CN108373496A

CN108373496A - 抗氧化性多肽gtmgavgprg及其制备方法

Info

Publication number: CN108373496A
Application number: CN201810471849.5A
Authority: CN
Inventors: 陶玉贵; 杜雾晨; 葛飞; 朱龙宝; 张旭光; 孙良玉; 宋平; 李婉珍
Original assignee: Anhui Polytechnic University
Current assignee: Anhui Polytechnic University
Priority date: 2018-05-17
Filing date: 2018-05-17
Publication date: 2018-08-07

Abstract

本发明公开了一种抗氧化性多肽GTMGAVGPRG及其制备方法，该抗氧化性多肽GTMGAVGPRG结构如式(I)所示，该制备方法采用固相合成抗氧化肽GTMGAVGPRG，该制备方法具有操作简单和产率高的优点；同时该抗氧化肽GTMGAVGPRG对自由基具有优异的清除效果。

Description

抗氧化性多肽GTMGAVGPRG及其制备方法

技术领域

本发明涉及抗氧化性多肽，具体地，涉及一种抗氧化性多肽GTMGAVGPRG及其制备方法。

背景技术

生物分子氧化是一个自由基介导的过程，它对加工类食品和生物系统造成很大的伤害。抗氧化肽对抑制、延缓脂质氧化，保护人体组织器官免受自由基侵害的有特定作用，具有较强抑制生物大分子过氧化和清除体内自由基的功能。抗氧化肽的作用机理是直接作用在自由基，或是间接消耗掉容易生成自由基的物质，防止发生进一步反应。自由基是高度不稳定的分子，除了体内正常反应外，环境因素也可以产生自由基。当体内的自由基超过了身体对其的抵抗力时，则会出现氧化性应激，氧化性应激会造成失明、关节炎、阿尔兹海默症、心血管疾病等。目前研究证实氧化性应激与大约200种疾病的产生有关。身体有抵抗自由基的系统，主要有两个防御系统：储存的抗氧化剂和抗氧化酶。如果这些防御系统供应不足，或者自由基过量，或者如果体内的修复系统不能完全修复损伤，健康就会出现问题。

目前，国内外专利对于抗氧化肽的研究层出不穷：专利文献CN 104356203A提供了一种抗氧化肽及制备方法与应用，该多肽序列为YTIQY；专利文献CN 103880933A提供了酶解小藻球蛋白，得到一种新型抗氧化肽，其氨基酸序列为AETIGLAP；专利文献CN103739693A提供了一种具有抗氧化活性的合浦珠母贝肉抗氧化肽序列，其氨基酸序列为GAGLPGKRER；专利文献CN 105566446A公开了一种来源于蒲公英籽的抗氧化肽的氨基酸序列、制备方法及其应用，其氨基酸序列为VF。就目前看来，多肽大多还是从微生物中进行提取，而微生物中提取多肽的技术操作复杂且多肽得率低。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗氧化性多肽GTMGAVGPRG及其制备方法，该制备方法采用固相合成抗氧化肽GTMGAVGPRG，该制备方法具有操作简单和产率高的优点；同时该抗氧化肽GTMGAVGPRG对自由基具有优异的清除效果。

为了实现上述目的，本发明提供了一种抗氧化性多肽GTMGAVGPRG，其中，该抗氧化性多肽GTMGAVGPRG结构如式(I)所示，

本发明还提供了一种如上述的抗氧化性多肽GTMGAVGPRG的制备方法，包括：

1)将基体树脂浸泡于溶剂中，接着加入N,N-二异丙基乙胺DIEA、N-芴甲氧羰基甘氨酸Fmoc-Gly-OH进行接触反应，然后洗涤、封头处理、脱保护，最后洗涤直至茚三酮检测为蓝色以得到二级树脂；

2)将二级树脂依次与多种氨基酸进行多次改性处理得到三级树脂；每次改性处理为：将二级树脂与氨基酸在1-羟基苯并三氮唑HoBt、N,N-二异丙基碳二亚胺DIC的存在下进行接触反应，然后经过脱保护、洗涤直至茚三酮检测为蓝色以得到三级树脂；单次改性处理中的化合物依次独立为N-芴甲氧羰基精氨酸Fmoc-Arg-OH、N-芴甲氧羰基脯氨酸Fmoc-Pro-OH、N-芴甲氧羰基甘氨酸Fmoc-Gly-OH、N-芴甲氧羰基缬氨酸Fmoc-Val-OH、N-芴甲氧羰基丙氨酸Fmoc-Ala-OH、N-芴甲氧羰基甘氨酸Fmoc-Gly-OH、N-芴甲氧羰基甲硫氨酸Fmoc-Met-OH、N-芴甲氧羰基苏氨酸Fmoc-Thr-OH、N-芴甲氧羰基甘氨酸Fmoc-Gly-OH；

3)将三级树脂洗涤，然后与切割液进行切割反应以制得抗氧化性多肽GTMGAVGPRG。

通过上述技术方案，结合图1可知，本发明以基体树脂为载体，在树脂上合成多(甘氨酸—苏氨酸—甲硫氨酸—甘氨酸—丙氨酸—缬氨酸—甘氨酸—脯氨酸—精氨酸—甘氨酸)肽，最后用含有三氟乙酸的切割液将此序列多肽从树脂上切割下来，用乙醚沉析法拿到粗品，用HPLC纯化得到纯品。该抗氧化肽具有较强的抗氧化性能，对DPPH、ABTS自由基都有强清除作用，表明其在抗氧化活性开发和应用方面有重要价值。

本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。

附图说明

附图是用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本发明，但并不构成对本发明的限制。在附图中：

图1是本发明的一种优选实施方式的制备路线图；

图2是检测例1中的液相质谱图；

图3是检测例1中的红外光谱图

图4是实施例1制得的GRPGVAGMTG清除DPPH自由基的“量-效”关系曲线图；

图5是实施例1制得的抗氧化肽GRPGVAGMTG清除ABTS自由基的“量-效”关系曲线图。

具体实施方式

以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。

在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。

本发明提供了一种抗氧化性多肽GTMGAVGPRG，其中，该抗氧化性多肽GTMGAVGPRG结构如式(I)所示，

在本发明的步骤1)中，浸泡的条件可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高浸泡效果，优选地，在步骤1)中，浸泡至少满足以下条件：浸泡温度为20-25℃，浸泡时间为20-40min。

在本发明的步骤1)中，接触反应的条件可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高产率以及反应速率，优选地，在步骤1)中，接触反应至少满足以下条件：反应温度为20-25℃，反应时间为1-2h。

在本发明的步骤1)中，物料的用量可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高产率，优选地，在步骤1)中，相对于0.5g的基体树脂，当取代度为0.5时，DIEA的用量为1-1.5mL，Fmoc-Gly-OH的用量为0.2-0.4g，溶剂的用量为10-15mL。

在本发明的步骤1)中，封头处理的条件可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高产率，优选地，在步骤1)中，封头处理采用二氯甲烷DCM、甲醇和DIEA加入体系中进行。

在本发明的步骤1)中，封头处理的试剂的用量可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高产率，优选地，相对于0.5g的基体树脂，DCM的用量为10-15mL，甲醇的用量为1-1.5mL，DIEA的用量为1-1.5mL。

在本发明的步骤1)中，溶剂的种类可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高产率，优选地，溶剂选自DCM、DMF、DMSO、HEMPA中的至少一者，基体树脂选自2-氯三苯甲基氯树脂、Wang树脂、MBHA树脂中的至少一者。

在本发明的步骤2)中，接触反应的条件可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高产率，优选地，在步骤2)中，接触反应至少满足以下条件：反应温度为20-25℃，反应时间为60-80min。

在本发明的步骤2)中，物料的用量以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高产率，优选地，在单次改性处理中，相对于0.5g基体树脂，HoBt的用量为0.4-0.6g，DIC的用量为1-1.5mL，化合物的用量依次为：N-芴甲氧羰基精氨酸Fmoc-Arg-OH的用量为1-1.5g，N-芴甲氧羰基脯氨酸Fmoc-Pro-OH的用量为0.8-1.0g，N-芴甲氧羰基甘氨酸Fmoc-Gly-OH的用量为0.8-1.0g，N-芴甲氧羰基缬氨酸Fmoc-Val-OH的用量为1-1.2g，N-芴甲氧羰基丙氨酸Fmoc-Ala-OH的用量为0.8-1.0g，N-芴甲氧羰基甘氨酸Fmoc-Gly-OH的用量为0.8-1.0g，N-芴甲氧羰基甲硫氨酸Fmoc-Met-OH的用量为1-1.2g，N-芴甲氧羰基苏氨酸Fmoc-Thr-OH的用量为1.1-1.3g，N-芴甲氧羰基甘氨酸Fmoc-Gly-OH的用量为0.8-1.0g。

在本发明的步骤3)中，切割液的组分以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高产率，优选地，在步骤3)中，切割液由三氟乙酸TFA和水组成；其中，各组分的具体含量可以在宽的范围内变化，但是为了进一步提高切割效果，优选地，所述TFA和水的体积比为95-97：3-5；

在本发明的步骤3)中，切割液的用量以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高产率，优选地，相对于0.5g的基体树脂，切割液的用量为5-10mL。

在本发明的步骤3)中，切割反应的条件以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高产率，优选地，在步骤3)中，切割反应满足以下条件：切割温度为20-25℃，切割时间为100-140min。

在本发明的步骤1)-3)中，洗涤的操作以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高产率，优选地，在步骤1)-3)中，洗涤采用分步洗涤的方式进行，洗涤液选自二甲基甲酰胺DMF、DCM、甲醇中的至少一者。

在本发明的步骤1)-3)中，脱保护采用的试剂以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高产率，优选地，在步骤1)-3)中，脱保护采用向体系中添加哌啶进行；其中，单次脱保护的时间也可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高脱保护的效果，优选地，单次脱保护的时间为20-25min。

在本发明中，产物的提纯可以采用多种方式进行，为了进一步简化提纯步骤以及提高提纯效果，优选地，在切割反应之后，该制备方法还包括提纯：首先采用冰乙醚离心沉降得到粗品，接着通过梯度洗脱法进行二次提纯；其中，梯度洗脱法中流动相A组分为0.05-0.12体积％的三氟乙酸水溶液，流动相B组分为乙腈。

其中，二次提纯的具体条件可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高提纯效果，优选地，在二次提纯过程中，洗脱梯度为0-60min，检测波长为220-254nm，柱温为20-32℃，流动相流速80-120mL/min；更优选地，在50min内，流动相B组分的体积浓度由45％升至95％。

以下将通过实施例对本发明进行详细描述。

实施例1

1)将0.5g 2-氯三苯甲基氯树脂在5mL二氯甲烷中浸泡30min使树脂充分蓬松，暴露更多的反应位点；接着加入0.2g Fmoc-Gly-OH、1mL DIEA于25℃下反应1.5h，然后进行洗涤；再加入15mL DCM、1.5mL甲醇和1mL DIEA至体系中进行封头处理30min，用DMF洗3遍，茚三酮检测树脂为白色即可进行下一步操作。然后加入20重量％的哌啶溶液，25℃下反应25min，脱去Fmoc，再用DMF洗涤3遍，抽去滤液，茚三酮检测树脂呈蓝色得到二级树脂；

2)进行九步改性处理得到三级树脂，每次所述改性处理为：将上述二级树脂、氨基酸、0.4g HoBt、1mL DIC在25℃下接触反应1h，抽去滤液，用DMF洗涤3遍，加入20％的哌啶溶液进行脱保护，25℃反应30min，脱去Fmoc，再用DMF洗涤3遍，抽去滤液，茚三酮检测为蓝色；其中，九步改性处理中氨基酸的投放量依次为：所述化合物的用量依次为:1g Fmoc-Arg-OH、0.8g Fmoc-Pro-OH、0.8g Fmoc-Gly-OH、0.9g Fmoc-Val-OH、0.8g Fmoc-Ala-OH、0.8gFmoc-Gly-OH、1.0g Fmoc-Met-OH、1.1g Fmoc-Thr-OH、0.8g Fmoc-Gly-OH；

3)将三级树脂依次通过DMF、DCM(使树脂蓬松)、甲醇(吸水)洗涤、抽滤得到树脂粉末，加入5mL切割液(三氟乙酸TFA、水的重量比为95：5)切割树脂与肽链，加入冰乙醚离心3次沉降得到粗品；

4)将粗品进行高效液相纯化得到纯净抗氧化多肽GTMGAVGPRG，产率为95.1％，具体为：在开始工作之前先使用100％的乙腈冲洗柱子20min，以保证色谱柱内残留的样品等杂质影响制备效果；将200mg粗品使用乙腈和水的混合溶液(乙腈、水的重量比为80-20:20-80)溶解成20mL溶液进行梯度洗脱，流动相A组分为0.1体积％的三氟乙酸水溶液，流动相B组分为乙腈；洗脱梯度为0-60min，检测波长为220nm，柱温为30℃，流动相流速100mL/min，进样量5μL；在50min内，流动相B组分的体积浓度由45％升至95％。

实施例2

1)将0.5g 2-氯三苯甲基氯树脂在5mL二氯甲烷中浸泡30min使树脂充分蓬松，暴露更多的反应位点；接着加入0.3g Fmoc-Gly-OH、1.5mL DIEA于25℃下反应1.5h，然后进行洗涤；再加入15mL DCM、1.5mL甲醇和1.5mL DIEA至体系中进行封头处理30min，用DMF洗3遍，茚三酮检测树脂为白色即可进行下一步操作。然后加入20％的哌啶溶液，25℃下反应25min，脱去Fmoc，再用DMF洗涤3遍，抽去滤液，茚三酮检测树脂呈蓝色得到二级树脂；

2)进行九步改性处理得到三级树脂，每次所述改性处理为：将上述二级树脂、氨基酸、0.5g HoBt、1.5mL DIC在25℃下接触反应1h，抽去滤液，用DMF洗涤3遍，加入用20重量％的哌啶溶液进行脱保护，25℃反应30min，脱去Fmoc，再用DMF洗涤3遍，抽去滤液，茚三酮检测为蓝色；其中，九步改性处理中氨基酸的投放量依次为：所述化合物的用量依次为：1.1gFmoc-Arg-OH、0.9g Fmoc-Pro-OH、0.9g Fmoc-Gly-OH、1.0g Fmoc-Val-OH、0.9g Fmoc-Ala-OH、0.9g Fmoc-Gly-OH、1.1g Fmoc-Met-OH、1.2g Fmoc-Thr-OH、0.9g Fmoc-Gly-OH；

3)将三级树脂依次通过DMF、DCM(使树脂蓬松)、甲醇(吸水)洗涤、抽滤得到树脂粉末，加入7.5mL切割液(三氟乙酸TFA、水的重量比为97：

3)切割树脂与肽链，加入冰乙醚离心3次沉降得到粗品；

4)将粗品进行高效液相纯化得到纯净抗氧化多肽GTMGAVGPRG，产率为96.2％，具体为：在开始工作之前先使用100％的乙腈冲洗柱子20min，以保证色谱柱内残留的样品等杂质影响制备效果；将200mg粗品使用乙腈和水的混合溶液(乙腈、水的重量比为80-20:20-80)溶解成20mL溶液进行梯度洗脱，流动相A组分为0.1体积％的三氟乙酸水溶液，流动相B组分为乙腈；洗脱梯度为0-60min，检测波长为220nm，柱温为30℃，流动相流速100mL/min，进样量5μL；在50min内，流动相B组分的体积浓度由45％升至95％。

实施例3

1)将0.5g 2-氯三苯甲基氯树脂在5mL二氯甲烷中浸泡30min使树脂充分蓬松，暴露更多的反应位点；接着加入0.4g Fmoc-Gly-OH、2mL DIEA于25℃下反应1.5h，然后进行洗涤；再加入15mL DCM、1.5mL甲醇和1.5mLDIEA至体系中进行封头处理30min，用DMF洗3遍，茚三酮检测树脂为白色即可进行下一步操作。然后加入20重量％的哌啶溶液，25℃下反应25min，脱去Fmoc，再用DMF洗涤3遍，抽去滤液，茚三酮检测树脂呈蓝色得到二级树脂；

2)进行九步改性处理得到三级树脂，每次所述改性处理为：将上述二级树脂、氨基酸、0.6g HoBt、1.5mL DIC在25℃下接触反应1h，抽去滤液，用DMF洗涤3遍，加入用20重量％的哌啶溶液进行脱保护，25℃反应30min，脱去Fmoc，再用DMF洗涤3遍，抽去滤液，茚三酮检测为蓝色；其中，九步改性处理中氨基酸的投放量依次为：所述化合物的用量依次为：1.2gFmoc-Arg-OH、1.0g Fmoc-Pro-OH、1.0g Fmoc-Gly-OH、1.1g Fmoc-Val-OH、1.0g Fmoc-Ala-OH、1.0g Fmoc-Gly-OH、1.0g Fmoc-Met-OH、1.3g Fmoc-Thr-OH、0.9g Fmoc-Gly-OH；

3)将三级树脂依次通过DMF、DCM(使树脂蓬松)、甲醇(吸水)洗涤、抽滤得到树脂粉末，加入10mL切割液(三氟乙酸TFA、水的重量比为96：

4)切割树脂与肽链，加入冰乙醚离心3次沉降得到粗品；

4)将粗品进行高效液相纯化得到纯净抗氧化多肽GTMGAVGPRG，产率为94.6％，具体为：在开始工作之前先使用100％的乙腈冲洗柱子20min，以保证色谱柱内残留的样品等杂质影响制备效果；将200mg粗品使用乙腈和水的混合溶液(乙腈、水的重量比为80-20:20-80溶解成20mL溶液进行梯度洗脱，流动相A组分为0.1体积％的三氟乙酸水溶液，流动相B组分为乙腈；洗脱梯度为0-60min，检测波长为220nm，柱温为30℃，流动相流速100mL/min，进样量5μL；在50min内，流动相B组分的体积浓度由45％升至95％。

检测例1

利用液相色谱-质谱联用仪(LC-MS)及红外光谱仪分析实施例1中抗氧化肽的分子量及结构，检测结果参见图2和图3，由图可知合成的多肽链为GTMGAVGPRG。

检测例2

实施例1中多肽链为GTMGAVGPRG的抗氧化活性的测试：

1)DPPH自由基清除能力测试

利用DPPH自由基清除率测定法研究多肽的抗氧化性。配制浓度为1×10^-5mol/L的DPPH乙醇溶液，避光保存。将2mL 0.1mmol的DPPH无水乙醇溶液加入到含有2mL GTMGAVGPRG样品溶液(1mL样品+1mL DMSO)的试管中，混匀。25℃下放置30min后，于517nm处测定吸光度，吸光值越小，表明自由基清除能力越强；具体结果见图3。

清除率(％)＝〔1－(A_i－A_j)/A₀〕×100％，式中，A₀为2mL，0.1mmol的DPPH无水乙醇溶液+2mL的样品溶剂，空白对照；A_i为2mL，0.1mmol的DPPH无水乙醇溶液+2mL的样品；A_j为2mL无水乙醇+2mL的样品。

2)ABTS自由基清除活性的测定

以去离子水将ABTS溶解，使ABTS浓度达到7mmol/L，加入过硫酸钾，使过硫酸钾的浓度为2.45mmol/L，之后将该溶液在室温下置于暗处过夜12-16h。将生成的ABTS自由基溶液用磷酸缓冲液(PBS，0.2mol/L，pH7.4)稀释，使其在734nm下的吸光值为0.70。取0.1mLGTMGAVGPRG样品液(1mL样品+1mL DMSO)与2.9mL ABTS自由基液混合，摇匀30s，暗处反应10min，然后在734nm处测其吸光值，以蒸馏水作为空白；具体结果见图4。

清除率(％)＝(A₀－A_j)/A₀×100％；式中，A₀为2.9mL ABTS试剂与0.1mL蒸馏水混合液的吸光值；A_j为2.9mL ABTS试剂与0.1mLGTMGAVGPRG样品液混合液的吸光值。

通过图3和图4可知：本发明提供的GTMGAVGPRG多肽对于DPPH自由基和ABTS自由基均有优异的清除能力，其抗氧化能力较强。

按照检测例1和2相同的方法对实施例2-3的产物进行检测，检测结果基本与实施例1的产物的检测结果基本一致。

以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。

另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。

Claims

1.一种抗氧化性多肽GTMGAVGPRG，其特征在于，所述抗氧化性多肽GTMGAVGPRG结构如式(I)所示，

2.一种如权利要求1所述的抗氧化性多肽GTMGAVGPRG的制备方法，其特征在于，包括：

2)将所述二级树脂依次与多种氨基酸进行多次改性处理得到三级树脂；每次所述改性处理为：将二级树脂与所述氨基酸在1-羟基苯并三氮唑HoBt、N,N-二异丙基碳二亚胺DIC的存在下进行接触反应，然后经过脱保护、洗涤直至茚三酮检测为蓝色以得到三级树脂；单次改性处理中的化合物依次独立为N-芴甲氧羰基精氨酸Fmoc-Arg-OH、N-芴甲氧羰基脯氨酸Fmoc-Pro-OH、N-芴甲氧羰基甘氨酸Fmoc-Gly-OH、N-芴甲氧羰基缬氨酸Fmoc-Val-OH、N-芴甲氧羰基丙氨酸Fmoc-Ala-OH、N-芴甲氧羰基甘氨酸Fmoc-Gly-OH、N-芴甲氧羰基甲硫氨酸Fmoc-Met-OH、N-芴甲氧羰基苏氨酸Fmoc-Thr-OH、N-芴甲氧羰基甘氨酸Fmoc-Gly-OH；

3)将所述三级树脂洗涤，然后与切割液进行切割反应以制得所述抗氧化性多肽GTMGAVGPRG。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在步骤1)中，所述浸泡至少满足以下条件：浸泡温度为20-25℃，浸泡时间为20-40min；

优选地，在步骤1)中，所述接触反应至少满足以下条件：反应温度为20-25℃，反应时间为1-2h。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在步骤1)中，相对于0.5g的所述基体树脂，当取代度为0.5时，所述DIEA的用量为1-1.5mL，所述Fmoc-Gly-OH的用量为0.2-0.4g，所述溶剂的用量为10-15mL；

优选地，在步骤1)中，所述封头处理采用二氯甲烷DCM、甲醇和DIEA加入体系中进行；

更优选地，相对于0.5g的所述基体树脂，所述DCM的用量为10-15mL，所述甲醇的用量为1-1.5mL，所述DIEA的用量为1-1.5mL；

进一步优选地，所述溶剂选自DCM、DMF、DMSO和HEMPA中的至少一者，所述基体树脂选自2-氯三苯甲基氯树脂、Wang树脂、MBHA树脂中的至少一者。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在步骤2)中，所述接触反应至少满足以下条件：反应温度为20-25℃，反应时间为60-80min；

优选地，在单次改性处理中，相对于0.5g所述基体树脂，所述HoBt的用量为0.4-0.6g，所述DIC的用量为1-1.5mL，所述化合物的用量依次为：所述N-芴甲氧羰基精氨酸Fmoc-Arg-OH的用量为1-1.5g，所述N-芴甲氧羰基脯氨酸Fmoc-Pro-OH的用量为0.8-1.0g，所述N-芴甲氧羰基甘氨酸Fmoc-Gly-OH的用量为0.8-1.0g，所述N-芴甲氧羰基缬氨酸Fmoc-Val-OH的用量为1-1.2g，所述N-芴甲氧羰基丙氨酸Fmoc-Ala-OH的用量为0.8-1.0g，所述N-芴甲氧羰基甘氨酸Fmoc-Gly-OH的用量为0.8-1.0g，所述N-芴甲氧羰基甲硫氨酸Fmoc-Met-OH的用量为1-1.2g，所述N-芴甲氧羰基苏氨酸Fmoc-Thr-OH的用量为1.1-1.3g，所述N-芴甲氧羰基甘氨酸Fmoc-Gly-OH的用量为0.8-1.0g。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在步骤3)中，切割液由三氟乙酸TFA和水组成；

优选地，所述TFA和水的体积比为95-97：3-5；

更优选地，相对于0.5g的所述基体树脂，所述切割液的用量为5-10mL。

7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在步骤3)中，所述切割反应满足以下条件：切割温度为20-25℃，切割时间为100-140min。

8.根据权利要求2-7所述的制备方法，其特征在于，在步骤1)-3)中，所述洗涤采用分步洗涤的方式进行，洗涤液选自二甲基甲酰胺DMF、DCM、甲醇中的至少一者。

9.根据权利要求2-7所述的制备方法，其特征在于，在步骤1)-3)中，所述脱保护采用向体系中添加哌啶进行；

优选地，单次脱保护的时间为20-25min。

10.根据权利要求2-7所述的制备方法，其特征在于，在所述切割反应之后，所述制备方法还包括提纯：首先采用冰乙醚离心沉降得到粗品，接着通过梯度洗脱法进行二次提纯；其中，梯度洗脱法中流动相A组分为0.05-0.12体积％的三氟乙酸水溶液，流动相B组分为乙腈；

优选地，在所述二次提纯过程中，洗脱梯度为0-60min，检测波长为220-254nm，柱温为20-32℃，流动相流速80-120mL/min；

更优选地，在50min内，流动相B组分的体积浓度由45％升至95％。