CN108374030A - 一种尖孢镰刀菌胞外多糖的制备方法及应用 - Google Patents
一种尖孢镰刀菌胞外多糖的制备方法及应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108374030A CN108374030A CN201810046748.3A CN201810046748A CN108374030A CN 108374030 A CN108374030 A CN 108374030A CN 201810046748 A CN201810046748 A CN 201810046748A CN 108374030 A CN108374030 A CN 108374030A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fusarium oxysporum
- exocellular polysaccharide
- preparation
- temperature
- gained
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 title claims abstract description 54
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title claims abstract description 54
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 title claims abstract description 54
- 241000223221 Fusarium oxysporum Species 0.000 title claims abstract description 43
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 28
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 28
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 17
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 10
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims abstract description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 38
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 24
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 24
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 21
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 15
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 15
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 15
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 claims description 14
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 claims description 11
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 10
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 10
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 10
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 8
- 235000015099 wheat brans Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 6
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 6
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 6
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 6
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 6
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 5
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 5
- 238000010563 solid-state fermentation Methods 0.000 claims description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 2
- 238000003809 water extraction Methods 0.000 claims description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 8
- 230000001408 fungistatic effect Effects 0.000 abstract description 7
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 4
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 4
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 4
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 241000519590 Pseudoalteromonas Species 0.000 description 2
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 2
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 2
- 241001313857 Bletilla striata Species 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 1
- 229920002444 Exopolysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 241000122692 Fusarium avenaceum Species 0.000 description 1
- 241000222684 Grifola Species 0.000 description 1
- 240000001080 Grifola frondosa Species 0.000 description 1
- 235000007710 Grifola frondosa Nutrition 0.000 description 1
- 229920001491 Lentinan Polymers 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000896292 Odontothrips loti Species 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000000767 anti-ulcer Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000000054 fungal extract Substances 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 229940115286 lentinan Drugs 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000003950 pathogenic mechanism Effects 0.000 description 1
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
- A01N43/02—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms
- A01N43/04—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms with one hetero atom
- A01N43/14—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms with one hetero atom six-membered rings
- A01N43/16—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms with one hetero atom six-membered rings with oxygen as the ring hetero atom
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
本发明公开了一种尖孢镰刀菌胞外多糖的制备方法及应用，属于生物技术领域。本发明将尖孢镰刀菌进行固体发酵培养，从发酵产物中分离出胞外水溶性粗多糖。本发明尖孢镰刀菌菌的固体发酵培养方法具有培养时间短的特点，本发明尖孢镰刀菌胞外多糖的制备方法简单易行，所得尖孢镰刀菌胞外多糖具有抑菌效果较好、成本低的优点。
Description
技术领域
本发明涉及一种尖孢镰刀菌胞外多糖的制备方法及应用，属于生物技术领域。
背景技术
多糖广泛的存在于动植物体内和微生物细胞壁中，是一种天然的高分子化合物，多糖不仅是构成生物体重要的组成成分，同时也是维持生命体的生命活动正常运转的基本物质之一。多糖具有多种生物活性，国内外科研工作者的大量研究表明了多糖具有以下功能：抗肿瘤、抗病毒、抗炎症、抗溃疡、抗菌等作用，其中很多真菌提取物及其多糖具有抑菌和免疫增强作用。如香菇多糖被证实是一类免疫激活剂，能激活巨噬细胞和淋巴细胞,裂褶菌多糖具有明显的细胞免疫促进作用，假交替单胞菌的多糖对念珠菌较好抑制作用（HaoC, ZHENG Z, Peng C, et al. Inhibitory Effect of Extracellular PolysaccharideEPS-II from Pseudoalteromonas on Candida adhesion to Cornea in vitro.Biomedical and Environmental Sciences, 2012, 25(2): 210-215），灰树花中提取的多糖有抑菌等多种生物活性作用（Su C H, Lai M N, Ng L T. Effects of differentextraction temperatures on the physicochemical properties of bioactivepolysaccharides from Grifola frondosa. Food chemistry, 2017, 220: 400-405）。尖孢镰刀菌是一种代表性的根系真菌，也是一种广泛存在的植物内生真菌。目前人们对尖孢镰刀菌的研究主要集中在其对植物致病机理、分子生物学和生物防治方面，最新研究表明:尖孢镰刀菌多酚具有体外抗菌抗氧化活性（Dong J W, Cai L, Xiong J, et al.Improving the antioxidant and antibacterial activities of fermented Bletillastriata with Fusarium avenaceum and Fusarium oxysporum. Process Biochemistry,2015, 50(1): 8-13）。
目前尚未有相关尖孢镰刀菌胞外多糖的制备方法和抑菌活性的研究。
发明内容
针对现有尖孢镰刀菌胞外多糖的技术问题及不足，本发明提供一种尖孢镰刀菌胞外多糖的制备方法及应用，本发明尖孢镰刀菌菌的固体发酵培养方法具有培养时间短，成本低的优点，本发明制备的尖孢镰刀菌胞外多糖抑菌效果较好。
一种尖孢镰刀菌胞外多糖的制备方法，具体步骤如下：
（1）菌种活化：将尖孢镰刀菌种接种到PDA培养基上，然后置于温度为26~30℃恒温培养箱中培养4~5 d；
（2）孢子悬液配置：在无菌条件下，采用吐温80溶液将步骤（1）所得PDA培养基上的尖孢镰刀菌的孢子洗下配制成孢子悬浮液；
（3）固体发酵培养：以麦麸为发酵固体基质，以发酵培养基的质量为100%计，添加蔗糖2~4%、蛋白胨1~ 2%、KH2PO4 0.2~0.4%、水50~60%，灭菌处理，在发酵培养基上接种5~15%，步骤（2）所得孢子悬浮液，然后在温度为26~30℃条件下恒温发酵4~6 d；
（4）分离：在步骤（3）所得固态发酵产物中加入蒸馏水，倒碎，在温度为90~100℃条件下热水浸提20~40 min，过滤、在温度为4℃条件下离心取上清液；
（5）胞外多糖制备：将步骤（4）所得上清液加入到无水乙醇中混合均匀得到混合液A，在温度为4℃条件下离心取沉淀，再用无水乙醇洗涤沉淀3次，然后烘干至恒重即得粗多糖，粗多糖用去离子水溶解，然后再进行去离子水透析16~24 h即得胞外多糖产品；
所述步骤（2）吐温80水溶液的质量百分数浓度为0.1%，孢子悬浮液浓度为1×107 个/mL；
进一步地，所述步骤（3）的麦麸过10~20目筛；
进一步地，所述步骤（5）混合液A中上清液的体积百分数为5~15 %酒精占大比例；
进一步地，所述步骤（5）中烘干温度为40~50℃；
进一步地，所述步骤（5）中去离子水透析的截留分子量为8~12 kDa，去离子水透析过程中每8 h换一次去离子水；
本发明的另一目的是提供尖孢镰刀菌胞外多糖的制备方法制备的尖孢镰刀菌胞外多糖。
本发明的尖孢镰刀菌胞外多糖可应用于抑菌。
本发明所述尖孢镰刀菌从广东省微生物菌种保藏管理中心购得，其编号为 GIM3.392。
本发明的有益效果：本发明尖孢镰刀菌菌的固体发酵培养方法具有培养时间短的特点，本发明制备的尖孢镰刀菌胞外多糖具有广谱抑菌效果且抑菌效果较好、成本低的优点。
附图说明
图1为实施例1~3的尖孢镰刀菌胞外多糖的抑菌效果图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明，但本发明的保护范围并不限于所述内容。
实施例1：一种尖孢镰刀菌胞外多糖的制备方法，具体步骤如下：
（1）菌种活化：将尖孢镰刀菌种接种到PDA培养基上，然后置于温度为28℃恒温培养箱中培养4 d；
（2）孢子悬液配置：在无菌条件下，采用吐温80溶液将步骤（1）所得PDA培养基上的尖孢镰刀菌的孢子洗下配制成孢子悬浮液，其中吐温80水溶液的质量百分数浓度为0.1 %，孢子悬浮液浓度为1×107个/mL；
（3）固体发酵培养：以麦麸为发酵固体基质，以发酵培养基的质量为100%计，添加蔗糖3%、蛋白胨1.5%、KH2PO4 0.3%、水50%，灭菌处理20 min，在发酵培养基上接种10 %步骤（2）所得孢子悬浮液，然后在温度为28℃条件下恒温发酵4 d；
（4）分离：在步骤（3）所得固态发酵产物中加入蒸馏水，倒碎，在温度为95℃条件下热水浸提30 min，过滤，在温度为4℃、离心速度为8000 r/min条件下离心20 min除去菌丝体得到上清液；
（5）胞外多糖制备：将步骤（4）所得上清液取5 mL加入到无水乙醇中混合均匀得到混合液A，其中混合液A中上清液的体积百分数为10 %，在温度为4℃、离心速度为8000 r/min条件下离心20 min取其沉淀，再用无水乙醇洗涤沉淀3次，然后在温度为40℃条件下烘干至恒重即得粗多糖，粗多糖用去离子水溶解，然后再进行去离子水透析24 h即得胞外多糖产品；其中去离子水透析的截留分子量为10 kDa，去离子水透析过程中每8 h换一次去离子水；
将上述得到的粗多糖溶解在5 mL去离子水中，用硫酸-苯酚法测定多糖含量，测得的吸光度值代入标准曲线方程，算出胞外多糖的含量（以葡萄糖计），本实施例中尖孢镰刀菌固体发酵培养基的发酵物中多糖含量为5.94 mg/mL；
抑菌测试：对照组为初始培养基质量为100 %计，添加蔗糖2 %、蛋白胨2 %、KH2PO4 0.2%、水60 %，灭菌处理20 min，在发酵培养基上接种10 %步骤（2）所得孢子悬浮液，然后在温度为28℃条件下恒温发酵4 d；细菌抑菌实验根据Casaril单一微量稀释法进行，真菌抑菌实验根据Li的牛津杯法进行；本实施例胞外多糖抑菌谱如表1所示，
对照组的抑菌率为20%，本实施例胞外多糖的抑菌效果如图1所示，从图1中可知胞外多糖的抑菌率达35.10%。
实施例2：一种尖孢镰刀菌胞外多糖的制备方法，具体步骤如下：
（1）菌种活化：将尖孢镰刀菌种接种到PDA培养基上，然后置于温度为30℃恒温培养箱中培养5 d；
（2）孢子悬液配置：在无菌条件下，采用吐温80溶液将步骤（1）所得PDA培养基上的尖孢镰刀菌的孢子洗下配制成孢子悬浮液，其中吐温80水溶液的质量百分数浓度为0.1 %，孢子悬浮液浓度为1×107个/mL；
（3）固体发酵培养：以麦麸为发酵固体基质，以发酵培养基的质量为100%计，添加蔗糖4%、蛋白胨2 %、KH2PO4 0.2 %、水55%，灭菌处理20min，在发酵培养基上接种15 %步骤（2）所得孢子悬浮液，然后在温度为30℃条件下恒温发酵5 d；
（4）分离：在步骤（3）所得固态发酵产物中加入蒸馏水，倒碎，在温度为90℃条件下热水浸提40 min，过滤，在温度为4℃、离心速度为8000 r/min条件下离心20 min除去菌丝体得到上清液；
（5）胞外多糖制备：将步骤（4）所得上清液取5 mL加入到无水乙醇中混合均匀得到混合液A，其中混合液A中上清液的体积百分数为5 %，在温度为4℃、离心速度为8000 r/min条件下离心20 min取其沉淀，再用无水乙醇洗涤沉淀3次，然后在温度为45℃条件下烘干至恒重即得粗多糖，粗多糖用去离子水溶解，然后再进行去离子水透析16h即得胞外多糖产品；其中去离子水透析的截留分子量为12 kDa，去离子水透析过程中每8 h换一次去离子水；
上述得到的粗多糖溶解在5 mL去离子水中，用硫酸-苯酚法测定多糖含量，测得的吸光度值代入标准曲线方程，算出胞外多糖的含量（以葡萄糖计），本实施例中尖孢镰刀菌固体发酵培养基的发酵物中多糖含量为4.21 mg/mL；
抑菌测试：按照实施例1的抑菌测试方法进行测试，本实施例胞外多糖的抑菌效果如图1所示，从图1中可知胞外多糖的抑菌率达31.50%。
实施例3：一种尖孢镰刀菌胞外多糖的制备方法，具体步骤如下：
（1）菌种活化：将尖孢镰刀菌种接种到PDA培养基上，然后置于温度为26℃恒温培养箱中培养4.5 d；
（2）孢子悬液配置：在无菌条件下，采用吐温80溶液将步骤（1）所得PDA培养基上的尖孢镰刀菌的孢子洗下配制成孢子悬浮液，其中吐温80水溶液的质量百分数浓度为0.1 %，孢子悬浮液浓度为1×107个/mL；
（3）固体发酵培养：以麦麸为发酵固体基质，以发酵培养基的质量为100%计，添加蔗糖2%、蛋白胨1 %、KH2PO4 0.4%、水60%，灭菌处理20min，在发酵培养基上接种5 %步骤（2）所得孢子悬浮液，然后在温度为26℃条件下恒温发酵6 d；
（4）分离：在步骤（3）所得固态发酵产物中加入蒸馏水，倒碎，在温度为100℃条件下热水浸提20 min，过滤，在温度为4℃、离心速度为8000 r/min条件下离心20 min除去菌丝体得到上清液；
（5）胞外多糖制备：将步骤（4）所得上清液取5 mL加入到无水乙醇中混合均匀得到混合液A，其中混合液A中上清液的体积百分数为15%，在温度为4℃、离心速度为8000 r/min条件下离心20min取其沉淀，再用无水乙醇洗涤沉淀3次，然后在温度为50℃条件下烘干至恒重即得粗多糖，粗多糖用去离子水溶解，然后再进行去离子水透析20 h即得胞外多糖产品；其中去离子水透析的截留分子量为 8 kDa，去离子水透析过程中每8 h换一次去离子水；
上述得到的粗多糖溶解在5 mL去离子水中，用硫酸-苯酚法测定多糖含量，测得的吸光度值代入标准曲线方程，算出胞外多糖的含量（以葡萄糖计），本实施例中尖孢镰刀菌固体发酵培养基的发酵物中多糖含量为3.26 mg/mL；
抑菌测试：按照实施例1的抑菌测试方法进行测试，本实施例胞外多糖的抑菌效果如图1所示，从图1中可知胞外多糖的抑菌率达29.37 %。
Claims (7)
1.一种尖孢镰刀菌胞外多糖的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：
（1）菌种活化：将尖孢镰刀菌种接种到PDA培养基上，然后置于温度为28~30℃恒温培养箱中培养4~5 d；
（2）孢子悬液配置：在无菌条件下，采用吐温80溶液将步骤（1）所得PDA培养基上的尖孢镰刀菌的孢子洗下配制成孢子悬浮液；
（3）固体发酵培养：以麦麸为发酵固体基质，以发酵培养基的质量为100%计，添加蔗糖2~4%、蛋白胨1~2 %、KH2PO4 0.2~0.4%、水50~60%，灭菌处理，在发酵培养基上接种5~15 %，步骤（2）所得孢子悬浮液，然后在温度为26~30℃条件下恒温发酵4~6 d；
（4）分离：在步骤（3）所得固态发酵产物中加入蒸馏水，倒碎，在温度为90~100℃条件下热水浸提20~40 min，过滤、在温度为4℃条件下离心取上清液；
（5）胞外多糖制备：将步骤（4）所得上清液加入到无水乙醇中混合均匀得到混合液A，在温度为4℃条件下离心取沉淀，再用无水乙醇洗涤沉淀3次，然后烘干至恒重即得粗多糖，粗多糖用去离子水溶解，然后再进行去离子水透析16~24 h即得胞外多糖产品。
2.根据权利要求1所述尖孢镰刀菌胞外多糖的制备方法，其特征在于：步骤（2）吐温80水溶液质量百分数浓度为0.1 %，孢子悬浮液浓度为1×107个/mL。
3.根据权利要求1所述尖孢镰刀菌胞外多糖的制备方法，其特征在于：步骤（3）的麦麸过20目筛。
4.根据权利要求1所述尖孢镰刀菌胞外多糖的制备方法，其特征在于：步骤（5）混合液A中上清液的体积百分数为5~15 %。
5.根据权利要求1所述尖孢镰刀菌胞外多糖的制备方法，其特征在于：步骤（5）中烘干温度为40~50℃。
6.根据权利要求1所述尖孢镰刀菌胞外多糖的制备方法，其特征在于：步骤（5）中去离子水透析的截留分子量为8~12 kDa透析袋上的截留分子量范围，去离子水透析过程中每8h换一次去离子水。
7.权利要求1~6所述尖孢镰刀菌胞外多糖的制备方法所制备的尖孢镰刀菌胞外多糖应用于抑菌。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810046748.3A CN108374030A (zh) | 2018-01-18 | 2018-01-18 | 一种尖孢镰刀菌胞外多糖的制备方法及应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810046748.3A CN108374030A (zh) | 2018-01-18 | 2018-01-18 | 一种尖孢镰刀菌胞外多糖的制备方法及应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108374030A true CN108374030A (zh) | 2018-08-07 |
Family
ID=63016707
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201810046748.3A Pending CN108374030A (zh) | 2018-01-18 | 2018-01-18 | 一种尖孢镰刀菌胞外多糖的制备方法及应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN108374030A (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110452848A (zh) * | 2019-08-20 | 2019-11-15 | 昆明理工大学 | 一株贝莱斯芽孢杆菌及其应用 |
| CN110607254A (zh) * | 2019-08-27 | 2019-12-24 | 华南理工大学 | 一种解淀粉芽孢杆菌及其胞外多糖的制备方法 |
| CN114181985A (zh) * | 2022-01-21 | 2022-03-15 | 皖南医学院 | 一种禾谷镰刀菌胞外多糖及其制备方法和在制备治疗胃癌药物中的应用 |
| CN117305124A (zh) * | 2023-09-19 | 2023-12-29 | 黑龙江大学 | 一株产刺五加苷e的刺五加内生真菌hasz1及其应用 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1321472A2 (en) * | 2000-09-19 | 2003-06-25 | Centro International de Fisica CIF | Elicitor of fungal origin and method for its preparation |
| CN101736032A (zh) * | 2009-03-13 | 2010-06-16 | 南京信息工程大学 | 用尖孢镰刀菌培养毒素的方法及其作为除草剂的应用 |
| CN102755354A (zh) * | 2012-03-13 | 2012-10-31 | 李绍平 | 尖孢镰刀菌提取物及其应用 |
| CN104726427A (zh) * | 2014-12-10 | 2015-06-24 | 上海大学 | 尖孢镰刀菌发酵生产脂肪酶用培养基及其培养方法 |
| CA3010562A1 (en) * | 2016-01-11 | 2017-07-20 | 3Plw Ltd. | Lactic acid-utilizing bacteria genetically modified to secrete polysaccharide-degrading enzymes |
-
2018
- 2018-01-18 CN CN201810046748.3A patent/CN108374030A/zh active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1321472A2 (en) * | 2000-09-19 | 2003-06-25 | Centro International de Fisica CIF | Elicitor of fungal origin and method for its preparation |
| CN101736032A (zh) * | 2009-03-13 | 2010-06-16 | 南京信息工程大学 | 用尖孢镰刀菌培养毒素的方法及其作为除草剂的应用 |
| CN102755354A (zh) * | 2012-03-13 | 2012-10-31 | 李绍平 | 尖孢镰刀菌提取物及其应用 |
| CN104726427A (zh) * | 2014-12-10 | 2015-06-24 | 上海大学 | 尖孢镰刀菌发酵生产脂肪酶用培养基及其培养方法 |
| CA3010562A1 (en) * | 2016-01-11 | 2017-07-20 | 3Plw Ltd. | Lactic acid-utilizing bacteria genetically modified to secrete polysaccharide-degrading enzymes |
Non-Patent Citations (7)
| Title |
|---|
| HUIRU ZHANG等: ""ANTIMICROBIAL ACTIVITY OF ENDOPHYTIC FUNGUS FUSARIUM SP. ISOLATED FROM MEDICINAL HONEYSUCKLE PLANT"", 《ARCH. BIOL. SCI.》 * |
| MIROSLAV STREDANSKY等: ""Production of bacterial exopolysaccharides by solid substrate fermentation"", 《PROCESS BIOCHEMISTRY》 * |
| XL LIU ET AL.: ""Identification and antibacterial characteristics of an endophytic fungus Fusarium oxysporum from Lilium lancifolium"", 《LETT APPL MICROBIOL》 * |
| 广州市药品检验所: "《农村中草药制剂技术》", 31 March 1978, 人民卫生出版社 * |
| 李培琴等: ""内生镰刀菌Dzf17多糖对盾叶薯蓣培养物薯蓣皂苷元积累的促进作用"", 《天然产物研究与开发》 * |
| 肖荣凤等: ""非致病性尖孢镰刀菌固体发酵条件筛选"", 《福建农业学报》 * |
| 郑露华等: ""尖孢镰刀菌LD105产抑菌多糖固态发酵条件优化"", 《食品科学》 * |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110452848A (zh) * | 2019-08-20 | 2019-11-15 | 昆明理工大学 | 一株贝莱斯芽孢杆菌及其应用 |
| CN110607254A (zh) * | 2019-08-27 | 2019-12-24 | 华南理工大学 | 一种解淀粉芽孢杆菌及其胞外多糖的制备方法 |
| CN110607254B (zh) * | 2019-08-27 | 2022-06-14 | 华南理工大学 | 一种解淀粉芽孢杆菌及其胞外多糖的制备方法 |
| CN114181985A (zh) * | 2022-01-21 | 2022-03-15 | 皖南医学院 | 一种禾谷镰刀菌胞外多糖及其制备方法和在制备治疗胃癌药物中的应用 |
| CN114181985B (zh) * | 2022-01-21 | 2023-11-21 | 皖南医学院 | 一种禾谷镰刀菌胞外多糖及其制备方法和在制备治疗胃癌药物中的应用 |
| CN117305124A (zh) * | 2023-09-19 | 2023-12-29 | 黑龙江大学 | 一株产刺五加苷e的刺五加内生真菌hasz1及其应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108374030A (zh) | 一种尖孢镰刀菌胞外多糖的制备方法及应用 | |
| George et al. | Extraction, purification and characterization of chitosan from endophytic fungi isolated from medicinal plants | |
| Sugumaran et al. | Production of pullulan by Aureobasidium pullulans from Asian palm kernel: A novel substrate | |
| US9284585B2 (en) | Method for increasing yield of total flavonoids in Ganoderma lucidum mycelium | |
| WO2016119293A1 (zh) | 一种微生物发酵生产氨基葡萄糖的菌株及方法 | |
| CN111690075B (zh) | 一种水溶性β-葡聚糖及其制备方法和在制备免疫增强和抗肿瘤的药物和保健品中的应用 | |
| Sun et al. | High-efficiency production of Tremella aurantialba polysaccharide through basidiospore fermentation | |
| US9284535B2 (en) | Method for producing laccase by means of liquid fermentation of Lentinus edodes | |
| CN107226871A (zh) | 一种青稞β‑葡聚糖的制备方法 | |
| WO2020038077A1 (zh) | 一种复合酶制备的壳寡糖及其制备方法 | |
| CN112515032A (zh) | 一种堇叶碎米荠中硒蛋白的提取方法和由该提取方法得到的硒蛋白及其应用 | |
| CN1884308A (zh) | 一种生产壳寡糖的方法 | |
| CN104262501A (zh) | 双膜法提取灰树花发酵液多糖的方法 | |
| CN108441429B (zh) | 一种小核菌及其发酵生产硬葡聚糖的方法 | |
| CN102161713B (zh) | 用酶解-超滤浓缩-喷雾干燥工艺连续制备高纯度果胶的方法 | |
| CN104031109B (zh) | 一种微生物发酵纯化茶皂素的方法 | |
| CN104911106B (zh) | 一种嗜松青霉菌株及其该菌株制备右旋糖酐酶的方法 | |
| CN106636252A (zh) | 干巴菌胞外多糖及其制备方法和应用 | |
| Jebur et al. | Chitosan Production from Aspergillus oryzae SU-B2 by submerged fermentation and studying some of its Physiochemical and antibacterial Characteristics | |
| CN102816751B (zh) | 一种高活性壳聚糖酶及其制备方法 | |
| CN105859911B (zh) | 一种透明质酸分离纯化的方法 | |
| US20220073572A1 (en) | Process for extracting phycocyanins | |
| CN104450831A (zh) | 一种提取鱼软骨中硫酸软骨素的方法 | |
| CN107827993B (zh) | 贝类粗多糖中蛋白质的发酵脱除方法 | |
| CN105821098A (zh) | 自絮凝发酵生产α-熊果苷 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20180807 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |