CN108441537A - 一种红参提取物的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种红参提取物的制备方法，其特征在于采用以下步骤：A、无菌条件下，取适量液体培养基配制菌种浓度为1.0×105‑1.0×106CFU/mL的菌悬液；B、取0.3‑0.5mL菌悬液在PDA固体培养基表面划线，在20‑25℃条件下培养3‑4天；在发酵摇瓶中进行扩培，得冬虫夏草菌丝发酵种子培养液；C、将红参进行清洗、烘干、灭菌、粉碎，通过高压微射流均质机破壁，得红参破壁匀浆；D、将冬虫夏草菌丝发酵种子培养液和红参破壁匀浆按照一定的质量比装入发酵罐进行发酵；E、发酵完成后，脱色、吸附、过滤、干燥后得粗提物；F、取粗提物进行热水提取，得红参提取物。本发明具有工艺简单，所得红参提取物中红参次要皂苷产量高，且含有较高含量虫草素的有益效果，同时还具有绿色环保的优点。
Description
技术领域
本发明涉及天然产物生物发酵技术领域，特别涉及一种红参提取物的制备方法。
背景技术
红参（Radix Ginseng Rubra）是人参最常见的炮制品，经浸润、清洗、分选、蒸制、晾晒、烘干等工序制成，活性成分主要有皂苷、多糖、脂溶性及挥发性物质等。其中红参皂苷因具有延缓衰老、抗疲劳、抗氧化、增强免疫力、抑制肿瘤细胞生长等作用而得到广泛研究应用，但红参皂苷中主要皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1、Ro等因人体吸收率低，药理作用得不到充分发挥，而次要皂苷Rg3、Rg5、Rh1、Rh4、Rk1等因在人体肠内的吸收率高，在阻碍肿瘤细胞的转移、抗衰老、抗氧化及增强免疫力等方面发挥出了卓越的药理活性。
冬虫夏草（Ophiocordyceps Sinensis）为麦角菌科真菌冬虫夏草菌寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体，是一种真菌，是我国传统的滋补性中药材，性温、味甘，含有丰富的虫草素(cordycepin)，是一种核苷类抗生素，具有抗肿瘤、抗衰老、抗菌抗炎、免疫调节、改善新陈代谢、清除自由基等多种药理作用。
目前，制备次要皂苷的方法主要有热处理、酸加水分解、酶转换法及有机合成等方法，但红参在热处理过程中可能会生成5-羟甲基糠醛（5-HMF）等致癌物质；酸加水分解法及酶转换法制备皂苷的工序中会不可避免的引入杂质或细菌，制得的产品均不宜作为食品或化妆品原料使用；有机合成方法路线及工艺较复杂，产量很低，成本较高且不利于环保。次要皂苷因产量低、价格昂贵等因素，应用和发展受到了极大限制。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种红参提取物的制备方法，该方法制备的红参提取物中红参次要皂苷产量高，且含有较高含量虫草素，本发明方法还具有绿色环保的优点。
为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：一种红参提取物的制备方法，其特征在于采用以下步骤：
A、无菌条件下，取适量液体培养基配制菌种浓度为1.0×105-1.0×106CFU/mL的菌悬液，所述菌种为冬虫夏草菌丝，菌种保藏号为CICC 14017，所述液体培养基为含10.0-15.0g/L葡萄糖、5.0-10.0g/L玉米淀粉、10.0-20.0g/L蛋白胨的MS液体培养基；
B、取0.3-0.5mL菌悬液在PDA固体培养基表面划线，在20-25℃条件下培养3-4天；挑取分散较好的单菌落接种至含有液体培养基成分的发酵摇瓶中进行扩培，置于气浴恒温振荡器内，在20-25℃，250r/min条件下供氧培养6-8天，气浴恒温振荡器内的氧浓度为0.030-0.050mol/L，得冬虫夏草菌丝发酵种子培养液；
C、将红参进行清洗、烘干、灭菌，粉碎至50-100目，得红参粉末，按质量比1.0:15.0将红参粉末与蒸馏水预先混合后倒入不锈钢容器中，升温至55-60℃，20RPM速度下刮边搅拌5-7小时，然后装入高压微射流均质机，反复高压均质5-8次，均质压力15000psi，均质温度50-52℃，在60℃下真空干燥至含水量为20wt%，得红参破壁匀浆；
D、在带有搅拌装置的发酵罐中加入适量液体培养基，加入液体培养基质量30-50%的麦麸，液体培养基质量10-20%的聚苯乙烯颗粒，然后加入液体培养基质量40-60%的红参破壁匀浆，量取红参破壁匀浆质量8.0-15.0%的冬虫夏草菌丝发酵种子培养液加入发酵罐中，添加适量水将发酵罐中初始含水率控制在50.0-65.0wt%，20-25℃条件下供氧发酵50-80天，发酵罐中氧浓度为0.030-0.050mol/L，每隔10天慢速搅拌翻匀物料一次，慢速搅拌过程中按照0.5mL/g的量补水；
E、发酵完成后，向发酵罐中加入发酵产物质量0.80-1.50%的硅藻土助滤剂及发酵产物质量8.0-10.0%的脱色活性炭，静置吸附2小时，再用板框压滤机过滤去渣，得滤液，60℃真空干燥得粗提物；
F、取粗提物质量20倍的蒸馏水，与粗提物混合后在50-55℃条件下提取4小时，然后5000r/min离心30分钟，取上清液，将所得上清液用旋转蒸发器在水浴温度50℃、转速100r/min条件下蒸发至水分含量低于10wt%；然后在-50℃下冷冻干燥48小时，得红参提取物。
本发明采用高效液相色谱分析法（HPLC）测定红参提取物中次要皂苷种类及含量，采用高效液相色谱分析法（HPLC）测定红参提取物中虫草素的含量，测试结果如下：本发明制备的红参提取物中主要含有Rg3、Rg5、Rh1、Rh4、Rk1这5种次要皂苷，含量分别介于4.20-4.80μg/mg、6.50-7.20μg/mg、3.60-4.40μg/mg、10.50-11.20μg/mg、6.20-6.80μg/mg之间，虫草素含量介于2.10-3.20μg/mg，远高于一般红参中次要皂苷的含量，含量对比见表1，本发明所得提取物中红参皂苷的种类从主要皂苷转化为人体吸收率好的次要皂苷，同时还含有较高含量的虫草素。
表1 一般红参提取物与本发明中红参提取物内不同种类皂苷的含量对比
本发明中所用冬虫夏草菌丝购于中国工业微生物菌种保藏管理中心，菌种编号：CICC14017；所用MS液体培养基为SIGMA公司生产，牌号M5519；所用葡萄糖（CAS 50-99-7）购于阿拉丁试剂（上海）有限公司，纯度≥99.5%；所用玉米淀粉（CAS 9005-25-8）购于阿拉丁试剂（上海）有限公司，试剂级；所用胰蛋白胨（CAS 91079-40-2）购于阿拉丁试剂（上海）有限公司，试剂级；所用PDA培养基购于杭州百思生物技术有限公司；所用气浴恒温振荡器购于江苏杰瑞尔电器有限公司，型号SHZ-82；所用红参为韩国正官庄红参，自行清洗并粉碎至50-100目；所用高压微射流均质机购于上海鲤跃精密机械贸易有限公司，型号M-110EH；所用真空干燥机购于常州日翔干燥设备有限公司，型号SZG-350；所用发酵罐购于南京润泽生物工程设备有限公司，型号RZY-XGX；所用麦麸为市售产品；所用聚苯乙烯颗粒购于北京中西远大科技有限公司，规格0.2-0.4mm；所用硅藻土购于嵊州市华力硅藻土制品有限公司，牌号为CD06，SiO2(%)≥85%；所用脱色活性炭购于湖州森盛活性炭有限公司，牌号为ZL-786，亚甲基兰吸附力12mL/0.1g；所用板框压滤机购于昆山市昆工环保机械有限公司，型号为XAMGZ/30U；所用离心机购于张家港市宇佼机械有限公司，型号为PSF-1000；所用旋转蒸发器购于上海亚荣生化仪器厂，型号为RE-52AA；所用冷冻干燥机购于美国LABCONCO公司，型号为FreeZone；所用高效液相色谱分析仪购自安捷伦科技（中国）有限公司，型号为Agilent 1260。
本发明利用冬虫夏草菌丝固态发酵红参来制备次要皂苷，所用冬虫夏草及红参均为我国传统保健滋补药材，利用生物发酵方式获得易于被人体吸收的次要皂苷，且发酵过程中冬虫夏草菌丝还不断累积虫草素，可以提升活性成分产量，绿色安全，所得提取物可以直接应用于食品及化妆品中，起到抗氧化及增强人体免疫力的作用。利用高压均质技术将红参预处理，可以破坏其细胞壁，使红参细胞内部有效成分释放，为下一步的微生物发酵创造有利条件，能显著促进发酵效果，提高产量。利用热水提取技术，对发酵产物进行有效分离，最后得到次要皂苷及虫草素含量高的产物。
本发明的优点在于提供了一条量产红参次要皂苷及虫草素的制备路线，利用冬虫夏草菌丝对经高压破壁的红参粉末进行固体发酵，再利用热水提取法，从发酵产物中分离得到高含量产物，其中5种次要皂苷Rg3、Rg5、Rh1、Rh4、Rk1的含量分别介于4.20-4.80μg/mg、6.50-7.20μg/mg、3.60-4.40μg/mg、10.50-11.20μg/mg、6.20-6.80μg/mg之间，虫草素含量介于2.10-3.20μg/mg，远高于一般红参中次要皂苷的含量，同时含有较高含量的虫草素。
本发明解决了红参次要皂苷产量极低的问题，经固体发酵的红参中皂苷的成分发生变化，易于被人体吸收的次要皂苷含量逐渐升高，且发酵过程中不断累积虫草素。本发明生产过程不引入有害溶剂，无大量废液产生，制备的红参提取物粉末质量稳定、成本低。
本发明提供的制备方法，产量较高，工艺步骤简单，利用冬虫夏草菌在红参表面进行固态发酵，发酵红参中皂苷的成分发生变化，易于被人体吸收的次要皂苷含量逐渐升高，且冬虫夏草菌在生长过程中还会产生虫草素，最终得到富含次要皂苷（Rg3、Rg5、Rh1、Rh4、Rk1）及虫草素的红参提取物，可直接应用在食品及化妆品行业。
综上所述，本发明的有益效果如下：1. 利用冬虫夏草菌丝固体发酵制备红参次要皂苷，可有效提高红参提取物中次要皂苷的含量，相比从同等重量的红参的直接提取，可平均提高产量20倍左右，且冬虫夏草菌丝在发酵过程中不断累积虫草素，可同时提高虫草素产量；2. 利用热水提取技术对发酵产物进行有效分离，得到Rg3、Rg5、Rh1、Rh4、Rk1 这5种次要皂苷的含量分别介于4.20-4.80μg/mg、6.50-7.20μg/mg、3.60-4.40μg/mg、10.50-11.20μg/mg、6.20-6.80μg/mg之间，虫草素含量介于2.10-3.20μg/mg，远高于一般红参中次要皂苷的含量，同时含有较高含量的虫草素；本发明中制备方法工艺简便，操作简单，绿色无污染，易于规模化工业生产。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步详细说明本发明，但本发明并不仅限于这些实施例。
实施例1：
一种红参提取物的制备方法，其特征在于采用以下步骤：
A、无菌条件下，取适量液体培养基配制菌种浓度为1.0×106CFU/mL的菌悬液，所述菌种为冬虫夏草菌丝，菌种保藏号为CICC 14017，所述液体培养基为含15.0g/L葡萄糖、8.0g/L玉米淀粉、20.0g/L蛋白胨的MS液体培养基；
B、取0.5mL菌悬液在PDA固体培养基表面划线，在25℃条件下培养4天；挑取分散较好的单菌落接种至含有液体培养基成分的发酵摇瓶中进行扩培，置于气浴恒温振荡器内，在25℃，250r/min条件下供氧培养6天，气浴恒温振荡器内的氧浓度为0.040mol/L，得冬虫夏草菌丝发酵种子培养液；
C、将红参进行清洗、烘干、灭菌，粉碎至100目，得红参粉末，按质量比1.0:15.0将红参粉末与蒸馏水预先混合后倒入不锈钢容器中，升温至60℃，20RPM速度下刮边搅拌6小时，然后装入高压微射流均质机，反复高压均质8次，均质压力15000psi，均质温度52℃，在60℃下真空干燥至含水量为20wt%，得红参破壁匀浆；
D、在带有搅拌装置的发酵罐中加入30kg液体培养基，加入液体培养基质量50%的麦麸15kg，液体培养基质量20%的聚苯乙烯颗粒6.0kg，然后加入液体培养基质量60%的红参破壁匀浆18kg，量取红参破壁匀浆质量15.0%的冬虫夏草菌丝发酵种子培养液2.7kg加入发酵罐中，添加适量水将发酵罐中初始含水率控制在50.0wt%，25℃条件下供氧发酵80天，发酵罐中氧浓度为0.040mol/L，每隔10天慢速搅拌翻匀物料一次，搅拌过程中按照0.5mL/g的量补水；
E、发酵完成后，向发酵罐中加入发酵产物质量1.50%的硅藻土助滤剂及发酵产物质量10.0%的脱色活性炭，静置吸附2小时，再用板框压滤机过滤去渣，得滤液，60℃真空干燥得粗提物；
F、取粗提物质量20倍的蒸馏水，与粗提物混合后在50℃条件下提取4小时，然后5000r/min离心30分钟，取上清液，将所得上清液用旋转蒸发器在水浴温度50℃、转速100r/min条件下蒸发至水分含量低于10wt%；然后在-50℃下冷冻干燥48小时，得红参提取物。
本实施例制备的红参提取物中主要含有Rg3、Rg5、Rh1、Rh4、Rk1这5种次要皂苷，含量分别为4.80μg/mg、7.05μg/mg、4.20μg/mg、11.20μg/mg、6.50μg/mg之间，虫草素含量为3.20μg/mg。
实施例2：
一种红参提取物的制备方法，其特征在于采用以下步骤：
A、无菌条件下，取适量液体培养基配制菌种浓度为8.0×105CFU/mL的菌悬液，所述菌种为冬虫夏草菌丝，菌种保藏号为CICC 14017，所述液体培养基为含10.0g/L葡萄糖、10.0g/L玉米淀粉、15.0g/L蛋白胨的MS液体培养基；
B、取0.4mL菌悬液在PDA固体培养基表面划线，在20℃条件下培养3天；挑取分散较好的单菌落接种至含有液体培养基成分的发酵摇瓶中进行扩培，置于气浴恒温振荡器内，在20℃，250r/min条件下供氧培养8天，气浴恒温振荡器内的氧浓度为0.050mol/L，得冬虫夏草菌丝发酵种子培养液；
C、将红参进行清洗、烘干、灭菌，粉碎至80目，得红参粉末，按质量比1.0:15.0将红参粉末与蒸馏水预先混合后倒入不锈钢容器中，升温至55℃，20RPM速度下刮边搅拌7小时，然后装入高压微射流均质机，反复高压均质6次，均质压力15000psi，均质温度50℃，在60℃下真空干燥至含水量为20wt%，得红参破壁匀浆；
D、在带有搅拌装置的发酵罐中加入30kg液体培养基，加入液体培养基质量40%的麦麸12kg，液体培养基质量10%的聚苯乙烯颗粒3.0kg，然后加入液体培养基质量50%的红参破壁匀浆15kg，量取红参破壁匀浆质量10.0%的冬虫夏草菌丝发酵种子培养液1.5kg加入发酵罐中，添加适量水将发酵罐中初始含水率控制在55.0wt%，20℃条件下供氧发酵60天，发酵罐中氧浓度为0.050mol/L，每隔10天慢速搅拌翻匀物料一次，搅拌过程中按照0.5mL/g的量补水；
E、发酵完成后，向发酵罐中加入发酵产物质量1.20%的硅藻土助滤剂及发酵产物质量8.0%的脱色活性炭，静置吸附2小时，再用板框压滤机过滤去渣，得滤液，60℃真空干燥得粗提物；
F、取粗提物质量20倍的蒸馏水，与粗提物混合后在52℃条件下提取4小时，然后5000r/min离心30分钟，取上清液，将所得上清液用旋转蒸发器在水浴温度50℃、转速100r/min条件下蒸发至水分含量低于10wt%；然后在-50℃下冷冻干燥48小时，得红参提取物。
本实施例制备的红参提取物中主要含有Rg3、Rg5、Rh1、Rh4、Rk1这5种次要皂苷，含量分别为4.20μg/mg、7.20μg/mg、3.60μg/mg、10.75μg/mg、6.20μg/mg之间，虫草素含量为2.74μg/mg。
实施例3：
一种红参提取物的制备方法，其特征在于采用以下步骤：
A、无菌条件下，取适量液体培养基配制菌种浓度为1.0×105CFU/mL的菌悬液，所述菌种为冬虫夏草菌丝，菌种保藏号为CICC 14017，所述液体培养基为含12.0g/L葡萄糖、5.0g/L玉米淀粉、13.0g/L蛋白胨的MS液体培养基；
B、取0.3mL菌悬液在PDA固体培养基表面划线，在23℃条件下培养4天；挑取分散较好的单菌落接种至含有液体培养基成分的发酵摇瓶中进行扩培，置于气浴恒温振荡器内，在23℃，250r/min条件下供氧培养7天，气浴恒温振荡器内的氧浓度为0.030mol/L，得冬虫夏草菌丝发酵种子培养液；
C、将红参进行清洗、烘干、灭菌，粉碎至50目，得红参粉末，按质量比1.0:15.0将红参粉末与蒸馏水预先混合后倒入不锈钢容器中，升温至58℃，20RPM速度下刮边搅拌5小时，然后装入高压微射流均质机，反复高压均质6次，均质压力15000psi，均质温度50℃，在60℃下真空干燥至含水量为20wt%，得红参破壁匀浆；
D、在带有搅拌装置的发酵罐中加入30kg液体培养基，加入液体培养基质量30%的麦麸9.0kg，液体培养基质量15%的聚苯乙烯颗粒4.5kg，然后加入液体培养基质量40%的红参破壁匀浆12kg，量取红参破壁匀浆质量8.0%的冬虫夏草菌丝发酵种子培养液0.96kg加入发酵罐中，添加适量水将发酵罐中初始含水率控制在65.0wt%，23℃条件下供氧发酵50天，发酵罐中氧浓度为0.030mol/L，每隔10天慢速搅拌翻匀物料一次，搅拌过程中按照0.5mL/g的量补水；
E、发酵完成后，向发酵罐中加入发酵产物质量0.80%的硅藻土助滤剂及发酵产物质量8.5%的脱色活性炭，静置吸附2小时，再用板框压滤机过滤去渣，得滤液，60℃真空干燥得粗提物；
F、取粗提物质量20倍的蒸馏水，与粗提物混合后在55℃条件下提取4小时，然后5000r/min离心30分钟，取上清液，将所得上清液用旋转蒸发器在水浴温度50℃、转速100r/min条件下蒸发至水分含量低于10wt%；然后在-50℃下冷冻干燥48小时，得红参提取物。
本实施例制备的红参提取物中主要含有Rg3、Rg5、Rh1、Rh4、Rk1这5种次要皂苷，含量分别为4.50μg/mg、6.50μg/mg、4.00μg/mg、10.50μg/mg、6.20μg/mg之间，虫草素含量为2.10μg/mg。
实施例4：
一种红参提取物的制备方法，其特征在于采用以下步骤：
A、无菌条件下，取适量液体培养基配制菌种浓度为5.0×105CFU/mL的菌悬液，所述菌种为冬虫夏草菌丝，菌种保藏号为CICC 14017，所述液体培养基为含14.0g/L葡萄糖、6.0g/L玉米淀粉、10.0g/L蛋白胨的MS液体培养基；
B、取0.5mL菌悬液在PDA固体培养基表面划线，在22℃条件下培养3天；挑取分散较好的单菌落接种至含有液体培养基成分的发酵摇瓶中进行扩培，置于气浴恒温振荡器内，在22℃，250r/min条件下供氧培养7天，气浴恒温振荡器内的氧浓度为0.030mol/L，得冬虫夏草菌丝发酵种子培养液；
C、将红参进行清洗、烘干、灭菌，粉碎至80目，得红参粉末，按质量比1.0:15.0将红参粉末与蒸馏水预先混合后倒入不锈钢容器中，升温至58℃，20RPM速度下刮边搅拌7小时，然后装入高压微射流均质机，反复高压均质5次，均质压力15000psi，均质温度52℃，在60℃下真空干燥至含水量为20wt%，得红参破壁匀浆；
D、在带有搅拌装置的发酵罐中加入30kg液体培养基，加入液体培养基质量45%的麦麸13.5kg，液体培养基质量18%的聚苯乙烯颗粒5.4kg，然后加入液体培养基质量40%的红参破壁匀浆12kg，量取红参破壁匀浆质量12.0%的冬虫夏草菌丝发酵种子培养液1.44kg加入发酵罐中，添加适量水将发酵罐中初始含水率控制在58.0wt%，22℃条件下供氧发酵65天，发酵罐中氧浓度为0.030mol/L，每隔10天慢速搅拌翻匀物料一次，搅拌过程中按照0.5mL/g的量补水；
E、发酵完成后，向发酵罐中加入发酵产物质量1.0%的硅藻土助滤剂及发酵产物质量9.0%的脱色活性炭，静置吸附2小时，再用板框压滤机过滤去渣，得滤液，60℃真空干燥得粗提物；
F、取粗提物质量20倍的蒸馏水，与粗提物混合后在53℃条件下提取4小时，然后5000r/min离心30分钟，取上清液，将所得上清液用旋转蒸发器在水浴温度50℃、转速100r/min条件下蒸发至水分含量低于10wt%；然后在-50℃下冷冻干燥48小时，得红参提取物。
本实施例制备的红参提取物中主要含有Rg3、Rg5、Rh1、Rh4、Rk1这5种次要皂苷，含量分别为4.74μg/mg、6.90μg/mg、4.40μg/mg、10.80μg/mg、6.80μg/mg之间，虫草素含量为3.10μg/mg。
实施例5：
一种红参提取物的制备方法，其特征在于采用以下步骤：
A、无菌条件下，取适量液体培养基配制菌种浓度为2.0×105CFU/mL的菌悬液，所述菌种为冬虫夏草菌丝，菌种保藏号为CICC 14017，所述液体培养基为含10.0g/L葡萄糖、8.0g/L玉米淀粉、17.0g/L蛋白胨的MS液体培养基；
B、取0.4mL菌悬液在PDA固体培养基表面划线，在25℃条件下培养3天；挑取分散较好的单菌落接种至含有液体培养基成分的发酵摇瓶中进行扩培，置于气浴恒温振荡器内，在25℃，250r/min条件下供氧培养8天，气浴恒温振荡器内的氧浓度为0.050mol/L，得冬虫夏草菌丝发酵种子培养液；
C、将红参进行清洗、烘干、灭菌，粉碎至60目，得红参粉末，按质量比1.0:15.0将红参粉末与蒸馏水预先混合后倒入不锈钢容器中，升温至56℃，20RPM速度下刮边搅拌7小时，然后装入高压微射流均质机，反复高压均质7次，均质压力15000psi，均质温度50℃，在60℃下真空干燥至含水量为20wt%，得红参破壁匀浆；
D、在带有搅拌装置的发酵罐中加入30kg液体培养基，加入液体培养基质量48%的麦麸14.4kg，液体培养基质量12%的聚苯乙烯颗粒3.6kg，然后加入液体培养基质量55%的红参破壁匀浆16.5kg，量取红参破壁匀浆质量12.0%的冬虫夏草菌丝发酵种子培养液1.98kg加入发酵罐中，添加适量水将发酵罐中初始含水率控制在62.0wt%，25℃条件下供氧发酵75天，发酵罐中氧浓度为0.050mol/L，每隔10天慢速搅拌翻匀物料一次，搅拌过程中按照0.5mL/g的量补水；
E、发酵完成后，向发酵罐中加入发酵产物质量1.50%的硅藻土助滤剂及发酵产物质量9.5%的脱色活性炭，静置吸附2小时，再用板框压滤机过滤去渣，得滤液，60℃真空干燥得粗提物；
F、取粗提物质量20倍的蒸馏水，与粗提物混合后在55℃条件下提取4小时，然后5000r/min离心30分钟，取上清液，将所得上清液用旋转蒸发器在水浴温度50℃、转速100r/min条件下蒸发至水分含量低于10wt%；然后在-50℃下冷冻干燥48小时，得红参提取物。
本实施例制备的红参提取物中主要含有Rg3、Rg5、Rh1、Rh4、Rk1这5种次要皂苷，含量分别为4.52μg/mg、6.88μg/mg、4.25μg/mg、11.05μg/mg、6.74μg/mg之间，虫草素含量为2.85μg/mg。
Claims (1)
1.一种红参提取物的制备方法，其特征在于采用以下步骤：
A、无菌条件下，取适量液体培养基配制菌种浓度为1.0×105-1.0×106CFU/mL的菌悬液，所述菌种为冬虫夏草菌丝，菌种保藏号为CICC 14017，所述液体培养基为含10.0-15.0g/L葡萄糖、5.0-10.0g/L玉米淀粉、10.0-20.0g/L蛋白胨的MS液体培养基；
B、取0.3-0.5mL菌悬液在PDA固体培养基表面划线，在20-25℃条件下培养3-4天；挑取分散较好的单菌落接种至含有液体培养基成分的发酵摇瓶中进行扩培，置于气浴恒温振荡器内，在20-25℃，250r/min条件下供氧培养6-8天，气浴恒温振荡器内的氧浓度为0.030-0.050mol/L，得冬虫夏草菌丝发酵种子培养液；
C、将红参进行清洗、烘干、灭菌，粉碎至50-100目，得红参粉末，按质量比1.0:15.0将红参粉末与蒸馏水预先混合后倒入不锈钢容器中，升温至55-60℃，20RPM速度下刮边搅拌5-7小时，然后装入高压微射流均质机，反复高压均质5-8次，均质压力15000psi，均质温度50-52℃，在60℃下真空干燥至含水量为20wt%，得红参破壁匀浆；
D、在带有搅拌装置的发酵罐中加入适量液体培养基，加入液体培养基质量30-50%的麦麸，液体培养基质量10-20%的聚苯乙烯颗粒，然后加入液体培养基质量40-60%的红参破壁匀浆，量取红参破壁匀浆质量8.0-15.0%的冬虫夏草菌丝发酵种子培养液加入发酵罐中，添加适量水将发酵罐中初始含水率控制在50.0-65.0wt%，20-25℃条件下供氧发酵50-80天，发酵罐中氧浓度为0.030-0.050mol/L，每隔10天慢速搅拌翻匀物料一次，慢速搅拌过程中按照0.5mL/g的量补水；
E、发酵完成后，向发酵罐中加入发酵产物质量0.80-1.50%的硅藻土助滤剂及发酵产物质量8.0-10.0%的脱色活性炭，静置吸附2小时，再用板框压滤机过滤去渣，得滤液，60℃真空干燥得粗提物；
F、取粗提物质量20倍的蒸馏水，与粗提物混合后在50-55℃条件下提取4小时，然后5000r/min离心30分钟，取上清液，将所得上清液用旋转蒸发器在水浴温度50℃、转速100r/min条件下蒸发至水分含量低于10wt%；然后在-50℃下冷冻干燥48小时，得红参提取物。
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