CN108359614A - 一株具有桔霉素脱毒能力的酿酒酵母 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一株具有桔霉素脱毒能力的酿酒酵母及其在桔霉素脱毒中的应用。通过采用高通量选育，筛选获得了一株具有桔霉素吸附能力的酿酒酵母，保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为：CCTCC NO：M2017724。本发明也公开了酿酒酵母在桔霉素脱毒中的应用：将酿酒酵母完整细胞或细胞壁组分添加于桔霉素污染的饲料中，桔霉素至少降低95%。本发明可应用于饲料中桔霉素的脱毒。

Description

一株具有桔霉素脱毒能力的酿酒酵母
所属技术领域
本发明公开了一种具有桔霉素脱毒活性的酿酒酵母及其在桔霉素脱毒中的应用。
背景技术
桔霉素是真菌次生代谢产物，广泛存在于谷物和饲料中。饲料污染桔霉素后，可以通过食物链转移到人体，因此寻找具有桔霉素脱毒活力的微生物菌株具有重要意义。
酵母是广泛用于食品酿造、饲料添加剂、生化制品以及工业生物技术的一大类单细胞真核微生物，酵母还具有生物脱毒的功能，在饲料、食品和环保领域具有重要应用前景。
发明内容
本发明目的是提供一种能够高效吸附桔霉素的酿酒酵母，以及该菌株的桔霉素吸附特性具备的潜在的应用性能。
为解决上述技术问题，本发明通过在山东圣琪生物有限公司厂区内土壤中广泛筛选，通过酵母-桔霉素的孵育反应体系，筛选获得一株高效吸附桔霉素的酿酒酵母。
本发明的技术方案，一组具有桔霉素吸附特性的酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae），将其分类命名为Saccharomyces cerevisiae Sunkeen-88，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2017724，保存日期为2017.11.23。
本发明同时提供了酿酒酵母在桔霉素脱毒中的应用。
所述的酿酒酵母在桔霉素脱毒中的应用，包括以下步骤 ：
①发酵培养 ：将培养基投入到发酵罐中，灭菌，然后将保藏编号为 CCTCC NO：M2017724的酿酒酵母制成发酵种子接种，接种至发酵罐中，流加营养液进行培养；
②酿酒酵母细胞及发酵液处理 ：发酵一段时间后，发酵液通过离心沉降等处理获得酿酒酵母细胞、细胞壁组分；
③桔霉素脱毒 ：将上述酿酒酵母细胞、或细胞壁组分加入被桔霉素污染的饲料中，可降低桔霉素的残余浓度。
优选地，将步骤②中的发酵液在3000-6000 rpm离心，收集酵母泥，采用去离子水液进行洗涤，再在3000-6000 rpm离心，收集得酵母细胞。
将上述收集得酵母细胞在80-95 ℃灭活30 min，降温55-65 ℃，加入一定量蛋白酶，酶解5-15小时，离心分离，收集重相，制得细胞壁组分；或将收集得酵母细胞在80-95 ℃灭活30 min-120 min，pH 5.0-7.0，降温至65 ℃以下，离心分离，收集重相制得细胞壁组分。
所述的具有桔霉素脱毒性能的酿酒酵母，包括酿酒酵母全细胞、或酿酒酵母细胞壁组分。
脱毒性能判断依据为通过加入后，体系中桔霉素的检测浓度相对于加入前的减少量。桔霉素的测定采用HPLC测定。
本发明的有益效果，本发明提供的能够高效桔霉素脱毒性能的酿酒酵母，在饲料中桔霉素脱毒中更具有广泛的应用价值，对于改善饲料安全性能具有重大意义。
菌种保藏信息
保藏时间：2017年11月23日，
保藏单位：中国典型培养物保藏中心，
保藏编号：CCTCC NO：M2017724，
保藏单位地址：中国武汉 武汉大学 邮编：430072，
分类命名：Saccharomyces cerevisiae Sunkeen-88。
附图说明
图1 酿酒酵母菌株的桔霉素脱毒特性，显示检测菌株与桔霉素孵育反应体系中的桔霉素含量降低比例；
图2 S.cerevisiae Sunkeen-88细胞壁在玉米饲料中桔霉素脱毒效果。
具体实施方式
实施例1 桔霉素脱毒菌株的筛选
从山东圣琪生物有限公司厂区采取土壤，无菌水梯度稀释，涂布分离系列单菌落，液体培养至对数期前期，用PBS清洗后，制成OD600等于5的PBS菌悬液待用，选用Sigma公司桔霉素标品。将PBS菌悬液与桔霉素溶液混合，30 摄氏度保温，分别在30分钟、60分钟、90分钟、120分钟取样，离心取上清进行检测，挑选脱毒作用最大菌株。其中S.cerevisiae Sunkeen-88脱毒动力学曲线。如图1所示，酿酒酵母菌株的桔霉素脱毒特性，显示检测菌株与桔霉素孵育反应体系中的桔霉素含量降低比例，在120分钟，S.cerevisiae Sunkeen-88降低饲料中桔霉素至少97%。
实施例2 酿酒酵母Sunkeen-88细胞壁对于饲料中桔霉素脱毒性能考察
将培养基投入到发酵罐中，灭菌，然后将保藏编号为 CCTCC NO：M2017724的酿酒酵母制成发酵种子接种，接种至发酵罐中，流加营养液进行培养，将得到的发酵液在3000-6000rpm离心，收集酵母泥，采用去离子水液进行洗涤，再在3000-6000 rpm离心，收集得Sunkeen-88酵母细胞，在80-95 ℃灭活30 min，降温55-65 ℃，加入一定量蛋白酶，酶解5-15小时，离心分离，收集重相，制得细胞壁组分备用；然后将猪饲料分为2份，其中1份污染桔霉素（浓度为10 ug/g），再将这2份玉米饲料分别分为2小份，其中l小份按照10%比例添加细胞壁组分，另外l小份按照10%比例添加玉米饲料，形成完全随机的2×2析因分析设计，包括污染或不污染桔霉素、添加或不添加Sunkeen-88细胞壁的饲料4种。30度保温，2小时后取样稀释测定，计算饲料中桔霉素的残余量。如图2所示，在2小时后，S. cerevisiae Sunkeen-88细胞壁降低玉米饲料中桔霉素达95%。图中，污染桔霉素的为桔霉素+，不污染的为桔霉素-，添加酿酒酵母细胞壁的为酿酒酵母细胞壁+，不添加细胞壁的为酿酒酵母细胞壁-。

Claims (5)

1.一种酿酒酵母SaccharomycesSunkeen-88，保藏编号为 ：CCTCC NO：M2017724。
2.一种如权利要求1所述的酿酒酵母在桔霉素脱毒中的应用。
3.根据权利要求 2所述的酿酒酵母在桔霉素脱毒中的应用，其特征在于，包括以下步骤 ：
①发酵培养 ：将培养基投入到发酵罐中，灭菌，然后将保藏编号为 CCTCC NO：M2017724的酿酒酵母制成发酵种子接种，接种至发酵罐中，流加营养液进行培养； ②酿酒酵母细胞及发酵液处理 ：发酵一段时间后，发酵液通过离心沉降等处理获得酿酒酵母细胞、细胞壁组分； ③桔霉素脱毒 ：将上述酿酒酵母细胞或细胞壁组分加入被桔霉素污染的饲料中，可降低桔霉素的残余浓度。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于 ：将步骤②中的发酵液在3000-6000 rpm离心，收集酵母泥，采用去离子水液进行洗涤，再在3000-6000 rpm离心，收集得酵母细胞。
5.根据权利要求 4所述的应用，其特征在于 ：将步骤②中的收集得酵母细胞在80-95℃灭活30 min，降温55-65 ℃，加入一定量蛋白酶，酶解5-15小时，离心分离，收集重相，制得细胞壁组分；或将收集得酵母细胞在80-95 ℃灭活30 min-120 min，pH 5.0-7.0，降温至65 ℃以下，离心分离，收集重相制得细胞壁组分。
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