CN108355071A - 一种红米水提取物在促创伤修复中的应用方法 - Google Patents

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Abstract

一种红米水提取物在促创伤修复中的应用方法，包括以下步骤：（1）制取提取物水溶物（RRE）；（2）小鼠全层皮损创伤愈合模型的建立和分析；（3）伤口愈合率测定。本发明的有益效果：红米水性提取物（RRE）提取方法简单，采用离心机进行离心并用冻干机冻干为粉末就可制取；创立创伤修复动物模型实验，采用对比的方法，将本发明与传统的生理盐水和表皮生长因子进行科学的对比，通过实验对比可得，本发明的促创伤修复效果更明显。

Description

一种红米水提取物在促创伤修复中的应用方法
技术领域
本发明属于创伤面修复技术领域，具体是一种红米水提取物在促创伤修复中的应用方法。
背景技术
皮肤是人体最大的器官，覆盖整个身体表面并有多种重要的生理功能，包括：感觉疼痛、发汗和热传感。它可分为2个组织层：角化上皮层和位于其下，富含胶原结缔组织提供支持和营养的真皮层。皮肤隔离人体和外界环境之间的物理屏障，从而保护体内组织和器官免受外界伤害。由于覆盖于身体表面，因此它也是最容易受伤的组织。如：物理、机械、化学及很多致病因素都可导致皮肤受到伤害形成创口。皮肤损伤时，必须快速有效的进行修复，这是生物生存所必需的；然而，这一修复过程一旦受阻，如病原体或微生物侵袭机体，可导致各种健康问题如继发性败血症、水电解质紊乱、感染性休克和多器官功能衰竭。伤口难以愈合对于高危患者是一个危害健康的重要问题可能因此导致衍变成难愈性溃疡甚至导致截肢。因此，迫切需要开发出新药物和治疗方法使皮肤伤口能够快速修复以维持机体内稳态非常重要。
创伤修复的研究已引起科学家们的关注，尤其是在生物医学领域。伤口治疗在全球范围内仍然是一个主要的健康问题。据估计，在美国每年出现约6700万手术伤口和1760万外伤伤口，有超过250亿美元用于治疗慢性伤口，这一负担将随着医疗费用地上升，人口老龄化、全球糖尿病以及肥胖症发生率的提高而持续增长。创口对于患者是一个巨大负担，它们不仅为患者增加了治疗成本，还影响患者的身心健康。开发有效治疗慢性伤口如糖尿病性溃疡的药物是至关重要的。到2021年，伤口愈合药物的全球市场估计价值超过185亿美元。
在许多国家，大米是一种重要的作物。虽然大米的主要功能是人类的食物，但它也具有许多其他的功能，特别是对于健康和营养来说。大米提取物显示了抗氧化活性、抗染色体畸形、抗癌性和抗炎效应，并在豚鼠大脑中被证实具有防止线粒体功能障碍的作用，此外，有研究显示紫色和红色的水稻有抗糖尿病的潜力。据我们所知，大米促进伤口愈合的能力还未见报道，在本次研究中，收集红米的水提取物进行实验，发现它对于小鼠全皮层创伤具有显著显示促创伤愈合能力，结果提示：红米具有比EGF更加优秀的促创伤修复能力，其具有“易制备”、“极低成本”和“极高活性”的特点，该实施方案是世界上首次发现红米具有强效的促创伤修复能力。
发明内容
为了解决上述现有技术的不足，本发明提供了一种红米水提取物在促创伤修复中的应用方法，其制备方法可用去壳红米通过生物化学分离纯化得到其水性提取物，将其运用于创伤修复动物模型实验，发现红米水性提取物（RRE）对促创伤修复有巨大的潜能。
为了达到上述目的，本发明采用的技术方案为：
一种红米水提取物在促创伤修复中的应用方法，包括以下步骤：
（1）制取提取物水溶物（RRE）：室温下，先把100克红米在1L超纯水中浸泡2个小时，而后把得到的浸米水收集起来，并用低温高速离心机在4℃、12000g离心30分钟，收集上清液，用冻干机将上清液冻干成粉末，储存在-20℃冰箱备用；
（2）小鼠全层皮损创伤愈合模型的建立和分析：采用5~6周龄雄性小鼠按动物保健和处理程序进行饲养，腹腔注射3.5%水合氯醛麻醉小鼠用电推剪剔除小鼠背部毛发，而后用70%乙醇对小鼠背部皮肤进行消毒处理，在其背部两侧对称剪出2个直径约为8mm的等大等圆创面，创面为全层皮肤缺损，术后小鼠单只分笼按标准程序进行饲养，全层皮损模型建立后，立即拍照，记录为创伤后0天创面，而后把全层皮肤缺损的小鼠随机分为2组，10只/组，其中阴性对照组：小鼠的左侧创面涂抹40μL（10μg/mL）红米提取物水溶液（RRE）右侧创面涂抹相同体积的生理盐水，阳性对照组：小鼠左侧创面处涂抹40μL（10μg/mL和100μg/mL）RRE，右侧创面涂抹相同体积表皮生长因子，自然暴露创面，每天上午、下午固定时间各给药一次，隔天固定时间用相机拍照记录创面变化情况，小鼠创伤愈合模型独立重复3次；
（3）伤口愈合率测定：利用图像分析程序进行分析计算，跟踪伤口边缘并计算伤口面积，将术后第4、6、8、12天的创面面积与术后0天的创面面积进行比较，通过公式计算表示伤口残余面积百分比。
对本发明进一步的描述，所述步骤（3）中伤口残余面积百分比 = [Rn/ R(0)]×100，R(0)表述术后0天创口面积，Rn表示术后第n天创口面积，并用GraphPad Prism软件绘制得到曲线图。
对本发明进一步的描述，所述步骤（2）中龄雄性小鼠体重为22-25g。
对本发明进一步的描述，所述步骤（2）中3.5%水合氯醛含量为20μL/20g。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：红米水性提取物（RRE）提取方法简单，采用离心机进行离心并用冻干机冻干为粉末就可制取；创立创伤修复动物模型实验，采用对比的方法，将本发明与传统的生理盐水和表皮生长因子进行科学的对比，通过实验对比可得，本发明的促创伤修复效果更明显。
附图说明
图1为本发明的对照组图。
图2为本发明的修复率图。
具体实施方式
下面将结合附图对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1，一种红米水提取物在促创伤修复中的应用方法，包括以下步骤：
（1）制取提取物水溶物（RRE）：室温下，先把100克红米在1L超纯水中浸泡2个小时。而后把得到的浸米水收集起来并用低温高速离心机4℃，12000g离心30分钟，收集上清液，用冻干机将上清液冻干成粉末，储存在-20℃冰箱备用；
（2）小鼠全层皮损创伤愈合模型的建立和分析：采用5~6周龄雄性小鼠按动物保健和处理程序进行饲养，腹腔注射3.5%水合氯醛麻醉小鼠用电推剪剔除小鼠背部毛发，而后用70%乙醇对小鼠背部皮肤进行消毒处理，在其背部两侧对称剪出2个直径约为8mm的等大等圆创面，创面为全层皮肤缺损，术后小鼠单只分笼按标准程序进行饲养，全层皮损模型建立后，立即拍照，记录为创伤后0天创面，而后把全层皮肤缺损的小鼠随机分为2组，10只/组，其中阴性对照组：小鼠的左侧创面涂抹40μL（10μg/mL）红米提取物水溶液（RRE）右侧创面涂抹相同体积的生理盐水，阳性对照组：小鼠左侧创面处涂抹40μL（10μg/mL和100μg/mL）RRE，右侧创面涂抹相同体积表皮生长因子，自然暴露创面，每天上午、下午固定时间各给药一次，隔天固定时间用相机拍照记录创面变化情况，小鼠创伤愈合模型独立重复3次；
（3）伤口愈合率测定：利用图像分析程序进行分析计算，跟踪伤口边缘并计算伤口面积，将术后第4、6、8、12天的创面面积与术后0天的创面面积进行比较，通过公式计算表示伤口残余面积百分比。
本实施例的一种优选技术方案，所述步骤（3）中伤口残余面积百分比 = [Rn/ R(0)]×100，R(0)表述术后0天创口面积，Rn表示术后第n天创口面积，并用GraphPad Prism软件绘制得到曲线图。
本实施例的一种优选技术方案，所述步骤（2）中龄雄性小鼠体重为22-25g。
本实施例的一种优选技术方案，所述步骤（2）中3.5%水合氯醛含量为20μL/20g。
如图1所示，在本实施例中，阴性对照组与阳性对照组的修复效果对比如下：在阴性对照组中，术后第6天起，相较于右侧涂抹生理盐水的创面，左侧涂抹RRE (10μg/mL) 的创面伤口收缩显著；阳性对照组中，术后第4天起，左侧涂抹样品RRE(10 μg/mL) 的创口较右侧涂抹EGF（100 μg/mL）的创口收缩更加明显。
如图2所示，在本实施例中，红米水提物具有剂量依赖性的促创伤修复能力，其中10μg/mL的红米水提物的促创面愈合能力比其浓度高10倍的EGF要强， 100μg/mL的红米水提物的促创面愈合能力比其相同浓度的EGF要强很多。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种红米水提取物在促创伤修复中的应用方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）制取提取物水溶物（RRE）：室温下，先把100克红米在1L超纯水中浸泡2个小时。
2.而后把得到的浸米水收集起来并用低温高速离心机4℃，12000g离心30分钟，收集上清液，用冻干机将上清液冻干成粉末，储存在-20℃冰箱备用；
（2）小鼠全层皮损创伤愈合模型的建立和分析：采用5~6周龄雄性小鼠按动物保健和处理程序进行饲养，腹腔注射3.5%水合氯醛麻醉小鼠用电推剪剔除小鼠背部毛发，而后用70%乙醇对小鼠背部皮肤进行消毒处理，在其背部两侧对称剪出2个直径约为8mm的等大等圆创面，创面为全层皮肤缺损，术后小鼠单只分笼按标准程序进行饲养，全层皮损模型建立后，立即拍照，记录为创伤后0天创面，而后把全层皮肤缺损的小鼠随机分为2组，10只/组，其中阴性对照组：小鼠的左侧创面涂抹40μL（10μg/mL）红米提取物水溶液（RRE）右侧创面涂抹相同体积的生理盐水，阳性对照组：小鼠左侧创面处涂抹40μL（10μg/mL和100μg/mL）RRE，右侧创面涂抹相同体积表皮生长因子，自然暴露创面，每天上午、下午固定时间各给药一次，隔天固定时间用相机拍照记录创面变化情况，小鼠创伤愈合模型独立重复3次；
（3）伤口愈合率测定：利用图像分析程序进行分析计算，跟踪伤口边缘并计算伤口面积，将术后第4、6、8、12天的创面面积与术后0天的创面面积进行比较，通过公式计算表示伤口残余面积百分比。
3.根据权利要求1所述的一种红米水提取物在促创伤修复中的应用方法，其特征在于，所述步骤（3）中伤口残余面积百分比 = [Rn/ R(0)]×100，R(0)表述术后0天创口面积，Rn表示术后第n天创口面积，并用GraphPad Prism软件绘制得到曲线图。
4.根据权利要求1所述的一种红米水提取物在促创伤修复中的应用方法，其特征在于，所述步骤（2）中龄雄性小鼠体重为22-25g。
5.根据权利要求1所述的一种红米水提取物在促创伤修复中的应用方法，其特征在于，所述步骤（2）中3.5%水合氯醛含量为20μL/20g。
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