CN108485794B - 一种灵芝孢子油的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种灵芝孢子油的制备方法，以未破壁的灵芝孢子粉为原料，通过萌发、酶解、超声波冻融后萃取得到灵芝孢子油，破壁率达到96%以上。本发明在破壁前通过对灵芝孢子粉进行萌发处理，并配合三次冻融循环，使得灵芝孢子油中的有效成分得到最大保留，从而提高了灵芝孢子粉的破壁率和出油率，本发明所提供的方法工艺简单、成本低、提取率高、产品质量稳定、适合工业生产。
Description
技术领域
本发明属于植物药有效成分提取技术领域，特别是涉及一种灵芝孢子油的制备方法。
背景技术
灵芝是我国传统扶正固本、滋补强壮的名贵中药，在我国有5000多年的药用、食用历史。灵芝孢子油是灵芝孢子粉破壁后提取的活性成分，为黄色透明液体，主要成份是灵芝酸、不饱和脂肪酸、灵芝多糖等。诱导或促进巨噬细胞的吞噬作用直接和间接毒杀肿瘤细胞。本品能够提高机体免疫力，减少因放、化疗引起的精神不佳、食欲减退、呕吐、脱发等情况的发生。作为保健品具有良好的功效，
灵芝孢子油的提取方法有传统的溶剂提取法，由于存在提取效率低、能耗高、费时长等缺点，现有采用超临界CO2萃取法的报道和专利申请较多，如CN1883590A、CN106318611A等，与传统方法相比，有生产周期短、有效成分不易破坏，无溶剂残留、不污染环境等优点。尽管如此，超临界CO2萃取法萃取灵芝孢子油需要的较高地压力和较长的提取时间，而且提取收率不稳定，批与批之间收率有较大的误差等缺点。
本发明旨在需求一种灵芝孢子粉高破壁率和高出油率的提取方法，更加适合工业生产。
发明内容
本发明的目的在于提供一种灵芝孢子油的制备方法，在破壁前通过对灵芝孢子粉进行萌发处理，提高了灵芝孢子粉的破壁率和出油率，提取工艺简单、优化了提取条件，降低了提取成本。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种灵芝孢子油的制备方法，以未破壁的灵芝孢子粉为原料，通过萌发、酶解、超声波冻融后萃取得到灵芝孢子油，破壁率达到80％以上。
一种灵芝孢子油制备方法，包括以下步骤：
(1)取未破壁灵芝孢子粉加入纯化水配成0.1g/mL的悬浊液60mL，然后向悬浊液中加入重量份数为 25％-30％的子实体浸出液，萌发18-24h；
(2)向步骤(1)所得悬浊液中依次加入重量份数为0.2％-0.5％纤维素酶、0.01％-0.05％的中性蛋白酶和0.15％-0.25％的木瓜蛋白酶，震荡摇匀，于60℃烘箱中培养0.5-1h(优选于60℃烘箱中培养0.8h)；
(3)将步骤(2)培养后的液体经超声震荡处理20-40min，使孢子团充分打散，于600-1000W下，经超声破碎仪破碎0.5-1h，然后于－20℃冷冻1.5h，转至微波炉中解冻4min，如此反复冻融循环3次；
(4)将步骤(3)处理后的液体移入分液漏斗，加入15-20mL无水乙醇、20-30mL的石油醚，振荡1min，收集有机层于已称重的三角瓶中，于55-75℃恒温水浴使有机溶剂挥发45min，然后于50℃下真空干燥至恒重，收集孢子油即可。
上述一种灵芝孢子油的制备方法，优选的方案是，步骤(1)加入重量份数为28％的子实体浸出液。
上述一种灵芝孢子油的制备方法，优选的方案是，步骤(1)萌发21h。
上述一种灵芝孢子油的制备方法，优选的方案是，步骤(2)加入重量份数为0.35％纤维素酶、0.03％的中性蛋白酶和0.2％的木瓜蛋白酶。
上述一种灵芝孢子油的制备方法，优选的方案是，步骤(3)经超声破碎仪破碎0.8h。
上述一种灵芝孢子油的制备方法，优选的方案是，步骤(4)加入18mL无水乙醇、25mL的石油醚。
上述一种灵芝孢子油的制备方法，优选的方案是，步骤(4)于65℃恒温水浴使有机溶剂挥发45min。
本发明的有益效果体现在：本发明在破壁前通过对灵芝孢子粉进行萌发处理，并配合三次冻融循环，使得灵芝孢子油中的有效成分得到最大保留，从而提高了灵芝孢子粉的破壁率和出油率，本发明所提供的方法工艺简单、成本低、提取率高、产品质量稳定、适合工业生产。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
实施例1一种灵芝孢子油制备方法，包括以下步骤：
(1)取未破壁灵芝孢子粉加入纯化水配成0.1g/mL的悬浊液60mL，然后向悬浊液中加入重量份数为 25％的子实体浸出液，萌发18h；
(2)向步骤(1)所得悬浊液中依次加入重量份数为0.2％纤维素酶、0.01％的中性蛋白酶和0.15％的木瓜蛋白酶，震荡摇匀，于60℃烘箱中培养0.5h；
(3)将步骤(2)培养后的液体经超声震荡处理20min，使孢子团充分打散，于600W下，经超声破碎仪破碎0.5h，然后于－20℃冷冻1.5h，转至微波炉中解冻4min，如此反复冻融循环3次；
(4)将步骤(3)处理后的液体移入分液漏斗，加入15mL无水乙醇、20mL的石油醚，振荡1min，收集有机层于已称重的三角瓶中，于55℃恒温水浴使有机溶剂挥发45min，然后于50℃下真空干燥至恒重，收集孢子油即可；孢子粉破壁率为88.5％，孢子油收率为29.7％。
实施例2一种灵芝孢子油制备方法，包括以下步骤：
(1)取未破壁灵芝孢子粉加入纯化水配成0.1g/mL的悬浊液60mL，然后向悬浊液中加入重量份数为 30％的子实体浸出液，萌发24h；
(2)向步骤(1)所得悬浊液中依次加入重量份数为0.5％纤维素酶、0.05％的中性蛋白酶和0.25％的木瓜蛋白酶，震荡摇匀，于60℃烘箱中培养1h；
(3)将步骤(2)培养后的液体经超声震荡处理40min，使孢子团充分打散，于1000W下，经超声破碎仪破碎1h，然后于－20℃冷冻1.5h，转至微波炉中解冻4min，如此反复冻融循环3次；
(4)将步骤(3)处理后的液体移入分液漏斗，加入20mL无水乙醇、30mL的石油醚，振荡1min，收集有机层于已称重的三角瓶中，于75℃恒温水浴使有机溶剂挥发45min，然后于50℃下真空干燥至恒重，收集孢子油即可；孢子粉破壁率为93.2％，孢子油收率为29.5％。
实施例3一种灵芝孢子油制备方法，包括以下步骤：
(1)取未破壁灵芝孢子粉加入纯化水配成0.1g/mL的悬浊液60mL，然后向悬浊液中加入重量份数为 26％的子实体浸出液，萌发20h；
(2)向步骤(1)所得悬浊液中依次加入重量份数为0.3％纤维素酶、0.02％的中性蛋白酶和0.18％的木瓜蛋白酶，震荡摇匀，于60℃烘箱中培养0.6h；
(3)将步骤(2)培养后的液体经超声震荡处理25min，使孢子团充分打散，于700W下，经超声破碎仪破碎0.5h，然后于－20℃冷冻1.5h，转至微波炉中解冻4min，如此反复冻融循环3次；
(4)将步骤(3)处理后的液体移入分液漏斗，加入15mL无水乙醇、20mL的石油醚，振荡1min，收集有机层于已称重的三角瓶中，于60℃恒温水浴使有机溶剂挥发45min，然后于50℃下真空干燥至恒重，收集孢子油即可；孢子粉破壁率为96.5％，孢子油收率为31.3％。
实施例4一种灵芝孢子油制备方法，包括以下步骤：
(1)取未破壁灵芝孢子粉加入纯化水配成0.1g/mL的悬浊液60mL，然后向悬浊液中加入重量份数为 29％的子实体浸出液，萌发22h；
(2)向步骤(1)所得悬浊液中依次加入重量份数为0.4％纤维素酶、0.04％的中性蛋白酶和0.22％的木瓜蛋白酶，震荡摇匀，于60℃烘箱中培养0.9h；
(3)将步骤(2)培养后的液体经超声震荡处理35min，使孢子团充分打散，于900W下，经超声破碎仪破碎1h，然后于－20℃冷冻1.5h，转至微波炉中解冻4min，如此反复冻融循环3次；
(4)将步骤(3)处理后的液体移入分液漏斗，加入20mL无水乙醇、30mL的石油醚，振荡1min，收集有机层于已称重的三角瓶中，于70℃恒温水浴使有机溶剂挥发45min，然后于50℃下真空干燥至恒重，收集孢子油即可；孢子粉破壁率为97.7％，孢子油收率为31.6％。
实施例5一种灵芝孢子油制备方法，包括以下步骤：
(1)取未破壁灵芝孢子粉加入纯化水配成0.1g/mL的悬浊液60mL，然后向悬浊液中加入重量份数为 28％的子实体浸出液，萌发21h；
(2)向步骤(1)所得悬浊液中依次加入重量份数为0.35％纤维素酶、0.03％的中性蛋白酶和0.2％的木瓜蛋白酶，震荡摇匀，于60℃烘箱中培养0.8h；
(3)将步骤(2)培养后的液体经超声震荡处理30min，使孢子团充分打散，于800W下，经超声破碎仪破碎0.8h，然后于－20℃冷冻1.5h，转至微波炉中解冻4min，如此反复冻融循环3次；
(4)将步骤(3)处理后的液体移入分液漏斗，加入18mL无水乙醇、25mL的石油醚，振荡1min，收集有机层于已称重的三角瓶中，于65℃恒温水浴使有机溶剂挥发45min，然后于50℃下真空干燥至恒重，收集孢子油即可；孢子粉破壁率为98.1％，孢子油收率为32.4％。
应当指出的是，具体实施方式只是本发明比较由代表性的例子，显然本发明的技术方案不限于上述实施例，还可以有很多变形。本领域的普通技术人员，以本发明所明确公开的或根据文件的书面描述毫无异议的得到的，均应认为是本专利所要保护的范围。
Claims (7)
1.一种灵芝孢子油的制备方法，其特征在于，以未破壁的灵芝孢子粉为原料，通过萌发、酶解、超声波冻融后萃取得到灵芝孢子油，破壁率达到96%以上；包括以下步骤：
（1）取未破壁灵芝孢子粉加入纯化水配成0.1g/mL 的悬浊液60mL，然后向悬浊液中加入重量份数为25%-30%的子实体浸出液，萌发18-24h；
（2）向步骤（1）所得悬浊液中依次加入重量份数为0.2%-0.5%纤维素酶、0.01%-0.05%的中性蛋白酶和0.15%-0.25%的木瓜蛋白酶，震荡摇匀，于60℃烘箱中培养0.5-1h；
（3）将步骤（2）培养后的液体经超声震荡处理20-40min，使孢子团充分打散，于600-1000W下，经超声破碎仪破碎0.5-1h，然后于－20℃冷冻1.5h，转至微波炉中解冻4 min，如此反复冻融循环3次；
（4）将步骤（3）处理后的液体移入分液漏斗，加入15-20mL 无水乙醇、20-30mL的石油醚，振荡1min，收集有机层于已称重的三角瓶中，于55-75℃恒温水浴使有机溶剂挥发45min，然后于50℃下真空干燥至恒重，收集孢子油即可。
2.根据权利要求1所述的一种灵芝孢子油的制备方法，其特征在于，步骤（1）加入重量份数为28%的子实体浸出液。
3.根据权利要求1所述的一种灵芝孢子油的制备方法，其特征在于，步骤（1）萌发21h。
4.根据权利要求1所述的一种灵芝孢子油的制备方法，其特征在于，步骤（2）加入重量份数为0.35%纤维素酶、0.03%的中性蛋白酶和0.2%的木瓜蛋白酶。
5.根据权利要求1所述的一种灵芝孢子油的制备方法，其特征在于，步骤（3）经超声破碎仪破碎0.8h。
6.根据权利要求1所述的一种灵芝孢子油的制备方法，其特征在于，步骤（4）加入18mL无水乙醇、25mL的石油醚。
7.根据权利要求1所述的一种灵芝孢子油的制备方法，其特征在于，步骤（4）于65℃恒温水浴使有机溶剂挥发45min。
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