CN108452366A - 一种鳕鱼皮明胶复合止血敷料及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种鳕鱼皮明胶复合止血敷料的制备方法，包括以下步骤：(1)明胶/海藻酸钠复合溶液的制备：将海藻酸钠溶解于蒸馏水并进行搅拌，然后加入冻干的鳕鱼皮明胶进行加热搅拌，真空脱气后得明胶/海藻酸钠复合溶液；(2)交联：将步骤(1)制备的明胶/海藻酸钠复合溶液与交联剂进行交联反应；(3)消毒灭菌：将步骤(2)的产物进行消毒灭菌，即得到所述的鳕鱼皮明胶复合止血敷料。由本发明制备的止血敷料整体呈纯白色，致密无杂质，且物理性能大幅提高，抗张强度和吸水性均高于现有产品，止血性能达到现有产品止血效果，微观结构成均匀的多孔状，适合细胞粘附，具有良好的生物相容性和体内降解性，是一种良好的生物医用敷料。

Description

一种鳕鱼皮明胶复合止血敷料及其制备方法
技术领域
本发明属于医用材料制备技术领域，具体涉及一种鳕鱼皮明胶复合止血敷料及其制备方法。
背景技术
皮肤是人体的重要器官之一，在日常生活中，经常会发生创伤、擦伤、烧伤和皮肤溃烂等情况，造成皮肤的损伤。当皮肤受到破坏时，即人体抵御环境的一大屏障受到破坏，使得伤口处易发生感染、蛋白质和体液流失等问题，进而导致出血量增加，影响伤口的愈合，严重时会引起各种并发症。一般，要求伤口敷料能做到迅速止血，降低出血量，并对伤口有一定的保护作用，促进伤口愈合。而现有的伤口敷料，如医用纱布、止血棉、止血粉等，仍存在止血时间长，易于伤口粘连，抗菌效果差等问题。所以，亟需一种新型的伤口敷料来解决上述问题。
明胶是一种变性的胶原蛋白，通常是从动物的皮肤、骨、肌肉等结缔组织中的胶原蛋白经热水水解提取得到的，并部分保留了胶原蛋白链，胶原蛋白的一些活性序列都存在于明胶骨干中。所以，明胶同样具有良好的生物可降解性和生物相容性，并且由于其热变性等特性而表现出比胶原蛋白更低的抗原性。目前，市面上现有的明胶止血敷料，其明胶基本上来源于猪、牛等陆生生物的器官或组织中，存在安全性、宗教信仰和民族传统等方面的问题，因此开发其他具有更高安全性来源的明胶有重要的意义。
近年来，海洋渔业飞速发展，海洋资源得到极大地开发和利用。随之，由加工而产生了大量的水产加工下脚料如鱼皮、鱼骨、鱼鳞等，除了少部分用于加工饲料、肥料外，绝大部分直接丢弃，造成了资源浪费和环境污染。而鳕鱼作为一种常见的经济鱼类，其开发和利用后产生大量的鱼皮废弃物，其中含有大量的胶原蛋白，若能充分利用，可以大大提高水产废料的经济价值，从而进一步推进水产品的高值化利用。
然而，作为生物医用材料，海洋生物来源的胶原蛋白存在着机械性能差、生物稳定性不佳等问题，限制了其实际的应用。因此，许多研究者通过多种方式提高明胶的物理性能，如物理化学交联、引入聚合物改性等。
发明专利CN 105854072 A公开了一种医用凝胶及其用于制备医疗外用凝胶贴的方法，该专利的亲水性高分子材料采用了明胶和/或海藻酸钠，交联剂为氯化钙或戊二醛，制得的医用凝胶亲水性好，但该发明专利主要应用于消除静脉给药造成的水肿炎症反应，防止静脉炎及软组织损伤，不能且不适合应用于皮肤擦伤、外伤及内脏出血等情况。
发明专利CN 104784740 B公开了一种复合医用敷料的制备方法，该专利将海藻酸钠海绵体浸没在氯化钙溶液当中，该专利也涉及了预冻成型和冷冻干燥技术，但该发明专利以海藻酸钠为主要原料，而明胶溶液仅为抑菌药物的载体，无法发挥明胶与海藻酸钠复配后的相互协同作用。
发明专利CN 104307031 B公开了一种皮肤外用修复材料的制备方法，该专利将海藻酸钠溶液与明胶溶液混合，然后也加入了戊二醛，但该发明专利是经共混液过滤、减压脱泡、静置后直接得到的凝胶状医用敷料，未经过真空冻干，缺乏三维网络状结构，不能为血小板的聚集粘附和活化提供支撑。
发明专利CN 1329022 C公开了一种亲水性生物黏附凝胶贴剂及其制备工艺，其中多肽凝胶选用明胶或者骨胶，多糖凝胶选用海藻酸钠等，复合交联剂包括的初交联剂选用无水氯化钙等，末交联剂采用戊二醛等，但该发明专利是将复配二次交联得到的生物粘附凝胶，均匀涂布在无纺布等制成的背衬上，再覆盖上隔离层。而本发明制备的复合止血敷料厚度约为0.5cm，整体呈疏松多孔的网络状，浸泡于生理盐水或吸收血液后膨胀为凝胶状，贴附于伤口处，并起到一定的阻塞止血作用。
发明专利CN 105126152 B公开了一种明胶壳聚糖复合止血粉，该专利基本公开了本申请的明胶制备方法，还公开了最终的产品消毒灭菌方式，但该发明专利得到的产品为粉末状，在应用过程中，存在易被血液冲走，使用不便，不易回收和扬尘等问题，限制了其适用范围。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明通过提供一种鳕鱼皮明胶复合止血敷料的制备方法，通过该方法制备的敷料可以迅速止血，降低出血量，同时该敷料还具有良好的物理性能，三维网络状空间结构，能够促进伤口愈合，且体内降解性良好。
为实现上述目的，本发明的技术方案为一种鳕鱼皮明胶复合止血敷料的制备方法，包括以下步骤：
(1)明胶/海藻酸钠复合溶液的制备：将海藻酸钠溶解于蒸馏水并进行搅拌，然后加入冻干的鳕鱼皮明胶进行加热搅拌，真空脱气后得明胶/海藻酸钠复合溶液；
(2)交联：将步骤(1)制备的明胶/海藻酸钠复合溶液与交联剂进行交联反应；
(3)消毒灭菌：将步骤(2)的产物进行消毒灭菌，即得到所述的鳕鱼皮明胶复合止血敷料。
进一步，步骤(1)中，所述的鳕鱼皮明胶制备步骤如下：
A、鳕鱼皮预处理：将刮除鱼鳞且清洗干净的鳕鱼皮加入NaOH水溶液中浸泡处理，然后用蒸馏水进行反复洗涤，再加入HCl水溶液浸泡至鳕鱼皮溶胀后，用水清洗至pH为中性；
B、鳕鱼皮明胶的提取：将经步骤A处理的鳕鱼皮沥干后加蒸馏水混合后于恒温水浴条件下震荡提取，然后进行离心，取上层溶液用多层纱绢过滤，将得到的滤液趁热抽滤，即获得鳕鱼皮明胶液，倒入平板冻干得鳕鱼皮明胶。
优选的，步骤A中，所述NaOH水溶液的浓度为0.1mol/L，所述鳕鱼皮与NaOH水溶液按照质量体积比为1:10‐20的料液比进行混合，浸泡时间为4‐6h。
优选的，步骤A中，所述HCl水溶液的浓度为0.1mol/L，所述鳕鱼皮与HCl水溶液按照质量体积比为1:6‐10的料液比进行混合，浸泡时间为2‐4h。
优选的，步骤B中，按照1:5‐10的质量体积比在鳕鱼皮中加入蒸馏水；于40‐60℃的恒温水浴条件下震荡提取3‐5小时；然后在4200r/min转速下离心15‐20min；所述纱绢为 50目。
优选的，步骤(1)中，将海藻酸钠溶解于蒸馏水并在磁力搅拌器上搅拌3‐4h；向海藻酸钠溶液中加入冻干的鳕鱼皮明胶后，在37℃的水浴条件下加热搅拌2‐4h，真空脱气15‐30min；所述明胶/海藻酸钠复合溶液中鳕鱼皮明胶溶液浓度为15mg/mL，海藻酸钠溶液浓度为4mg/mL、8mg/mL、12mg/mL、15mg/mL中的一种。
优选的，所述海藻酸钠溶液浓度为8mg/mL。
进一步，步骤(2)中，所述交联剂为戊二醛；向步骤(3)制备的明胶/海藻酸钠复合溶液中加入戊二醛，使戊二醛的终浓度为0.01％‐0.03％，在4℃下交联12‐24h后，倒入不锈钢平板中，控制不锈钢平板中溶液高度为5‐10mm，‐20℃预冻6‐12h，传热方式为自然对流，冻干速率为0.05‐0.07g/h，然后放入冻干机中冷冻干燥24h。
进一步，步骤(2)中，所述交联剂为氯化钙；将步骤(3)制备的明胶/海藻酸钠复合溶液倒入不锈钢平板中，控制不锈钢平板中溶液高度为5‐10mm，‐20℃预冻6‐8h，传热方式为自然对流，冻干速率为0.05‐0.07g/h，然后放入冻干机中冷冻干燥24h，然后取出，按照质量体积比为1:20将其放入2％的氯化钙乙醇溶液中完全浸没，常温交联12‐24h，经二次冻干。
优选的，步骤(3)中消毒灭菌的方式为20KGy60Co消毒灭菌。
进一步，本发明还提供了一种根据上述方法制备获得的鳕鱼皮明胶复合止血敷料，其厚度为0.5cm，整体呈疏松多孔的网络状，孔径为100‐200μm，抗张强度0.05‐0.11Mpa，断裂伸长率为6％，吸水倍数为40‐50倍，交联度为46％‐56％。
与现有技术先比，本发明的有益技术效果：
(1)海藻酸钠是一种天然的多糖类物质，具有良好的生物相容性和生物可降解性，具有成膜和形成凝胶的能力。明胶与海藻酸钠复配，不仅可以进一步提高敷料的止血性能，同时还能增强复合敷料与伤口组织之间的附着力，提高材料的可塑性。
(2)以戊二醛进行交联，是通过化学交联的方法来提高复合敷料的张力和稳定性，形成较为致密的网状结构。
(3)海藻酸钠可以与钙离子等二价阳离子发生交联，从线性疏松结构交联成较为致密的网状结构形成水凝胶，因此选择氯化钙作为交联剂。
(4)由本发明的方法制备的复合止血敷料整体呈纯白色，表面致密柔软；同时，具有良好的网络状空间结构，孔隙均匀且相互连通，结构致密，孔径约为100-200μm，适合细胞粘附，有促进伤口愈合的作用。
(5)本发明在预冻过程中，通过对冻干速率的控制，使得形成的冰晶大小均匀。在真空状态下水分不经过液态直接升华成气态，其升华通路形成致密的孔隙，这样的微观结构具有较高的吸水性和保湿性。
(6)由本发明的方法制备的复合止血敷料的物理性能得到大幅提高，抗张强度和吸水性均高于现有的明胶伤口敷料，且通过大鼠肝创面止血、股动脉止血和断尾止血模型实验结果表明，复合止血敷料能明显缩短止血时间，降低出血量，基本达到了现有成品的止血效果。
(7)本发明通过控制戊二醛的添加量，确定其最优添加量的最小用量，结果表明，制备的复合止血敷料的交联效果好，稳定性高，且对大鼠皮肤无刺激性，细胞毒性低，溶血率明显低于5％，具有良好的生物相容性、血液相容性和体内降解性。
综合上述，本发明制备的鳕鱼皮明胶复合敷料整体呈纯白色，致密无杂质，且物理性能大幅提高，抗张强度和吸水性均高于现有产品，止血性能达到现有产品止血效果，微观结构成均匀的多孔状，适合细胞粘附，具有良好的生物相容性和体内降解性，是一种良好的生物医用敷料。
附图说明
图1为本发明的鳕鱼皮明胶复合止血敷料的成品示意图；
图2为发明的鳕鱼皮明胶复合止血敷料的微观结构示意图；
图3为本发明实施例5的微观结构示意图；
注：图3中，从左往右依次为鳕鱼皮明胶与海藻酸钠复配比分别为15:0、15:8和15:15 的扫描电镜图。
具体实施方式
本发明以鳕鱼皮明胶为主料，以海藻酸钠为辅料，戊二醛或氯化钙为交联剂，将不同配比的溶液通过冷冻干燥制备出性能优良的鳕鱼皮明胶复合敷料，且原料来源广泛，制备工艺简单，价格低廉，克服了现有敷料的一些不足。
一种鳕鱼皮明胶复合止血敷料的制备方法，包括以下步骤：
(1)鳕鱼皮预处理：将刮除鱼鳞且清洗干净的鳕鱼皮加入NaOH水溶液中浸泡处理，然后用蒸馏水进行反复洗涤，再加入HCl水溶液浸泡至鳕鱼皮溶胀后，用水清洗至pH为中性。
(2)鳕鱼皮明胶的提取：将经步骤(1)处理的鳕鱼皮沥干后加蒸馏水混合后于恒温水浴条件下震荡提取，然后进行离心，取上层溶液用多层纱绢过滤，将得到的滤液趁热抽滤，即获得鳕鱼皮明胶液，倒入平板冻干得鳕鱼皮明胶。
(3)明胶/海藻酸钠复合溶液的制备：将海藻酸钠溶解于蒸馏水并进行搅拌，然后加入步骤(2)冻干的鳕鱼皮明胶进行加热搅拌，此时溶液粘度较大，溶液中含有较多大小不一、分布不均的气泡，会影响冻干后产品的微观结构，因此，再通过真空脱气的方式脱除气泡后得明胶/海藻酸钠复合溶液。
(4)交联：将步骤(3)制备的明胶/海藻酸钠复合溶液与交联剂进行交联反应。
(5)消毒灭菌：将步骤(4)的产物进行消毒灭菌，即得到所述的鳕鱼皮明胶复合止血敷料。
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
实施例1
一种鳕鱼皮明胶复合止血敷料的制备方法，包括以下步骤：
(1)鳕鱼皮预处理：将冷冻的鳕鱼皮流水解冻后除去肌肉组织和脂肪组织，刮除鱼鳞，用清水清洗干净；将100g的鳕鱼皮按照1:10的料液比(w/v)加入0.1mol/L的NaOH 水溶液中浸泡处理4h，以除去杂蛋白及色素；然后用蒸馏水进行反复洗涤；再将鳕鱼皮按照1:6的料液比(w/v)加入0.1mol/L的HCl水溶液浸泡2h至鳕鱼皮溶胀后，用水清洗至 pH为中性。
(2)鳕鱼皮明胶的提取：将经步骤(1)处理的鳕鱼皮沥干后按照1:5的料液比加蒸馏水混合后于50℃的恒温水浴条件下震荡提取3小时；然后在4200r/min转速下离心15min，取上层溶液用多层纱绢过滤，所述纱绢为50目，将得到的滤液趁热抽滤，即获得鳕鱼皮明胶液，取上层溶液倒入平板冻干得鳕鱼皮明胶。
(3)明胶/海藻酸钠复合溶液的制备：将海藻酸钠溶解于蒸馏水并在磁力搅拌器上搅拌3h，使海藻酸钠充分溶解；然后加入步骤(2)冻干的鳕鱼皮明胶，在37℃的水浴条件下加热搅拌2h，真空脱气30min后得明胶/海藻酸钠复合溶液；所述明胶/海藻酸钠复合溶液中鳕鱼皮明胶溶液浓度为15mg/mL，海藻酸钠溶液浓度为4mg/mL。如果先加明胶再加海藻酸钠，或两者同时加入，搅拌时间更长，且易形成沉淀，因此，本发明选择先加海藻酸钠并搅拌使之充分溶解再进行后续操作。本发明在实验中发现，改变海藻酸钠和明胶的添加顺序，先加明胶再加海藻酸钠，或两者同时加入，搅拌时间更长，且易形成沉淀。
(4)交联：向步骤(3)制备的明胶/海藻酸钠复合溶液中加入戊二醛，使戊二醛的终浓度为0.01％，在4℃下交联12h后；倒入6cm深的不锈钢平板中，控制不锈钢平板中溶液高度为5‐10mm，‐20℃预冻6h，传热方式为自然对流，分别在预冻时间为1h、3h、6h、 9h、12h，测量冻干速率，范围在0.05‐0.07g/h之间；然后放入冻干机中冷冻干燥24h。
(5)消毒灭菌：取出步骤(4)获得的成型的敷料产品经20KGy60Co消毒灭菌，即得到所述的鳕鱼皮明胶复合止血敷料。
实施例2
一种鳕鱼皮明胶复合止血敷料的制备方法，包括以下步骤：
(1)鳕鱼皮预处理：将冷冻的鳕鱼皮流水解冻后除去肌肉组织和脂肪组织，刮除鱼鳞，用清水清洗干净；将100g鳕鱼皮按照1:10的料液比(w/v)加入0.1mol/L的NaOH水溶液中浸泡处理4h，以除去杂蛋白及色素；然后用蒸馏水进行反复洗涤；再将鳕鱼皮按照 1:6的料液比(w/v)加入0.1mol/L的HCl水溶液浸泡2h至鳕鱼皮溶胀后，用水清洗至pH 为中性。
(2)鳕鱼皮明胶的提取：将经步骤(1)处理的鳕鱼皮沥干后按照1:5的料液比加蒸馏水混合后于40℃的恒温水浴条件下震荡提取3小时；然后在4200r/min转速下离心15min，取上层溶液用纱绢过滤，所述纱绢为50目，将得到的滤液趁热抽滤，即获得鳕鱼皮明胶液，倒入平板冻干得鳕鱼皮明胶。
(3)明胶/海藻酸钠复合溶液的制备：将海藻酸钠溶解于蒸馏水并在磁力搅拌器上搅拌3h；然后加入步骤(2)冻干的鳕鱼皮明胶，在37℃的水浴条件下加热搅拌2h，真空脱气30min后得明胶/海藻酸钠复合溶液；所述明胶/海藻酸钠复合溶液中鳕鱼皮明胶溶液浓度为15mg/mL，海藻酸钠溶液浓度为8mg/mL。
(4)交联：将步骤(3)制备的明胶/海藻酸钠复合溶液倒入6cm深的不锈钢平板中，控制不锈钢平板中溶液高度为5‐10mm，‐20℃预冻6h，传热方式为自然对流，分别在预冻时间为1h、3h、6h、9h、12h，测量冻干速率，范围在0.05‐0.07g/h之间；然后放入冻干机中冷冻干燥24h；取出成型的敷料产品，按照质量体积比为1:20放入2％的氯化钙乙醇溶液中完全浸没常温交联12h后，经二次冻干。若直接将氯化钙直接加到明胶/海藻酸钠复合溶液中，氯化钙会与海藻酸钠反应生成不溶性的海藻酸钙。
(5)消毒灭菌：取出步骤(4)二次冻干成型的敷料产品经20KGy60Co消毒灭菌，即得到所述的鳕鱼皮明胶复合止血敷料。
实施例3
一种鳕鱼皮明胶复合止血敷料的制备方法，包括以下步骤：
(1)鳕鱼皮预处理：将冷冻的鳕鱼皮流水解冻后除去肌肉组织和脂肪组织，刮除鱼鳞，用清水清洗干净；将100g鳕鱼皮按照1:20的料液比(w/v)加入0.1mol/L的NaOH 水溶液中浸泡处理6h，以除去杂蛋白及色素；然后用蒸馏水进行反复洗涤；再将鳕鱼皮按照1:10的料液比(w/v)加入0.1mol/L的HCl水溶液浸泡4h至鳕鱼皮溶胀后，用水清洗至pH为中性。
(2)鳕鱼皮明胶的提取：将经步骤(1)处理的鳕鱼皮沥干后按照1:10的料液比加蒸馏水混合后于60℃的恒温水浴条件下震荡提取5小时；然后在4200r/min转速下离心20min，取上层溶液用纱绢过滤，所述纱绢为50目，将得到的滤液趁热抽滤，即获得鳕鱼皮明胶液，倒入平板冻干得鳕鱼皮明胶。
(3)明胶/海藻酸钠复合溶液的制备：将海藻酸钠溶解于蒸馏水并在磁力搅拌器上搅拌4h；然后加入步骤(2)冻干的鳕鱼皮明胶，在37℃的水浴条件下加热搅拌4h，真空脱气20min后得明胶/海藻酸钠复合溶液；所述明胶/海藻酸钠复合溶液中鳕鱼皮明胶溶液浓度为15mg/mL，海藻酸钠溶液浓度为4mg/mL。
(4)交联：向步骤(3)制备的明胶/海藻酸钠复合溶液中加入戊二醛，使戊二醛的终浓度为0.03％，在4℃下交联24h后；倒入6cm深的不锈钢平板中，控制不锈钢平板中溶液高度为5‐10mm，‐20℃预冻12h，传热方式为自然对流，分别在预冻时间为1h、3h、6h、 9h、12h，测量冻干速率，范围在0.05‐0.07g/h之间；然后放入冻干机中冷冻干燥24h。
(5)消毒灭菌：取出步骤(4)获得的成型的敷料产品经20KGy60Co消毒灭菌，即得到所述的鳕鱼皮明胶复合止血敷料。
实施例4
一种鳕鱼皮明胶复合止血敷料的制备方法，包括以下步骤：
(1)鳕鱼皮预处理：将冷冻的鳕鱼皮流水解冻后除去肌肉组织和脂肪组织，刮除鱼鳞，用清水清洗干净；将100g鳕鱼皮按照1:20的料液比(w/v)加入0.1mol/L的NaOH 水溶液中浸泡处理6h，以除去杂蛋白及色素；然后用蒸馏水进行反复洗涤；再将鳕鱼皮按照1:10的料液比(w/v)加入0.1mol/L的HCl水溶液浸泡4h至鳕鱼皮溶胀后，用水清洗至 pH为中性。
(2)鳕鱼皮明胶的提取：将经步骤(1)处理的鳕鱼皮沥干后按照1:10的料液比加蒸馏水混合后于60℃的恒温水浴条件下震荡提取5小时；然后在4200r/min转速下离心20min，取上层溶液用纱绢过滤，所述纱绢为50目，将得到的滤液趁热抽滤，即获得鳕鱼皮明胶液，倒入平板冻干得鳕鱼皮明胶。
(3)明胶/海藻酸钠复合溶液的制备：将海藻酸钠溶解于蒸馏水并在磁力搅拌器上搅拌4h；然后加入步骤(2)冻干的鳕鱼皮明胶，在37℃的水浴条件下加热搅拌4h，真空脱气30min后得明胶/海藻酸钠复合溶液；所述明胶/海藻酸钠复合溶液中鳕鱼皮明胶溶液浓度为15mg/mL，海藻酸钠溶液浓度为8mg/mL。
(4)交联：将步骤(3)制备的明胶/海藻酸钠复合溶液倒入6cm深的不锈钢平板中，控制不锈钢平板中溶液高度为5‐10mm，‐20℃预冻12h，传热方式为自然对流，分别在预冻时间为1h、3h、6h、9h、12h，测量冻干速率，范围在0.05‐0.07g/h之间；然后放入冻干机中冷冻干燥24h；取出成型的敷料产品，按照质量体积比为1:20放入2％的氯化钙溶液中完全浸没常温交联12h后，经二次冻干。
(5)消毒灭菌：取出步骤(4)二次冻干成型的敷料产品经20KGy60Co消毒灭菌，即得到所述的鳕鱼皮明胶复合止血敷料。
如图1‐2所示，由实施例1‐4制备获得的鳕鱼皮明胶复合止血敷料，厚度约为0.5cm，整体呈纯白色，表面致密柔软。同时，如图2所示，通过电镜观察可知，鳕鱼皮明胶复合止血敷料整体呈疏松多孔的网络状，其具有良好的网络状空间结构，孔隙均匀且相互连通，结构致密，孔径约为100-200μm，适合细胞粘附，有促进伤口愈合的作用。将所述鳕鱼皮明胶复合止血敷料浸泡于生理盐水或吸收血液后膨胀为凝胶状，贴附于伤口处，并起到一定的阻塞止血作用。由本发明的方法制备的复合止血敷料的物理性能得到大幅提高，抗张强度和吸水性均高于现有的明胶伤口敷料，且通过大鼠肝创面止血、股动脉止血和断尾止血模型实验结果表明，复合止血敷料能明显缩短止血时间，降低出血量，基本达到了现有成品的止血效果。并且，本发明通过控制戊二醛的添加量，确定其最优添加量的最小用量为0.01％‐0.03％，结果表明，本发明制备的复合止血敷料的交联效果好，稳定性高，且对大鼠皮肤无刺激性，细胞毒性低，溶血率明显低于5％，具有良好的生物相容性、血液相容性和体内降解性。
实施例5
1、戊二醛交联得到的鳕鱼皮明胶复合止血敷料微观结构测定：
利用实施例1和3的方法，将鳕鱼皮明胶与海藻酸钠分别按照含量比为15:0、15:8和 15:15进行复配，选取表观形态较好的上述实施获得不同复配比的复合敷料产品进行扫描电镜检测，并与未复配的鳕鱼皮明胶对比，观察其纤维的粗细、孔径的大小、孔径的分布情况等。如图3所示的扫描电镜图可以看出：与纯明胶相比，复配后，敷料的孔隙分布更加均匀，丝状结构减少，结构更加致密。
2、戊二醛交联得到的鳕鱼皮明胶复合止血敷料物理性能测定：
以抗张强度、断裂伸长率、吸水倍数、交联度等指标对鳕鱼皮明胶复合止血敷料物理性能进行评价。如表1所示，不同复配比条件下得到鳕鱼皮明胶复合止血敷料的抗张强度范围在0.05‐0.11MPa左右，断裂伸长率约为6％，吸水倍数均为40‐50倍，交联度在46％‐56％左右。与纯明胶相比，其抗张强度、吸水倍数和交联度均有明显提高，说明明胶与海藻酸钠复配有相互协同，明显改善了鱼皮明胶的机械性能，扩大了复合止血敷料的应用范围，且基本达到了现有产品所需的物理性能。而断裂伸长率则变化不大，表明复配后不会增大敷料的脆性，保持了明胶原有的柔软度。
表1为戊二醛交联得到的鳕鱼皮明胶复合止血敷料物理性能测定结果
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种鳕鱼皮明胶复合止血敷料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)明胶/海藻酸钠复合溶液的制备：将海藻酸钠溶解于蒸馏水并进行搅拌，然后加入冻干的鳕鱼皮明胶进行加热搅拌，真空脱气后得明胶/海藻酸钠复合溶液；
(2)交联：将步骤(1)制备的明胶/海藻酸钠复合溶液与交联剂进行交联反应；
(3)消毒灭菌：将步骤(2)的产物进行消毒灭菌，即得到所述的鳕鱼皮明胶复合止血敷料。
2.根据权利要求1所述的鳕鱼皮明胶复合止血敷料的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，所述的鳕鱼皮明胶制备步骤如下：
A、鳕鱼皮预处理：将刮除鱼鳞且清洗干净的鳕鱼皮加入NaOH水溶液中浸泡处理，然后用蒸馏水进行反复洗涤，再加入HCl水溶液浸泡至鳕鱼皮溶胀后，用水清洗至pH为中性；
B、鳕鱼皮明胶的提取：将经步骤A处理的鳕鱼皮沥干后加蒸馏水混合后于恒温水浴条件下震荡提取，然后进行离心，取上层溶液用多层纱绢过滤，将得到的滤液趁热抽滤，即获得鳕鱼皮明胶液，倒入平板冻干得鳕鱼皮明胶。
3.根据权利要求2所述的鳕鱼皮明胶复合止血敷料的制备方法，其特征在于：步骤A中，所述NaOH水溶液的浓度为0.1mol/L，所述鳕鱼皮与NaOH水溶液按照质量体积比为1:10-20的料液比进行混合，浸泡时间为4-6h；所述HCl水溶液的浓度为0.1mol/L，所述鳕鱼皮与HCl水溶液按照质量体积比为1:6-10的料液比进行混合，浸泡时间为2-4h。
4.根据权利要求2所述的鳕鱼皮明胶复合止血敷料的制备方法，其特征在于：步骤B中，按照1:5-10的质量体积比在鳕鱼皮中加入蒸馏水；于40-60℃的恒温水浴条件下震荡提取3-5小时；然后在4200r/min转速下离心15-20min；所述纱绢为50目。
5.根据权利要求1所述的鳕鱼皮明胶复合止血敷料的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，将海藻酸钠溶解于蒸馏水并在磁力搅拌器上搅拌3-4h；向海藻酸钠溶液中加入冻干的鳕鱼皮明胶后，在37℃的水浴条件下加热搅拌2-4h，真空脱气15-30min；所述明胶/海藻酸钠复合溶液中鳕鱼皮明胶溶液浓度为15mg/mL，海藻酸钠溶液浓度为4mg/mL、8mg/mL、12mg/mL、15mg/mL中的一种。
6.根据权利要求1所述的鳕鱼皮明胶复合止血敷料的制备方法，其特征在于：所述海藻酸钠溶液浓度为8mg/mL。
7.根据权利要求1所述的鳕鱼皮明胶复合止血敷料的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，所述交联剂为戊二醛；向步骤(3)制备的明胶/海藻酸钠复合溶液中加入戊二醛，使戊二醛的终浓度为0.01％-0.03％，在4℃下交联12-24h后，倒入不锈钢平板中，控制不锈钢平板中溶液高度为5-10mm，-20℃预冻6-12h，传热方式为自然对流，冻干速率为0.05-0.07g/h，然后放入冻干机中冷冻干燥24h。
8.根据权利要求1所述的鳕鱼皮明胶复合止血敷料的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，所述交联剂为氯化钙；将步骤(3)制备的明胶/海藻酸钠复合溶液倒入不锈钢平板中，控制不锈钢平板中溶液高度为5-10mm，-20℃预冻6-8h，传热方式为自然对流，冻干速率为0.05-0.07g/h，然后放入冻干机中冷冻干燥24h，然后取出，按照质量体积比为1:20将其放入2％的氯化钙乙醇溶液中完全浸没，常温交联12-24h，经二次冻干。
9.根据权利要求1所述的鳕鱼皮明胶复合止血敷料的制备方法，其特征在于：步骤(3)中消毒灭菌的方式为20KGy60Co消毒灭菌。
10.根据权利要求1-9任一项所述的制备方法制备获得的鳕鱼皮明胶复合止血敷料，其特征在于：所述的鳕鱼皮明胶复合止血敷料的厚度为0.5cm，整体呈疏松多孔的网络状，孔径为100-200μm，抗张强度0.05-0.11Mpa，断裂伸长率为6％，吸水倍数为40-50倍，交联度为46％-56％。
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