CN108424455A - 一种肿瘤标志物CA50检测用抗体IgG及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种肿瘤标志物CA50检测用抗体IgG及应用，包括一个重链和一个轻链；所述重链的可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，轻链的可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。所述重链可变区的CDR1，CDR2，CDR3的序列如SEQIDNO：5，SEQIDNO：6，SEQIDNO：7所示。所述轻链可变区的CDR1，CDR2，CDR3的序列如SEQIDNO：8，SEQIDNO：9，SEQIDNO：10所示。本发明抗体特异性识别了肿瘤标志物CA50，抗体具有特异性，亲和力高、特异性好。本发明抗体的检测范围宽、灵敏度高，检测浓度在0~500ng/mL范围内,检测下限为2ng/mL。回收率为107.08%，灵敏度为0.83 U/m L，重复性CV值<10%。

Description

一种肿瘤标志物CA50检测用抗体IgG及应用
技术领域
本发明涉及免疫技术领域，具体涉及一种检测甲胎蛋白的抗体及应用。
背景技术
近些年各种癌症在我国的发病率上升非常迅速，早期诊断率却较低，多种癌治疗预后较好，因此早期筛查和诊断是提高和改善预后的关键因素，肿瘤标志物的检测被认为是一种简单且无损伤的检查手段，其中CA50就是一种灵敏度很高的标志物，为解决它特异性不强的问题，医学检验届也提出了和CA199/CA724/CEA等标志物联检的有效方案。
CA50是主要分布在糖酯及高分子糖蛋白中，遍布于结、直肠、胰、肺等很多器官的肿瘤组织中的糖类抗原，早期从大肠癌培养细胞株COLO205中发现，在是一种有参考价值的广谱肿瘤标志物。
CA50是胰腺和结、直肠癌的标志物，是最常用的糖类抗原肿瘤标志物，因其广泛存在胰腺、胆囊、肝、胃、结直肠、膀胱、子宫，它的肿瘤识别谱比CA19-9广，因此它又是一种普遍的肿瘤标志相关抗原，而不是特指某个器官的肿瘤标志物。CA50在多种恶性肿瘤中可检出不同的阳性率，在结直肠癌组织中的阳性表达率（83.6%），在结核及肺癌性胸水中表达率高达98．57％，在胰腺癌、胆囊癌、肝癌患者中，阳性率也可达80%以上，对胰腺癌和胆囊癌的阳性检出率居首位，占94.4%；其它依次为肝癌（88%）、卵巢与子宫癌(88%)和恶性胸水（80%）等，现已证实在各种恶性肿瘤中常可升高可用于胰腺癌、胆囊癌等肿瘤的早期诊断，对肝癌、胃癌、结直肠癌及卵巢肿瘤诊断亦有较高价值。
值得指出的是CA50在80％AFP阴性的肝细胞癌中呈阳性结果，作为手术治疗彻底与否的指标也有较大的正确性。另外，CA50对恶性胸水有很高的阳性检出率。另有报导萎缩性胃炎患者胃液CA50的浓度与正常人比较有显著改变。通常认为萎缩性胃炎是癌前高危期，因此CA50可作为癌前诊断指标之一。在胰腺炎、结肠炎和肺炎发病时，CA50也会升高，但随炎症消除而下降，基于这些事实基础，本项目的研究是针对检测肿瘤标志物CA50的抗体。
发明内容
本发明的目的在于：提供一种能检测肿瘤标志物CA50的基因工程抗体，该抗体具有亲和力高、特异性好的特性，效价高。
为了实现上述目的，本发明采用的技术手段为：
一种肿瘤标志物CA50检测用抗体IgG，包括一个重链和一个轻链；所述重链的可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，或者是该序列经一个或多个氨基酸添加、删除、替换、修饰的保守性突变而获得的保守性变异体；
所述轻链的可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，或者是该序列经一个或多个氨基酸添加、删除、替换、修饰的保守性突变而获得的保守性变异体。
一种DNA分子，其编码所述抗体IgG的重链或/和轻链。
所述重链的可变区核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；所述轻链的可变区核苷酸序列如SEQIDNO：4所示。
所述重链可变区的CDR1，CDR2，CDR3的序列如SEQIDNO：5，SEQIDNO：6，SEQIDNO：7所示。
所述轻链可变区的CDR1，CDR2，CDR3的序列如SEQIDNO：8，SEQIDNO：9，SEQIDNO：10所示。
一种DNA分子，其编码权利要求1-3任一项所述抗体IgG的重链或/和轻链。
一种表达载体，包含有权利要求4所述的DNA分子以及与该DNA分子操作性相连的表达调控序列。
一种宿主细胞，被上述表达载体转化。
所述抗体IgG在制备检测肿瘤标志物CA50的诊断试剂或治疗药物中的用途。
有益效果：制备了与现有抗体不同的鼠抗乙肝病毒的核心抗原的抗体，并且效价优于现有的鼠抗，本发明抗体特异性识别了肿瘤标志物CA50，抗体具有特异性，亲和力高、特异性好。本发明抗体的检测范围宽、灵敏度高，检测浓度在0~500ng/mL范围内,检测下限为2ng/mL。回收率为107.08%，灵敏度为0.83 U/m L，重复性CV值<10%。
具体实施方式
以下实施例将对本发明作进一步说明。应理解，这些具体描述的实施方案不应构成对本发明范围的限制。
本发明的抗CA50单链抗体具有如SEQ ID NO .1所示的重链可变区部分、如SEQ IDNO .2所示轻链可变区部分(VH--VL)。
在一个实施方案中，抗CA50单链抗体由本发明所述的重链可变区部分、轻链可变区部分和连接肽组成，所述连接肽由甘氨酸（Gly）和丝氨酸（Ser）构成的一段亲水性的柔性多肽（G4S）3，其中所述重链可变区部分连接于所述连接肽的N-端或C-端，而轻链可变区部分相应地连接于所述连接肽的另一端。优选地，所述重链可变区部分连接于所述连接肽的N-端。在本发明单链抗体的一个实施方案中，所述重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。
实施例1. 抗原免疫过程
1、抗原准备过程：取CA50稀释至1mg/ml，首次免疫取50μl抗原溶液、50μl 0.01MPBS与150μl弗氏完全佐剂；后续免疫取25μl抗原溶液、75μl0.01MPBS与100μl弗氏不完全佐剂。用两只2ml注射器分别吸取抗原溶液与佐剂，尽可能排掉注射器中的空气并用三通链接，先将抗原推入佐剂中，在反复推动连接好的注射器约20min--40min，直至乳化后的抗原在水中不扩散为止。
2、免疫小鼠过程：选择6至8周龄的健康实验鼠，活泼积极进食，体表无明显外伤为宜。采用腹腔注射方法，每14天免疫一次，当免疫两次之后，每次免疫第7天断尾取血检测效价，当效价达到要求即停止免疫。
实施例2. 细胞融合过程
细胞融合过程步骤如下：
2.1准备工作
2.1.1配制HAT培养基，分装DMEM及PEG。
2.1.2手术器械、50ml塑料离心管、50ml玻璃离心管灭菌。
2.1.3提前一周复苏SP2/0细胞，培养并使之处于良好的生长状态。
2.1.4提前一天用HAT培养基采饲养细胞并铺板，融合一只老鼠需要铺5块饲养细胞板。
2.2融合
2.2.1处理SP2/0：吹散，转移至50ml塑料离心管，1000r离心5min，弃上清，加DMEM，吹散，1000r离心5min，加DMEM至10ml左右，吹散，计数，备用。
2.2.2提取脾细胞
2.2.2.1小鼠眼窝取血，脱颈处死，血样留作阳性对照。
2.2.2.2分离出小鼠脾脏，先用DMEM冲洗脾脏外部，再DMEM冲洗脾脏内部，收集冲洗液并转移至10ml玻璃离心管，计数。
2.2.2.3 1000r离心5min，弃上清，加DMEM吹散并转移至50ml玻璃离心管，将之前处理的SP2/0同时转移至50ml玻璃离心管，1000r离心5min，弃上清，在手背上磨匀。
2.2.2.4 37℃温水浴，1min内加入1mlPEG，边加边摇，静置90s。
2.2.2.5 1min内加1mlDMEM，30s内加1mlDMEM，逐渐加速，加DMEM至40~50ml，37℃静置10min，800r离心6min，弃上清，加HAT铺板。
2.2.2.6 3天之后半换液，一周之后全换液，换HAT培养基培养。
实施例3.亚克隆挑选过程
3.1观察细胞状态，当96孔内有肉眼可观察到的细胞团后，进行整板检测，挑选阳性较高的孔进行亚克隆，一个阳性孔一块板。
3.2当6孔内有肉眼可观察到的细胞团后，进行亚克隆挑拣，每块板选择12个单个细胞团的孔进行亚克隆挑拣，选择阳性高，细胞状态好的细胞进行下一步亚克隆，至少进行三次亚克隆，最后挑选出阳性高、细胞状态好单克隆细胞团定株。
3.3将挑出来的细胞团转移至24孔培养，待24孔细胞长好后转移至小方瓶培养。
3.4待小方瓶内细胞长好之后，进行冻存及制备腹水。
实施例4.腹水制备过程
4.1提前一周给老鼠注射石蜡，每只老鼠0.5ml。
4.2待小方瓶内细胞长好之后，吹散，转移至10ml玻璃离心管，1000r离心5min，弃上清，加1mlDMEM，计数，按每只老鼠注射0.8×106个细胞，每只老鼠注射0.5ml的量进行稀释，然后给老鼠腹腔注射细胞。
4.3观察老鼠状态，待小鼠腹部明显涨大即可开始抽取腹水并收集。
实施例5.抗体纯化过程
应用ProteinA-SepharoseCL24B亲和层析法纯化单克隆抗体，AKTA explorer100进行监测。取腹水，在4℃，12000g条件下离心15min，以除去较大的凝块。将
1.5gProteinA-SepharoseCL24B干粉用6～7ml三蒸水溶解，再用0.02M，pH7.4的磷酸盐缓冲液(上样缓冲液)浸泡15min，然后装入层析柱中。用10倍柱床体积的上样缓冲液过柱，流速为1ml/min，pH试纸测试流出液体的pH为7.4。取预处理过的腹水5ml，用上样缓冲液稀释至50ml，用0.45μm的滤膜过滤，上样，流速为1ml/min。用上样缓冲液进行流洗，10倍柱床体积，流速为1ml/min。随后用0.02M，pH4.0的柠檬酸缓冲液洗脱抗体，同时应用AKTAexplorer100进行监测，当观察到基线开始上升，即出现洗脱峰时，取干净的4ml离心管收集，每收集3ml后，立即用1M，pH9.0的TRis2Hcl缓冲液调整pH值至7.0。收集洗脱液至洗脱峰回到基线后，继续用上样缓冲液平衡5～10倍柱床体积，流速调至1ml/min。再用三蒸水平衡10倍柱床体积。采用SDS不连续丙烯酰胺凝胶电泳(SDS2PAGE)，浓缩胶和分离胶浓度分别为120g/L和50g/L，每槽加样10μl，考马斯亮蓝R250染色。具体操作见参考文献(美)E.哈洛(EdHarlow) (美)D.莱恩(DavidLane) 《抗体技术实验指南》出版社：科学出版社 出版日期：2002-09；萨姆布鲁克 J，弗里奇 EF，曼尼阿蒂斯 T，等著.金冬雁，黎孟枫，侯云德，等译.《分子克隆实验指南》[M].第2版.北京科学出版社，1992，1713-1720.。应用ELISA法测定效价。
实施例6.抗体测序过程
将细胞样品反转录后获得cDNA；扩增并获得重链和轻链可变区；克隆至pMD18-T载体，测序；使用IMGT/V-QUEST进行测序结果比对，之后得到全部序列。抗体测序过程是本领域技术人员都得知的技术。具体序列见序列表。所述的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO .2所示，重链可变区的CDR1，CDR2，CDR3的序列如SEQIDNO：5，SEQIDNO：6，SEQIDNO：7所示，轻链可变区的CDR1，CDR2，CDR3的序列如SEQIDNO：8，SEQIDNO：9，SEQIDNO：10所示。
实施例7 抗体的功能活性鉴定
用间接ELISA法测定筛选所得抗体的腹水效价及与肿瘤标志物CA50的交叉反应，结果显示：抗体的腹水效价高达1:3×107。
对胰腺癌细胞进行免疫荧光染色（FITC和DAPI双染，400倍显微镜下观察），鉴定抗体与天然肿瘤分子特异性结合能力，结果显示，在实验中，肿瘤标志物CA50抗体组均呈现明显绿色荧光，而无关抗体对照组细胞未观察到绿色荧光，说明本发明抗体特异性识别了肿瘤标志物CA50，抗体具有很好的CA50特异性，无交叉反应。
综上可见，本发明的抗体具有亲和力高、特异性好的特性。
本发明抗体特异性识别了肿瘤标志物CA50，抗体具有特异性，亲和力高、特异性好。本发明抗体的检测范围宽、灵敏度高，检测浓度在0~500ng/mL范围内,检测下限为2ng/mL。回收率为107.08%，灵敏度为0.83 U/m L，重复性CV值<10%。
最后应说明的是：显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明本申请所作的举例，是优选的实施例。而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本申请型的保护范围之中。
其中：
重链可变区的氨基酸序列SEQ ID NO .1：
EVQLQQSGAELMKPGASVKISCKATGYTFSSYWIEWVKQRPGHGLEWSANILPGSGSPNYNEKFKGKDTFTADTSSNTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARRGRGFPYWGQGTLVTVSA
AKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLRCLVKGYSPEPVTLPWNSGSLSSGVHTLPAVLQSGLNTLSSSLTVTSSTSPSQSITRNVANPASSPKVDKKIEPRGPTIKPCPRCKCPAPNLLGGPSVFIGPPKIKNVLMISKSPIVTYVVVDKSEDDPDVQISWFVGNVEVHTAQTETHREDYHSTLRAVSALPIQAQDWMPGKEFKCKDNNKDLAAPIRRTISKAKGSVRAPQVYVTPPREEERTKKQVTRTCMVRDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSR；
轻链可变区的氨基酸序列SEQ ID NO .2：
DIVMTQTPSSLSASLGDTITITCHASQNIKVWLSWYQQKPGNIPKLLIYKTSNLHTGVSSRFSGSGSGTAFTLTISSLQGEDIATYYCQQGQSYPFTFGGGTKLEIK
RADVAPTASIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNRFYPKDSNVKCEIDGSERQNGVLNPWTDQDSKHSTYSTSSTLTLTKDEYERHNSYTTEATHKKATSPIVRSFNRNEGIRDRADLIG；
重链的可变区核苷酸序列SEQ ID NO：3：
GAGGTCCAGCTGCAGCAGTCTGGAGCTGAGCTGATGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGATATCCTGCAAGGCTACTGGCTACACATTCAGTAGCTACTGGATAGAGTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACATGGCCTTGAGTGGAGTGCAAATATTTTACCTGGAAGTGGTAGTCCTAACTACAATGAGAAGTTCAAGGGCAAGGACACATTCACTGCAGATACATCCTCCAACACAGCCTACATGCAACTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCCGTCTATTACTGTGCAAGAAGGGGACGGGGGTTTCCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCAAAACAACAGCCCCATCTGTCTATCCACTGGCCCCTGTGTGTGGAGATACAACTGGCTCCTCGGTGACTCTACGATGCCTGGTCAAGGGATATTCCCCTGAGCCAGTGACCTTGCCCTGGAACTCTGGATCCCTGTCCAGTGGTGTGCACACCTTGCCAGCTGTCCTGCAGTCTGGCCTAAACACCCTCAGCAGCTCACTGACTGTAACCTCGAGCACCTCGCCCAGCCAGTCCATCACCCGCAATGTGGCAAACCCGGCAAGCAGCCCCAAGGTGGACAAGAAAATTGAGCCCAGAGGGCCCACAATCAAGCCCTGTCCTCGGTGCAAATGCCCAGCCCCTAACCTCTTGGGAGGACCATCGGTCTTCATCGGCCCTCCAAAGATCAAGAATGTACTCATGATCTCCAAGAGCCCCATAGTCACATATGTGGTGGTGGATAAAAGCGAGGATGACCCAGACGTCCAGATCAGCTGGTTTGTGGGCAACGTGGAAGTACACACAGCTCAGACCGAAACCCATAGAGAGGATTACCACAGTACTCTCCGGGCGGTCAGTGCCCTCCCCATCCAGGCACAGGACTGGATGCCTGGCAAGGAGTTCAAATGCAAGGACAACAACAAAGACCTGGCAGCGCCCATCCGGAGAACCATCTCAAAAGCCAAAGGGTCAGTAAGAGCTCCACAGGTATATGTCACGCCTCCACGGGAAGAAGAGCGCACTAAGAAACAGGTCACACGGACCTGCATGGTCCGGGACTTCATGCCTGAAGACATTTACGTGGAGTGGACCAACAACGGGAAAACAGAGCTAAACTACAAGAACACTGAACCAGTCCTGGACTCTGATGGTTCTTACTTCATGTACAGCAAGCTGAGAGTGGAAAAGAAGAACTGGGTGGAAAGAAATAGCTACTCCTGTTCAGTGGTCCACGAGGGTCTGCACAATCACCACACGACTAAGAGCTTCTCCCGG；
轻链的可变区核苷酸序列SEQIDNO：4：
GATATTGTGATGACACAGACTCCATCCAGTCTGTCTGCATCCCTTGGAGACACAATTACCATCACTTGCCATGCCAGTCAGAACATTAAGGTTTGGTTAAGCTGGTACCAGCAGAAACCAGGAAATATTCCTAAACTATTGATCTATAAGACTTCCAACTTGCACACAGGCGTCTCATCAAGGTTTAGTGGCAGTGGATCTGGAACAGCTTTCACATTAACCATCAGCAGCCTGCAGGGTGAAGACATTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTCAAAGTTATCCGTTCACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAACGGGCTGATGTTGCACCAACTGCATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAGGTTCTACCCCAAAGACAGCAATGTCAAGTGCGAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACCCCTGGACTGATCAGGACAGCAAGCACAGCACCTACAGCACAAGCAGCACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCACTGAGGCCACTCACAAGAAGGCAACTTCACCCATTGTCCGGAGCTTCAACAGGAATGAGGGTATCCGGGATAGGGCAGATCTGATTGGG；
重链CDR1的序列SEQIDNO：5：QLSSLT；
CDR2的序列SEQIDNO：6：QTETHREDY；
CDR3的序列SEQIDNO：7：MYSK；
轻链可变区的CDR1的序列SEQIDNO：8:GDTITITC；
轻链可变区的CDR2的序列SEQIDNO：9 为：RFYP；
轻链可变区的CDR3的序列SEQIDNO：10为:HKKATS。
序列表
<110> 南京京达生物技术有限公司
<120> 一种肿瘤标志物CA50检测用抗体IgG及应用
<141> 2018-03-20
<160> 10
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ser
35 40 45
Ala Asn Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Pro Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Asp Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Arg Gly Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Arg Cys Leu
130 135 140
Val Lys Gly Tyr Ser Pro Glu Pro Val Thr Leu Pro Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Leu Pro Ala Val Leu Gln Ser Gly
165 170 175
Leu Asn Thr Leu Ser Ser Ser Leu Thr Val Thr Ser Ser Thr Ser Pro
180 185 190
Ser Gln Ser Ile Thr Arg Asn Val Ala Asn Pro Ala Ser Ser Pro Lys
195 200 205
Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro
210 215 220
Arg Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Ile Gly Pro Pro Lys Ile Lys Asn Val Leu Met Ile Ser Lys Ser Pro
245 250 255
Ile Val Thr Tyr Val Val Val Asp Lys Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val
260 265 270
Gln Ile Ser Trp Phe Val Gly Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr
275 280 285
Glu Thr His Arg Glu Asp Tyr His Ser Thr Leu Arg Ala Val Ser Ala
290 295 300
Leu Pro Ile Gln Ala Gln Asp Trp Met Pro Gly Lys Glu Phe Lys Cys
305 310 315 320
Lys Asp Asn Asn Lys Asp Leu Ala Ala Pro Ile Arg Arg Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Thr Pro Pro
340 345 350
Arg Glu Glu Glu Arg Thr Lys Lys Gln Val Thr Arg Thr Cys Met Val
355 360 365
Arg Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly
370 375 380
Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp
405 410 415
Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His
420 425 430
Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg
435 440
<210> 2
<211> 223
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Thr Ile Thr Ile Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile Lys Val Trp
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ile Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Thr Ser Asn Leu His Thr Gly Val Ser Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Gly
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Val Ala
100 105 110
Pro Thr Ala Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly
115 120 125
Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Arg Phe Tyr Pro Lys Asp Ser
130 135 140
Asn Val Lys Cys Glu Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu
145 150 155 160
Asn Pro Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys His Ser Thr Tyr Ser Thr Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr
180 185 190
Thr Thr Glu Ala Thr His Lys Lys Ala Thr Ser Pro Ile Val Arg Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Asn Glu Gly Ile Arg Asp Arg Ala Asp Leu Ile Gly
210 215 220
<210> 4
<211> 1326
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
gaggtccagc tgcagcagtc tggagctgag ctgatgaagc ctggggcctc agtgaagata 60
tcctgcaagg ctactggcta cacattcagt agctactgga tagagtgggt gaagcagagg 120
cctggacatg gccttgagtg gagtgcaaat attttacctg gaagtggtag tcctaactac 180
aatgagaagt tcaagggcaa ggacacattc actgcagata catcctccaa cacagcctac 240
atgcaactca gcagcctgac atctgaggac tctgccgtct attactgtgc aagaagggga 300
cgggggtttc cttactgggg ccaagggact ctggtcactg tctctgcagc caaaacaaca 360
gccccatctg tctatccact ggcccctgtg tgtggagata caactggctc ctcggtgact 420
ctacgatgcc tggtcaaggg atattcccct gagccagtga ccttgccctg gaactctgga 480
tccctgtcca gtggtgtgca caccttgcca gctgtcctgc agtctggcct aaacaccctc 540
agcagctcac tgactgtaac ctcgagcacc tcgcccagcc agtccatcac ccgcaatgtg 600
gcaaacccgg caagcagccc caaggtggac aagaaaattg agcccagagg gcccacaatc 660
aagccctgtc ctcggtgcaa atgcccagcc cctaacctct tgggaggacc atcggtcttc 720
atcggccctc caaagatcaa gaatgtactc atgatctcca agagccccat agtcacatat 780
gtggtggtgg ataaaagcga ggatgaccca gacgtccaga tcagctggtt tgtgggcaac 840
gtggaagtac acacagctca gaccgaaacc catagagagg attaccacag tactctccgg 900
gcggtcagtg ccctccccat ccaggcacag gactggatgc ctggcaagga gttcaaatgc 960
aaggacaaca acaaagacct ggcagcgccc atccggagaa ccatctcaaa agccaaaggg 1020
tcagtaagag ctccacaggt atatgtcacg cctccacggg aagaagagcg cactaagaaa 1080
caggtcacac ggacctgcat ggtccgggac ttcatgcctg aagacattta cgtggagtgg 1140
accaacaacg ggaaaacaga gctaaactac aagaacactg aaccagtcct ggactctgat 1200
ggttcttact tcatgtacag caagctgaga gtggaaaaga agaactgggt ggaaagaaat 1260
agctactcct gttcagtggt ccacgagggt ctgcacaatc accacacgac taagagcttc 1320
tcccgg 1326
<210> 4
<211> 669
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
gatattgtga tgacacagac tccatccagt ctgtctgcat cccttggaga cacaattacc 60
atcacttgcc atgccagtca gaacattaag gtttggttaa gctggtacca gcagaaacca 120
ggaaatattc ctaaactatt gatctataag acttccaact tgcacacagg cgtctcatca 180
aggtttagtg gcagtggatc tggaacagct ttcacattaa ccatcagcag cctgcagggt 240
gaagacattg ccacttacta ctgtcaacag ggtcaaagtt atccgttcac gttcggaggg 300
gggaccaagc tggaaataaa acgggctgat gttgcaccaa ctgcatccat cttcccacca 360
tccagtgagc agttaacatc tggaggtgcc tcagtcgtgt gcttcttgaa caggttctac 420
cccaaagaca gcaatgtcaa gtgcgagatt gatggcagtg aacgacaaaa tggcgtcctg 480
aacccctgga ctgatcagga cagcaagcac agcacctaca gcacaagcag caccctcacg 540
ttgaccaagg acgagtatga acgacataac agctatacca ctgaggccac tcacaagaag 600
gcaacttcac ccattgtccg gagcttcaac aggaatgagg gtatccggga tagggcagat 660
ctgattggg 669
<210> 5
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
Gln Leu Ser Ser Leu Thr
1 5
<210> 6
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
Gln Thr Glu Thr His Arg Glu Asp Tyr
1 5
<210> 7
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
Met Tyr Ser Lys
1
<210> 8
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
Gly Asp Thr Ile Thr Ile Thr Cys
1 5
<210> 9
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
Arg Phe Tyr Pro
1
<210> 10
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
His Lys Lys Ala Thr Ser
1 5

Claims (8)

1.一种肿瘤标志物CA50检测用抗体IgG，包括重链可变区和轻链可变区，其特征在于，所述的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO .1所示，或者是该序列经一个或多个氨基酸添加、删除、替换、修饰的保守性突变而获得的保守性变异体；
所述的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO .2所示，或者是该序列经一个或多个氨基酸添加、删除、替换、修饰的保守性突变而获得的保守性变异体。
2.根据权利要求1所述的一种肿瘤标志物CA50检测用抗体IgG，其特征在于，所述的重链可变区的三个抗原互补区CDR的氨基酸序列为SEQ ID NO .5，SEQ ID NO .6和SEQ ID NO.7所示。
3.根据权利要求1所述的一种肿瘤标志物CA50检测用抗体IgG，其特征在于，所述的轻链可变区的三个抗原互补区CDR的氨基酸序列为SEQ ID NO .8，SEQ ID NO .9和SEQ ID NO.10所示。
4.一种DNA分子，其编码权利要求1-3任一项所述抗体IgG的重链或/和轻链。
5.根据权利要求4所述的一种DNA分子，其特征在于，所述重链可变区的核苷酸序列如SEQIDNO：3所示；所述轻链可变区的核苷酸序列如SEQIDNO：4所示。
6.一种表达载体，包含有权利要求4所述的DNA分子以及与该DNA分子操作性相连的表达调控序列。
7.一种宿主细胞，被权利要求6所述的表达载体转化。
8.权利要求1-3任一项所述抗体IgG在制备检测肿瘤标志物CA50的诊断试剂或治疗药物中的用途。
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