传标记信息,减少操作步骤,缩短实验时间。具体的,其中位点包括新CODIS系统的20个STR位点,YfilerTM试剂盒的16个STR位点以及公安部建库要求的20个STR位点,同时在二代遗传标记中还增加了在中国群体中多态性和稳定性较好的位点,适用于全球不同国家不同地区人群的DNA分型检测;并且本个体识别体系以尽可能短的扩增片段涵盖STR位点,其中包括15个核心序列为2bp和3bp重复的lobSTR位点,此外本体系还包括一个主要扩增产物小于100bp的SNP位点集合,加上二代测序系统固有的高灵敏度,有利于法医学微量、陈旧、降解检材分型。
附图说明
图1为常染色体STR位点的在人类基因组中的定位示意图;
图2为性染色体STR位点的在人类基因组中的定位示意图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式结合附图对本发明作进一步详细说明。
在本发明实施例中提供了一种基于二代测序的个体识别体系,本个体识别体系包括针对112个STR位点和318个SNP位点设计的引物序列,引物序列用于对不同基因位点进行分型扩增,从而本个体识别体系能同时检测112个STR和318个SNP位点,位点覆盖全基因组。本个体识别体系也将STR位点和SNP位点分开单独扩增,可根据实际需求选择扩增的位点。
112个STR位点包括53个常染色体STR位点、23个X染色体STR位点及35个Y染色体STR位点和一个性别决定位点AMEL。其中,常染色体STR位点的在人类基因组中的定位图如图1所示,性染色体STR位点在人类基因组中的定位图如图2所示。
318个SNP位点包括186个常染色体SNP位点、69个X染色体SNP位点、57个Y染色体SNP位点、及6个血型表型相关SNP位点。
每一个位点对应设计一对引物,一对引物用于从两端同时扩增位点的DNA片段。
具体的,53个常染色体STR位点及对应的引物序列如表1所示。其中53个STR位点分别分布在22对常染色体上,53个常染色体STR位点对应的引物序列如SEQ ID NO.1至SEQ IDNO.106所示。
所述的一个性别决定位点AMEL和23个X染色体STR位点、35个Y染色体STR位点对应的引物序列如SEQ ID NO.107至SEQ ID NO.224如表2所示;
186个常染色体SNP位点及对应的引物序列如表3所示。
69个X染色体SNP位点及对应的引物序列如表4所示。
57个Y染色体SNP位点及对应的引物序列如表5所示。
6个血型表型相关SNP位点及对应的引物序列如表6所示。
表1.常染色体STR位点序列信息
表2.性染色体STR位点序列信息
表3.常染色体SNP位点序列信息
表4.X染色体SNP位点序列信息
表5.Y染色体SNP位点序列信息
表6.血型表型相关的位点序列信息
Allele | 正向引物序列(SEQ ID NO.) | 反向引物序列(SEQ ID NO.) |
261 | TGCAGCTCGAATAGGAAGG(849) | TGAACTGCTCGTTGAGGAT(850) |
297 | TGCAGCTCGAATAGGAAGG(851) | TGAACTGCTCGTTGAGGAT(852) |
681 | CATGACCATTACCGAGGA(853) | TAGGCCTGGGACTGGGGC(854) |
703 | CATGACCATTACCGAGGA(855) | TAGGCCTGGGACTGGGGC(856) |
802 | CACCTCTTGCACCGACCC(857) | ACGACCCCGAGGGCTACTAC(858) |
803 | CACCTCTTGCACCGACCC(859) | ACGACCCCGAGGGCTACTAC(860) |
如表6所示,6个血型表型相关SNP位点为261、297、681、703、802、803,用于ABO血型的鉴别。并且,采用3对引物分别扩增血型表型相关的261、297、681、703、802、803位点,具体的261和297、681和703、802和803分别采用相同的引物扩增,得到长度不等的特征性片段,通过读取突变位点的碱基可以判断血型。而判断血型依据如下表7。
表7.血型表型相关SNP位点及血型判断
表7中“-”代表缺失。
本发明还提供了一种DNA分型检测的方法,本方法采用上述的基于二代测序的个体识别体系分型检测DNA,将DNA中112个STR位点和318个SNP位点在同一个PCR扩增反应体系中同时扩增。SNP和STR也可分开扩增,用户可根据需要自行选择。
PCR扩增反应体系如下表8所示包括15ul的DNA聚合酶、5ul的引物混合物(PrimerMix)、1ul的DNA模板和4ul的去离子水,在DNA聚合酶的作用下引物混合物中的引物序列对模板DNA中的112个STR位点和318个SNP位点同时进行扩增,扩增体系在各种反应热循环仪上(如ABI 9700、ABI Veriti、Bio-Rad myCycler等)采用表9所示的温度循环条件可以得到较好的结果,其中,温度循环包括四次循环,其中第一循环为在温度为95℃时间为5min条件下的1个循环;第二循环包括三个阶段的30个循环,三个阶段包括在温度为94℃时间为30s条件下的第一阶段、在温度为56℃时间为90s条件下的第二阶段,在温度为72℃时间为30s条件下的第三阶段;第三循环为在温度为72℃时间为10min条件下的1个循环;第四循环为在温度为4℃时间不限的条件下的1个循环。DNA可由血液、血斑、带毛囊的毛发、口腔试子等制备。DNA模板量达到2ng就能够得到较好的扩增结果。
在上述PCR扩增反应体系按照指定的反应程序扩增模板DNA,可以得到各位点混合的扩增产物。扩增产物可通过市面上主流测序平台(如Illumina Hiseq4000、BGISEQ-500等)进行测序分析。对测序后的数据进行生物信息学分析,得到DNA分型数据。
表8.反应扩增体系
组分 | 体积(25ul) |
DNA聚合酶Mix | 15ul |
Primer Mix(100μM) | 5ul |
DNA模板 | 1ul(约2ng) |
去离子水 | 补充至25ul |
表9.扩增体系温度循环条件
本发明提供了一种试剂盒,试剂盒即为一个PCR扩增反应体系,试剂盒包括引物混合物、DNA聚合酶、DNA模板和去离子水,其体积比如表8所示。
其中,引物混合物包括基于二代测序的个体识别体系中针对112个STR位点和318个SNP位点设计的引物序列。SNP和STR可分开或一起扩增,用户可根据需要自行选择。
基于上述位点的选择及引物的设计,本试剂盒在DNA分型检测方面的应用,包括并不限于:(1)个体身份识别;(2)二联体或三联体亲子鉴定;(3)在双亲缺失姐妹关系认定、父女关系认定、祖母与孙女关系认定及隔代认亲等复杂亲缘关系鉴定;(4)母血分型;(5)混合复杂样本分型;(6)高度降解样本如大规模灾难的遗骸身份鉴定;(7)父系亲缘关系的鉴定;(8)二代DNA档案建立;(9)血型鉴定等。
在上述的应用中,DNA模板来源于但不限于血液、血斑、血浆、毛囊、口腔拭子中的至少一种。
本发明提供的基于二代测序的个体识别体系、试剂盒及其用途具有如下优点:
(1)在一些复杂的亲缘关系鉴定中,如双亲缺失姐妹关系认定、父女关系认定、祖母与孙女关系认定及隔代认亲等,往往需要使用常染色体的STR分型试剂盒、Y-STR分型试剂盒、X-STR分型试剂盒等扩增几次以达到亲缘关系鉴定的目的,耗时又繁琐。因此,本发明将常染色体STR、具有伴性遗传的X-STR、具有父系遗传的Y-STR等遗传标记相结合,可以在缩短检测时间的同时提高检验效能,既能满足一般的个体识别、亲子鉴定,也能满足复杂亲缘关系鉴定、家系排查及家谱构建等,具有很好的市场前景;
(2)上世纪90年代美国FBI选择13个常染色体STR基因座用于建立DNA数据索引系统CODIS(Combined DNA Index System):CSF1PO、D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、FGA、TH01、TPOX、vWA,目前该系统已被多个国家的DNA数据库在其基础上借鉴和发展,现有技术的很多试剂盒都是在这个基础上增加的,目前最新的CODIS系统有20个位点,本发明的试剂盒既包括新CODIS系统的20个STR位点,还包括市面上用于鉴别父系(爷爷-父亲-儿子)的YfilerTM试剂盒的16个STR位点以及中国公安部建DNA数据库要求的20个STR位点等,同时在二代遗传标记中还增加了在中国群体中多态性和稳定性较好的STR位点,既适用于国外也适用于中国人群的DNA分型检测;
(3)陈旧、高腐的样本,DNA降解,片段短,一代STR分型试剂盒受限于自身的荧光标记的方法论,扩增片段长,所以难以处理诸如大规模灾难的遗骸等陈旧、高腐、降解的样本,而二代分型试剂盒采用的是测序的方法,在设计引物时没有荧光标记的局限性,可以得到适当短的产物,本发明的个体识别体系设计引物以得到尽量短的STR和SNP扩增片段,因此在处理陈旧、高腐、降解的样本时比较有优势;
(4)一代的DNA分型技术一次性只能处理几十个样本,而本发明的个体识别体系采用二代测序技术,高通量,根据平台不同,最多一次性可以检测几百个样本;
(5)本个体识别体系用户可以自主选择市面的主流测序平台测序,适用于市面上大部分主流测序平台,解决了Illumina MiSeq FGx平台兼容性不够的问题;
(6)本个体识别体系在DNA分型时还可以通过读取ABO血型表型有关位点的突变碱基来检测血型,在案件中起到辅助鉴定的作用。例如检测出受害者是B型血,而嫌疑人是A型血,可以排除嫌疑人等,故可以在案件中起辅助鉴定的作用。
实施例一:
本实施例提供了一种基于二代测序的个体识别体系,本个体识别体系对一男性样品进行基因分型并检测血型。
血液由男性志愿者捐献,血清学检测为B型血。DNA模板用chelex-100方法提取,引物由一公司合成,按照一定比例混合成引物混合物。取引物混合物、DNA聚合酶Mix等,按照表8配置反应体系。按照表9的反应条件设置热循环仪(ABI VeritiPCR仪),将PCR反应管放入仪器中进行PCR扩增。扩增反应结束后,取出反应管,用UltraTM DNA LibraryPrep Kit for文库制备试剂盒制备DNA文库。取PCR纯化产物,按照UltraTM DNA Library Prep Kit for文库制备试剂盒的说明书操作步骤依次进行末端修复、接头连接、连接产物纯化、PCR、PCR产物纯化等步骤完成文库制备。
取制备好的文库,按照说明书使用Illumina Hiseq 4000进行上机测序。
为了检验个体识别体系分型结果的准确性,使用MiSeq FGx系统和PromegaPowerPlex21试剂盒分别对相同的DNA模板进行检测。对这3次的分型结果进行比较,结果如表10、表11所示。
表10.本个体识别体系与两种试剂盒对同一DNA模板的STR分型结果
表10中“-”代表对应试剂盒中不包括该位点。
表11.血型相关位点检测结果
Allele | 261 | 297 | 681 | 703 | 802 | 803 |
GG | GG | CC | TT | GG | GG |
从表10可知,本个体识别体系的分型结果与现有的两种试剂盒的结果基本相同,验证了本个体识别体系检测的正确性。
将表11检测的结果对比表7可知,检测的男性血液为B血型,与血清学检测结果一致。
实施例二:
本实施例提供了一种基于二代测序的个体识别体系,本个体识别体系对一女性样品进行基因分型并检测血型。
血液由女性志愿者捐献,经血清学检测为A型血。模板DNA用chelex-100方法提取。扩增反应在ABI 9700热循环仪上进行,用UltraTM DNA Library Prep Kitfor文库制备试剂盒进行建库,用Illumina Hiseq 4000上机测序。
其中,女性样本常染色体分型结果如表12所示,女性样本血型相关位点检测结果如表13所示。
表12.女性样本常染色体的实验数据和分型结果
位点名称 | 分型结果 | 位点名称 | 分型结果 | 位点名称 | 分型结果 |
D1S1612 | 10,12 | D6S474 | 12,12 | D16S539 | 8,10 |
D1S1628 | 12,12 | D7S801 | 23,23 | D17S974 | 8,11 |
D1S2134 | 8,10 | D7S820 | 7,8 | D17S1301 | 12,13 |
D1S1656 | 11,12 | D8S1179 | 10,11 | D18S1145 | 18,18 |
D2S1338 | 14,20 | D9S1122 | 12,10 | D18S466 | 10,10 |
D2S2944 | 10,11 | D9S2157 | 15,17 | D18S51 | 13,18 |
D2S441 | 11,13 | D9S2168 | 18,18 | D18S535 | 13,14 |
TPOX | 8,11 | D10S1248 | 11,11 | D18S865 | 10,11 |
D3S1358 | 15,17 | D10S1435 | 8,9 | D18S872 | 12,12 |
D3S3053 | 16,18 | TH01 | 8,9 | D19S253 | 8,9 |
D4S2408 | 8,9 | D12S391 | 15,17 | D19S400 | 15,16 |
D4S2995 | 14,14 | vWA | 20,20 | D19S433 | 14,16 |
FGA | 20,23 | D13S317 | 8,11 | D20S161 | 18,19 |
CSF1PO | 8,9 | D14S1434 | 12,13 | D20S482 | 14,16 |
D5S818 | 9,11 | D15S128 | 20,20 | D21S11 | 26,30 |
D6S1017 | 11,13 | D15S129 | 20,20 | PentaD | 8,12 |
D6S1025 | 14,14 | D15S131 | 24,26 | D22S1045 | 11,11 |
D6S1043 | 10,15 | PentaE | 10,11 |
表13.血型相关位点检测结果
Allele | 261 | 297 | 681 | 703 | 802 | 803 |
GG | AG | CC | CC | AG | CC |
根据表13的检查结果对比表7可知,检测的女性血液为A血型,与血清学检测结果一致。
实施例三:
本实施例提供了一种基于二代测序的个体识别体系,本个体识别体系对两个家系进行基因型分析。两个家系分别为肯定家系和否定家系。
血液由志愿者捐献,DNA模板用chelex-100方法提取。扩增反应在ABI 9700热循环仪上进行,用UltraTM DNA Library Prep Kit for文库制备试剂盒进行建库,用Illumina Hiseq 4000上机测序。
肯定家系常染色体分型结果如表14所示,否定家系常染色体分型结果如表15所示。
表14.肯定家系实验数据和分型结果
表15.否定家系实验数据和分型结果
以上应用了具体个例对本发明进行阐述,只是用于帮助理解本发明,并不用以限制本发明。对于本发明所属技术领域的技术人员,依据本发明的思想,还可以做出若干简单推演、变形或替换,变形或替换等情况也应在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 深圳华大法医科技有限公司
<120> 一种基于二代测序的个体识别体系、试剂盒及其用途
<130> 18I25880
<160> 860
<170> PatentIn version 3.3
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<213> 人工序列
<400> 11
gatggcaaaa gattcaagtt a 21
<210> 12
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 12
gtgttacatg gatgaatgga gag 23
<210> 13
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 13
tcatgacgcc aggaagtgtg 20
<210> 14
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 14
gagctaagtc gggctgtgg 19
<210> 15
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 15
agaagcaggc acttacggaa 20
<210> 16
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 16
cttcccgcgc taggccgttc 20
<210> 17
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 17
gcttgccatg tatctatctc gt 22
<210> 18
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 18
gagtcagagc aagaccctgt ct 22
<210> 19
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 19
tgagtgcggt ttgtgatatg at 22
<210> 20
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 20
tctttgctct catgaataga tca 23
<210> 21
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 21
ataagcagtt caatagaaac ct 22
<210> 22
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 22
gactcgaaaa atagtaaccg tt 22
<210> 23
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 23
ggctcgcgta atttgtgtgt cga 23
<210> 24
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 24
tcctgatctg agaagtagca a 21
<210> 25
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 25
ggcaaggaga aagaaacaaa 20
<210> 26
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 26
taaaattaag gcatatttac aa 22
<210> 27
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 27
agcaccctgt tctaagtagt tc 22
<210> 28
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 28
attaacacgt aactgccttc at 22
<210> 29
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 29
tagggacagt ttacaacatt tc 22
<210> 30
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 30
tgtatttcct ctttggtatc c 21
<210> 31
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 31
gatgcgtgga tgcatgaaaa a 21
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 32
gtcaccccgt ccatttgagc 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 33
ccaccaagga aagacagagt 20
<210> 34
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 34
ctcgttcttc tgcacaagta c 21
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<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 35
attgtctatg agccacttgc cat 23
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 36
aggatgggtg gatcaataga tt 22
<210> 37
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 37
ggttttccaa gagatagacc 20
<210> 38
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 38
tcataaatcc ctactcatat ctat 24
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 39
gacaggattt gtgaggatca t 21
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<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 40
ccactgtccc atccccca 18
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 41
ataaaaaaaa actatcaatc tg 22
<210> 42
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 42
catagtttag aacgaactaa 20
<210> 43
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 43
ggcaacttat atgtattttt gtatttc 27
<210> 44
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 44
gccttaattt atttacctat cctgta 26
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 45
ggggtatttc aagataactg 20
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 46
ctgcaaagct ctagtttagt gct 23
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 47
ggcaaagcga gactctgt 18
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<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 48
gaggcaaaat gctatcctcg ttt 23
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 49
tggcttctac cccatgattc 20
<210> 50
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 50
gaacacacct gtacaggcac 20
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 51
aattctgaac aaatgagtga gtgga 25
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 52
caactctggt tcgtattctc tt 22
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<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 53
ttataatgcg tcattgagtt ttatt 25
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 54
ctgtctcgaa aaataaacag a 21
<210> 55
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 55
gtgcaggtca gaccagggaa ca 22
<210> 56
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 56
gcctgcttcc tcccttagtt tcc 23
<210> 57
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 57
atcaacagga tcaatggatg c 21
<210> 58
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 58
agctaattgc cctctaataa atcc 24
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 59
acagatgata aatacatagg at 22
<210> 60
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 60
agtggatgac tgtaagaata atca 24
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<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 61
tctaacgcgt ctatctgtat tta 23
<210> 62
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 62
cagcccaaaa agcgacagac 20
<210> 63
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 63
caattccttg cttaataact cta 23
<210> 64
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 64
aaccaatagg agcgtagtgg a 21
<210> 65
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 65
gctgatgatg gaacgaagga 20
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<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 66
gctacaggct actgataaaa aca 23
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 67
tctttgcgga ccgtgtttcc 20
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 68
ttaataagct ggagtgcacc ac 22
<210> 69
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 69
gaaagcaact cactactct 19
<210> 70
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 70
ccagttaatt ccttctaac 19
<210> 71
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 71
tattaattga gaaaactcc 19
<210> 72
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 72
ctgagcaaga ctcagtctc 19
<210> 73
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 73
tcctgtgctt ccctagatcc taata 25
<210> 74
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 74
tctctgttca ttgtctttca atgat 25
<210> 75
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 75
agaactgatg aaattctgcc a 21
<210> 76
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 76
taaaaagaat gaaggtaaaa at 22
<210> 77
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 77
gatagatctg ggataggtag gca 23
<210> 78
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 78
acccaaaacg ttgaatgtca ta 22
<210> 79
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 79
ctagtgggtc gaggccactt ca 22
<210> 80
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 80
gccactcagt ttgtggtata att 23
<210> 81
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 81
gcataatgtt gatggtttgg aatg 24
<210> 82
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 82
gcactcgagg atggctctct att 23
<210> 83
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 83
gtgacaagta ttgagacctt gtct 24
<210> 84
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 84
gagatgctct tacaataaca gttg 24
<210> 85
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 85
agccacaccc ataact 16
<210> 86
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 86
atgagaatgc agagaaagag aatc 24
<210> 87
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 87
ttttatgagc caaattcttg ta 22
<210> 88
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 88
gcattctttg gataaactga acca 24
<210> 89
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 89
taaatttcat gctttctgat gctta 25
<210> 90
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 90
tgcatcactc gcagcgtttg gc 22
<210> 91
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 91
gggaaatgct atcatgttat ttctc 25
<210> 92
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 92
tagacagaca gatgcggact ga 22
<210> 93
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 93
gttcttatct gttcctgtct atct 24
<210> 94
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 94
ataaataaat aaagcgtaca gacgg 25
<210> 95
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 95
cccgaatagt gaaaatcttc tc 22
<210> 96
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 96
cctgggcgtc aacagaataa gat 23
<210> 97
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 97
ttaagtgact gtttgtccac ca 22
<210> 98
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 98
ttgccctata ctgatcattt attcc 25
<210> 99
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 99
tctgtttcag agaatgcacc ga 22
<210> 100
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 100
ccataaccag tgcatgaatc aattcc 26
<210> 101
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 101
acttttgctg ctcagtctcc 20
<210> 102
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 102
cagagaatca gactgctaat agga 24
<210> 103
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 103
gcaagtgtgt gccaccatct caa 23
<210> 104
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 104
gtttatagtg attctctttt tggcc 25
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 105
gcgtatcggg gctagttatt cc 22
<210> 106
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 106
tatgattggc atgcatattt ttataa 26
<210> 107
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 107
gggcgtcgct ctgtttagaa ta 22
<210> 108
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 108
tcagacgtta aagctggcaa g 21
<210> 109
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 109
tttgtgctct ctatctctat ctgt 24
<210> 110
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 110
agcacaacgg catcatgtat tg 22
<210> 111
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 111
cttcagtgtt tgacatggct t 21
<210> 112
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 112
ccatccccta aacctctcat 20
<210> 113
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 113
cagaatcagt aggatatctc tct 23
<210> 114
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 114
ctctaacaag tctcctttca cat 23
<210> 115
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 115
agtatgatgc tagaatattc acct 24
<210> 116
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 116
ggaacatatg ctactttatc tcg 23
<210> 117
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 117
agatatatag taaaaatact cc 22
<210> 118
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 118
taaacatgta cttagcgaaa aa 22
<210> 119
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 119
cccaaaatat atgtggtca 19
<210> 120
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 120
aatgttatct acatgatagg gag 23
<210> 121
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 121
gaatatagag gaaggggaaa tca 23
<210> 122
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 122
ggacctcagt tcaaagaaat 20
<210> 123
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 123
ccaaactcta ttagtcaacg 20
<210> 124
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 124
gacccgattt tcataataaa t 21
<210> 125
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 125
gcttggctta gatgcgattc a 21
<210> 126
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 126
cttaccagaa tcagaagtct 20
<210> 127
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 127
tcagtgcaca ataataaatg a 21
<210> 128
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 128
tgccctttat cacccagatt 20
<210> 129
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 129
gcctgcgtga ctcgggatc 19
<210> 130
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 130
gaacatatac atttcagcat 20
<210> 131
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 131
atttccatct ctgtctccat ctttg 25
<210> 132
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 132
ggagaagggc atgaatttg 19
<210> 133
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 133
aagctaggaa ctgataatac a 21
<210> 134
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 134
gagtcctgtg cttaggtctg 20
<210> 135
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 135
cacgtgggaa cttatgggag t 21
<210> 136
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 136
gacttgtctg acgaaatatt ca 22
<210> 137
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 137
cgagccacag cctacaaaag 20
<210> 138
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 138
atccagatag acagatcaat ag 22
<210> 139
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 139
caggcagtat tgggatcatc ca 22
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 140
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<213> 人工序列
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 142
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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cattgttcag gtttctctcc 20
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<213> 人工序列
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ttcaaggtgc tgcaggtttg 20
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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tgtctcctca tctacatg 18
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<212> DNA
<213> 人工序列
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tacagcacgc tatagtctca g 21
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<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
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tgatgtgcaa gcaggtagg 19
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gcaggctcca tttttatacc 20
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tacgctagat gcacactctc 20
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<213> 人工序列
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 267
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<212> DNA
<213> 人工序列
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caagtatatg aggatgtttg 20
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 372
tcaagtatat gaggatgttt gt 22
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 373
ggaaaagaac ccaggtgt 18
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<212> DNA
<213> 人工序列
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gacattaggt ggattcatag ctg 23
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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cctagttgac ccctaagaag 20
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<213> 人工序列
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cactgggctc tgatctg 17
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<212> DNA
<213> 人工序列
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cgtggatctc aggtctccag 20
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<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 382
cttgccgagt aggtaggac 19
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<213> 人工序列
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ttctggcttt ggcagcatac 20
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atgtgcatgc ttttgggtgg 20
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<213> 人工序列
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gtgtcattag tgagcatgag 20
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<212> DNA
<213> 人工序列
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accaatcaag tcagagccac 20
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<213> 人工序列
<400> 387
ctgagggtgg cgtgagtg 18
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<213> 人工序列
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aggtgctcag caagcaga 18
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<213> 人工序列
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tccagtgaga agtgtcttgg 20
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<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 394
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 395
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 396
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<213> 人工序列
<400> 398
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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aaacaagctt tcaatcacca 20
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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accagcaaca ctcctaatc 19
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<213> 人工序列
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ccattaaacc cagcaccta 19
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<213> 人工序列
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caaggtcata caatgaatgg tgt 23
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<213> 人工序列
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tattcgtctg tcatcgctgc 20
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tgatggacgc tgcgtagctg 20
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<212> DNA
<213> 人工序列
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tgcgctacct gacgagttac 20
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<212> DNA
<213> 人工序列
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ttacaataca gcgctcgtct 20
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<212> DNA
<213> 人工序列
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tcccctttcg cttccccta 19
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<212> DNA
<213> 人工序列
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caggtatgtt cagggaactc 20
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<211> 20
<212> DNA
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atgagaacag agctgagtcg 20
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<213> 人工序列
<400> 509
ggttatttct gtctctgatt ctat 24
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<211> 20
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<213> 人工序列
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cagggtctga actgaactgt 20
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<211> 23
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<213> 人工序列
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agataggttc gagttttggc ttt 23
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<213> 人工序列
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gcccccgtga agcttcag 18
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agtgtgagaa gagcctca 18
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agaggggaaa gacgaaagga 20
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<211> 20
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<213> 人工序列
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atgagctggt gtccaaggag 20
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<213> 人工序列
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tgagctagca taacaacgg 19
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agggagatga gatggctaag 20
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agcatgtaaa tacatagcca t 21
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<400> 520
atcatctgag tctgatatgt ct 22
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 521
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 522
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 523
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 524
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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ctgctagaac tctgaaaatt 20
<210> 774
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 774
tgttggtttc tcgcattggt 20
<210> 775
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 775
gttacaagtg aaaccatctt ggtat 25
<210> 776
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 776
cttcaggtcc attttaaaga catac 25
<210> 777
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 777
accctaaaat tttagatttg gtatc 25
<210> 778
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 778
gtcttgaaag tattccttct gtctc 25
<210> 779
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 779
aagagatagc agatgctggt tt 22
<210> 780
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 780
tgcataactt gcagtatttt taca 24
<210> 781
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 781
gcagacacag gaattacaga tga 23
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<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 782
cttatacatc ccacaaaatc tctt 24
<210> 783
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 783
tacctattcg ataattgtct gcat 24
<210> 784
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 784
taccacatgc ttgtcctgct 20
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<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 785
ggaggcattg acccaataat ggact 25
<210> 786
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 786
taggctgggc ggatcattga a 21
<210> 787
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
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ctctatccag cttagtttca ttg 23
<210> 788
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 788
gtaaaattca aagcatctct ccc 23
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 789
tcttttgact cagcctgtta c 21
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 790
cttcctaccc aaaccaagat ac 22
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 791
tcaccccgca ctaagaagaa 20
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<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
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gtagttaggt agttagaagg tgac 24
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<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
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gttgtcattg catctaccaa atat 24
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 794
ctctatgtca aaaggaactt cg 22
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 795
ctgacgattc ccgcttaagc a 21
<210> 796
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
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aatccactca agtcccagct aa 22
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<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 797
gctcaagtta tggtatgaag caata 25
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<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
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agtgaatgaa ggagttgaag gtaa 24
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 799
ccaacacacc gaaagaagat cg 22
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
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aacacatttc cttagggacg t 21
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 801
ggagcaacac aggcaatta 19
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 802
aggcttgtgg acaatactcc t 21
<210> 803
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 803
attgaaatag ttgttgcgtc agct 24
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<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 804
tcgctacggg agttattggg atg 23
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 805
catcatggct aggtagtgtt t 21
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
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ttagtgctag gttttcactt a 21
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 807
tacacacacc ttccctagac 20
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 808
tgagtggtag gctgtttat 19
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
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tcattgaatt gggagacagg 20
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 810
ctcccaattc aacctctaac gc 22
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 811
gtacaattaa tggctatgtt ggct 24
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<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
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attataactg ccggttacct gaag 24
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<212> DNA
<213> 人工序列
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ctgtccatta gtctgcccat aaa 23
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<212> DNA
<213> 人工序列
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attaaccctt accttgccaa a 21
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<212> DNA
<213> 人工序列
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aactgttcct accctgctta 20
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<212> DNA
<213> 人工序列
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ctgtgatcat gtagccagta aa 22
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<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
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ctggacgtcc ttcacttgg 19
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<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 818
ggcagctgca aggatatg 18
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
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acatgttgac atttccactg c 21
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
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tgaagaatgg gaagtgtgaa at 22
<210> 821
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 821
tcccagtgaa aacctttaga ata 23
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 822
ttggtctgtt ctttctagcc c 21
<210> 823
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 823
ctaatctttg gcgagaattt gt 22
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
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tgaaatgggg tatgttcctg g 21
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 825
tcagagagcg gagattccgt 20
<210> 826
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 826
aagtatcatt tagagtatcg actgt 25
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 827
accaggactt tgaccagtat c 21
<210> 828
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 828
actgctaatt ggatcctgcc 20
<210> 829
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 829
cacattagtc tacagattag gcac 24
<210> 830
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 830
agttaagtgt atgctccatg g 21
<210> 831
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 831
ttgtgagaga tcggtctagt tag 23
<210> 832
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 832
gttcagacgg acgagcatca 20
<210> 833
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 833
ttgtcctagt ctgctatgac tgc 23
<210> 834
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 834
ttgaacatgc tactgatcat acg 23
<210> 835
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 835
gaggtagagg acgccagca 19
<210> 836
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 836
tcagtgctag tgcgactgat g 21
<210> 837
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 837
catctcatgc tgctcctga 19
<210> 838
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 838
gtcacgatac gtctatgtga t 21
<210> 839
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 839
aatctctggg ctagtgtgtc 20
<210> 840
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 840
ccgcgaccct attccgcatc t 21
<210> 841
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 841
catgtggagt ggggggaa 18
<210> 842
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 842
gactgaggct taggacgctg c 21
<210> 843
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 843
agccacatta aatctcacta t 21
<210> 844
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 844
ctctatcagg gttgcaactt ggt 23
<210> 845
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 845
tcgtccacat ggggagagtt gg 22
<210> 846
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 846
agcttagaga acctgcatcc ac 22
<210> 847
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 847
gcgtgtttga tccctatgat t 21
<210> 848
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 848
ccaagaccct cccttagcat acag 24
<210> 849
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 849
tgcagctcga ataggaagg 19
<210> 850
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 850
tgaactgctc gttgaggat 19
<210> 851
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 851
tgcagctcga ataggaagg 19
<210> 852
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 852
tgaactgctc gttgaggat 19
<210> 853
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 853
catgaccatt accgagga 18
<210> 854
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 854
taggcctggg actggggc 18
<210> 855
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 855
catgaccatt accgagga 18
<210> 856
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 856
taggcctggg actggggc 18
<210> 857
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 857
cacctcttgc accgaccc 18
<210> 858
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 858
acgaccccga gggctactac 20
<210> 859
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 859
cacctcttgc accgaccc 18
<210> 860
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 860
acgaccccga gggctactac 20
Claims (8)
1.一种基于二代测序的个体识别体系,其特征在于,包括针对112个STR位点和318个SNP位点同时扩增设计的引物序列,所述112个STR位点包括53个常染色体STR位点、23个X染色体STR位点及35个Y染色体STR位点和一个性别决定位点AMEL;所述318个SNP位点包括186个常染色体SNP位点、69个X染色体SNP位点、57个Y染色体SNP位点、及6个血型表型相关SNP位点;
所述53个常染色体STR位点对应的引物序列如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.106所示;
所述性别决定位点AMEL和23个X染色体STR位点、35个Y染色体STR位点对应的引物序列如SEQ ID NO.107至SEQ ID NO.224所示;
所述186个常染色体SNP位点对应的引物序列如SEQ ID NO.225至SEQ ID NO.596所示;
所述69个X染色体SNP位点对应的引物序列如SEQ ID NO.597至SEQ ID NO.734所示;
所述57个Y染色体SNP位点对应的引物序列如SEQ ID NO.735至SEQ ID NO.848所示;
所述6个血型表型相关SNP位点对应的引物序列如SEQ ID NO.849至SEQ ID NO.860所示。
2.一种DNA分型检测的方法,其特征在于,采用权利要求1所述的个体识别体系分型检测DNA。
3.如权利要求2所述的方法,其特征在于,所述112个STR位点和318个SNP位点在同一个PCR扩增反应体系中同时扩增或者分开扩增。
4.如权利要求3所述的方法,其特征在于,所述PCR扩增反应体系包括15ul的DNA聚合酶、5ul的引物混合物、1ul的DNA模板和4ul的去离子水。
5.如权利要求3所述的方法,其特征在于,所述PCR扩增反应体系的温度循环包括四次循环,其中第一循环为在温度为95℃时间为5min条件下的1个循环;第二循环包括三个阶段的30个循环,所述三个阶段包括在温度为94℃时间为30s条件下的第一阶段、在温度为56℃时间为90s条件下的第二阶段、以及在温度为72℃时间为30s条件下的第三阶段;第三循环为在温度为72℃时间为10min条件下的1个循环;第四循环为在温度为4℃时间不限条件下的1个循环。
6.一种试剂盒,其特征在于,包括引物混合物,所述引物混合物包括权利要求1所述的引物序列。
7.如权利要求6所述的试剂盒,还包括缓冲液、DNA聚合酶、DNA模板和去离子水;
所述DNA模板来源包括血液、血斑、血浆、毛囊和口腔拭子。
8.如权利要求7所述的试剂盒在个体身份识别、亲缘关系鉴定、母血分型、混合复杂样本分型、二代DNA档案建立、血型鉴定及芯片生产中的应用。
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