CN108398551A - 一种用于酶联免疫试剂盒的组合物以及抗核抗体谱检测试剂盒及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及酶联免疫技术领域，公开了一种用于酶联免疫试剂盒的组合物以及抗核抗体谱检测试剂盒及其制备方法。本发明所述组合物包括封闭液和酶标稀释液；所述封闭液含有酪蛋白、蔗糖、PBS、甘露醇、Tween20、甜菜碱和叠氮钠，所述酶标稀释液含有PBS、酪蛋白、对羟基苯甲酸钠、PEG、甜菜碱和Proclin300。本发明从酶联免疫试剂盒的封闭液和酶标稀释液入手，通过选择适宜成分，使得酶联免疫试剂盒能够较长时间保持检测的稳定性。同时，以所述组合物制备的抗核抗体检测试剂盒具有较佳稳定性，保质期在2年以上。

Description

一种用于酶联免疫试剂盒的组合物以及抗核抗体谱检测试剂 盒及其制备方法
技术领域
本发明涉及酶联免疫技术领域，具体涉及一种用于酶联免疫试剂盒的组合物以及抗核抗体谱检测试剂盒及其制备方法。
背景技术
抗核抗体(ANA)是具有多种细胞核成分的自身抗体，是以真核细胞的核成分为靶抗原的自身抗体的总称，可用于多种自身免疫性疾病的筛查。自身免疫性疾病(AID)是指机体的免疫效应或免疫效应分子，针对自身组织或细胞产生的一系列病理性免疫应答反应，导致自身组织器官损伤的一大类疾病，其发病机理十分复杂多变，往往累及皮肤、浆膜、关节、肾及中枢神经系统等。一般常见的疾病有系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎(RA)、干燥综合征(SS)、混合性结缔组织病(MCTD)、弥漫性结缔组织病(CTD)、自身免疫性肝炎(AIH)、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、系统性硬皮病(PSS)、多肌炎/皮肌炎(PM/DM)等。很多AID是以临床症状出现之前数月甚至数年即呈现自身抗体为特征的慢性疾病，同时自身抗体也可以预示疾病特异性、严重程度和进展。因此对这些自身抗体的筛查和鉴别就有着重要的意义。同时，由于AID的病程一般较长，发作和缓解经常交替出现，因此及时准确检测这些自身抗体也可对AID的早期正确诊断和疗效评价等方面起到很好的辅助作用。
目前有很多检测抗核抗体的方法，包括间接免疫荧光分析法或免疫印迹法，但还是存在各自的缺点。间接免疫荧光分析法是通过形成的荧光结合物来推断自身抗体的类别，缺乏一个具体客观的诊断，需要利用其他技术进行二次证实，如免疫印迹法、酶联免疫法等。免疫印记法所需标本量大、操作繁琐、检测时间过长、成本较高等问题。金标渗滤法不能准确地得出具体的项目结果，检测结果的准确性相对较低、灵敏度也较低。传统的琼脂双向扩散法、对流免疫电泳法、间接血凝法和补体结合试验等都具有所需标本量大、操作麻烦、检测时间过长、价格昂贵、检测结果准确性较低等缺点。
近年出现了可以检测16种抗核抗体的蛋白芯片，例如CN105021811A。然而，传统的蛋白芯片操作复杂、成本高，且试剂盒的稳定期一般都是2-8℃稳定期1年，稳定性不高。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种用于酶联免疫试剂盒的组合物，使得所述组合物用于制备酶联免疫试剂盒时能够显著提高试剂盒在低温和室温下的稳定性，保存时间延长；
本发明的另外一个目的在于提供上述组合物在制备酶联免疫试剂盒中的应用，特别是用于检测抗核抗体的相关试剂盒；
本发明的另外一个目的在于提供一种包含上述组合物的抗核抗体菌抗体谱检测试剂盒及其制备方法，使得所述试剂盒在低温和室温下具有较长时间的稳定性。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种用于酶联免疫试剂盒的组合物，包括封闭液和酶标稀释液；所述封闭液含有酪蛋白、蔗糖、PBS、甘露醇、Tween20、甜菜碱和叠氮钠，所述酶标稀释液含有PBS、酪蛋白、对羟基苯甲酸钠、PEG、甜菜碱和Proclin300。
针对现有酶联免疫试剂盒稳定较差、保存时间较短的缺陷，本发明意外发现了从制备试剂盒的封闭液和酶标稀释液(用于稀释酶标抗原或抗体用)入手，通过选择合适的组分完善两者的组成，能够显著提高酶联免疫试剂盒的稳定性和保存时间。
作为优选，所述封闭液含有2％-4％酪蛋白，2％-5％蔗糖，1％-3％甘露醇，0.5％-1％甜菜碱，0.02％-0.05％Tween20，0.01M PBS，0.05％叠氮钠，pH值为7.4-7.6，余量为水，所述百分比为质量百分比(w/v)；在本发明具体实施方式中，所述封闭液所述封闭液含有2％的酪蛋白、2％的蔗糖、0.01M PBS、1％甘露醇、0.05％Tween20、0.5％甜菜碱和0.05％叠氮钠，pH值为7.4-7.6，余量为超纯水。
作为优选，所述酶标稀释液含有0.01M PBS,2％-4％酪蛋白,0.5％-1％甜菜碱，0.2％-1％对羟基苯甲酸钠、1.5％-5％PEG、0.05％Proclin300，pH值为7.4-7.6，余量为水，所述百分比中除Proclin300是体积百分比之外，其余都是质量百分比(w/v)；在本发明具体实施方式中，所述酶标稀释液含有0.01M PBS、2％的酪蛋白、0.5％对羟基苯甲酸钠、1.5％PEG、0.5％甜菜碱和0.05％Proclin300，pH值为7.4-7.6，余量为水。其中PEG优选为PEG10000。
本发明利用上述组合物进行抗核抗体酶联免疫试剂盒的制备，与采用常规的封闭液和酶标稀释液的抗核抗体酶联免疫试剂盒相比，在低温(2-8℃)下，本发明试剂盒在放置24个月后仍然能够保持较高的稳定性，而对照的试剂盒在放置18个月后就已经出现很大程度的不稳定性；在室温(18-28℃)下，本发明试剂盒在放置9个月后仍然能够保持较高的稳定性，而对照的试剂盒在放置6个月后就已经出现很大程度的不稳定性，放置9个月后已经无法保证检测的准确性。
基于上述优异的技术效果，本发明提出了所述组合物在制备酶联免疫试剂盒中的应用，特别是在制备抗核抗体酶联免疫检测试剂盒中的应用。
同时，本发明还提供一种抗核抗体谱检测试剂盒，包括以下组分：
包被有细胞核成分抗原的蛋白芯片、用酶标稀释液稀释的酶标抗体、样品稀释液、洗涤液和显色液；其中，所述蛋白芯片包被细胞核成分抗原后采用封闭液封闭，所述封闭液含有酪蛋白、蔗糖、PBS、甘露醇、Tween20、甜菜碱和叠氮钠，所述酶标稀释液含有PBS、酪蛋白、对羟基苯甲酸钠、PEG、甜菜碱和Proclin300，所述封闭液和酶标稀释液与前述组合物方案相同。
作为优选，所述细胞核成分抗原选自dsDNA、组蛋白、Sm、U1RNP、SSA-60、SSA-52、SSB、Scl-70、Jo-1、核糖体P蛋白、PCNA、CENP-B、PM-Scl、AMA-M2、Mi-2、Ku、核小体、LAMP-2、AGA95中的一种或两种以上；在本发明具体实施方式中，所述细胞核成分抗原为dsDNA、组蛋白、Sm、U1RNP、SSA-60、SSA-52、SSB、Scl-70、Jo-1、核糖体P蛋白、PCNA、CENP-B、PM-Scl、AMA-M2、Mi-2、Ku、核小体、LAMP-2和AGA95。
在包被中，细胞核成分抗原采用CB缓冲液、PBS缓冲液或Tris缓冲液为细胞核成分抗原稀释缓冲液进行包被；作为优选，所述缓冲液选自pH9.6的CB缓冲液、pH7.4的PBS缓冲液(优选0.01M)或pH8.5的Tris缓冲液(优选20mM)，更优选地，在缓冲液中添加PEG或PVP、海藻糖、甘油以及Proclin300，同时添加了水溶性的环糊精，可使包被更稳定、细胞核成分抗原包被点更规则、更圆，CV更小。
其中，水溶性环糊精可以是Captisol、2-羟基-β-环糊精或羧甲基-β-环糊精等，浓度为0.02％；PEG的浓度为2.5％，PVP的浓度为0.5-0.6％，海藻糖的浓度为5-10％，甘油的浓度为15％，Proclin300浓度为0.05％，所述百分比中除Proclin300是体积百分比之外，其余都是质量百分比(w/v)。
更为具体地，在包被过程中：
dsDNA、Sm、U1RNP、Scl-70、Jo-1、组蛋白、核小体7种抗原分别用PH7.4-PH7.6的0.01M的PBS缓冲液(其中含0.5％的PVP、5％的海藻糖、0.05％的Proclin300、0.02％的2-羟基-β-环糊精)进行稀释包被，终浓度分别为40ug/ml、10ug/ml、10ug/ml、15ug/ml、20ug/ml、18ug/ml、12ug/ml；
SSA60、SSA52、SSB、PCNA、CENP-B、PM-Scl、核糖体P蛋白7种抗原分别用PH7.4-PH7.6的0.01M的PBS缓冲液(其中含5％的PEG4000、10％的海藻糖、0.05％的Proclin300、0.02％的2-羟基-β-环糊精)进行稀释包被，终浓度分别为10ug/ml、8ug/ml、8ug/ml、20ug/ml、25ug/ml、15ug/ml、15ug/ml。
Mi-2和Ku分别用PH9.6的CB缓冲液稀释至浓度30ug/ml和60ug/ml。
AMA-M2、LAMP-2和AGA95分别用PH8.5的0.02M的Tris缓冲液(其中含5％的PEG4000、0.05％的Proclin300、2.5％的海藻糖，以及0.02％的Captisol和15％的甘油)进行稀释包被，终浓度分别为：25ug/ml、20ug/ml和40ug/ml。
此外，本发明试剂盒中的蛋白芯片还包括阴性质控点、阳性质控点、样品质控点、酶标质控点、参考曲线点以及位置参考点中的一个或两个以上；更为具体地，至少一个阴性质控点(NC)和一个阳性质控点(PC)；至少一个样品质控点(SC)和一个酶标质控点(EC)；至少5个标准曲线点(S1-S5)以及一个芯片本身包被的位置参考点(Loc)。
在具体实施方式中，本发明蛋白芯片上还包含一个阴性质控点(NC)和一个阳性质控点(PC)；一个样品点质控点(SC)和一个酶标质控点(EC)；5个参考曲线点(S1-S5)以及一个芯片本身包被的位置参考点(Loc)。
其中，阳性质控点可以是人IgG，则对应使用的酶标抗体就是抗人IgG的酶标。阳性质控点也可以是包被BSA偶联的DNP，则对应使用的酶标抗体就是抗人IgG的酶标以及抗DNP的酶标的混合液。
而阴性质控点可以是低于反应信号值的微量浓度的人IgG，或采用其他的无关蛋白来替代；样品质控点可以是兔抗人的IgG或其他的抗人IgG(如羊抗人IgG)；酶标质控点可以是人IgG(酶标是抗人IgG的酶标)，或其他的抗兔的抗体(酶标用的是兔抗人IgG),或者抗羊的抗体(酶标就用羊抗人的IgG)。所述参考曲线点在具体实施过程中是5个由低到高浓度的人IgG，用于内部定标，结果的判读。
芯片本身的位置参考点包被的是2ug/ml的人IgG溶液，主要是对阵列取值时的定位作用。
本发明所述酶标抗体中酶标记物为酶标抗人IgG，如羊抗人或兔抗人IgG；所述酶可选择常规的酶，如辣根过氧化物酶、AP，亲和素，吖啶酯等。
本发明使用的显色液是增强型化学发光底物(ECL)，通过荧光检测装置或仪器进行反应结果的读取。在其他实施例中也可以使用其他的显色底物，如p-NPP，TMB等。
本发明还对应提供了所述试剂盒的制备方法，包括：
将细胞核成分抗原在蛋白芯片上进行包被，包被后洗涤，然后加入封闭液封闭，获得包被有细胞核成分抗原的蛋白芯片，所述封闭液含有酪蛋白、蔗糖、PBS、甘露醇、Tween20、甜菜碱和叠氮钠；
配制含有PBS、酪蛋白、对羟基苯甲酸钠、PEG、甜菜碱和Proclin300的酶标稀释液并稀释酶标抗体，获得用酶标稀释液稀释的酶标抗体，然后配制样品稀释液、洗涤液和显色液，获得抗核抗体谱检测试剂盒。
由以上技术方案可知，本发明从酶联免疫试剂盒的封闭液和酶标稀释液入手，通过选择适宜成分，使得酶联免疫试剂盒能够较长时间保持检测的稳定性。同时，以所述组合物制备的抗核抗体检测试剂盒具有较佳稳定性，保质期在2年以上。
具体实施方式
本发明公开了一种用于酶联免疫试剂盒的组合物以及抗核抗体谱检测试剂盒及其制备方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明所述组合物、试剂盒和应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的组合物、试剂盒和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
以下就本发明所提供的一种用于酶联免疫试剂盒的组合物以及抗核抗体谱检测试剂盒及其制备方法做进一步说明。
实施例1：本发明所述抗核抗体谱检测试剂盒的制备
1、细胞核成分抗原和相关蛋白的包被
蛋白芯片阵列中的PC、NC、S1、S2、S3、S4、S5、EC点分别包被的是2ug/ml、0.01ug/ml、0.1ug/ml、0.5ug/ml、2ug/ml、4ug/ml、8ug/ml、2ug/ml的人IgG，稀释缓冲液为PH9.6的CB缓冲液(其中含2.5％的PEG4000、5％的海藻糖，0.05％的Proclin300，以及15％的甘油)。
SC点包被的是2ug/ml的羊抗人IgG抗体，稀释缓冲液为PH9.6的CB缓冲液。
Loc点包被的是2ug/ml的人IgG，稀释缓冲液是PH9.6的CB缓冲液。
dsDNA、Sm、U1RNP、Scl-70、Jo-1、组蛋白、核小体7种抗原分别用PH7.4-PH7.6的0.01M的PBS缓冲液(其中含0.5％的PVP、5％的海藻糖、0.05％的Proclin300、0.02％的2-羟基-β-环糊精)进行稀释，终浓度分别为40ug/ml、10ug/ml、10ug/ml、15ug/ml、20ug/ml、18ug/ml、12ug/ml。
SSA60、SSA52、SSB、PCNA、CENP-B、PM-Scl、核糖体P蛋白7种抗原分别用PH7.4-PH7.6的0.01M的PBS缓冲液(其中含5％的PEG4000、10％的海藻糖，0.05％的Proclin300、0.02％的2-羟基-β-环糊精)进行稀释，终浓度分别为10ug/ml、8ug/ml、8ug/ml、20ug/ml、25ug/ml、15ug/ml、15ug/ml。
Mi-2和Ku分别用PH9.6的CB缓冲液稀释至浓度30ug/ml和60ug/ml。
AMA-M2、LAMP-2和AGA95分别用PH8.5的0.02M的Tris缓冲液(其中含5％的PEG4000、0.05％的Proclin300,2.5％的海藻糖，以及0.02％的Captisol和15％的甘油)进行稀释，终浓度分别为：25ug/ml、20ug/ml和40ug/ml。
所有按照上述稀释好的抗体或抗原分别用0.22um的滤膜过滤，然后通过BioDot精密点样仪按照要求进行阵列的包被。全部蛋白包被完成之后，将芯片用膜盖住，置于2-8℃，过夜包被24-30h。蛋白芯片阵列可参照如下表呈现的阵列，也可根据实际需要调整，不做限制：
表1蛋白芯片阵列
PC S1 dsDNA SSA60 PCNA Loc
NC S2 组蛋白 SSA52 CENP-B 核小体
SC S3 Sm Scl-70 PM-Scl LAMP-2
EC S4 U1RNP Jo-1 AMA-M2 AGA95
Loc S5 SSB 核糖体P蛋白 Mi-2 Ku
2、封闭
取出包被的芯片，用PH7.4的PBST洗涤液清洗3次，然后每孔加入150ul的封闭液(含有2％的酪蛋白、2％的蔗糖、0.01M PBS、1％甘露醇、0.05％Tween20、0.5％甜菜碱和0.05％叠氮钠，pH值为7.4-7.6，余量为超纯水)，室温封闭1h，然后拍干，于湿度15％以下，室温放置，干燥4h，后密封、2-8℃保存，获得包被有细胞核成分抗原的蛋白芯片。
3、配制酶标稀释液、酶标抗体、显色液、样品稀释液和浓缩洗涤液
酶标稀释液：含有0.01M PBS、2％的酪蛋白、0.5％对羟基苯甲酸钠、1.5％PEG、0.5％甜菜碱和0.05％Proclin300，pH值为7.4-7.6，余量为水；
酶标抗体：辣根过氧化物酶标记的兔抗人IgG抗体；
使用时，用酶标稀释液将辣根过氧化物酶标记的兔抗人IgG抗体稀释至6K倍(酶标抗体浓度)。
显色液：ECL显色剂。
样品稀释液：0.02M Tris，0.15M NaCl，0.05％Tween20，0.01％酪蛋白，pH7.4。
洗涤液：0.02M Tris，0.15M NaCl，0.05％Tween20，pH7.4。
上述包被有细胞核成分抗原的蛋白芯片、酶标稀释液稀释的酶标抗体和显色液、以及样品稀释液和洗涤液组成本发明抗核抗体谱检测试剂盒。
4、检测方法
(1)取出蛋白芯片，平衡至室温；
(2)加样：将阴性和阳性对照血清、以及用样品稀释液稀释了101倍的待测样品，每孔100uL加入待测芯片孔中反应。
(3)温育：室温静置反应30min。加300uL洗涤液，洗涤3次，每次静置1min。
(4)加酶标抗体：每孔加入100uL酶标抗体。
(5)温育：室温静置反应30min。加300uL洗涤液，洗涤3次，每次静置1min。
(6)显色：每孔加入ECL显色剂50uL，室温静置，避光反应30min。
(7)测定：30min内，用化学发光芯片分析仪读取并计算每个反应孔对应抗体的信号值；，通过S1-S5五点校准的标准曲线，来计算并判断结果的阴阳性及强度。
实施例2：本发明所述试剂盒稳定性检测
对照试剂盒：按照实施例1的方法进行制备，区别在于封闭液为常规的含3％的BSA、0.05％Proclin300的PBS缓冲液，PH7.4；酶标稀释液采用现有技术CN105021811A中的酶标稀释液：0.46％三羟甲基氨基甲烷、5％的山羊血清、0.8％的NaCl、0.1％的吐温20、0.04％的乙二胺四乙酸、0.5％对羟基苯甲酸钠、0.1％的Proclin300，余量为去离子水。
试验试剂盒：实施例1试剂盒；
检测方法：将两种试剂盒分别置于室温(18-28℃)和低温(2-8℃)下放置一段时间，然后采用相同血清按照实施例1检测方法检测，统计仪器信号值，结果见表2-5。
1、实施例1试剂盒低温下的稳定性数据
表2
由表2可以看出，本发明试剂盒分别检测了在低温下放置0、6、12、18、24个月的检测信号值，同时统计了各个信号值的比值，结果显示，放置了24个月的试剂盒，其检测信号值与放置0、6、12、18个月的检测信号值相比，几乎均处于90％以上，证明本发明所述试剂盒在低温条件下放置24个月仍然具备较高的检测稳定性。
2、实施例1试剂盒室温下的稳定性数据
表3
由表3可以看出，本发明试剂盒分别检测了在常温下放置0、3、6、9、12个月的检测信号值，同时统计了各个信号值的比值，结果显示，放置了9个月的试剂盒，其检测信号值与放置0、3、6个月的检测信号值相比，几乎均处于90％以上，证明本发明所述试剂盒在常温条件下放置9个月仍然具备较高的检测稳定性。
3、实施例1试剂盒和对照试剂盒低温下的稳定性数据对比
表4
由表4可以看出，本发明试剂盒和对照试剂盒分别检测了在低温下放置6、12、18、24个月的检测信号值，同时统计了相同时间下，两个试剂盒的信号值的比值，结果显示，放置了18个月的对照试剂盒，其检测信号值开始出现显著的下降，结合表2数据可以明显得出对照试剂盒的稳定性不如本发明试剂盒的结论，而两者的差别仅在于封闭液和酶标稀释液。
4、实施例1试剂盒和对照试剂盒常温下的稳定性数据对比
表5
由表5可以看出，本发明试剂盒和对照试剂盒分别检测了在常温下放置3、6、9个月的检测信号值，同时统计了相同时间下，两个试剂盒的信号值的比值，结果显示，放置了6个月的对照试剂盒，其检测信号值开始出现显著的下降，放置了9个月的对照试剂盒，已经无法准确检测，结合表3数据可以明显得出对照试剂盒的稳定性不如本发明试剂盒的结论，而两者的差别仅在于封闭液和酶标稀释液。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (12)

1.一种用于酶联免疫试剂盒的组合物，其特征在于，包括封闭液和酶标稀释液；所述封闭液含有酪蛋白、蔗糖、PBS、甘露醇、Tween20、甜菜碱和叠氮钠，所述酶标稀释液含有PBS、酪蛋白、对羟基苯甲酸钠、PEG、甜菜碱和Proclin300。
2.根据权利要求1所述组合物，其特征在于，所述封闭液含有2％-4％酪蛋白，2％-5％蔗糖，1％-3％甘露醇，0.5％-1％甜菜碱，0.02％-0.05％Tween20，0.01M PBS，0.05％叠氮钠，pH值为7.4-7.6，余量为水。
3.根据权利要求1所述组合物，其特征在于，所述酶标稀释液含有0.01M PBS,2％-4％酪蛋白,0.5％-1％甜菜碱，0.2％-1％对羟基苯甲酸钠、1.5％-5％PEG、0.05％Proclin300，pH值为7.4-7.6，余量为水。
4.权利要求1-3任意一项所述组合物在制备酶联免疫试剂盒中的应用。
5.根据权利要求4所述应用，其特征在于，所述酶联免疫试剂盒为抗核抗体酶联免疫检测试剂盒。
6.一种抗核抗体谱检测试剂盒，其特征在于，包括以下组分：
包被有细胞核成分抗原的蛋白芯片、用酶标稀释液稀释的酶标抗体、样品稀释液、洗涤液和显色液；其中，所述蛋白芯片包被细胞核成分抗原后采用封闭液封闭，所述封闭液含有酪蛋白、蔗糖、PBS、甘露醇、Tween20、甜菜碱和叠氮钠，所述酶标稀释液含有PBS、酪蛋白、对羟基苯甲酸钠、PEG、甜菜碱和Proclin300。
7.根据权利要求6所述试剂盒，其特征在于，所述封闭液含有2％-4％酪蛋白，2％-5％蔗糖，1％-3％甘露醇，0.5％-1％甜菜碱，0.02％-0.05％Tween20，0.01MPBS，0.05％叠氮钠，pH值为7.4-7.6，余量为水。
8.根据权利要求6所述试剂盒，其特征在于，所述酶标稀释液含有0.01M PBS,2％-4％酪蛋白,0.5％-1％甜菜碱，0.2％-1％对羟基苯甲酸钠、1.5％-5％PEG、0.05％Proclin300，pH值为7.4-7.6，余量为水。
9.根据权利要求6所述试剂盒，其特征在于，所述细胞核成分抗原选自dsDNA、组蛋白、Sm、U1RNP、SSA-60、SSA-52、SSB、Scl-70、Jo-1、核糖体P蛋白、PCNA、CENP-B、PM-Scl、AMA-M2、Mi-2、Ku、核小体、LAMP-2、AGA95中的一种或两种以上。
10.根据权利要求6或9所述试剂盒，其特征在于，所述细胞核成分抗原采用CB缓冲液、PBS缓冲液或Tris缓冲液为细胞核成分抗原稀释缓冲液进行包被。
11.根据权利要求2-10任意一项所述试剂盒，其特征在于，所述蛋白芯片还包括阴性质控点、阳性质控点、样品质控点、酶标质控点、参考曲线点以及位置参考点中的一个或两个以上。
12.权利要求6所述试剂盒的制备方法，其特征在于，包括：
将细胞核成分抗原在蛋白芯片上进行包被，包被后洗涤，然后加入封闭液封闭，获得包被有细胞核成分抗原的蛋白芯片，所述封闭液含有酪蛋白、蔗糖、PBS、甘露醇、Tween20、甜菜碱和叠氮钠；
配制含有PBS、酪蛋白、对羟基苯甲酸钠、PEG、甜菜碱和Proclin300的酶标稀释液并稀释酶标抗体，获得用酶标稀释液稀释的酶标抗体，然后配制样品稀释液、洗涤液和显色液，获得抗核抗体谱检测试剂盒。
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