CN108359663A - 一种聚磷菌固定化小球及其应用 - Google Patents

一种聚磷菌固定化小球及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种聚磷菌固定化小球，是由以下步骤制得的：菌悬液的制备；活性炭吸附；γ‑聚谷氨酸/壳寡糖水凝胶的制备；复合包埋载体水溶液的制备；聚磷菌固定化小球的制备。本发明还公开了该聚磷菌固定化小球在富磷废水处理中的应用。本发明制备的聚磷菌固定化小球活性高、吸附量大、机械强度好。本发明以活性炭为吸附剂，显著提高聚磷菌固定化小球的生物吸附量，还可以起到骨架支撑作用，增强聚磷菌固定化小球的机械强度；γ‑聚谷氨酸/壳寡糖水凝胶生物相容性好，粘性大，无毒，环境友好性好，显著提升聚磷菌固定化小球固定微生物的活性及吸附量，还可以提高小球的机械强度、含水率，扩大聚磷菌固定化小球内部的支架孔径。

Description

一种聚磷菌固定化小球及其应用
技术领域
本发明属于微生物固定化技术领域，具体涉及一种聚磷菌固定化小球及其应用。
背景技术
近年来，在自然因素和人为因素的双重影响下，我国地表水体富营养化现象日益严重。磷是水体富营养化问题中起决定作用的因素，过量磷是造成水体污秽异臭，使湖泊发生富营养化和海湾出现赤潮的主要原因，因此，如何降低水体中的磷已经成为水体富营养化控制研究的关键。聚磷菌是一类广泛存在于富营养化湖泊底泥中特殊的兼性菌，厌氧释磷，好氧状态下超量吸磷，将水体中的溶解态磷转化为难溶性的聚磷酸盐储存在细胞内，使体内含磷量超过一般细菌含磷量的数倍，是污废水生物除磷的重要菌群。利用聚磷菌进行污水处理是一项新型环保技术，以其除磷效果好、费用低、节约能源、无二次污染等优点，已成为生物除磷的强势工具和研究热点。
固定化技术是指利用化学或物理手段将游离的酶、微生物细胞、动植物细胞、细胞器等定位于限定的空间区域，并使其保持活性，可反复使用的一种新型生物技术。微生物固定化技术作为固定化技术的分支直接从固定化酶技术衍生而来，为完善和提高游离微生物体系性能而全面发展起来的，它通过将菌体固定在载体上，避免菌体流失，以提高菌体作用效率。固定化微生物的制备方式一般可分为共价结合法、交联法、吸附法和包埋法。固定化所需要的载体也各有不同，比如海藻酸钠、聚乙烯醇、壳聚糖、聚酯等有机高分子和磷酸钙、碳酸钙、硅胶、硅藻土、活性炭等无机物。活性炭由于巨大的比表面积、发达的孔隙结构、稳定的化学性能等特点，在水处理方面作为一种极强的吸附剂发挥着重要作用。活性炭作为载体固定化微生物效率更高，生物附着量更大。聚乙烯醇凝胶因无毒、价廉、抗微生物分解和机械强度高等特点受到重视。但聚乙烯醇凝胶制备过程中使用硼酸交联剂对微生物细胞有毒害作用，聚乙烯醇载体在使用过程中又易发生黏连现象，存在包埋颗粒易破碎、传质阻力大、产气上浮及活性丧失大等缺陷。海藻酸钠固定化小球的制备需钙离子交联形成凝胶，其能有效的包埋微生物细胞，且微生物的活性高，但钙化的海藻酸钠凝胶稳定性差，容易在多离子作用或在钙离子扩散而钾、钠离子大量聚集是变软，出现“漏酶”现象。
发明内容
本发明提供了一种活性高、吸附量大、机械强度好的聚磷菌固定化小球
本发明还提供了该聚磷菌固定化小球的应用。
一种聚磷菌固定化小球，是由以下步骤制得的：
1）菌悬液的制备：将聚磷菌接种于富集培养基中，摇床培养，得到对数生长期的菌体，离心，弃去上清液，将菌体用0.9%的生理盐水洗涤，反复离心4-5次，加入与菌液等体积的生理盐水稀释，得菌悬液；
本发明制备的菌悬液中活菌数为1×106-1×108CFU/mL。
2）活性炭吸附：将菌悬液与活性炭室温混合吸附30min，得活性炭吸附菌悬液混合液；
3）γ-聚谷氨酸/壳寡糖水凝胶的制备：将γ-聚谷氨酸、透明质酸及壳寡糖加至去离子水中，85℃加热至完全溶解，冷却至28-32℃，加入交联剂室温不断搅拌交联5min，得γ-聚谷氨酸/壳寡糖水凝胶；
4）复合包埋载体水溶液的制备：将聚乙烯醇和海藻酸钠加至去离子水中，高温灭菌并使其完全溶解，冷却到28-32℃，得聚乙烯醇/海藻酸钠水溶液；将聚乙烯醇/海藻酸钠水溶液与γ-聚谷氨酸/壳寡糖水凝胶混合均匀，得复合包埋载体水溶液；
5）聚磷菌固定化小球的制备：将活性炭吸附菌悬液混合液和复合包埋载体水溶液混合，搅拌均匀，-5℃-5℃条件下用注射器滴加至不断搅拌的氯化钙/饱和硼酸溶液中，形成直径3-4mm的小球，4℃固定交联24h后，用生理盐水冲洗4-5次，4℃低温保存，得聚磷菌固定化小球。
所述步骤1）中，富集培养基为牛肉膏蛋白胨培养基，具体组成为：牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，氯化钠5g/L，余量为蒸馏水。
所述步骤1）中，摇床培养的温度为30℃，时间为6h；离心转速为8000r/min，离心10min。
所述步骤2）中，活性炭与菌悬液用量比3-5g：100mL。
所述步骤3）中，γ-聚谷氨酸、透明质酸、壳寡糖和去离子水的用量比为5-7g：0.3-0.5g：0.4-0.6g：100mL；交联剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和N-N-羟基琥珀酰亚胺。
所述步骤3）中，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、N-N-羟基琥珀酰亚胺和去离子水的用量比为1.8-2g：1-1.4g：100mL。
所述步骤4）中，高温灭菌的温度为121℃，压力为105-110kPa，时间为20min；聚乙烯醇、海藻酸钠、γ-聚谷氨酸/壳寡糖水凝胶和去离子水的用量比为10-14g：3-5g：8-12mL：90mL。
所述步骤5）中，氯化钙/饱和硼酸溶液中氯化钙浓度为3%-5%。
所述步骤5）中，活性炭吸附菌悬液混合液与复合包埋载体水溶液的体积比为1：1。
所述聚磷菌固定化小球在富磷废水处理中的应用。
所述聚磷菌固定化小球在废水中的接种量为100g/L；所述废水中磷的初始浓度不大于10mg/L。
本发明所用聚磷菌为不动杆菌（Acinetobacter sp.）G2，该菌购于中国典型培养物保藏中心（中国武汉，武汉大学内），保藏编号为：CCTCCM2015302。
本发明以聚磷菌制备菌悬液，活性炭为吸附剂，生理盐水为表面处理剂，3%氯化钙/饱和硼酸溶液为交联剂，γ-聚谷氨酸/壳寡糖水凝胶、海藻酸钠和聚乙烯醇为包埋剂，采用包埋共吸附的方式制备聚磷菌固定化小球。
本发明的有益效果：本发明制备的聚磷菌固定化小球活性高、吸附量大、机械强度好。本发明以活性炭为吸附剂，显著提高聚磷菌固定化小球的的生物吸附量，还可以起到骨架支撑作用，增强聚磷菌固定化小球的机械强度；γ-聚谷氨酸/壳寡糖水凝胶生物相容性好，粘性大，无毒，环境友好性好，显著提升聚磷菌固定化小球固定微生物的活性及吸附量，还可以提高小球的机械强度、含水率，扩大聚磷菌固定化小球内部的支架孔径。
附图说明
图1为本发明制备的聚磷菌固定化小球的照片；
图2为本发明制备的聚磷菌固定化小球的断面在5000倍下的电镜照片；
图3为本发明制备的聚磷菌固定化小球的断面在10000倍下的电镜照片。
具体实施方法
下面结合具体实例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了发明讲述内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
本发明所用聚磷菌为不动杆菌（Acinetobacter sp.）G2，该菌购于中国典型培养物保藏中心（中国武汉，武汉大学内），保藏编号为：CCTCCM2015302。
实施例1
一种聚磷菌固定化小球，是由以下步骤制得的：
1）菌悬液的制备：将聚磷菌接种于富集培养基中，摇床培养，得到对数生长期的菌体，离心，弃去上清液，将菌体用0.9%的生理盐水洗涤，反复离心4-5次，加入与菌液等体积的生理盐水稀释，得菌悬液；
本发明制备的菌悬液中活菌数为1×106-1×108CFU/mL。
2）活性炭吸附：将菌悬液与活性炭室温混合吸附30min，得活性炭吸附菌悬液混合液；
3）γ-聚谷氨酸/壳寡糖水凝胶的制备：将γ-聚谷氨酸、透明质酸及壳寡糖加至去离子水中，85℃加热至完全溶解，冷却至28℃，加入交联剂室温不断搅拌交联5min，得γ-聚谷氨酸/壳寡糖水凝胶；
4）复合包埋载体水溶液的制备：将聚乙烯醇和海藻酸钠加至去离子水中，高温灭菌并使其完全溶解，冷却到32℃，得聚乙烯醇/海藻酸钠水溶液；将聚乙烯醇/海藻酸钠水溶液与γ-聚谷氨酸/壳寡糖水凝胶混合均匀，得复合包埋载体水溶液；
5）聚磷菌固定化小球的制备：将活性炭吸附菌悬液混合液和复合包埋载体水溶液混合，搅拌均匀，-5℃-5℃条件下用注射器滴加至不断搅拌的氯化钙/饱和硼酸溶液中，形成直径3-4mm的小球，4℃固定交联24h后，用生理盐水冲洗4-5次，4℃低温保存，得聚磷菌固定化小球。
所述步骤1）中，富集培养基为牛肉膏蛋白胨培养基，具体组成为：牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，氯化钠5g/L，余量为蒸馏水。
所述步骤1）中，摇床培养的温度为30℃，时间为6h；离心转速为8000r/min，离心10min。
所述步骤2）中，活性炭与菌悬液用量比3g：100mL。
所述步骤3）中，γ-聚谷氨酸、透明质酸、壳寡糖和去离子水的用量比为7g：0.3g：0.6g：100mL；交联剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和N-N-羟基琥珀酰亚胺。
所述步骤3）中，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、N-N-羟基琥珀酰亚胺和去离子水的用量比为2g：1g：100mL。
所述步骤4）中，高温灭菌的温度为121℃，压力为105-110kPa，时间为20min；聚乙烯醇、海藻酸钠、γ-聚谷氨酸/壳寡糖水凝胶和去离子水的用量比为14g：3g：8mL：90mL。
所述步骤5）中，氯化钙/饱和硼酸溶液中氯化钙浓度为3%。
所述步骤5）中，活性炭吸附菌悬液混合液与复合包埋载体水溶液的体积比为1：1。
所述聚磷菌固定化小球在富磷废水处理中的应用。
所述聚磷菌固定化小球在废水中的接种量为100g/L；所述废水中磷的初始浓度不大于10mg/L。
实施例2
一种聚磷菌固定化小球，是由以下步骤制得的：
1）菌悬液的制备：将聚磷菌接种于富集培养基中，摇床培养，得到对数生长期的菌体，离心，弃去上清液，将菌体用0.9%的生理盐水洗涤，反复离心4-5次，加入与菌液等体积的生理盐水稀释，得菌悬液；
本发明制备的菌悬液中活菌数为1×106-1×108CFU/mL。
2）活性炭吸附：将菌悬液与活性炭室温混合吸附30min，得活性炭吸附菌悬液混合液；
3）γ-聚谷氨酸/壳寡糖水凝胶的制备：将γ-聚谷氨酸、透明质酸及壳寡糖加至去离子水中，85℃加热至完全溶解，冷却至30℃，加入交联剂室温不断搅拌交联5min，得γ-聚谷氨酸/壳寡糖水凝胶；
4）复合包埋载体水溶液的制备：将聚乙烯醇和海藻酸钠加至去离子水中，高温灭菌并使其完全溶解，冷却到30℃，得聚乙烯醇/海藻酸钠水溶液；将聚乙烯醇/海藻酸钠水溶液与γ-聚谷氨酸/壳寡糖水凝胶混合均匀，得复合包埋载体水溶液；
5）聚磷菌固定化小球的制备：将活性炭吸附菌悬液混合液和复合包埋载体水溶液混合，搅拌均匀，-5℃-5℃条件下用注射器滴加至不断搅拌的氯化钙/饱和硼酸溶液中，形成直径3-4mm的小球，4℃固定交联24h后，用生理盐水冲洗4-5次，4℃低温保存，得聚磷菌固定化小球。
所述步骤1）中，富集培养基为牛肉膏蛋白胨培养基，具体组成为：牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，氯化钠5g/L，余量为蒸馏水。
所述步骤1）中，摇床培养的温度为30℃，时间为6h；离心转速为8000r/min，离心10min。
所述步骤2）中，活性炭与菌悬液用量比4g：100mL。
所述步骤3）中，γ-聚谷氨酸、透明质酸、壳寡糖和去离子水的用量比为6g：0.4g：0.5g：100mL；交联剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和N-N-羟基琥珀酰亚胺。
所述步骤3）中，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、N-N-羟基琥珀酰亚胺和去离子水的用量比为1.9g：1.2g：100mL。
所述步骤4）中，高温灭菌的温度为121℃，压力为105-110kPa，时间为20min；聚乙烯醇、海藻酸钠、γ-聚谷氨酸/壳寡糖水凝胶和去离子水的用量比为12g：4g：10mL：90mL。
所述步骤5）中，氯化钙/饱和硼酸溶液中氯化钙浓度为4%。
所述步骤5）中，活性炭吸附菌悬液混合液与复合包埋载体水溶液的体积比为1：1。
所述聚磷菌固定化小球在富磷废水处理中的应用。
所述聚磷菌固定化小球在废水中的接种量为100g/L；所述废水中磷的初始浓度不大于10mg/L。
实施例3
一种聚磷菌固定化小球，是由以下步骤制得的：
1）菌悬液的制备：将聚磷菌接种于富集培养基中，摇床培养，得到对数生长期的菌体，离心，弃去上清液，将菌体用0.9%的生理盐水洗涤，反复离心4-5次，加入与菌液等体积的生理盐水稀释，得菌悬液；
本发明制备的菌悬液中活菌数为1×106-1×108CFU/mL。
2）活性炭吸附：将菌悬液与活性炭室温混合吸附30min，得活性炭吸附菌悬液混合液；
3）γ-聚谷氨酸/壳寡糖水凝胶的制备：将γ-聚谷氨酸、透明质酸及壳寡糖加至去离子水中，85℃加热至完全溶解，冷却至32℃，加入交联剂室温不断搅拌交联5min，得γ-聚谷氨酸/壳寡糖水凝胶；
4）复合包埋载体水溶液的制备：将聚乙烯醇和海藻酸钠加至去离子水中，高温灭菌并使其完全溶解，冷却到28℃，得聚乙烯醇/海藻酸钠水溶液；将聚乙烯醇/海藻酸钠水溶液与γ-聚谷氨酸/壳寡糖水凝胶混合均匀，得复合包埋载体水溶液；
5）聚磷菌固定化小球的制备：将活性炭吸附菌悬液混合液和复合包埋载体水溶液混合，搅拌均匀，-5℃-5℃条件下用注射器滴加至不断搅拌的氯化钙/饱和硼酸溶液中，形成直径3-4mm的小球，4℃固定交联24h后，用生理盐水冲洗4-5次，4℃低温保存，得聚磷菌固定化小球。
所述步骤1）中，富集培养基为牛肉膏蛋白胨培养基，具体组成为：牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，氯化钠5g/L，余量为蒸馏水。
所述步骤1）中，摇床培养的温度为30℃，时间为6h；离心转速为8000r/min，离心10min。
所述步骤2）中，活性炭与菌悬液用量比5g：100mL。
所述步骤3）中，γ-聚谷氨酸、透明质酸、壳寡糖和去离子水的用量比为5g：0.5g：0.4g：100mL；交联剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和N-N-羟基琥珀酰亚胺。
所述步骤3）中，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、N-N-羟基琥珀酰亚胺和去离子水的用量比为1.8g：1.4g：100mL。
所述步骤4）中，高温灭菌的温度为121℃，压力为105-110kPa，时间为20min；聚乙烯醇、海藻酸钠、γ-聚谷氨酸/壳寡糖水凝胶和去离子水的用量比为10g：5g：12mL：90mL。
所述步骤5）中，氯化钙/饱和硼酸溶液中氯化钙浓度为5%。
所述步骤5）中，活性炭吸附菌悬液混合液与复合包埋载体水溶液的体积比为1：1。
所述聚磷菌固定化小球在富磷废水处理中的应用。
所述聚磷菌固定化小球在废水中的接种量为100g/L；所述废水中磷的初始浓度不大于10mg/L。
对比例
一种聚磷菌固定化小球，是由以下步骤制得的：
1）菌悬液的制备：将聚磷菌接种于富集培养基中，摇床培养，得到对数生长期的菌体，离心，弃去上清液，将菌体用0.9%的生理盐水洗涤，反复离心4-5次，加入与菌液等体积的生理盐水稀释，得菌悬液；
本发明制备的菌悬液中活菌数为1×106-1×108CFU/mL。
2）活性炭吸附：将菌悬液与活性炭室温混合吸附30min，得活性炭吸附菌悬液混合液；
3）复合包埋载体水溶液的制备：将聚乙烯醇和海藻酸钠加至去离子水中，高温灭菌并使其完全溶解，冷却到30℃，得复合包埋载体水溶液；
4）聚磷菌固定化小球的制备：将活性炭吸附菌悬液混合液和复合包埋载体水溶液混合，搅拌均匀，-5℃-5℃条件下用注射器滴加至不断搅拌的氯化钙/饱和硼酸溶液中，形成直径3-4mm的小球，4℃固定交联24h后，用生理盐水冲洗4-5次，4℃低温保存，得聚磷菌固定化小球。
所述步骤1）中，富集培养基为牛肉膏蛋白胨培养基，具体组成为：牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，氯化钠5g/L，余量为蒸馏水。
所述步骤1）中，摇床培养的温度为30℃，时间为6h；离心转速为8000r/min，离心10min。
所述步骤2）中，活性炭与菌悬液用量比4g：100mL。
所述步骤3）中，高温灭菌的温度为121℃，压力为105-110kPa，时间为20min；聚乙烯醇、海藻酸钠和去离子水的用量比为12g：4g：100mL。
所述步骤4）中，氯化钙/饱和硼酸溶液中氯化钙浓度为3%。
所述步骤4）中，活性炭吸附菌悬液混合液与复合包埋载体水溶液的体积比为1：1。
所述聚磷菌固定化小球在富磷废水处理中的应用。
所述聚磷菌固定化小球在废水中的接种量为100g/L；所述废水中磷的初始浓度不大于10mg/L。
应用例
将实施例1-3和对比例制备的聚磷菌固定化小球应用在富磷废水，处理条件为：分别将初始浓度为10mg/L、5mg/L富磷废水装至摇瓶中，150mL/瓶；将聚磷菌固定化小球按照100g/L的比例加至摇瓶中，在30℃、转速150r/min摇床上将摇瓶培养5d，每隔1d取样测定磷含量，分别计算聚磷率，结果如表1所示。
初始浓度为10mg/L的富磷废水的组分为：葡萄糖0.3g，蛋白胨0.1g，酵母粉0.01g，乙酸钠0.15g，氯化钠0.05g，二水合硫酸镁0.15g，氯化铵0.18g，磷酸氢二钾0.0446g，加蒸馏水至1L。
初始浓度为5mg/L的富磷废水的组分为：葡萄糖0.3g，蛋白胨0.1g，酵母粉0.01g，乙酸钠0.15g，氯化钠0.05g，二水合硫酸镁0.15g，氯化铵0.18g，磷酸氢二钾0.0223g，加蒸馏水至1L。
表1聚磷菌固定化小球的聚磷率
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (10)

1.一种聚磷菌固定化小球，其特征在于，是由以下步骤制得的：
1）菌悬液的制备：将聚磷菌接种于富集培养基中，摇床培养，得到对数生长期的菌体，离心，弃去上清液，将菌体用0.9%的生理盐水洗涤，反复离心4-5次，加入与菌液等体积的生理盐水稀释，得菌悬液；
2）活性炭吸附：将菌悬液与活性炭室温混合吸附30min，得活性炭吸附菌悬液混合液；
3）γ-聚谷氨酸/壳寡糖水凝胶的制备：将γ-聚谷氨酸、透明质酸及壳寡糖加至去离子水中，85℃加热至完全溶解，冷却至28-32℃，加入交联剂室温不断搅拌交联5min，得γ-聚谷氨酸/壳寡糖水凝胶；
4）复合包埋载体水溶液的制备：将聚乙烯醇和海藻酸钠加至去离子水中，高温灭菌并使其完全溶解，冷却到28-32℃，得聚乙烯醇/海藻酸钠水溶液；将聚乙烯醇/海藻酸钠水溶液与γ-聚谷氨酸/壳寡糖水凝胶混合均匀，得复合包埋载体水溶液；
5）聚磷菌固定化小球的制备：将活性炭吸附菌悬液混合液和复合包埋载体水溶液混合，搅拌均匀，-5℃-5℃条件下用注射器滴加至不断搅拌的氯化钙/饱和硼酸溶液中，形成直径3-4mm的小球，4℃固定交联24h后，用生理盐水冲洗4-5次，4℃低温保存，得聚磷菌固定化小球。
2.根据权利要求1所述聚磷菌固定化小球，其特征在于，所述步骤1）中，富集培养基为牛肉膏蛋白胨培养基，具体组成为：牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，氯化钠5g/L，余量为蒸馏水。
3.根据权利要求1所述聚磷菌固定化小球，其特征在于，所述步骤1）中，摇床培养的温度为30℃，时间为6h；离心转速为8000r/min，离心10min。
4.根据权利要求1所述聚磷菌固定化小球，其特征在于，所述步骤2）中，活性炭与菌悬液用量比3-5g：100mL。
5.根据权利要求1所述聚磷菌固定化小球，其特征在于，所述步骤3）中，γ-聚谷氨酸、透明质酸、壳寡糖和去离子水的用量比为5-7g：0.3-0.5g：0.4-0.6g：100mL；交联剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和N-N-羟基琥珀酰亚胺。
6.根据权利要求5所述聚磷菌固定化小球，其特征在于，所述步骤3）中，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、N-N-羟基琥珀酰亚胺和去离子水的用量比为1.8-2g：1-1.4g：100mL。
7.根据权利要求1所述聚磷菌固定化小球，其特征在于，所述步骤4）中，高温灭菌的温度为121℃，压力为105-110kPa，时间为20min；聚乙烯醇、海藻酸钠、γ-聚谷氨酸/壳寡糖水凝胶和去离子水的用量比为10-14g：3-5g：8-12mL：90mL。
8.根据权利要求1所述聚磷菌固定化小球，其特征在于，所述步骤5）中，氯化钙/饱和硼酸溶液中氯化钙浓度为3%-5%；活性炭吸附菌悬液混合液与复合包埋载体水溶液的体积比为1：1。
9.一种权利要求1所述聚磷菌固定化小球的应用，其特征在于，所述聚磷菌固定化小球在富磷废水处理中的应用。
10.根据权利要求9所述聚磷菌固定化小球的应用，其特征在于，所述聚磷菌固定化小球在废水中的接种量为100g/L；所述废水中磷的初始浓度不大于10mg/L。
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