CN108379329A - 一种抗流感病毒的中药组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种抗流感病毒的中药组合物及其制备方法，所述抗流感病毒的中药组合物由以下原料药制成：一枝蒿、贯叶金丝桃，分别用8‑12倍量60‑90％乙醇分别回流提取二次，每次回流提取1‑2小时，分别得到提取液，将提取液过滤后分别收集滤液，将滤液分别用真空浓缩设备进行浓缩，浓缩至干后，分别得到一枝蒿乙醇提取物和贯叶金丝桃乙醇提取物，将一枝蒿乙醇提取物和贯叶金丝桃乙醇提取物混匀后制成胶囊剂、片剂、颗粒剂。制得的抗流感病毒的中药适用于风热犯表、邪毒化热所致的各类流行性病毒性感冒包括甲型H1N1流感引起上述症候者，而且治疗效果好，无毒副作用。

Description

一种抗流感病毒的中药组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及医药技术领域，特别是一种抗流感病毒的中药组合物及其制备方法。

背景技术

自上个世纪初期流感病毒(主要是甲型流感病毒)多次引起世界性的大流行。据WHO估计，每年因流感引发的严重呼吸道疾病有300-500万例，导致50万人死亡；高危人群包括65岁以上的老人、2岁以下的婴幼儿，慢性心血管疾病、肺部或肾脏疾病、糖尿病和免疫缺陷患者，美国每年都有超过5万人死于流感相关并发症。

流感导致的高致病率和死亡率不仅带来了巨大的直接经济损失，而且由此支付的医疗保健费用及对生产力的影响造成的间接经济损失也十分惊人，构成社会的沉重负担。流感病毒抗原性的变异使得流感不易为人类所控制，而抗原性变异幅度的大小，直接影响了流感流行的规模。当一种的新亚型病毒出现时，由于人群普遍缺少针对该病毒的特异性免疫，故各年龄层次均易受到感染。密集人群的发病率可达20-50％，在个别机关团体发病率可高达达80％。新亚型在短期内扩散至世界各地，故称世界大流行。当亚型内变异株产生时，常常引起局部暴发流行，老人及儿童发病较多，在非流行期间流感一般呈散发状态。随着病情进一步加重可继发严重的肺炎、急性呼吸窘迫综合征、肺出血、胸腔积液、全血细胞减少、肾功能衰竭、呼吸衰竭及多器官损伤，甚至导致死亡。因此,流感已成为威胁人类生命和健康的主要原因之一，是严重影响人们生命健康和日常生活的传染病之一，同时也成为一个日益严重的公共卫生问题。

流感病毒吸附于呼吸道粘膜上皮细胞，在宿主细胞核内进行进行翻译和复制，转录时与流感病毒结合的细胞膜内陷形成小囊，病毒包在里面形成内吞体后，病毒膜上M2蛋白作为离子通道使内吞体pH值达到5-6，此时HA蛋白结构发生改变，膜融合并释放病毒核衣壳，病毒RNA和RNP(核糖核蛋白)复合物转移至细胞核中[1]，在病毒RNA聚合酶的作用下启动合成mRNA，病毒RNP复合物主要在PBl、PB2、PA和NP的作用下在细胞膜上合成后，再与结合的M1、NS2相互作用形成以芽生的方式释放出完整病毒。加入外源的NA后，便可产生具感染性的子代病毒。病毒基因转移到细胞质内，可破坏宿主细胞pre-mRNA，抑制细胞mRNA的翻译，从而抑制宿主细胞蛋白合成。细胞的合成机构逐渐接受病毒RNA的指令，不再合成本身的核酸和蛋白质，只产生病毒的RNA和蛋白质，复制出新的病毒粒子，因此导致细胞溶解；流感病毒亦可启动Fas介导的凋亡系统来诱导宿主细胞的凋亡。新增殖的病毒颗粒从细胞膜上芽生，借神经氨酸酶的作用而释放出来，再侵入其他柱状上皮细胞，使受病毒感染的纤毛柱状上皮细胞发生变性、坏死和脱落，形成局部炎症反应，并可侵入血液或淋巴循环，引起全身毒血症样中毒反应。

流感病毒为有包膜的RNA病毒，其包膜分内、外两层，内膜由基质蛋白Ml构成，M1在颗粒核蛋白体(VRNP)的胞质、胞核间的有序转移及病毒体的成熟过程中具有重要的调节作用。外层包膜由一脂质双层构成，其上面嵌有三种病毒蛋白：具有血凝素活性的蛋白(HA)、具有神经氨酸酶活性的蛋白质(NA)和基质蛋白(M2)。血凝素能引起多种红细胞凝集，也是病毒吸附于敏感细胞表面受体的工具。神经氨酸酶，一般认为它是病毒繁殖完成后脱离细胞表面的工具。这种糖蛋白抗原都能单独地发生变异，因而是株特异性。

目前西医治疗流感多采用抗病毒方法,抗病毒治疗对防止和延缓病变的发展有重要作用,但抗病毒药物有着严格的适应证,以及较大的副作用，且有会产生耐药性。随着流感病因病理的研究不断深入，主要着眼于寻找更好的治疗药物，如流感病毒神经氨酸酶(NA)的抑制剂、流感病毒受体阻制剂、抗流感病毒反义寡核昔酸、免疫调节药物等，但均处于动物实验阶段，或因有明显副作用而未应用于临床，或副作用大，限制了其在临床上的使用。同时，由于流感的前述发病机制并非孤立存在，而是相互联系的，因此靶点单一的药物能否具有较好的临床疗效尚需进一步探讨。目前西医针对病毒性上呼吸道感染尚无特效药，治疗仅以支持对症治疗为主，且耐药性问题日益严重。由于病毒种类繁多，感染范围广，免疫不持久，须依赖多次再感染方能维持，因此广泛使用疫苗来预防不现实。因此，有效阻止流感发生及病程进展的药物和手段仍然匮乏，能够有效阻止流感发生或是延缓其病程发展的治疗方法，对于流感患者来说是非常关键的，减轻高致病率和死亡率具有重大意义。

流感相当于中医外感热病，时行感冒范畴，而对于流感，中医古代文献无明确记载，但有相应的描述。晋·葛洪《肘后备急方》指出“其冬月不甚寒，多暖气，及西风使人骨节缓惰受，至春发，名为时行”；隋·巢元方《诸病源候论·时气病诸候》“夫时气病者，此皆因岁时不和，温凉失节，人感乖戾知气而生病者，多相染易”；北宋杨仁斋《仁斋直指方·诸风》提出“感冒风邪，发热头痛，咳嗽声重，涕唾稠粘”；至清代林佩琴在其《类证治裁·伤风论治》篇中提出时行感冒之名：“时行感冒，寒热往来，伤风无汗，参苏饮，人参败毒散，神术散”；均为类似流感的描述。今人以前贤的认识为基础，认为流感的病因病机主要为：(1)正气不足；(2)触冒时行疫毒；(3)非时之气。每遇气候突变，气节交变，寒暖失常之时，风邪湿浊病邪淫行而侵袭机体，若正气充盛，表卫固密，则病邪可拒之于外，若体弱气虚，表卫不固，则病邪入侵而发为流感。

据此，现代中医拟定多种治法进行辨证遣药治疗流感，尽管临床治疗上各家自有主张，各有所长，但多项实验及临床研究均表明，中医药在减轻流程缩短病程方面有着可靠而良好的作用，表明中药治疗流感有着广阔的应用前景；但是现有治疗流感的中药配方复杂，药效不佳，而且所用中药种类繁多，并且是药三分毒，中药里面还含有一些有毒成分，过多种类的中药组合制成中药会造成中药中可能会含有多种有毒成分，患者服用后会产生毒副作用。

发明内容

本发明的目的是要解决现有技术中存在的不足，提供一种抗流感病毒的中药组合物及其制备方法，制得的抗流感病毒的中药适用于风热犯表、邪毒化热所致的各类流行性病毒性感冒包括甲型H1N1流感引起上述症候者，而且治疗效果好，无毒副作用。

为达到上述目的，本发明是按照以下技术方案实施的：

一种抗流感病毒的中药组合物，所述抗流感病毒的中药组合物包涵以下二味原料药：一枝蒿、贯叶金丝桃。

进一步，为了方便患者服用，所述抗流感病毒的中药组合物制成的剂型为胶囊剂、片剂、颗粒剂。

另外，本发明还提供了一种抗流感病毒的中药组合物的制备方法，包括以下步骤：取一枝蒿、贯叶金丝桃，粉碎后分别用8-12倍量60-90％乙醇分别回流提取二次，每次回流提取1-2小时，分别得到提取液，将提取液过滤后分别收集滤液，将滤液分别用真空浓缩设备进行浓缩，浓缩至干后，分别得到一枝蒿乙醇提取物和贯叶金丝桃乙醇提取物，将一枝蒿乙醇提取物和贯叶金丝桃乙醇提取物混匀后制成胶囊剂、片剂、颗粒剂。

与现有技术相比，本发明的抗流感病毒的中药组合物仅由一枝蒿、贯叶金丝桃两味组成，祛风解表，清热解毒，凉血利咽，平衡体液，调整气质，清除“乃孜来”。用于干热性“乃孜来”性感冒，临床用于抗病毒，解热，镇痛，症见发热恶寒，头痛，咽痛，咳嗽，鼻塞流浊涕，肌肉酸痛，口苦尿赤，舌红，苔薄黄或黄腻，脉浮数或滑数，适用于风热犯表、邪毒化热所致的各类流行性病毒性感冒包括甲型H1N1流感引起上述症候者；而且本发明抗流感病毒的中药组合物治疗效果好，无毒副作用。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步描述，在此发明的示意性实施例以及说明用来解释本发明，但并不作为对本发明的限定。

实施例1

称取一枝蒿20g、贯叶金丝桃20g，粉碎后分别用12倍量60％乙醇分别回流提取二次，每次回流提取2小时，分别得到提取液，将提取液过滤后分别收集滤液，将滤液分别用真空浓缩设备进行浓缩，浓缩至干后，分别得到一枝蒿乙醇提取物和贯叶金丝桃乙醇提取物，将一枝蒿乙醇提取物和贯叶金丝桃乙醇提取物混匀后按照常规操作制成胶囊剂、片剂、颗粒剂。

实施例2

称取一枝蒿20g、贯叶金丝桃20g，粉碎后分别用12倍量70％乙醇分别回流提取二次，每次回流提取2小时，分别得到提取液，将提取液过滤后分别收集滤液，将滤液分别用真空浓缩设备进行浓缩，浓缩至干后，分别得到一枝蒿乙醇提取物和贯叶金丝桃乙醇提取物，将一枝蒿乙醇提取物和贯叶金丝桃乙醇提取物混匀后按照常规操作制成胶囊剂、片剂、颗粒剂。

实施例3

称取一枝蒿20g、贯叶金丝桃20g，粉碎后分别用12倍量80％乙醇分别回流提取二次，每次回流提取2小时，分别得到提取液，将提取液过滤后分别收集滤液，将滤液分别用真空浓缩设备进行浓缩，浓缩至干后，分别得到一枝蒿乙醇提取物和贯叶金丝桃乙醇提取物，将一枝蒿乙醇提取物和贯叶金丝桃乙醇提取物混匀后按照常规操作制成胶囊剂、片剂、颗粒剂。

实施例4

称取一枝蒿20g、贯叶金丝桃20g，粉碎后分别用12倍量90％乙醇分别回流提取二次，每次回流提取2小时，分别得到提取液，将提取液过滤后分别收集滤液，将滤液分别用真空浓缩设备进行浓缩，浓缩至干后，分别得到一枝蒿乙醇提取物和贯叶金丝桃乙醇提取物，将一枝蒿乙醇提取物和贯叶金丝桃乙醇提取物混匀后按照常规操作制成胶囊剂、片剂、颗粒剂。

实施例5

称取一枝蒿20g、贯叶金丝桃20g，粉碎后分别用8倍量60％乙醇分别回流提取二次，每次回流提取1小时，分别得到提取液，将提取液过滤后分别收集滤液，将滤液分别用真空浓缩设备进行浓缩，浓缩至干后，分别得到一枝蒿乙醇提取物和贯叶金丝桃乙醇提取物，将一枝蒿乙醇提取物和贯叶金丝桃乙醇提取物混匀后按照常规操作制成胶囊剂、片剂、颗粒剂。

实施例6

称取一枝蒿20g、贯叶金丝桃20g，粉碎后分别用10倍量70％乙醇分别回流提取二次，每次回流提取1.5小时，分别得到提取液，将提取液过滤后分别收集滤液，将滤液分别用真空浓缩设备进行浓缩，浓缩至干后，分别得到一枝蒿乙醇提取物和贯叶金丝桃乙醇提取物，将一枝蒿乙醇提取物和贯叶金丝桃乙醇提取物混匀后按照常规操作制成胶囊剂、片剂、颗粒剂。

实施例7

称取一枝蒿20g、贯叶金丝桃20g，粉碎后分别用12倍量80％乙醇分别回流提取二次，每次回流提取2小时，分别得到提取液，将提取液过滤后分别收集滤液，将滤液分别用真空浓缩设备进行浓缩，浓缩至干后，分别得到一枝蒿乙醇提取物和贯叶金丝桃乙醇提取物，将一枝蒿乙醇提取物和贯叶金丝桃乙醇提取物混匀后为胶囊芯材，壁材为明胶，用胶囊机将芯材与壁材贴合后，制备得到中药胶囊。

以下对抗流感病毒的中药组合物功效进行验证：

1抗病毒试验

治疗给药对流感病毒感染小鼠肺炎模型的作用(肺指数)

表1、2结果显示：采用甲型H1N1流感病毒FM1和PR8二株病毒感染正常小鼠后，小鼠肺指数明显增高，与正常对照组比较有显著性差异；给予抗流感病毒的中药组合物进行治疗性给药后，三个剂量组肺指数均有不同程度降低，其中FM1株大、中、小剂量组及PR8大、中剂量组与模型对照组比较有显著性差异。

表1治疗给药对流感病毒FM1株感染小鼠肺炎模型的抑制作用

注：与正常组比较^##P<0.01；与模型对照组比较，**P<0.01，*P<0.05。

表2治疗给药对流感病毒PR8株感染小鼠肺炎模型的抑制作用

注：与正常组比较^##P<0.01；与模型对照组比较，**P<0.01，*P<0.05。

2解热试验

2.1对酵母所致大鼠发热模型的解热作用

表3、4结果显示：试验期间正常对照组动物体温保持在正常范围内，模型组动物体温保持在造模后平稳状态，抗流感病毒的中药组合物高、中剂量组在给药后1h-3h对酵母所致大鼠发热模型具有明显的解热作用，与模型组比较具有显著性差异。

2.2对脂多糖所致家兔发热模型的解热作用

表5、6结果显示：试验期间正常对照组动物体温保持在正常范围内，模型组动物体温保持在造模后平稳状态，抗流感病毒的中药组合物高、中、低三个剂量组在给药后1h-3h对脂多糖所致家兔发热模型具有明显的解热作用，与模型组比较具有显著性差异。

表3抗流感病毒的中药组合物对酵母致大鼠发热模型体温的影响(X±SD)

注：与正常组比较^##P<0.01；与模型对照组相比，*P<0.05，**P<0.01。

表4抗流感病毒的中药组合物对酵母致大鼠发热模型体温差值的影响(X±SD)

注：与正常组比较^##P<0.01；与模型对照组相比，*P<0.05，**P<0.01。

表5抗流感病毒的中药组合物对脂多糖致家兔发热模型体温的影响(X±SD)

注：与正常组比较^##P<0.01；与模型对照组相比，*P<0.05，**P<0.01。

表6抗流感病毒的中药组合物对脂多糖致家兔发热模型体温差值的影响(X±SD)

注：与正常组比较^##P<0.01；与模型对照组相比，*P<0.05，**P<0.01。

3镇痛试验

3.1对醋酸致小鼠疼痛模型的影响(扭体法)

表7结果显示：抗流感病毒的中药组合物高、中剂量组可明显降低醋酸致小鼠扭体次数，与模型组比较具有显著性差异，其扭体抑制率分别为34.27％和38％。

表7抗流感病毒的中药组合物对醋酸致小鼠疼痛模型的影响

与模型对照组比较：*P<0.05，**P<0.01。

3.2对热板致小鼠疼痛模型的影响(痛阈值)

表8结果显示：抗流感病毒的中药组合物高、中剂量组在给药后1-2h使小鼠痛阈值明显升高，与模型组比较具有显著性差异。

表8抗流感病毒的中药组合物对热板致小鼠疼痛模型的影响

与自身给药前比较：*P<0.05；**P<0.01。

4抗炎作用

4.1对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响

表9结果显示：抗流感病毒的中药组合物高、中、低三个剂量组均能显著抑制醋酸引起的小鼠腹腔毛细血管通透性增高，与模型对照组比较具有显著性差异。

表9抗流感病毒的中药组合物对小鼠毛细血管通透性的影响

与空白对照组比较：^##P<0.01；与模型对照组比较：**P<0.01，*P<0.05。

4.2对小鼠血清中SOD、MDA和IFN-γ含量的影响

表10结果显示：采用甲型H1N1流感病毒FM1株或PR8株病毒感染正常小鼠造成肺炎模型，给予抗流感病毒的中药组合物大、中、小剂量治疗4天后，对小鼠血清中IFN–γ、SOD和MDA含量均无影响。

表10治疗给药对流感病毒感染小鼠血清中细胞因子含量的影响

结论

抗病毒作用：采用甲型H1N1流感病毒FM1和PR8株感染正常小鼠造成肺炎模型，给予抗流感病毒的中药组合物进行治疗性给药，对小鼠肺部炎症有明显治疗作用，可明显减少感染动物的死亡数，延长动物的存活天数。采用甲型H1N1流感病毒FM1和PR8株病毒感染正常小鼠造成肺炎模型，给予抗流感病毒的中药组合物进行预防性给药，对FM1和PR8株流感病毒性肺炎均无治疗作用，可延长PR8株感染动物的存活天数。

解热作用：抗流感病毒的中药组合物对酵母致大鼠发热模型、脂多糖致家兔发热模型均具有明显的解热作用。

镇痛作用：抗流感病毒的中药组合物对醋酸致小鼠疼痛模型及热板致小鼠疼痛模型具有明显的镇痛作用。

5抗流感病毒的中药组合物体外抗呼吸道病毒作用的研究

本品在体外对甲型流感病毒FM1株(H1N1亚型)、brisbane/59/2007株(H1N1亚型)、柯萨奇病毒B族4型CoxB4、单纯疱疹病毒1型HSV均具有明显的抑制作用。

5.1抗流感病毒的中药组合物对MDCK、hep-2细胞的毒性试验结果

抗流感病毒的中药组合物对MDCK细胞的TC₀为2.5mg·mL^-1，TC₅₀为6.01mg·mL^-1；抗流感病毒的中药组合物对Hep-2细胞的TC₀为5mg·mL^-1，TC₅₀为8.66mg·mL^-1(见表11)。

表11抗流感病毒的中药组合物对细胞的毒性作用IC₅₀单位：mg·mL^－1

5.2抗流感病毒的中药组合物体外抗流感病毒作用的结果

抗流感病毒的中药组合物在体外对甲型H1N1流感病毒FM1株、brisbane/59/2007株具有不同程度的抑制作用，其IC₅₀均为0.89mg·mL^－1，治疗指数TI均为6.75，而对甲型H1N1流感病毒PR8株、乙型毒株江西修水无明显的抑制作用(见表12、表13)。

表12抗流感病毒的中药组合物的体外抗流感病毒作用IC₅₀单位：mg·mL^－1

表13抗流感病毒的中药组合物的体外抗流感病毒的病变情况

药物浓度单位：mg·mL^－1。

5.3抗流感病毒的中药组合物体外抗呼吸道病毒作用的结果

抗流感病毒的中药组合物在体外对HSV、CoxB4的致Hep-2细胞病变均有不同程度的抑制作用，其IC₅₀分别为1.58mg·mL^－1、2.52mg·mL^－1，治疗指数TI分别为5.48和3.44，而对PIV、RSV、CoxB3、Ad3无明显抑制作用或很弱的抑制作用，结果见表14和表15。

表14抗流感病毒的中药组合物的体外抗呼吸道病毒作用

IC₅₀单位：mg·mL^－1。

表15抗流感病毒的中药组合物的体外抗呼吸道病毒的病变情况

药物浓度单位：mg·mL^－1。

6抗流感病毒的中药组合物体外抗菌作用的研究

抗流感病毒的中药组合物在体外对金黄色葡萄球菌，白色葡萄球菌；表皮葡萄球菌；乙型链球菌具有明显的抑制作用见表16。

表16抗流感病毒的中药组合物在体外对细菌的抑制作用

综述，本发明确实能够祛风解表，清热解毒，凉血利咽，平衡体液，调整气质，清除“乃孜来”。用于干热性“乃孜来”性感冒，临床用于抗病毒，解热，镇痛，症见发热恶寒，头痛，咽痛，咳嗽，鼻塞流浊涕，肌肉酸痛，口苦尿赤，舌红，苔薄黄或黄腻，脉浮数或滑数，适用于风热犯表、邪毒化热所致的各类流行性病毒性感冒包括甲型H1N1流感引起上述症候者；而且本发明抗流感病毒的中药组合物治疗效果好，无毒副作用。

本发明的技术方案不限于上述具体实施例的限制，凡是根据本发明的技术方案做出的技术变形，均落入本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种抗流感病毒的中药组合物，其特征在于：所述抗流感病毒的中药组合物包涵以下二味原料药：一枝蒿、贯叶金丝桃。

2.根据权利要求1所述的抗流感病毒的中药组合物，其特征在于：所述抗流感病毒的中药组合物制成的剂型为胶囊剂、片剂、颗粒剂。

3.一种如权利要求1所述的抗流感病毒的中药组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：取一枝蒿、贯叶金丝桃，粉碎后分别用8-12倍量60-90％乙醇分别回流提取二次，每次回流提取1-2小时，分别得到提取液，将提取液过滤后分别收集滤液，将滤液分别用真空浓缩设备进行浓缩，浓缩至干后，分别得到一枝蒿乙醇提取物和贯叶金丝桃乙醇提取物，将一枝蒿乙醇提取物和贯叶金丝桃乙醇提取物混匀后制成胶囊剂、片剂、颗粒剂。

4.根据权利要求3所述的抗流感病毒的中药组合物的制备方法，其特征在于：每次回流提取回流提取的时间为2小时。