CN108387732A - 一种基于双分子荧光互补技术的mpo检测试剂盒、制备及使用方法 - Google Patents

一种基于双分子荧光互补技术的mpo检测试剂盒、制备及使用方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108387732A
CN108387732A CN201711271892.9A CN201711271892A CN108387732A CN 108387732 A CN108387732 A CN 108387732A CN 201711271892 A CN201711271892 A CN 201711271892A CN 108387732 A CN108387732 A CN 108387732A
Authority
CN
China
Prior art keywords
mpo
fluorescin
terminal segment
antibody
preparation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201711271892.9A
Other languages
English (en)
Inventor
徐林
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Nanjing Tianzong Yikang Biological Science & Technology Co Ltd
Original Assignee
Nanjing Tianzong Yikang Biological Science & Technology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nanjing Tianzong Yikang Biological Science & Technology Co Ltd filed Critical Nanjing Tianzong Yikang Biological Science & Technology Co Ltd
Priority to CN201711271892.9A priority Critical patent/CN108387732A/zh
Publication of CN108387732A publication Critical patent/CN108387732A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
    • G01N33/533—Production of labelled immunochemicals with fluorescent label
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/544—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being organic

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)

Abstract

本发明提供了一种基于双分子荧光互补技术的MPO检测试剂盒、制备及使用方法。所述试剂盒包括：抗MPO抗体偶联的荧光蛋白N端片段、抗MPO抗体偶联的荧光蛋白C端片段；本发明还公开了所述一种基于双分子荧光互补技术的MPO诊断试剂盒的制备方法，该方法包括：抗MPO抗体偶联的荧光蛋白N端片段的制备、抗MPO抗体偶联的荧光蛋白C端片段的制备；最后还公开了该试剂盒的使用方法；本发明试剂盒具有操作简单、特异性好、免清洗、准确度高等优点，便于临床检测使用，其应用于心血管疾病的监测，可以提高心血管疾病诊断的准确率，具有极大的市场价值。

Description

一种基于双分子荧光互补技术的MPO检测试剂盒、制备及使用 方法
技术领域
本发明涉及一种双分子荧光互补技术用于体外免疫诊断检测人体内MPO的含量，属于疾病诊断检测领域。
背景技术
髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)又称过氧化物酶，是由中性粒细胞、单核细胞和某些组织的巨噬细胞分泌的含血红素辅基的血红素蛋白酶，是血红素过氧化物酶超家族成员之一。在成熟的粒细胞中，MPO是含量最丰富的糖蛋白，约占外周血多形核中性粒细胞 (PMNs)内总蛋白质含量的5％，血液中95％的MPO来源于PMNs。
MPO的相对分子质量为150×103，是由2个亚单位聚合而成的二聚体，每个亚单位又由一条重链(α链，相对分子质量约60×103)和一条轻链(β链，相对分子质量约15×103)所构成。2个亚单位在α链处由1个二硫键相连，重链具有亚铁卟啉基团，说明MPO是铁依赖性的。MPO以3种亚形存在于髓系细胞中，分别为MPO I、II、III。3种亚型主要是重链有差异，轻链的差异较小，导致它们在相对分子质量及疏水性等方面不同，3种亚型在功能上的差异还不明确，有待进一步研究。
冠心病是心血管系统中最常见的疾病，而动脉粥样硬化(AS)又是形成冠心病的重要病理基础。AS发病过程中通常出现氧化低密度脂蛋白，进而巨噬细胞吞噬脂质变成泡沫细胞，泡沫细胞的形成在AS的发生机制中起关键作用。研究发现MPO有促进AS病变形成的作用， MPO通过产生自由基和多种反应性物质，促进斑块形成和不稳定性增加，加速AS进展，进而引起多种并发症如急性冠脉综合征(ACS)。研究发现，MPO缺陷的个体罹患心血管疾病的危险性明显下降。MPO水平的升高不仅与患冠状动脉疾病易感性相关，还可以预测早期患心肌梗死的危险性。
MPO作为一种新的预测ACS的炎症标志物，能识别心肌肌钙蛋白T(cTnT)阴性的ACS患者未来发生不良心血管事件的危险性。国外文献指出，MPO基线水平能独立预测其未来30天到6个月内突发心脏不良事件(心肌梗死、再梗死、血管重建或死亡)的危险性。权威杂志新英格兰医学期刊在2003年报道了一项研究，通过检测604名胸痛患者的MPO浓度水平，能预测30天至6个月内发生心血管事件的概率。如果单独检测cTnT，只有54％的患者被预测，而采用检测MPO预测出的概率提高到84.5％。
常用的MPO检测方法有金标定性试验、荧光免疫法、酶联免疫吸附试验和磁微粒化学发光法。金标定性实验快速，但该方法灵敏度低、无法动态监测MPO含量的变化。荧光免疫法操作复杂，对操作环境和操作人员有较高的要求。酶联免疫吸附试验法的检测灵敏度较低，目前主要应用于传染性疾病筛查等对检测灵敏度要求较低的项目，并且反应时间较长。磁微粒化学发光法是从酶联免疫吸附试验法改进而来，与其相比具有操作简单，检测速度快等特点，但是磁微粒化学发光法是非均相反应，操作过程需要清洗，降低了检测的可重复性。
为解决上述问题，如果能利用MPO的抗体，以双分子荧光互补技术为平台，研发出一种针对心血管疾病诊断的MPO快速检测试剂。使其与现有检测试剂相比，具有操作方便、灵敏度高、检测快速、精密度高等优点；将其应用于心血管疾病的监测，可以提高心血管疾病诊断的准确率，则就会受到市场的广泛欢迎和具有极大的市场价值。
发明内容
针对现有技术中存在的技术问题，本发明提供一种可用于定量检测MPO的检测试剂盒、其制备及使用方法。
本发明通过以下技术方案实现：
一种制备基于双分子荧光互补技术MPO检测试剂盒的方法，包括如下步骤：
1)抗MPO抗体偶联荧光蛋白N端片段；
2)抗MPO抗体偶联荧光蛋白C端片段；
在上述技术方案中，所述抗MPO抗体为针对MPO不同表位的单克隆抗体或多克隆抗体。
在上述方案中，所述抗MPO抗体偶联荧光蛋白N端片段的步骤中，荧光蛋白N端片段与抗MPO抗体的质量比为1∶1-10。
在上述方案中，所述抗MPO抗体偶联荧光蛋白C端片段的步骤中，荧光蛋白C端片段与抗MPO抗体的质量比为1∶1-10。
根据以上任一技术方案所述所制备的基于双分子荧光互补技术的MPO检测试剂盒。其主要组成包括：
1)抗MPO抗体偶联的荧光蛋白N端片段；
2)抗MPO抗体偶联的荧光蛋白C端片段。
以上任一技术方案所述的试剂盒的使用方法，其特征在于：包括如下步骤：
1)在试剂盒的反应孔中加入样品、抗MPO抗体偶联的荧光蛋白N端片段和抗MPO抗体偶联的荧光蛋白C端片段，混合反应5-60分钟；
2)激发光照射反应孔，测量每个反应孔发光量获得荧光信号值。
此试剂盒的反应孔可以是微孔板、微流控试剂盘、反应杯、反应管等。
附图说明
图1是本发明实施例提供的基于双分子荧光互补技术的MPO检测试剂盒原理示意图，其中，1-抗MPO抗体，2-连接剂，3-荧光蛋白N端片段，4-待测物(MPO)，5-抗MPO抗体，6-荧光蛋白C端片段，7-连接剂。
图2是本发明实施例提供的基于双分子荧光互补技术的MPO检测试剂盒检测线性范围图。
图3是本发明实施例提供的基于双分子荧光互补技术的MPO检测试剂盒结果相关性比较。
具体实施方式
以下参考附图对本发明的基于双分子荧光互补技术的MPO检测试剂盒、制备及其使用方法进行详细说明。
实施例1
抗MPO抗体偶联荧光蛋白N端片段，以黄色荧光蛋白(YFP)1-154氨基酸的片段YFPN为例，具体实施过程为：
1)将0.1mg YFPN蛋白加入到离心管中，用0.05mol/L pH9.5碳酸盐缓冲液(CB)配制将YFPN蛋白稀释到1mg/ml。
2)在通风橱中加入终浓度为1.25％的戊二醛。
3)37℃水浴反应2h。
4)用脱盐柱Sephadex G-25或0.05mol/LpH9.5CB透析除去过量戊二醛。
5)取0.1mg抗MPO抗体，用0.05mol/LpH9.5CB配制1mg/ml抗体，将活化的YFPN 蛋白和抗体混合。
6)4℃，反应过夜。
7)封闭；加入50μl 0.2mol/L赖氨酸溶液，室温封闭2h，以封闭残留的醛基，终止反应。
8)4℃放置2h。
9)将反应物通过Sephadex G-200凝胶柱或用0.45μm滤膜除去多聚体不溶物，用0.01mol/L pH7.2PBS透析纯化偶联物，使用前稀释至所需浓度。
实施例2
抗MPO抗体偶联荧光蛋白C端片段，以黄色荧光蛋白(YFP)155-238氨基酸的片段YFPC为例，具体实施过程为：
1)将0.1mg YFPC蛋白加入到离心管中，用0.05mol/L pH9.5碳酸盐缓冲液(CB)配制将YFPC蛋白稀释到1mg/ml。
2)在通风橱中加入终浓度为1.25％的戊二醛。
3)37℃水浴反应2h。
4)用脱盐柱Sephadex G-25或0.05mol/L pH9.5CB透析除去过量戊二醛。
5)取0.1mg抗MPO抗体，用0.05mol/L pH9.5CB配制1mg/ml抗体，将活化的YFPC 蛋白和抗体混合。
6)4℃，反应过夜。
7)封闭：加入50μl 0.2mol/L赖氨酸溶液，室温封闭2h，以封闭残留的醛基，终止反应。
8)4℃放置2h。
9)将反应物通过Sephadex G-200凝胶柱或用0.45μm滤膜除去多聚体不溶物，用0.01mol/L pH7.2PBS透析纯化偶联物，使用前稀释至所需浓度。
实施例3
试剂盒主要组成：
1)抗MPO抗体偶联的荧光蛋白N端片段；
2)抗MPO抗体偶联的荧光蛋白C端片段。
实施例4
试剂盒使用方法，包括如下步骤：
1)在试剂盒的反应孔中加入样品、抗MPO抗体偶联的荧光蛋白N端片段和抗MPO抗体偶联的荧光蛋白C端片段，混合反应5-60分钟；
2)激发光照射反应孔，测量每个反应孔发光量获得荧光信号值。
此试剂盒的反应孔可以是微孔板、微流控试剂盘、反应杯、反应管等。
实施例5
本发明试剂盒方法学评价：
1.线性
配制浓度为0ng/ml、5ng/ml、20ng/ml、100ng/ml、400ng/ml、1200ng/ml的MPO标准品溶液。在反应孔中分别加入20μl标准品、加入50μl抗MPO抗体偶联的荧光蛋白N端片段，加入50μl抗MPO抗体偶联的荧光蛋白C端片段，37℃温育10分钟。温育后，激发光照射反应孔，测量每个反应孔发光量获得荧光信号值。
以荧光信号值为纵坐标，标准品浓度为横坐标，绘制标准工作曲线(见附图2)。
2.准确度
回收率试验：用已知量MPO标准品加入到正常人的血清标本中，测量加入后浓度值与加入的理论值进行比较，计算MPO的回收率。检测结果如下：
样本编号 加入MPO浓度(ng/ml) 测量MPO的浓度(ng/ml) 回收率(％)
1 50 51.5 103
2 100 102.4 102.4
3 400 403.7 100.9
4 1000 991 99.1
3.精密度
选取3份不同浓度的标本，分别按照本发明所述的方法重复测量20次。根据20次的测量结果，计算平均偏差CV值。
4.分析灵敏度
分析灵敏度的定义为：是指在统计学意义上能与零剂量区别的量。重复20次测量零剂量点，计算其平均值(X)和标准差(SD)，以X+2SD的计算的浓度值即为该试剂盒的分析灵敏度。本发明试剂盒的分析灵敏度为2ng/ml。
5.抗干扰性
检测本发明的基于双分子荧光互补技术的免疫分析试剂在干扰性物质(溶血、高血脂、高胆红素)存在的情况下检测标本的准确性。将血红蛋白溶液分别取适量加入到MPO阳性血清标本中，使血清中血红蛋白的含量分别为0.5mg/ml、1.0mg/ml。将甘油三酯溶液分别取适量加入到MPO阳性血清标本中，使血清中甘油三酯的含量分别为0.5mg/ml、1.0mg/ml。将胆红素溶液分别取适量加入到MPO阳性血清标本中，使血清中胆红素的含量分别为25μg/ml、50μg/ml。对加入了血红蛋白、甘油三酯和胆红素的MPO阳性标本进行测定。将理论浓度与实测浓度的比值作为回收率，回收率在97.1％-101.0％之间。表明基于双分子荧光互补技术的MPO试剂在检测血清样本时不受血红蛋白、甘油三酯、胆红素的干扰。
6.相关性
如图3所示，与西门子MPO试剂盒的相关性为：y＝0.993x+0.7075，R2＝0.998。
本发明与现有方法和产品相比，具有检测灵敏度高、特异性好、成本较低，对检测仪器要求低的优点。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明所揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种基于双分子荧光互补技术的MPO检测试剂盒、制备及使用方法，其特征在于：
1)试剂盒主要组成：抗MPO抗体偶联的荧光蛋白N端片段和抗MPO抗体偶联的荧光蛋白C端片段；
2)使用方法：在试剂盒的反应孔中加入样本、抗MPO抗体偶联的荧光蛋白N端片段和抗MPO抗体偶联的荧光蛋白C端片段，混合反应5-60分钟；
3)检测方法：激发光照射反应孔，测量每个反应孔发光量获得荧光信号值。
2.一种基于双分子荧光互补技术的MPO检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)抗MPO抗体偶联荧光蛋白N端片段的制备；
2)抗MPO抗体偶联荧光蛋白C端片段的制备。
3.根据权利要求1所述的抗MPO抗体为针对MPO不同表位的单克隆抗体或多克隆抗体。
4.根据权利要求1所述的荧光蛋白，包括但不限于绿色荧光蛋白、蓝色荧光蛋白、青色荧光蛋白、黄色荧光蛋白、红色荧光蛋白。
5.根据权利要求2所述的一种基于双分子荧光互补技术的MPO检测试剂盒制备的方法，其特征在于，所述的抗MPO抗体偶联荧光蛋白N端片段步骤中，荧光蛋白N端片段与MPO抗体的质量比为1∶1-10。
6.根据权利要求2所述的基于双分子荧光互补技术的MPO检测试剂盒制备的方法，其特征在于，所述的抗MPO抗体偶联荧光蛋白C端片段步骤中，荧光蛋白C端片段与MPO抗体的质量比为1∶1-10。
7.根据权利要求1所述的反应孔，包括但不限于微孔板、微流控试剂盘、反应杯、反应管。
CN201711271892.9A 2017-11-27 2017-11-27 一种基于双分子荧光互补技术的mpo检测试剂盒、制备及使用方法 Pending CN108387732A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711271892.9A CN108387732A (zh) 2017-11-27 2017-11-27 一种基于双分子荧光互补技术的mpo检测试剂盒、制备及使用方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711271892.9A CN108387732A (zh) 2017-11-27 2017-11-27 一种基于双分子荧光互补技术的mpo检测试剂盒、制备及使用方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN108387732A true CN108387732A (zh) 2018-08-10

Family

ID=63075967

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201711271892.9A Pending CN108387732A (zh) 2017-11-27 2017-11-27 一种基于双分子荧光互补技术的mpo检测试剂盒、制备及使用方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108387732A (zh)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN201654036U (zh) * 2009-12-21 2010-11-24 东北农业大学 Mpo奶牛隐性乳房炎检测试剂盒
CN102680676A (zh) * 2011-07-29 2012-09-19 南京诺尔曼生物技术有限公司 髓过氧化物酶(myeloperoxidase MPO)测定试剂盒(胶乳增强免疫比浊法)
CN105548534A (zh) * 2015-04-04 2016-05-04 吉林双正医疗科技有限公司 心肌标志物的联合检测装置及其制备方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN201654036U (zh) * 2009-12-21 2010-11-24 东北农业大学 Mpo奶牛隐性乳房炎检测试剂盒
CN102680676A (zh) * 2011-07-29 2012-09-19 南京诺尔曼生物技术有限公司 髓过氧化物酶(myeloperoxidase MPO)测定试剂盒(胶乳增强免疫比浊法)
CN105548534A (zh) * 2015-04-04 2016-05-04 吉林双正医疗科技有限公司 心肌标志物的联合检测装置及其制备方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CLIFF I. STAINS ET AL: "A General Approach for Receptor and Antibody-Targeted Detection of Native Proteins utilizing Split-Luciferase Reassembly", 《ACS CHEMICAL BIOLOGY》 *
黄欣媛等: "蛋白片段互补分析技术研究进展", 《中国生物工程杂志》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11959912B2 (en) Fluorescence immunochromatographic detection card and a preparation method therefor and use thereof
CN102759631B (zh) 一种定量检测降钙素原pct的胶乳增强免疫比浊试剂盒
JP5710699B2 (ja) オートタキシン測定による慢性肝疾患の検査方法および検査薬
CN108318680B (zh) 一种抗药抗体的检测方法及检测试剂盒
CN106918708A (zh) 一种用于检测胰岛素的竞争法胶乳增强免疫透射比浊试剂盒
CN105277690A (zh) 全自动测定抗蛋白酶3抗体IgG的试剂盒及方法
CN202916286U (zh) 一种定量检测降钙素原pct的胶乳增强免疫比浊试剂盒
EP1295127B1 (en) Inter-alpha-trypsin as a marker for sepsis
CN109307766A (zh) 胃蛋白酶原ⅰ检测试剂盒
CN110361547B (zh) 一种化学发光定量检测粪便潜血的试剂及其检测方法和其在检测下消化道健康的用途
CN101368961A (zh) 尿膀胱癌抗原化学发光免疫分析定量测定试剂盒及其制备方法
CN107271692B (zh) 一种标记特异性高亲和力重组抗体的荧光微球及其应用
US11067579B2 (en) Target marker GP73 for detecting steatohepatitis and detection application method
CN108267594A (zh) 一种基于双分子荧光互补技术的st2检测试剂盒、制备及使用方法
CN108387732A (zh) 一种基于双分子荧光互补技术的mpo检测试剂盒、制备及使用方法
CN108226520A (zh) 一种基于双分子荧光互补技术的ck-mb检测试剂盒、制备及使用方法
CN105974129A (zh) 一步均相h-fabp检测试剂盒及其制备和使用方法
CN108226529A (zh) 一种基于双分子荧光互补技术的NT-proBNP检测试剂盒、制备及使用方法
CN108254567A (zh) 一种基于双分子荧光互补技术的ngal检测试剂盒、制备及使用方法
CN109444431A (zh) 一种心脏肌球蛋白结合蛋白c的定量检测方法及检测试剂盒
CN108267595A (zh) 一种基于双分子荧光互补技术的Myo检测试剂盒、制备及使用方法
CN114563569B (zh) 一种信号放大技术在pgp9.5检测试剂盒中的应用
CN108226524A (zh) 一种基于双分子荧光互补技术的cTnT检测试剂盒、制备及使用方法
CN108226528A (zh) 一种基于双分子荧光互补技术的crp检测试剂盒、制备及使用方法
CN108318460A (zh) 一种基于双分子荧光互补技术的Lp-PLA2检测试剂盒、制备及使用方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20180810

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication