CN108431003A - 含有吲哚衍生物的药物组合物、其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了包含通式1的吲哚衍生物的定义明确且稳定的药物组合物、制备包含适合于工业生产的高含量药理学活性异构体的二盐酸盐的方法、以及这些在药物组合物中的用途。本发明还提供将所述化合物用于治疗癌症的方法。本发明还提供了将这些化合物与通常用于治疗癌症疾病的其他疗法联合使用的方法。

Description

含有吲哚衍生物的药物组合物、其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及改进且稳定的吲哚衍生物的药物组合物，包含高含量的其药理学活性异构体。本发明还涉及使用该组合物治疗癌症的方法及其制备方法。本发明还涉及能够大规模合成的药理学活性化合物。
发明背景
吲哚衍生物及其药学上可接受的盐以在N-亚甲基主体处的顺式/反式异构体(Z/E异构体)混合物的形式公开于WO 2012/128689和WO 2014/046589。这些化合物用于实体癌症的治疗。抗癌效果被认为是基于化合物的铁螯合性质。由于异构化率在生理条件下似乎相当，假定异构体的药理作用是基本相似或甚至相同的。
Eshba等人公开了N-(1-吡啶-2-基-亚甲基)-N-(9H-1,3,4,9-四氮杂-芴-2-基)-肼衍生物作为抗病毒和抗癌剂，其中仅一种化合物显示出细胞毒活性。理想的是药物组合物定义明确，特别是其药理学活性成分。因此，如果化合物以两种同种型存在，那么所述化合物的更具活性的异构体在其药物组合物中必须占优势。此外，药学组合物应当足够稳定，以允许其以长期储存而成分没有显著变化。
需要为患癌症的患者开发新型且有效的抗癌药物。在获得最终产品之前，所有药物研发有很多困难。最初，一种有前景的化合物被鉴定出来并在不同的体外模型中进行实验测试，然后通过使用不同的小鼠模型进行临床前研究。直到此刻，仅需要合成少量的化合物，并且纯度要求低于人体临床研究所需的纯度。药物研发中有许多步骤是关键的，例如鉴定和分离活性化合物，研究特定异构体是否比其他异构体更有效，是否还具有允许程度的纯度、稳定性以及所述化合物是否可以大规模制造。这些并非无关紧要的步骤，由于上述的制造问题，许多有希望的化合物/药物未能进入市场。
发明内容
本发明基于如下发现：可以将式1的E和Z形式的混合物转化为其高立构纯度(steric purity)的E形式的二盐酸盐。
式1
本发明的第一目的是提供定义明确且稳定的药物组合物，所述药物组合物包含高含量的通式1所述的化合物的药理学活性异构体(E)和其药学上可接受的盐。
R是H、或甲基、或被C1-C4直链或支链烷基取代的亚甲基；
R1选自下组：H、C1-C4直链或支链烷基、甲氧基、被一个至三个氟、溴、卤素取代的甲氧基；
R2是H、或C1-C4直链或支链烷基；
X是CH或N；
Y是CH或N；并且
其中，至少95重量％(w/w)的药理学活性化合物或其药学上可接受的盐呈如权利要求1所限定的E-异构体的形式。
药物组合物旨在于在癌症治疗中使用。一方面中，至少96重量％、或97重量％、或98重量％或至少98.5重量％的所述化合物是E形式的。另一方面中，至少99重量％、优选至少99.5重量％、最优选至少99.8重量％的药理学活性化合物是E异构体的。理想地，100重量％的所述化合物是E异构体。本发明的药物组合物还可以包含至少一种药学上可接受的赋形剂和/或载体。
根据本发明的优选的实施方式，通式1的化合物还可在未被R1取代的单-、双-或三-氮杂咔唑基的6、7、8、9位之一上被C1-C4直链或支链烷基取代。
通式1以及1a和1b的优选化合物如表1所列。
在一实施方式中，R和R1是CH3，并且R2是H。优选地，R是CH3，并且R1是6-CH3，R2是H。更优选X和Y是N。
在另一实施方式中，R是CH2CH3，R1是CH3，并且R2是H。优选地，R是CH2CH3，R1是6-CH3，并且R2是H。更优选X和Y是N。
在另一实施方式中，R是CH2C(CH3)3，R1是CH3，并且R2是H。优选地，R是CH2C(CH3)3，R1是6-CH3，并且R2是H。更优选X和Y是N。
本发明最优选的化合物是化合物A、B和C(参见表1)。
在一实施方式中，本发明的药物组合物包含结晶形式的药学上可接受的盐形式的通式1的药理学活性化合物。盐可以是适用于稳定式1游离碱的任意盐，即酸性盐，例如，盐酸盐、硝酸盐和硫酸盐。盐可以是单盐(mono salt)或二盐(di salt)。优选地，所述盐是单盐酸盐或二盐酸盐。最优选二盐酸盐。
赋形剂可以是甘露醇、葡萄糖、蔗糖或其他合适的糖衍生物中的一种。在一个优选的实施方式中，赋形剂是D-甘露醇。D-甘露醇的浓度范围可以是0.5％至20％(w/v)。优选地，浓度范围为1.0重量％至15重量％(w/v)。更优选地，浓度范围为3％至10％(w/v)。最优选地，浓度范围为4％至6％(w/v)。在另一方面中，D-甘露醇的浓度范围更优选约为5％(w/v)。
本发明还提供了用于制备如上所述药物组合物的方法。所述方法包括以下步骤：
i.提供游离碱形式的通式1的化合物的溶液，
ii.所述溶液与足量的乙醇中的盐酸反应以形成通式1b的化合物，即，二盐酸盐，其中所述二盐酸盐自发沉淀；
iii.将步骤(ii)溶剂中得到的包含二盐酸盐的沉淀物进行剥离(stripping)，
iv.将包含步骤(iii)的二盐酸盐的沉淀物溶解于水性溶剂中，所述水性溶剂任选地包含药学上可接受的赋形剂，以及
v.将混合物进行冷冻干燥，由此获得冻干粉末或饼。
用于通式1的游离碱的溶剂可以是例如甲醇。沉淀物的剥离(即，步骤(iii))可以例如通过空气或惰性气体排出而在真空中进行。
E-异构体的量的范围与上述药物组合物相同。
在一实施方式中，水性溶剂是水。优选无菌水。
赋形剂可以是如上文所述的。溶解沉淀物的顺序在该过程中不受限制并且可以改变。沉淀物可以是例如，固体形式的、与赋形剂例如以固体形式混合、以及在搅拌下加入至水性溶剂中。或者，赋形剂可以溶解于加入固体沉淀物的水性溶液中，并在搅拌下溶解。
另一目的是以所述储存稳定的药物组合物的水溶液形式提供用于注射或输注的药物制剂。
通过在水性溶剂(例如注射用水(WFI))中重构步骤(v)的冻干粉末来获得药物制剂。
药理学活性化合物的浓度范围可以为0.05mg/ml至40mg/ml。在一实施方式中，药理学活性化合物的浓度范围为0.1mg/ml至30mg/ml。更优选地，药理学活性化合物的浓度范围可以为0.5mg/ml至20mg/ml。更优选地，药理学活性化合物的浓度范围可以为0.75mg/ml至10mg/ml。所述药理学活性化合物的浓度可以最优选为约1mg/ml。
制剂的pH在4以下。所述制剂的pH取决于药理学活性化合物的浓度，并且通常在0.5至4的范围内。例如，具有1mg/ml药理学活性化合物的制剂的pH在2至3的范围内。
重构可以在一个或多个步骤中进行，例如，通过加入第一量溶剂溶解冻干物，随后将溶剂加至所需最终浓度。
用于重构含有所述药理学活性化合物的冻干粉末的水性溶剂还可以包含如上所述的药学上可接受的赋形剂。
本发明的另一个方面是提供一种缓解、减轻或治疗对象中的癌症的方法，该方法通过单独使用本发明的药物组合物、或本发明药物组合物与另一抗癌治疗组合使用来进行。
药物制剂的给药途径可以是通过输注或注射。然而，可以使用制剂或组合物给药的任意合适途径。制剂或组合物可以如下方式给药：例如，动脉内、肌肉内、胸膜内、口服、直肠、肠道、伤口内或肿瘤内和鞘内给药。
本发明的另一个目标是提供通式1b示例的沉淀物，
其中，至少95重量％(w/w)的通式1b的药理学活性化合物呈E-异构体的形式。
E-异构体的量的范围可以与上述药物组合物相同。
通式1b的化合物是式1的吲哚衍生物的沉淀物，其中，取代基R、R1、R2、X和Y如式1中所限定。通式1b的优选化合物如表1所列。通式1b的最优选的化合物是如表1中的化合物A、B和C那样取代的。
本发明的另一目的是提供用于制备含有如上所述的所述化合物或其药学上可接受盐的沉淀物的方法，所述方法对应于如上所述用于药物组合物的方法的步骤i)至iii)。
一方面中，乙醇中的二盐酸盐(即，步骤ii)以两步骤添加，其中，1.0至1.15当量的乙醇中的盐酸在第一步骤中添加，并且2.0至2.5当量的乙醇中的盐酸在第二步骤中添加。或者，添加可以在一个或多个步骤中进行。盐沉淀物在步骤(ii)中自发溶解。
如上所述沉淀物还可以在药物组合物中使用。
沉淀物可以在进一步加工成冻干物之前直接使用或在干燥后使用。
所述沉淀物的乙醇含量范围为所述沉淀物的2重量％至15重量％。优选在所述沉淀物的4重量％至13重量％、或9重量％至11重量％的范围内。在一实施方式中，乙醇的量为所述沉淀物的10.4重量％至10.6重量。
本发明还提供含有通式1a的化合物的冻干物，
其中，至少95重量％(w/w)的通式1a的药理学活性化合物呈E-异构体的形式。E-异构体的量的范围可以与上述药物组合物相同。
通式1a的化合物是如上所述式I的吲哚衍生物的二盐酸盐。
最优选的化合物是如上述式1和1b那样取代的。
本发明还提供一种制备所述冻干物的方法，所述方法包括以下步骤：
a)将通式1b的沉淀物溶解于水性溶剂中，
b)所获得的溶液进行过滤，
c)将步骤b)的溶液进行冷冻干燥以获得含有通式1a的化合物的冻干物。
在一方面中，沉淀物可以在搅拌下在步骤a)中溶解于水性溶剂中。所述方法在详细说明中进行进一步说明。
步骤a)的沉淀物可以如式1或1b所述的任一种那样取代。在另一方面，沉淀物可以包含所述化合物中的一种或其组合。在另一方面，可以混合包含不同本发明化合物的单独的沉淀物。
水性溶剂还可以包含至少一种药学上可接受的赋形剂。赋形剂和赋形剂的浓度可以如上所述。
步骤b)所获得的溶液可以优选通过至少一个无菌过滤器进行过滤，在一些实施方式中，步骤b)所获得的溶液通过两个无菌过滤器进行过滤。所获得的溶液可以例如在步骤c)之前回收在无菌容积中。步骤b)的溶液还可以填充到适用于冷冻干燥的小瓶中。
本发明的另一个目的是提供如上所述沉淀物或冻干物在药物组合物中的用途。
本发明的药物组合物(即，冻干物)和沉淀物在室温下稳定至少12个月。优选地，药物组合物(即，冻干物)和沉淀物在室温下稳定至少24个月。
本发明的另一个目的是提供组合物(即，含有所述化合物的冻干物)在治疗癌症中的用途。
一方面中，本发明的冻干物可以仅包含一种本发明的药理学活性化合物，例如，化合物A2、B2、C2。在另一方面，本发明的冻干物可以包含本发明的化合物的组合。另一方面，本发明的含有所述化合物或药学上可接受的盐的冻干物可以包含至少一种本发明的化合物与至少一种用于癌症治疗的其它药理学活性化合物的组合。
本发明的化合物可以单独给药或作为混合物给药。化合物还可以在另一药物或抗癌治疗的同时或之前或之后进行给药。
上述药物组合物、沉淀物或制剂可以例如用于预防或治疗以病理性增殖细胞为特征的疾病或病症。
药物制剂可以适用于通过在水性溶剂中使得所述组合物重构来进行输注或注射。优选地，制剂用于输注。
药理学活性化合物的最终浓度范围可以为0.5mg/ml至30mg/ml。
药物组合物和制剂的pH范围可以为0.5至4。优选地，pH范围为1至3。如上所述，pH取决于药理学活性化合物的浓度，并且例如，对于1mg/ml的制剂，pH范围为2至3。
药物组合物或制剂还可以包含共治疗剂(co-therapeutic agent)。
优选地，本发明的药物组合物和制剂用于治疗癌症。
癌症可以是实体肿瘤、液体肿瘤或血液肿瘤。
此外，上述药物、药物制剂、组合物、沉淀物或冻干物可以与另一抗癌治疗组合使用，例如，化疗、免疫或免疫调节疗法、激素疗法、肿瘤的手术切除、光动力疗法、激光疗法、热疗、冷冻疗法、血管生成抑制、放射疗法、或它们的组合。
本发明还提供了用于治疗以病理性增殖细胞为特征的疾病或病症(如癌症)的方法，其中，将有效量的本发明的药理学活性化合物给予需要该治疗的对象。
有效量的一种或多种所述所述药理学活性化合物在个体和癌症形式中是不同的。例如，有效量为约0.1-10mg/kg体重，优选约0.5-5mg/kg体重，并且更优选1-4mg/kg体重。给予对象的总剂量可以为5mg至800mg，取决于对象的状况和癌症形式，并且与所述对象的重量无关。一方面，给药至对象的剂量范围为30mg至300mg。当与如下所列举的另一癌症治疗组合时，该剂量甚至可以更低。
在另一方面，本发明提供了如上所述癌症治疗方法与另一抗癌治疗组合的方法。
如上所述的不同实施方式可以彼此组合使用或单独使用。
下文的发明详述阐明了本发明的一个或多个实施方式的细节。本发明的其它特征、目的和优势通过描述和附图以及通过引用纳入本文的权利要求书将是显而易见的。
附图的简要说明
以下附图是对本发明的各方面的说明，并不意味着对权利要求所包含的本发明的范围进行限制。
图1显示了用于合成化合物A的沉淀物(A1)的合成路径，以及沉淀物至对应盐(即，冻干物(A2))的盐形成步骤。
图2a显示了99.8％纯度的化合物A1的HPLC色谱，图2b显示了通过X射线色谱确认的化合物A1的E-异构体结构。
图3显示了化合物A在各种细胞系中的剂量-响应曲线。
图4a-d显示了化合物A、B和C在HCT116-细胞中剂量-响应曲线(A)，以及化合物A(b)、化合物B(c)和化合物C(d)在HepG2-细胞、RKO-细胞、HeLa-细胞、CEM-细胞和THP-1细胞中的剂量-响应曲线。
发明详述
应该理解，本发明不限于本文所公开的具体配置、方法步骤和材料，因为这些配置、方法步骤和材料可以在一定程度上变化。还应理解，本文所用术语的目的仅是描述具体实施方式，不用来构成限制，因为本发明的范围仅受所附权利要求书及其等价形式的限制。
本文引用的所有参考文献通过引用全文纳入本文并用于所有目的，就好像将各篇单独的出版物、专利或专利申请特定和单独地通过引用全文纳入本文用于所有目的一样。
参考本文提供的以下定义，附图和示例性公开，可以最好地理解本发明。
在本说明书中，通式I的化合物意在包括其任何药学上合适的沉淀物、溶剂合物、盐或前药。
在本说明书中，术语“沉淀物”表示通过沉淀得到的二盐酸盐乙醇共结晶化合物、或二盐酸盐乙醇盐、或二盐酸盐乙醇溶剂合物，例如在图1的反应4中沉淀步骤的产物。化合物可以是本发明的任意式1的化合物的沉淀物。
在本说明书中，术语“药学上可接受的化合物”包括本说明书中所述的沉淀物、溶剂合物和冻干物。
在本说明书中，术语"异构体"是指具有相同组成和分子量但物理和/或化学性质不同的化合物。这种物质具有相同的原子数量和种类，但是结构上不同。结构差异可以是在构造上(几何异构体)或在偏振光平面的旋转能力上(立体异构体)。术语“立体异构体”是指原子空间排列不同的相同构造的异构体。
在本说明书中，除非另有说明，否则术语“药学上可接受的赋形剂”是指无毒、惰性的固体、半固体或液体填料、稀释剂、包封材料或任何类型的制剂助剂。
在本说明书中，除非另有说明，否则术语“药理学活性化合物”包括当给药于宿主(包括人类和动物)时将产生治疗有益的药理学响应的任何物质。
在本说明书中，术语“给予”或“给药”是指以药学上可用方式将药物提供给对象。
在本说明书中，除非另有说明，否则术语“细胞毒性化合物”是指能够阻止细胞生长或杀死细胞(即具有高细胞毒活性)的化合物。
在本说明书中，除非另有说明，否则术语“衍生物”是指由初始结构直接形成的化合物、或通过初始结构的化学反应形成的化合物、或通过“修饰”(其是初始结构的部分取代)形成的化合物、或通过设计和从同合成形成的化合物。衍生物可以是合成的，或者可以是细胞或体外酶促反应的代谢产物。
在本说明书书中，术语“癌症”是指任何恶性肿瘤疾病，即由异常和不受控制的细胞分裂引起的任何恶性生长或肿瘤。术语“癌症”具体意味着包括实体局部肿瘤和非实体癌症形式。例如，所述癌症形式可以选自：白血病(ALL、AML、CLL、CML、CMML)、T细胞白血病、多发性骨髓瘤、卵巢癌、前列腺癌、宫颈腺癌、鳞状细胞癌、乳腺癌、结直肠癌、小肠癌、肛门癌、胃癌、肾癌、肾盂和输尿管的恶性黑色素瘤、尿道癌、膀胱癌、肝癌、阑尾癌、胰腺癌、肺癌、食道癌、唇癌/口腔癌、鼻癌、喉癌、脑/中枢神经系统癌症、皮肤癌、甲状腺和胸腺癌、肉瘤、头颈癌、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、霍奇金淋巴瘤和腹膜假粘液瘤。
本发明提供了用于制备有利于E-异构体的药物组合物的方法。单晶X射线证实E-异构体在固态下占主导地位。
通过使用本发明的方法，获得了包含至少95重量％(通过HPLC确认，参见图2)的药理学活性化合物(E-异构体)的定义明确且稳定的药物组合物。
实施例
实施例1：化合物A的合成
在第一个实验中，化合物A(游离碱)在丙酮/乙酰化物/乙腈(acetone nitrile)中稀释，E-异构体可溶于该溶剂组合中但Z-异构体不能，并且易于过滤。使用该溶剂组合的最终E-异构体含量约为92％。所述溶剂组合在小规模生产过程中运行良好，但由于需要大量溶剂而无法扩大生产。因此，发明人基于由Kgokong等人2005年所描述的1,2,4-三嗪并[5,6-b]吲哚衍生物合成研发了化合物A的合成(参见图1)。发明人研发了使用甲醇(MeOH)作为溶剂、以及乙醇(作为HCl的载体)中的盐酸(HCl/EtOH)(EtOH也用作反溶剂(anti-solvent))。在随后的放大工艺研发中，反应体积效率得到改进。此外，还研发了用于大规模将游离碱(A)转化为盐酸盐沉淀物(A1)的合适方法(参见图1，实施例1和2)。游离碱(A)不溶于单独的MeOH，但是在加入约1当量的HCl/EtOH时获得了清澈的溶液。
由于观察到的二硫化物物质，反应可以在氮气下进行以避免空气氧化。由反应步骤1产生的湿滤饼也可以在真空中干燥，或者可以在没有事先干燥的情况下进一步处理湿滤饼。通过真空干燥使得杂质的产生最小化，因为杂质可能在抽气干燥过程中产生。在50℃下使反应步骤2的产物化合物与略过量的2-乙酰基吡啶(1.5当量)在乙醇(20mL/克化合物)中反应以形成产物，但在5小时后转化率过低(～8％)。
图1显示了化合物A的合成的反应步骤1-3(E和Z异构体的混合物；IUPAC系统名称：2-[(1E)-1-(2-{6-甲基-5H-[1,2,4]三嗪并[5,6-b]吲哚-3-基}肼-1-亚基)乙基]吡啶)。
步骤1.向7-甲基靛红(methylisatin)(4.75kg，29.5mol)的水性悬浮液中加入2.85kg(31.3mol)氨基硫脲和6.15kg(44.5mol)碳酸钾。将经搅拌的混合物在回流下加热3小时，然后冷却至室温。缓慢加入乙酸(100％，3.3kg，55.0mol)，直至pH达到7.1。用压滤机过滤悬浮液，滤饼用水(19.4kg)洗涤以获得7.6kg湿的6-甲基-2H,3H,5H-[1,2,4]三嗪并[5,6-b]吲哚-3-硫酮。
步骤2.将来自前一步的对应于约4.6kg干燥的6-甲基-2H,3H,5H-[1,2,4]三嗪并[5,6-b]吲哚-3-硫酮的湿滤饼悬浮于57.1kg的一水合肼，并将混合物在89℃下搅拌18小时。使反应混合物冷却到室温，产物通过离心进行分离，用水(15.9kg)和乙醇(18.4kg)洗涤，在1450RPM下排水。将3-肼基-6-甲基-5H-[1,2,4]三嗪并[5,6-b]吲哚的湿滤饼(7.8kg相当于3.8kg干重)转移回清洁的反应器中并在真空下干燥。
步骤3.向来自步骤2的干燥的3-肼基-6-甲基-5H-[1,2,4]三嗪并[5,6-b]吲哚中加入水(76.85kg)、乙酸(100％，6.70kg，111.6mol)和2-乙酰基吡啶(10.75kg，88.7mol)。将混合物在48.5℃搅拌3小时，冷却至室温，并在将温度保持在20-25℃之间的同时缓慢加入NaOH(27％，6.3kg，110mol)以达到pH7.0。在此温度下将混合物进一步搅拌11/4小时，并通过离心分离产物。在用水(7.3kg)和乙醇(5.8kg)的混合物洗涤后，滤饼在1450RPM下排水，然后在47℃的真空烘箱中干燥66小时，得到5.82kg形式为米色/带绿色的固体材料的标题化合物。
图1中的步骤4显示了化合物A1的合成，其是化合物A的乙醇共结晶(IUPAC系统名称：2-[(1E)-1-(2-{6-甲基-5H-[1,2,4]三嗪并[5,6-b]吲哚-3-基}肼-1-亚基)乙基]吡啶二盐酸盐)。
向2-[(1E,Z)-1-(2-{6-甲基-5H-[1,2,4]三嗪并[5,6-b]吲哚-3-基}肼-1-亚基)乙基]-吡啶)(5.80kg)中加入乙醇HCl(12.4kg，1.05当量)，将混合物在28-30℃下搅拌半小时直至获得澄清溶液。溶液进行过滤并在搅拌下在25℃下在1小时40分钟内加入另外的乙醇HCl(28.95kg，2.45当量)。在第一次添加1.05当量HCl/EtOH的过程中，大部分Z-异构体转化为E-异构体并形成一些单盐酸盐。通过加入2.45当量的EtOH中的HCl，二盐酸盐自发沉淀。通过用0.1M NaOH酚酞指示剂滴定EtOH中HCl的摩尔浓度，计算出约1.1至1.4M HCl。在相同温度下继续搅拌15分钟并加入乙醇(45.8kg)。将如此形成的悬浮液冷却至约0至-5℃并搅拌1小时。离心分离的产物用乙醇(0至5℃，45kg)洗涤，然后在1450RPM下排水。将滤饼在37℃下真空干燥42小时，以得到7.57kg标题化合物(基于无残留溶剂-游离碱为约108％或基于单EtOH为98％，二盐酸盐为黄色至橙色固体)。
所获得的乙醇共晶二盐酸盐沉淀物具有约2重量％至20重量％的乙醇含量。
图1中的反应步骤5显示了包含通式1a的化合物的冷冻干燥组合物的形成。
通过HPLC分析异构体含量
在方法研发过程中，化合物A和化合物A1的分析导致了分析问题，例如由于如样品不稳定、溶解度差、异构化、HPLC等。因此，发明人基于XBridgeC18,3.5μm，150×4.6mm柱研发了更稳健的HPLC方法。通过使用MeOH中的2％甲酸作为稀释剂，并从未涂覆的标准HPLC样品瓶转换为来自安捷伦(Agilent)的经涂覆的(硅烷化)小瓶，进一步解决了该问题。
使用Agilent 1200/1260色谱系统或等同物。
当使用酸性HPLC分析化合物A时，发现～7％为Z-异构体形式(在0.1％TFA/H2O中制备样品)。2天后重新分析同样的样品，显示出～2％的Z-异构体，并开始水解成化合物A1(检测到约1％)。这表明酸性条件(pH范围为1-4)使得不期望的Z-异构体转化为所需的E-异构体。当进行随后的盐形成(反应步骤4)(使用乙醇中的HCl)时，异构体含量降低至<0.5％。这意味着化合物A、B或C可以允许相对较大含量的不期望的异构体(例如5％)，因为在加入乙醇中的HCl后不期望的异构体将转化成所需的异构体。乙醇中的HCl的加入形成了二盐酸盐沉淀物(如化合物A1、B1和C1)。
HPLC纯度
将HPLC纯度计算为100％-杂质总量。计算中排除所有低于0.05％的峰和基质中存在的峰。各杂质的含量计算为总峰面积的百分比(面积％)。杂质总量是≥0.05％的杂质总和。
杂质
各杂质的最终结果是四个结果的平均值。杂质总量记录为≥0.05％的杂质总和。
残留溶剂
化合物A1的分析表明它是二盐酸盐乙醇共结晶组合物(沉淀物)。化合物A1的理论乙醇含量为10.6％，这与如上所述的乙醇共结晶(沉淀物)的形成一致。
在包含化合物A的组合物的工艺研发期间，令人惊讶地显示二盐酸盐乙醇共结晶(例如A1)吸湿性较小并且对水解和异构体纯度的降解显著更稳定。
得出的结论是，药物物质(沉淀物)中可以容忍高水平的乙醇，因为它在随后的冷冻干燥期间被除去，后续冷冻干燥是最终药物产品(冻干物)的制造工艺的一部分。
甲醇水平显示相对较高；通常组合物A1的甲醇水平为1.4-1.8％。长时间的干燥循环不会显著降低甲醇水平。然而，如用乙醇的情况下，在最终药物产物(例如A2)的制造期间所使用的随后的冷冻干燥循环有效地将甲醇去除至低于ICH Q3B指南的水平。
结论
基于最终药物产物中乙醇和甲醇水平远低于ICH Q3C指南的事实，并且考虑到这一点被仔细监测，得出的结论是药物物质(即，化合物A1)中可允许较高水平。说明书中说明的所有其他限制均在Ph.Eur或USP标准范围内。
鉴定
样品的鉴定是基于样品制备的主峰和用于鉴定的样品制备的主峰的目视检查。化合物A1由色谱图中的一个单峰表示(参见图2a)。
实施例2：稳定性
根据国际药品注册协调会议(International Conference on Harmonization，ICH)指南Q1A(R2)新药物物质和产品的稳定性测试，进行二盐酸盐乙醇共结晶沉淀物和冻干二盐酸盐的稳定性研究。在研究期间用于分析稳定性样品的所有分析仪器均符合当前cGMP的要求。
稳定性研究由两部分组成，一个长期研究(5℃，24、36个月)和一个加速研究(25℃/60％RH，6个月)。
将化合物A(A1)的二盐酸盐乙醇共结晶沉淀物装入置于密闭HDPE容器中的热封箔片层叠袋内的热封双层聚乙烯袋中。样品在长期条件5℃和加速条件25℃/60％RH下储存。整个测试期间外观呈黄色至橙色固体。由于25℃/60％RH的X射线粉末衍射结果而进行的分析具有意想不到的低结晶度水平。结晶度水平对药物物质的质量或稳定性没有直接影响，但作为研发工作的一部分进行控制。所获得的36个月的稳定性数据总结在下表2a中。
表2b显示了在6个月的时间内25℃和60％RH下二盐酸盐乙醇共结晶沉淀物的稳定性数据。整个过程中外观呈黄色至橙色固体。
结论
包含化合物A1的本发明组合物稳定至少24个月(表2a)。在此期间，在2-8℃或25℃/60％RH(6个月)下化合物A1没有出现显著分解。其表示化合物A1的组合物应在2-8℃储存和运输。但是，在最高达25℃的温度下储存24小时应该没有问题。
实施例3：2-[(1E)-1-(2-{6-甲基-5H-[1,2,4]三嗪并[5,6-b]吲哚-3-基}肼-1-亚基)乙基]-吡啶二盐酸盐的乙醇共结晶沉淀物的药物组合物的制备
将多个225.6mg的主要2-[(1E)-1-(2-{6-甲基-5H-[1,2,4]三嗪并[5,6-b]吲哚-3-基}肼-1-亚基)乙基]-吡啶二盐酸盐的乙醇共结晶沉淀物(A1)(相当于160mg游离碱，A)溶于甘露醇(500mg)的注射用水溶液中(Ph.Eur.,10ml)中，溶液通过两个0.2μm过滤器过滤来灭菌并填充到相应数量的经灭菌的小瓶中，然后冷冻干燥(获得化合物的盐A2)。
2RRT＝1.47-1.51时杂质的相对面积高于预期。由另一位分析师重复了样品制备和HPLC分析，证实了结果。在测试方法验证期间观察到这种杂质的波动峰面积。
发明人研发了新的冷冻干燥方法，因为现有技术使用的常规方法需要超过300小时的干燥。新方法更具好，并列于下表3中。
2RRT＝1.47-1.51时杂质的相对面积高于预期。
由另一位分析师重复了样品制备和HPLC分析，证实了结果。在测试方法验证期间观察到这种杂质的波动峰面积。
通过具有如表3所示的最大负压和相对高的温度、退火温度，冷冻干燥步骤减少到19小时。
避免与金属表面接触。通过冷冻干燥过程除去存在的乙醇和少量甲醇。
小瓶在氮气下钳口密封并储存在5℃下；储存24个月后没有观察到降解。
评价作为赋形剂的葡萄糖和甘露醇单独使用、或与NaCl组合使用。用5％(w/v)甘露醇作为添加剂获得了关于溶解度、冻干饼的质地和抑制杂质形成的最佳结果。用葡萄糖作为膨胀剂(bulking agent)观察到经冷冻干燥的饼更高程度的塌陷。由于NaCl所产生的pH增加降低了化合物A2的溶解度，所以添加NaCl会引起溶解度问题。
用于重构和注射的冻干粉末(相当于160mg游离碱化合物A)在2-8℃条件下储存至24个月。整个试验期间外观呈黄色至橙色的经冷冻干燥的饼，并在重构后是黄色至橙色溶液而没有可见颗粒。
表3
由于25℃/60％RH的X射线粉末衍射结果而进行的分析具有意想不到的低结晶度水平。结晶度水平对药物物质的质量或稳定性没有直接影响，但作为研发工作的一部分进行控制。重构时间最长达3分钟。没有检测到细菌生长，并且在室温下的24个月期间不影响产品的无菌性。获得的稳定性数据总结在下表4a中。
*水解杂质3-肼基-6-甲基-5H-[1,2,4]三嗪醇[5,6-b]吲哚
LOQ为0.05％，<LOQ的峰记录<0.05％。
用于重构和注射的冻干粉末(相当于160mg游离碱化合物A)在25℃/60％RH加速条件下储存(参见表4b)。整个试验期间外观呈黄色至橙色的经冷冻干燥的饼，并在重构后是黄色至橙色溶液而没有可见颗粒。由于25℃/60％RH的X射线粉末衍射结果而进行的分析具有意想不到的低结晶度水平。结晶度水平对药物物质的质量或稳定性没有直接影响，但作为研发工作的一部分进行控制。重构时间最长达3分钟没有检测到细菌生长，并且在室温下的24个月期间不影响产品的无菌性。令人惊讶的是，冻干物在室温下显示出稳定至少24个月。获得的稳定性数据总结在下表4b中。
*水解杂质3-肼基-6-甲基-5H-[1,2,4]三嗪醇[5,6-b]吲哚
LOQ为0.05％，<LOQ的峰记录<0.05％。pH应该在0.5-4的范围内，在上面的实施例中，浓度约为16mg/ml，pH值在1.3-2.3范围内，并且含水量在1％以下。Z-异构体优选小于2％，然而发明人惊讶地发现酸性条件有利于E-异构体。
包含化合物A2的冻干物令人惊讶地显示出在冷冻干燥之后比在冷冻干燥之前水溶性更小。由此，进行了结构调查，并且该研究显示出化合物A2在冷冻干燥期间会改变其结晶形式。新的结晶形式在水中难溶，这解释了二盐酸盐乙醇共结晶沉淀(A1)和二盐酸盐(A2)之间的溶解度差异。实验表明，该沉淀物的耗尽引起形态形式的变化。实验结果还显示，赋形剂(D-甘露糖醇)对新形态形式的形成没有任何影响。用表3中所述的冷冻干燥循环和设定为5％的甘露醇含量获得了关于杂质形成和冻干饼质地的最佳结果。
实施例4：药物制剂的制备
发现化合物A2可以以1mg/ml配制在水性介质中以抑制副产物的形成最长达24小时。而且，应理解，pH对于化合物A2在水性介质中的稳定性具有重要意义，在约1-4的pH下具有最好的稳定性，物质的浓度越高导致的pH越低。1mg/ml的所述水溶液具有约2-3的pH。
将得到的化合物A2配制为无菌冻干粉末，将上述冻干粉末溶解于水性溶剂(如注射用水)中来制备注射用或输注用溶液。各小瓶含有一定量的药理活性化合物，对应于由225.6mg药物(A1)和5％甘露醇(w/v)的溶液制备的160mg游离碱(A)。冻干物可以在10ml水性溶剂中重构，然后在任选地包含药理学上可接受的赋形剂、优选5％甘露醇(w/v)的水性溶剂中稀释至1mg/ml，用于输注。
实施例5
化合物B的合成；2-[(1E)1-(2-{6-甲基-5H-[1,2,4]三嗪并[5.6-b]吲哚-3-基}肼-1-亚基)丙基]吡啶
将1-(吡啶-2-基)丙-1-酮(35mg，0.26mmol)溶于水-乙酸混合物(20:1,10mL)中，然后加入3-肼基-6-甲基-5H-[1,2,4]三嗪并[5,6-b]吲哚(50mg，0.23mmol)。将反应混合物在50℃下搅拌2小时。在蒸发溶剂后，得到深绿色固体(70mg)。LC显示出异构体比例为95:5的纯产物。
实施例6
化合物C的合成；2-(3,3-二甲基-N-{6-甲基-5H-[1,2,4]三嗪并[5,6-b]吲哚-3-基}丁烷腙基)吡啶
将3,3‐二甲基-1-(吡啶-2-基)丁-1-酮(46mg，0.26mmol)溶于水-乙酸混合物(20:1,10mL)中，然后加入3-肼基-6-甲基-5H-[1,2,4]三嗪并[5,6-b]吲哚(48mg，0.23mmol)。反应混合物在50℃下搅拌过夜。在蒸发溶剂后，得到黄绿色(greenish yellow)固体(78mg)。LC显示出异构体比例为92:8的纯产物。
实施例7
化合物B1向其二盐酸盐(B2)的转化通过以下程序制备：
将2-[(1E)1-(2-{6-甲基-5H-[1,2,4]三嗪并[5.6-b]吲哚-3-基}肼-1-亚基)丙基]吡啶(30mg，0.09mmol)悬浮在甲醇(0.6mL)中，然后逐滴加入乙醇中的HCl(1.04当量，1.28M，75μL)。在所有固体溶解后，加入更多的乙醇中的HCl(2.08当量，1.25M，150μL)和乙醇(0.6mL)。出现浅棕色沉淀。将悬浮液在-10℃保持3小时，然后过滤固体，用冷乙醇洗涤并干燥。产物是亮黄色固体(10mg)。LC仅显示一种异构体，在将产物转化成其HCl盐后未检测到次要异构体。
实施例8
化合物C1向其二盐酸盐(C2)的转化通过以下程序制备：将2-[(1E)1-(2-{6-甲基-5H-[1,2,4]三嗪并[5.6-b]吲哚-3-基}肼-1-亚基)丙基]吡啶(30mg，0.09mmol)悬浮在甲醇(0.6mL)中，然后逐滴加入乙醇中的HCl(1.04当量，1.28M，75μL)。在所有固体溶解后，加入更多的乙醇中的HCl(2.08当量，1.25M，150μL)和乙醇(0.6mL)。产物不会立即沉淀，仅在悬浮液在-10℃下保持3小时后。过滤进行固体，用冷乙醇洗涤并干燥。产物是亮黄色固体(20mg)。LC仅显示一种异构体(E)，在将产物转化成其HCl盐后未检测到次要异构体(Z)。
表征
单晶X射线显示出E-异构体在固态下占主导地位。
单晶X射线在瑞典的SARomics Biostructures AB进行。在通常用于蛋白质晶体类型的标准低温回路中，浸入石蜡油中并在液氮中闪蒸冷却，获得约100×30μm的化合物A1的晶体。在装有225mm mar CCD检测器的MAX-实验室(MAX-lab)的I911-3站在100K下收集数据光束尺寸为50x 50μm。X射线结果证实化合物A1是E-腙异构体。预测结构如图2b所示，其中N代表氮原子，H代表氢原子，CL代表氯原子，H2O代表水分子。
所有测试均使用参考标准进行，并且所有分析均与所提出的结构相符。
结论
即使产物化合物A2容易在水性溶剂中水解，化合物A的原料中的4-7％的含水量也是可容许的。
母液中没有异构体痕迹，表明所用的沉淀条件将Z-异构体转化为了目标E-异构体。优选地，盐形成应该在数小时内进行，因为产物对酸敏感。
组合物研发工作从上文讨论的水性溶剂稳定性测试和赋形剂评估开始。基于这些结果，关于对杂质形成和药物产品(即，二盐酸盐，例如化合物A2)溶解度的影响，通过优化组成(即，药物物质-乙醇共结晶沉淀物-浓度和赋形剂的类型和数量)继续进行组合物研究。作为优化的结果，各小瓶游离碱(化合物A)的量从100增加到160mg。
实施例9细胞毒活性
在不同细胞系(图3)和人类肿瘤的原代培养物中显示化合物A的表示为存活指数(IC50)的细胞毒活性(表5)。微培养细胞毒性荧光测定法(FMCA)(Lindhagen等人，2008)用于测定化合物在各种细胞系和人类肿瘤原代培养物中的细胞毒性作用。使用移液机械手Precision 2000(伯腾仪器公司，佛蒙特州威努斯基(Bio-Tek Instruments Inc.，Winooski，VT))将细胞接种在药物制备的384孔板中。将板温育72小时，然后转移到由如下组成的整合HTS SAGIAN核心系统：具有CO2孵育器(Cytomat 2C，Kendro，瑞典绍伦吐纳)的ORCA机器人(贝克曼库尔特公司(Beckman Coulter))、分配器模块(Multidrop 384，Titertek，亨兹维尔瑞典)、洗涤器模块(ELx405，伯腾仪器公司)、脱盖站、板收纳处(platehotels)、条形码阅读器(贝克曼库尔特公司)、液体处理器(Biomek 2000，贝克曼库尔特公司)和用于自动化FMCA的多用途阅读器(FLUOstar Optima，BMG Labtech，德国奥芬堡)。
对不同的细胞系(例如，CCRF-CEM T细胞白血病、RPMI-8226多发性骨髓瘤、A2780卵巢癌、FaDu头颈癌(鳞状细胞癌肿瘤)、HT29结直肠癌、MCF7乳腺癌和HL-60白血病细胞)以及原代人类肿瘤细胞培养物组(表5)进行分析(结肠癌、胃癌、肾癌、阑尾癌、小肠癌和胰腺癌、以及腹膜假性粘液瘤)。结果显示化合物A具有广泛的抗癌活性，如效果-浓度图(图3)所例示。
实施例10
本发明人还着手表征代表化合物A、B和C在不同来源的癌的细胞系中的活性。之前已经详细描述了所使用的特定分析和机理评估的结论(Zhang等人，2014)。如先前详细描述的(Lindhagen等人，2008)，使用基于细胞的微培养细胞毒性荧光测定(FMCA)评估化合物A、B和C(参见图4)的细胞毒性，其表达为六种人肿瘤细胞系中的存活指数。该方法基于测定由具有完整质膜的活细胞的FDA水解产生的发荧光的荧光素。荧光与完整活细胞的数量成比例。
材料和方法
细胞培养
细胞系在供应商推荐的相应细胞培养基中进行培养。培养基补充有10％热灭活的胎牛血清、2mmol/L的L-谷氨酰胺、100μg/mL的链霉素和100U/mL的青霉素(均来自西格玛-奥德里奇公司(Sigma-Aldrich))。所有细胞系在含5％CO2的潮湿气氛中于37℃进行培养。
细胞毒活性的检测
简要介绍FMCA分析，将每孔2500个细胞接种到384孔的微孔板中并在用化合物处理前温育过夜。使用声学液体传递(acoustic liquid transfer)(Echo 550，LabCyte)加入化合物。将板在37℃孵育72小时，然后洗涤并将FDA加入到孔中，然后在37℃孵育50分钟。在Fluoroskan仪器(Labsystems，GMI，Ramsey，MIN)中在485/520nm下测定荧光，所述荧光与各孔中的活细胞数量成比例。细胞存活表示为生存指数(SI)，定义为化合物处理过的孔中的荧光值，以对照孔中的值的百分比进行分析，扣除空白值。质量标准包括信号/空白比>10，对照和空白孔的变异系数(CV)<30％。Graph Pad Prism(美国加利福尼亚圣地亚哥)。所有实验进行两次，各浓度在各实验中以一式四份进行评估。化合物(A、B和C)用DMSO，5mM稀释。表5.不同原代人类肿瘤细胞培养物组的IC50
疾病 进行分析的患者数： IC50μM
PMP* 50 9.4
结直肠肿瘤** 25 11
胃癌 9 6.9
肾癌 13 164
间皮瘤 7 12
阑尾癌 4 21
小肠癌 1 5.4
软巢癌 30 5.7
胰腺癌 1 6.0
*腹膜假粘液瘤，**大肠癌，从最大肿瘤细胞减灭术和腹膜切除术(peritinectomies)获得的手术标本
结果和讨论
所测试的化合物(A、B和C)在广泛的癌细胞系中显示出强烈的活性，参见表6和图4。选择细胞系以覆盖范围广泛的代表血液肿瘤和实体肿瘤两者的癌症类型(表6)。
从这些结果清楚地显示出化合物A、B和C对几种不同的肿瘤细胞系是有效的，包括结肠癌、宫颈腺癌、肝细胞癌、急性淋巴母细胞性白血病和急性单核细胞白血病。
从此处给出的结果清楚地显示出化合物A、B和C对几种不同的肿瘤细胞系是有效的，包括结肠癌、宫颈腺癌、肝细胞癌、急性淋巴母细胞性白血病和急性单核细胞白血病。
表6.在六种人肿瘤细胞系中化合物A、B和C的IC50
虽然已在本文中详细讨论了特定实施方式，但是这仅仅是为了说明的目的而通过示例的方式进行，并且不旨在限制所附权利要求的范围。具体而言，发明人考虑，可对本发明进行多种取代、变化和修改而不背离权利要求所限定的本发明的精神和范围。
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参考文献
Eshba等人，作为潜在抗病毒剂和抗癌剂的一些经取代的-1,2,4-三嗪并[5,6-b]吲哚衍生物的合成(Synthesis of some substituted-1,2,4-triazino[5,6-b]indolederivatives as potential antiviral and anticancer agents)，药学(Pharmazie)第42卷，第10期，1987；664-666。
Lindhagen E,Nygren P,Larsson R(2008)，微培养细胞毒性荧光测定(Thefluorometric microculture cytotoxicity assay)，Nature Protocls 3:1364-1369。
Kgokong JL，Smith PP，Matsabisa GM(2005)Bioorg Med Chem.13(8):2935-42)。
Zhang X等人(2014)，在代谢受损的微环境中诱导线粒体功能障碍作为靶向肿瘤细胞的策略(Induction of mitochondrial dysfunction as a strategy for targetingtumor cells in metabolically compromised microenvironments)，Naturecommunications 5:3295。

Claims (19)

1.用于治疗癌症的药物组合物，其包含通式1的药理学活性化合物或其药学上可接受的盐，
其中，
R是H、或甲基、或被C1-C4直链或支链烷基取代的亚甲基；
R1选自下组：H、C1-C4直链或支链烷基、甲氧基、被一个至三个氟、溴、卤素取代的甲氧基；
R2是H、或C1-C4直链或支链烷基；
X是CH或N；
Y是CH或N，并且，至少95重量％(w/w)的药理学活性化合物或其药学上可接受的盐呈E-异构体的形式。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述药理学活性化合物是结晶形式的盐。
3.如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，所述盐是二盐酸盐。
4.如权利要求1至3中任一项所述的药物组合物，所述药物组合物还包含浓度0.1％至10％(w/v)的药学上可接受的赋形剂。
5.如权利要求1-4中任一项所述的药物组合物，所述药物组合物具有至少12个月的稳定性。
6.一种制备如权利要求1至5中任一项所述的药物组合物的方法，其包括以下步骤：
i.提供游离碱形式的通式1的化合物的溶液，
ii.所述溶液与足量的乙醇中的盐酸反应以使通式1的化合物形成二盐酸盐，其中二盐酸盐自发沉淀；
iii.将步骤(ii)溶剂中得到的包含二盐酸盐的沉淀物进行剥离，
iv.将步骤(iii)的二盐酸盐溶解于水性溶剂中，所述水性溶剂任选地包含药学上可接受的赋形剂，以及
v.将混合物进行冷冻干燥，由此获得冻干粉末或饼。
7.一种含有通式1b的化合物的沉淀物，
其中，R是H、或甲基、或被C1-C4直链或支链烷基取代的亚甲基；
R1选自下组：H、C1-C4直链或支链烷基、甲氧基、被一个至三个氟、溴、卤素取代的甲氧基；
R2是H、或C1-C4直链或支链烷基；
X是CH或N；
Y是CH或N，并且，至少95重量％(w/w)化合物1b呈E-异构体的形式。
8.一种用于制备如权利要求7所述的二盐酸盐沉淀物的方法，所述方法包括权利要求6的步骤i)至iii)。
9.如权利要求7所述的二盐酸盐沉淀物，其中，残留乙醇占二盐酸盐沉淀物的2-20重量％。
10.一种含有通式1a的化合物的冻干物，
其中，R是H、或甲基、或被C1-C4直链或支链烷基取代的亚甲基；
R1选自下组：H、C1-C4直链或支链烷基、甲氧基、被一个至三个氟、溴、卤素取代的甲氧基；
R2是H、或C1-C4直链或支链烷基；
X是CH或N；
Y是CH或N，并且，至少95重量％(w/w)化合物1a呈E-异构体的形式。
11.一种用于制备如权利要求10所述的冻干物的方法，其包括以下步骤：
i将通式1b的二盐酸盐沉淀物溶解于水性溶剂中，所述水性溶剂任选地包含药学上可接受的赋形剂，以及
ii.将混合物进行冷冻干燥，由此获得冻干粉末或饼。
12.如权利要求7或9所述的二盐酸盐沉淀物或如权利要求10所述的冻干物在药物组合物中的用途。
13.一种适于输注的药物制剂，其通过将如权利要求1-5、7、9和10中任一项所述的药物组合物或药学上可接受的盐以0.5-30mg/ml的最终浓度范围在水性溶剂中进行重构来制备。
14.如权利要求13所述的药物制剂，其特征在于，pH为0.5至4。
15.如权利要求1至5、7、9、10、13和14中任一项所述的药学组合物、药学上可接受的盐或制剂，其用于治疗癌症。
16.如权利要求15所述的药学组合物、药学上可接受的盐或制剂，所述癌症是实体肿瘤、液体肿瘤或血液肿瘤。
17.一种用于治疗对象的癌症的方法，其中，将有效量的包含如权利要求1至5、7、9、10、13和14中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐的药物制剂或组合物给予需要该治疗的对象。
18.如权利要求17所述的治疗方法，其与另一种抗癌治疗组合。
19.根据权利要求17或18中任一项所述的治疗癌症的方法，其特征在于，有效剂量为0.01-10mg/kg体重，优选0.1-5mg/kg体重，更优选1-4mg/kg体重。
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Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HUE059610T2 (hu) * 2015-12-18 2022-12-28 Vivolux Ab Gyógyszerészeti készítmény, amely indolszármazékokat tartalmaz, valamint eljárás annak elõállítására és felhasználására
WO2021044608A1 (ja) * 2019-09-06 2021-03-11 シミックホールディングス株式会社 ダントロレン水性製剤及びその調製方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006102102A2 (en) * 2005-03-17 2006-09-28 Marshfield Clinic Tgf-beta modulators and methods for using the same
CN103547268A (zh) * 2011-03-21 2014-01-29 威沃路克斯股份公司 实体瘤的治疗
CN104662022A (zh) * 2012-09-21 2015-05-27 威沃路克斯股份公司 治疗实体瘤的手段和方法

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6660737B2 (en) * 2001-05-04 2003-12-09 The Procter & Gamble Company Medicinal uses of hydrazones
WO2009035534A2 (en) * 2007-09-07 2009-03-19 The Cleveland Clinic Foundation Treatment of ischemic eye disease by the systematic pharmaceutical activation of hypoxia inducible factor (hif)
HUE059610T2 (hu) * 2015-12-18 2022-12-28 Vivolux Ab Gyógyszerészeti készítmény, amely indolszármazékokat tartalmaz, valamint eljárás annak elõállítására és felhasználására

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006102102A2 (en) * 2005-03-17 2006-09-28 Marshfield Clinic Tgf-beta modulators and methods for using the same
CN103547268A (zh) * 2011-03-21 2014-01-29 威沃路克斯股份公司 实体瘤的治疗
CN104662022A (zh) * 2012-09-21 2015-05-27 威沃路克斯股份公司 治疗实体瘤的手段和方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
XIAONAN ZHANG ET AL.: "Induction of mitochondrial dysfunction as a strategy for targeting tumour cells in metabolically compromised microenvironments", 《NATURE COMMUNICATIONS》 *
赵广荣 等: "《现代生命科学与生物技术》", 31 October 2008, 天津大学出版社 *

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