CN108402473A - 一种具有改善记忆功能的用于口服的脑多肽组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种具有改善记忆功能的用于口服的脑多肽组合物，其由40‑90%的小分子肽和10‑60%的游离氨基酸组成，其中所述小分子肽的分子量为10kDa以下。该脑多肽组合物是由哺乳动物脑组织经匀浆、脱脂制得脑蛋白质，再将脑蛋白质经酶水解后制备而成。所述脑多肽组合物可用于制备食品、保健食品或特医食品等，对人体无毒副作用，且具有显著的提高记忆力的功效，可用于老年痴呆等症的预防和辅助治疗。

Description

一种具有改善记忆功能的用于口服的脑多肽组合物

技术领域

本发明涉及一种具有改善记忆功能的用于口服的脑多肽组合物及其在食品、保健食品或特医食品中的应用。

背景技术

生物活性肽具有调节人体生理机能的功效，同时作为营养物质，易于被人体吸收利用。目前最常用的此类药物之一是脑蛋白水解物，用于治疗脑功能性障碍类疾病，研究发现其活性与水解物中的小分子多肽即脑多肽密切相关。

目前脑多肽的应用形式主要是药用，最早由奥地利依比威大药厂于20世纪70年代开发出脑蛋白水解物产品，商品名为施普善，剂型为注射液，文献报道其小分子肽和氨基酸的质量含量（以含氮质量计）分别为30%以下和60%以上（CN201510254965.8）。之后90年代国内企业开始涉足该类产品的开发，剂型仍主要为注射剂，这是由于现有技术一直未解决该类产品口服生物利用度较低的问题。但是，由于注射剂给药方式接受度和方便性的问题使脑多肽类药物临床应用受到了限制，而脑功能性障碍类疾病一般需要长期用药，因此给病人带来了极大的不便。

基于以上技术现状，如果能开发出和注射剂生物利用度相当的口服脑多肽类产品，显然有利于脑多肽的广泛应用，进一步地，如果该产品能应用在食品、保健食品或特医食品中使老年群体日常食用，则有望改善该群体的记忆力，降低痴呆症的发病率，具有显著的经济和社会效益。

发明内容

针对以上技术背景，本发明的目的是提供一种具有改善记忆功能的用于口服的脑多肽组合物，并提供其在制备改善记忆食品、保健食品或特医食品中的应用。

本发明采用如下技术方案：

一种具有改善记忆功能的用于口服的脑多肽组合物，其由健康哺乳动物的脑组织经水解得到，以含氮质量计，其由40-90%的小分子肽和10-60%的游离氨基酸组成，其中所述小分子肽的分子量为10kDa以下。所述哺乳动物为牛、羊、猪，优选猪脑。

优选地，以含氮质量计，所述小分子肽和游离氨基酸的含量分别为55-90%和10-45%。

进一步优选地，以含氮质量计，所述小分子肽和游离氨基酸的含量分别为60-90%和10-40%。

进一步优选地，以含氮质量计，所述小分子肽和游离氨基酸的含量分别为70-80%和20-30%。

本发明所述的“以氮质量计”是指：小分子肽在脑多肽组合物中的比例，是由所述小分子肽中的氮质量占小分子肽和游离氨基酸所含氮质量的总和的比例来计算的；游离氨基酸在组合物中的比例，是由所述游离氨基酸中的氮质量占小分子肽和游离氨基酸所含氮质量的总和的比例来计算的。

所述氮质量的测定方法一般按照中国药典等国家标准中规定的凯氏定氮法等氮定量法进行测定。

进一步优选地，所述具有改善记忆功能的用于口服的脑多肽组合物，其由哺乳动物脑组织经匀浆、脱脂制得脑蛋白质，再将脑蛋白质经酶水解后制备而成。

其中，所述哺乳动物为牛、羊、猪，优选猪。

进一步优选地，所述酶水解为以胃蛋白酶和菠萝蛋白酶依次水解。

进一步优选地，所述具有改善记忆功能的用于口服的脑多肽组合物，其采用以下步骤制备得到：

（1）将哺乳动物脑组织清洗去杂，匀浆；

（2）将匀浆液煮沸，加入有机溶剂脱脂，得脑蛋白质溶液；

（3）将所述脑蛋白质溶液加入胃蛋白酶，于pH 1-3下酶解；

（4）酶解液调pH6-7，加入菠萝蛋白酶酶解；

（5）将步骤（4）得到的酶解液煮沸后降温至20-25℃，过滤，滤液过截留分子量10kDa的超滤膜，干燥，得所述脑多肽组合物。

优选地，步骤（3）所述胃蛋白酶加入量为3-5mg/g脑组织，胃蛋白酶酶解温度为30-40℃，胃蛋白酶酶解时间为5-10h；步骤（4）所述菠萝蛋白酶加入量为0.1-0.2mg/g脑组织，菠萝蛋白酶酶解温度为35-55℃，菠萝蛋白酶酶解时间为3-4h。

进一步优选地，步骤（2）中将匀浆液冷却至25-30摄氏度后进行脱脂，所述有机溶剂为乙醇、丙酮或正己烷，其用量为匀浆液体积的1-10倍。

本发明还提供所述脑多肽组合物的制备方法。

本发明所述的具有改善记忆功能的用于口服的脑多肽组合物的制备方法，其步骤为：将哺乳动物脑组织经匀浆、脱脂制得脑蛋白质，再将脑蛋白质经酶水解后制成所述脑多肽组合物。

进一步地，本发明所述的具有改善记忆功能的用于口服的脑多肽组合物的制备方法，其采用以下步骤制备得到：

（1）将哺乳动物脑组织清洗去杂，匀浆；

（2）将匀浆液煮沸，加入有机溶剂脱脂，得脑蛋白质溶液；

（3）将所述脑蛋白质溶液加入胃蛋白酶，于pH 1-3下酶解；

（4）酶解液调pH6-7，加入菠萝蛋白酶酶解；

（5）将步骤（4）得到的酶解液煮沸后降温至20-25℃，过滤，滤液过截留分子量10kDa的超滤膜，干燥，得所述脑多肽组合物。

优选地，步骤（3）所述胃蛋白酶加入量为3-5mg/g脑组织，胃蛋白酶酶解温度为30-40℃，胃蛋白酶酶解时间为5-10h；步骤（4）所述菠萝蛋白酶加入量为0.1-0.2mg/g脑组织，菠萝蛋白酶酶解温度为35-55℃，菠萝蛋白酶酶解时间为3-4h。

进一步优选地，步骤（2）中将匀浆液冷却至25-30摄氏度后进行脱脂，所述有机溶剂为乙醇、丙酮或正己烷，其用量为匀浆液体积的1-10倍。

本发明还提供所述的脑多肽组合物在制备具有改善记忆功能的食品、保健食品或特医食品中的应用。

与现有技术相比，本发明的积极效果如下：

1、现有技术中认为脑多肽组合物口服生物利用度较低，本发明则意外发现小分子肽含量在特定的范围内，即以氮质量计40-90%时，其口服效果和注射剂相当，并且，脑多肽组合物中，并非小分子肽越多效果越好，也并非氨基酸比例越高越好，而是氨基酸和小分子肽比例达到某一具体范围时，具有一定协同效果，脑保护效果明显改善，可以与注射液相当，具体而言，肽含量为70-80%时，效果最优；肽含量为90%时效果反而较80%时有所降低，究其原因，可能是氨基酸在肽的吸收利用过程中发挥了一定的协同作用，氨基酸含量过低反而影响小分子肽作用的发挥。

2、经本发明的发明人前后十年的研究发现，肽类成分的分子量十分关键，分子量大于10kDa的多肽不能带来良好的效果，分子量大于10kDa的多肽在组合物中的比例增大，效果可能更劣于普通氨基酸混合物，因此应严格控制选取分子量10kDa以下的肽成分。

3、脑多肽组合物的组成受制备方法的影响较大，所用的蛋白酶种类、酶量及水解温度、时间等都会影响终产品的组成，工艺条件的改变会导致肽的种类和含量发生变化，从而影响产品的功效。发明人通过大量的对比试验发现，用蛋白酶对蛋白质进行酶解时，不同的酶具有不同的作用机制，其特异性也不同，有的酶特异性强，只对特定的肽键具有切割作用，有些酶则能对多种肽键进行切割，不同的酶解条件也会对酶的切割作用产生影响。本发明经试验筛选出两种蛋白酶，并将二者顺序联合使用，依次对脑蛋白质进行水解，胃蛋白酶特异性较强，只能水解芳香族氨基酸（色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸）的肽键，并且氨基端第三个氨基酸为碱性氨基酸时还会影响其切割效果，也就是说胃蛋白酶的切割位点相对较少，可将蛋白质分解成大分子多肽。菠萝蛋白酶则可以针对更多的特定位点进行切割，最终将多肽分解成低分子短肽，再结合特定的酶解条件进行控制，可以得到含有40-90%低分子肽和10-60%氨基酸的产物，制备过程中10kDa以上分子量的肽含量少，过超滤膜后氮损失少，产物的收率在72%以上。

4、曾尝试改变酶解条件以获得含有更高比例小分子肽的产品，但发现肽含量高于90%后其分子量较大，过超滤膜后10kDa以下小分子肽含量大大降低。而本发明通过酶解后产物大部分是10kDa以下的短肽，超滤后总氮量损失少，提高了目标产品的收率。

5、由于猪脑原料管控及冷冻贮藏等条件限制，提高原料的利用率可在很大程度上降低生产成本。

6、将该脑多肽组合物以食品的形式日常服用，对人体无毒副作用，且具有显著的提高记忆力的功效，可用于痴呆等症的预防和辅助治疗。

具体实施方式

实施例1 制备脑多肽组合物

（1）取清洗去杂后的猪脑组织100kg，用200目胶体磨匀浆；

（2）将匀浆液煮沸，冷却至25-30℃后，加入10倍体积的乙醇，搅拌0.5h脱脂，得蛋白质溶液；

（3）将脱脂后的蛋白质溶液中加入300g胃蛋白酶，于37℃、pH 1.5下酶解5h；

（4）酶解液调pH6-7，加入10g菠萝蛋白酶，于55℃下反应3h；

（5）将步骤（4）得到的酶解液煮沸后降温至20-25℃，过滤除去其中的固体如酶等，滤液通过截留分子量10kDa的超滤膜，喷雾干燥，得脑多肽组合物。

实施例2 制备脑多肽组合物

（1）取清洗去杂后的猪脑组织100kg，用200目胶体磨匀浆；

（2）将匀浆液煮沸，冷却至25-30℃后，加入等体积的正己烷，搅拌1h脱脂，得蛋白质溶液；

（3）将脱脂后的蛋白质溶液中加入300g胃蛋白酶，于35℃、pH 3下酶解6h；

（4）酶解液调pH6-7，加入12g菠萝蛋白酶，于37℃下反应4h；

（5）将步骤（4）得到的酶解液煮沸后降温至20-25℃，过滤，滤液通过截留分子量10kDa的超滤膜，喷雾干燥，得脑多肽组合物。

实施例3 制备脑多肽组合物

（1）取清洗去杂后的猪脑组织100kg，用200目胶体磨匀浆；

（2）将匀浆液煮沸，冷却至25-30℃后，加入5倍体积的乙醇，搅拌0.5h脱脂，得蛋白质溶液；

（3）将脱脂后的蛋白质溶液中加入300g胃蛋白酶，于30℃、pH 2.5下酶解7h；

（4）酶解液调pH6-7，加入15g菠萝蛋白酶，于45℃下反应2h；

（5）将步骤（4）得到的酶解液煮沸后降温至20-25℃，过滤，滤液通过截留分子量10kDa的超滤膜，喷雾干燥，得脑多肽组合物。

实施例4 制备脑多肽组合物

（1）取清洗去杂后的猪脑组织100kg，用200目胶体磨匀浆；

（2）将匀浆液煮沸，冷却至25-30℃后，加入5倍体积的丙酮，搅拌0.5h脱脂，得蛋白质溶液；

（3）将脱脂后的蛋白质溶液中加入400g胃蛋白酶，于30℃、pH 2.5下酶解8h；

（4）酶解液调pH6-7，加入15g菠萝蛋白酶，于45℃下反应2h；

（5）将步骤（4）得到的酶解液煮沸后降温至20-25℃，过滤，滤液通过截留分子量10kDa的超滤膜，喷雾干燥，得脑多肽组合物。

实施例5 制备脑多肽组合物

（1）取清洗去杂后的猪脑组织100kg，用200目胶体磨匀浆；

（2）将匀浆液煮沸，冷却至25-30℃后，加入5倍体积的乙醇，搅拌0.5h脱脂，得蛋白质溶液；

（3）将脱脂后的蛋白质溶液中加入400g胃蛋白酶，于30℃、pH 2.5下酶解9h；

（4）酶解液调pH6-7，加入15g菠萝蛋白酶，于45℃下反应2h；

（5）将步骤（4）得到的酶解液煮沸后降温至20-25℃，过滤，滤液通过截留分子量10kDa的超滤膜，喷雾干燥，得脑多肽组合物。

实施例6 制备脑多肽组合物

（1）取清洗去杂后的猪脑组织100kg，用200目胶体磨匀浆；

（2）将匀浆液煮沸，冷却至25-30℃后，加入5倍体积的乙醇，搅拌0.5h脱脂，得蛋白质溶液；

（3）将脱脂后的蛋白质溶液中加入450g胃蛋白酶，于30℃、pH 2.5下酶解10h；

（4）酶解液调pH6-7，加入15g菠萝蛋白酶，于45℃下反应2h；

（5）将步骤（4）得到的酶解液煮沸后降温至20-25℃，过滤，滤液通过截留分子量10kDa的超滤膜，喷雾干燥，得脑多肽组合物。

实施例7 制备脑多肽组合物

（1）取清洗去杂后的牛脑组织100kg，用200目胶体磨匀浆；

（2）将匀浆液煮沸，冷却至25-30℃后，加入5倍体积的乙醇，搅拌0.5h脱脂，得蛋白质溶液；

（3）将脱脂后的蛋白质溶液中加入500g胃蛋白酶，于30℃、pH 2.5下酶解10h；

（4）酶解液调pH6-7，加入20g菠萝蛋白酶，于45℃下反应2h；

（5）将步骤（4）得到的酶解液煮沸后降温至20-25℃，过滤，滤液通过截留分子量10kDa的超滤膜，喷雾干燥，得脑多肽组合物。

表1实施例1-7的产物收率和百分比组成

注：产物收率=产物含氮量/滤液含氮量，肽含量和氨基酸含量基于产物含氮量计算。

实施例8 制备固体饮料

按重量份取实施例1制得的脑多肽组合物50份，加入麦芽糊精30份、木糖醇15份、维生素C 3份和食用香精2份，混匀后过60-100目筛，辐射灭菌后封装即可。

实施例9 稳定性

将实施例1-实施例8制备的产品密封包装后自然放置24个月，在0、3、6、9、12、18和24月检测，符合产品内控标准，产品稳定性良好，见表2。

表2稳定性检测结果

。

实施例10 改善记忆评价试验

实验设置十组，实验组A-G分别灌胃本发明实施例7~1的产品，阳性对照组注射施普善产品，给药剂量均为60 mg/kg体重（以总氮计），模型组和正常对照组灌胃等量生理盐水，每日给药一次，连续给药14天。

实验动物：ICR小鼠：SPF级，雄性，18-20g，200只，由北京维通利华实验动物技术有限公司（许可证号：SCXK(京)2016-0011），合格证编号：11400700264012。

记忆获得障碍模型：末次灌饲后次日，模型组和各个试验组腹腔注射东莨菪碱(3mg/kg.bw)，10 分钟后进行训练，24 小时后测试记忆成绩。

试验方法：

动物筛选分组

分别经Y迷宫及避暗训练淘汰反应过于迟钝或对电刺激特别敏感的小鼠，筛选合格的200只小鼠分为两大组分别为测定Y迷宫组及测定避暗组，各100只，测定避暗组分为正常对照1组、模型1组、阳性对照1组及实验组A1、B1、C1、D1、E1、F1、G1组，每组10只。测定Y迷宫组分为正常对照2组、模型2组、阳性对照2组及实验组A2、B2、C2、D2、E2、F2、G2组。每组10只。

给药

分组完毕即开始给药，每天1次，连续给药14d，正常对照组及模型组给予等体积的生理盐水。第13d各组给药后30min除正常对照组外其余各组每只小鼠sc给予氢溴酸东莨菪碱3mg/kg。30 min后开始分别进行Y迷宫及避暗实验。

避暗实验

给药第13d，小鼠sc给予氢溴酸东莨菪碱3mg/kg 30 min后，将小鼠面部背向洞口放入明室，小鼠从明箱进入暗箱后，关闭小门并对小鼠持续6 s电击，再次打开小门，小鼠随即逃出暗箱，开始计时，记录动物再次进入暗室时间即为潜伏期，并记录5min内动物进入暗室的错误次数。给药第14d，给药后将小鼠面部背向洞口放入明室，记录5min内动物进入暗室的潜伏期、错误次数。给药第14d测定结果作为记忆成绩。结果见表3。

注：与正常对照1组比较**P<0.01,***P<0.001；与模型1组比较#P<0.05,##P<0.01。

由表3可见，与正常对照1组比较，模型1组的潜伏期极显著降低（P<0.001），错误数显著增多（P<0.01）；与模型1组比较，阳性对照1组潜伏期明显升高（P<0.05），错误次数显著降低（P<0.01）。实验组的潜伏期较模型1组有显著升高，错误次数显著减少，实验组较阳性对照组在延长潜伏期、减少错误次数中的效果相当。

Y迷宫实验

小鼠sc给予氢溴酸东莨菪碱3mg/kg，30 min后，将小鼠放入Y迷宫，小鼠在起步区予以电击致其逃至安全区，灯光持续10 s，然后熄灯休息5 s，开始下一次操作，测试20次，记录小鼠反应，计算小鼠的错误次数，测定小鼠学习能力。次日给药后再测试20次，记录小鼠反应，计算小鼠的错误次数，测定小鼠记忆能力，对记忆成绩进行统计分析。实验在黑暗、安静环境下进行。规定小鼠受电击后从起步区直接逃至安全区的反应称为“正确反应”，否则为“错误反应”。实验结果见表4。

注：与正常对照2组比较*P<0.05；与模型2组比较#P<0.05，##P<0.01。

由表4可见，与正常对照2组比较，模型2组错误数显著增多（P<0.05），表明记忆障碍模型造模成功；与模型2组比较，阳性药对照2组及实验组A2-G2组错误数显著减少，即注射施普善与口服本发明脑多肽组合物均产生了改善记忆的效果；实验组与阳性对照组在降低错误次数上无明显统计学差异，说明口服本发明脑多肽组合物与施普善注射剂在改善记忆方面的效果相当。

实施例11 急性毒性试验

样品：按实施例 1制备的样品。

实验动物：SPF 级昆明种小鼠。

小鼠经口急性毒性试验（MTD）：选用 18 ～ 22 克 SPF 级昆明种小鼠 20 只，雌雄各半，以 25g/kg·BW 的剂量经口二次灌胃，给药后连续观察 14 天。记录中毒表现及死亡情况。

急性毒性试验：以 25g/kg·BW 的剂量灌胃两种性别的小鼠，观察 14 天。实验期间未见明显的中毒表现，观察期内无死亡。受试物对两种性别的小鼠的急性经口毒性（MTD）均大于 25g/kg·BW，根据《食品安全性毒理学评价程序和方法》（2003 年版）急性毒性分级，属无毒级。

实施例12 30天喂养试验

样品：按实施例1制备的样品。

实验动物：选用体重 60 ～ 80g， SD 大鼠 80 只，雌雄各半。

试验方法：剂量设计为：0.5、1、2g/kg·BW（以总氮计，分别相当于人拟用剂量的25倍、50 倍、100 倍）。将大鼠随机分为三个受试物组及对照组，每组 20 只，雌雄各半。对照组喂饲正常基础块料，受试物组则喂饲掺入不同剂量样品。连续观察 30 天。

观察指标及结果

一般情况观察：

每天观察动物的表现、行为、毒性表现和死亡情况。每周称体重 1 次和两次食物摄入量，计算每周及总的食物利用率。结果各组动物生长发育、活动均正常，无中毒表现和死亡，各组动物每周体重、体重增加量、进食量和食物利用率及总体重增加量、进食量和食物利用率均无统计学差异 (p >0.05)。

血液学检查：

测定血红蛋白含量（Hgb）、红细胞（RBC）及白细胞（WBC）计数，白细胞分类（淋巴、单核、中性粒、嗜酸、嗜碱）。实验末期血液学的各项指标均在正常值范围内，各组动物血红蛋白、红细胞及白细胞计数、白细胞分类与对照组相比均无统计学差异 (p >0.05)。

生化指标测定：

测定血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、尿素氮（BUN）、胆固醇（CHO）、甘油三酯（TG）、血糖（GLU）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、肌酐（CRE）。实验末期试验动物各项生化指标均在正常值范围内，各组动物血生化指标与对照组相比均无统计学差异(p >0.05)。

大体观察及病理组织检查：

试验末期颈椎脱臼处死动物，观察各主要脏器及胸、腹腔大体病理改变。取出全部动物的肝脏、肾脏、脾脏、睾丸，称重并计算脏器系数。取出对照组和高剂量组动物的肝脏、肾脏、脾脏、睾丸（或卵巢）、胃及十二指肠，用 12% 福尔马林固定，石蜡包埋、切片、 HE 染色，在光镜下进行组织学检查。各主要脏器(心、肝、脾、肺、肾、胃、肠等)均未见有意义的病理改变。

上述急性毒性试验和 30 天喂养试验结果表明本品属于无毒级，可以长期服用。

实施例13 改善记忆功能试验

样品：按实施例8所述配方及工艺制备的样品。人拟用剂量为20mg/kg·BW·日（以总氮计）。

受试对象：受试者未接受过类似测试，短期内未服用与受试功能有关的物品。服用受试样品前对受试者进行第一次记忆商测试后，按记忆商将受试者双盲法随机分为试食组与对照组，尽可能考虑文化水平、年龄等，进行均衡性检验。

试食方法: 试食组服用本品受试品，每人每日推荐服用量为每日 2 次，每次10mg/kg·BW，对照组服用安慰剂，连续服用 1 个月，每组 50 人。

试验方法按照《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版) 中辅助改善记忆功能的人体试食试验规程进行。

结果见表5~表7：

表5试食前各项分测验量表分

结果表明，试食前试食组与对照组比较，各项分测验量表分差异均无统计学意义。

表6试食后各项分测验量表分

注：*与对照组相比，P＜0.05；#与试食前相比，P＜0.05

结果表明，试食后试食组与对照组比较，各项分测验量表分均显著高于对照组。

表7试食前后记忆总量表分

注：*与对照组相比，P＜0.05；#与试食前相比，P＜0.05

结果表明，试食后试食组的记忆总量表分显著高于对照组，且显著高于试食组试食前。

由实施例11-13可见，本发明脑多肽组合物制备的固体饮料无毒，可长期服用，且改善记忆力的作用显著优于现有产品。

采用本发明脑多肽组合物制备的其他形式的食品、保健食品或特医食品如面包、饼干和液体饮料等，具有和实施例8的产品相应的功效，在此不在赘述。

以上仅为本发明的较佳实施方式，而非其可实施方式的穷举，本领域技术人员在本发明精神的原则下所做出的任何不具有创造性的改进，如将本发明所述脑多肽组合物加入食品原料中采用现有技术制备的其他食品，均应认为在本发明的保护范围内。

Claims (10)

1.一种具有改善记忆功能的用于口服的脑多肽组合物，其特征在于：其由健康哺乳动物的脑组织经水解得到，以含氮质量计，其由40-90%的小分子肽和10-60%的游离氨基酸组成，其中所述小分子肽的分子量为10kDa以下。

2.根据权利要求1所述的具有改善记忆功能的用于口服的脑多肽组合物，其特征在于：以含氮质量计，所述小分子肽和游离氨基酸的含量分别为55-90%和10-45%。

3.根据权利要求2所述的具有改善记忆功能的用于口服的脑多肽组合物，其特征在于：以含氮质量计，所述小分子肽和游离氨基酸的含量分别为60-90%和10-40%。

4.根据权利要求3所述的具有改善记忆功能的用于口服的脑多肽组合物，其特征在于：以含氮质量计，所述小分子肽和游离氨基酸的含量分别为70-80%和20-30%。

5.根据权利要求1~4任一项所述的具有改善记忆功能的用于口服的脑多肽组合物，其特征在于：其由哺乳动物脑组织经匀浆、脱脂制得脑蛋白质，再将脑蛋白质经酶水解后制备而成。

6.根据权利要求5所述的具有改善记忆功能的用于口服的脑多肽组合物，其特征在于：所述酶水解为以胃蛋白酶和菠萝蛋白酶依次水解。

7.根据权利要求6所述的具有改善记忆功能的用于口服的脑多肽组合物，其特征在于：其采用以下步骤制备得到的：

（1）将哺乳动物脑组织清洗去杂，匀浆；

（2）将匀浆液煮沸，加入有机溶剂脱脂，得脑蛋白质溶液；

（3）将所述脑蛋白质溶液加入胃蛋白酶，于pH 1-3下酶解；

（4）酶解液调pH6-7，加入菠萝蛋白酶酶解；

（5）将步骤（4）得到的酶解液煮沸后降温至20-25℃，过滤，滤液过截留分子量10kDa的超滤膜，干燥，得所述脑多肽组合物。

8.根据权利要求7所述的具有改善记忆功能的用于口服的脑多肽组合物，其特征在于：步骤（3）所述胃蛋白酶加入量为3-5mg/g脑组织，胃蛋白酶酶解温度为30-40℃，胃蛋白酶酶解时间为5-10h；步骤（4）所述菠萝蛋白酶加入量为0.1-0.2mg/g脑组织，菠萝蛋白酶酶解温度为35-55℃，菠萝蛋白酶酶解时间为3-4h。

9.根据权利要求7所述的具有改善记忆功能的用于口服的脑多肽组合物，其特征在于：步骤（2）中将匀浆液冷却至25-30摄氏度后进行脱脂，所述有机溶剂选自乙醇、丙酮或正己烷，所述有机溶剂的用量为匀浆液体积的1-10倍。

10.权利要求1~4任一项所述的脑多肽组合物在制备具有改善记忆功能的食品、保健食品或特医食品中的应用。