CN108342399A - 尾叶桉f5h基因及其应用 - Google Patents

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CN108342399A CN201810148574.1A CN201810148574A CN108342399A CN 108342399 A CN108342399 A CN 108342399A CN 201810148574 A CN201810148574 A CN 201810148574A CN 108342399 A CN108342399 A CN 108342399A
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lignin
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陈博雯
刘海龙
肖玉菲
覃子海
张烨
张晓宁
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    • C12N9/0071—Oxidoreductases (1.) acting on paired donors with incorporation of molecular oxygen (1.14)
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    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8242—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits
    • C12N15/8243—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine
    • C12N15/8255—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine involving lignin biosynthesis

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Abstract

本发明公开了一种尾叶桉F5H基因及其应用，其尾叶桉F5H基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，可将该基因应用于转基因植株中，且证明了该基因具有调控S木质素合成的作用。通过对尾叶桉F5H基因功能的研究，有助于推动尾叶桉转基因定向调控木质素合成的基因工程育种。

Description

尾叶桉F5H基因及其应用
技术领域
本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及涉及尾叶桉F5H基因及其应用。
背景技术
桉树是桃金娘科桉属植物的总称，原产地为澳大利亚。广西的桉树研究在我国处于领先地位，20世纪70年代初期就开始引种，经过多年的引种试验及杂交选育，得到了多个优良树种、优良种源及优良家系。桉树生长快、材质好，广西全区桉树面积居全国首位，已经成为短周期原料林的主要造林树种。尾叶桉GLU4无性系(Eucalyptus urophylla cloneGLU4)是广西广泛种植的桉树良种，因其纤维素含量、纤维素长度等制浆指标显著优于其他桉树品种，成为纸浆材造林首选树种。从纸浆材生产需求出发，希望木材中的木质素含量更低或更易于去除。然而木质素在维持植物正常生长发育、防御病原菌侵害方面仍具有不可或缺的重要意义，木质素降幅过大对植物具有潜在的不利影响，所以定向调控木质素单体合成，提高其S/G比值，成为纸浆材品质提升的主要研究策略。
F5H(阿魏酸-5-羟化酶，ferulate-5 hydroxylase,又称CAld5H，松柏醛-5-羟化酶，coniferaldehyde-5-hydroxylase)是植物木质素单体合成中的关键酶之一，F5H基因发现较晚，但其对S木质素合成的限速功能和显著的调控效果，使其立即成为关注的目标。拟南芥F5H突变体中木质素中几乎全部由G木质素组成，在突变体中表达F5H后，S木质素含量提高至95％以上，G木质素含量则极少(Meyer等1998；Weng等2010)。在杨树和烟草中过表达拟南芥F5H基因，转基因植株表现出S木质素的升高(Franke等2000；Stewart等2009)。师竹娟等(2007)用C4H启动子驱动甘蓝型油菜(Brassica napus)F5H基因的反义片段转化烟草，转化植株花期之前与野生型基本无异，但开花后长势变弱，茎干纤细，茎部Maüle显色程度稍弱于野生型，暗示其S木质素含量可能降低，F5H基因的抑制使木质素沉积发生了改变。F5H的研究结果一致表明上调F5H可以显著提高S木质素含量，但在尾叶桉中尚未有F5H基因分离鉴定出来，利用其中的基因序列进行基因工程调控更是无法开展。本发明公开的尾叶桉F5H序列及其在基因工程中的应用，有助于深入尾叶桉F5H基因功能的研究，并推动尾叶桉转基因定向调控木质素合成的基因工程育种。
发明内容
本发明的目的在于提供一种尾叶桉F5H基因及其植物表达载体、宿主细胞以及在植物木质素单体合成调控中的应用，以有效地定向提高植物S木质素单体合成，在木质素单体合成调控的基因工程中的发挥重要作用。
本发明可通过如下技术方案实现：
一种尾叶桉F5H基因，其cDNA序列具有如下特征：具有SEQ ID NO.1所示的DNA序列；或者其编码具有SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的多肽。
本发明还提供一种植物表达载体，其包上述的尾叶桉F5H基因或其片段。
作为技术方案的优选，所述植物表达载体为pCAMBIA3301。
作为技术方案的另一种优选，所述植物表达载体为重组载体pCAMBIA3301-EuF5H。
本发明还提供一种宿主细胞，其包含如上所述的尾叶桉F5H基因或其片段或者植物表达载体。
作为技术方案的优选，所述宿主细胞选自大肠杆菌、农杆菌或植物细胞，如大肠杆菌JM109菌株、农杆菌LBA4404菌株。
本发明的尾叶桉F5H基因在调控植物木质素单体合成方面的应用，可将尾叶桉F5H基因或其片段转化入植物，也可将所述植物表达载体转化入植物，也可用所述宿主细胞侵染植物，详细的步骤可参考具体实施方式。
本发明的有益效果：
1、本发明首次发现了尾叶桉中的参与木质素单体合成的重要基因F5H，并对该基因在木质素单体合成调控中的基因工程应用进行研究。
2、本发明在烟草中转化表达尾叶桉F5H得到的转基因烟草植株证明了尾叶桉F5H具有促进S木质素单体合成，并对G木质素单体合成具有轻微的抑制的作用，可达到定向调控木质素单体合成的效果。
3、本发明公开的尾叶桉F5H基因序列及其在基因工程中的应用，有助于深入尾叶桉F5H基因功能的研究，并推动尾叶桉转基因定向调控木质素合成的基因工程育种。
4、本发明对尾叶桉F5H基因感染烟草植株的木质素单体含量检测：显示转基因烟草植株中G木质素含量比野生型烟草低，S木质素提高30％以上，S/G比值提高30％以上，验证了基因EuF5H对木质素单体含量起到调控作用。
附图说明
图1：野生型烟草木质部染色图。
图2：转基因型烟草木质部染色图。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。下述实施例中的％，如无特殊说明，均为质量百分含量。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
实施例1：尾叶桉F5H基因的cDNA序列克隆
在NCBI检索其他植物中已报道的F5H基因序列，blast分析基因保守区，用VectorNTI软件设计得到目标基因特异引物F5H-F/F5H-R，序列如下：
F5H-F：GCTAATCCATGGATATTTTCT；
F5H-R：CCATTTGCTTGCTCAATATAGA。
取移栽培养3～4周的尾叶桉GLU4无性系组培苗茎部组织，采用RNA prep Pure多糖多酚植物总RNA提取试剂盒(TAKARA)提取总RNA，并用RNA LA PCR反转录试剂盒(TAKARA)合成cDNA，以上均按试剂盒说明书操作，DNA样品于-80℃保存。
以cDNA作为模板，用目标基因特异引物F5H-F/F5H-R采用Ex-Taq聚合酶(TAKARA)扩增基因cDNA片段。PCR扩增产物分别经0.8％琼脂糖凝胶电泳检测后，用普通DNA产物纯化试剂盒(天根)纯化回收，与克隆载体pMD18-T载体16℃连接过夜后转化大肠杆菌JM109，利用抗生素进行平板筛选。随机挑取抗性克隆用目标基因特异引物F5H-F/F5H-R进行PCR验证后，取PCR验证阳性克隆提取质粒并用载体上的通用引物测序，获得具有完整编码区的F5H基因cDNA序列(SEQ ID NO.1)，利用NCBI的ORF Finder对F5H基因编码区进行翻译，获得其编码蛋白质的氨基酸序列为SEQ ID NO.2。重组质粒分别命名为pF5H。
实施例2、尾叶桉F5H基因正义表达载体构建
通过使用工具酶进行双酶切、目的片段回收和连接，将F5H克隆至植物表达载体，如pCAMBIA1301，使得该基因位于启动子如CaMV 35S启动子的控制下。
按照以下操作方法实施，详细的步骤可根据本领域技术人员已知的方法进行修改：
根据尾叶桉F5H基因序列设计引物F5H-F1/F5H-R1，其中上游引物F5H-F1附加了BglII酶切位点，下游引物F5H-R1附加了BstEII酶切位点。
F5H-F1：gggagatctgctaatccatggatattttct
F5H-R1：gggggtgaccccatttgcttgctcaatataga
使用离心柱型普通质粒小提试剂盒(天根)从上述转化的大肠杆菌中提取含有F5H的重组质粒pF5H，以pF5Hr为模板，F5H-F1/F5H-R1为引物，用Ex-Taq酶(TAKARA)对F5H基因进行PCR扩增。扩增产物采用普通DNA产物纯化试剂盒(天根)按说明书进行纯化，用BglII(NEB)和BstEII(NEB)进行双酶切，产物用普通DNA产物纯化试剂盒(天根)回收。
另取pCAMBIA1301质粒，使用BglII和BstEII进行双酶切。酶切产物进行0.8％琼脂糖凝胶电泳，使用普通DNA产物纯化试剂盒(天根)回收大小约为10000bp的pCAMBIA1301骨架条带。
将上述两个片段按照F5H:pCAMBIA1301的摩尔比为3:1混合，使用T4DNA连接酶(promega)进行连接后转化大肠杆菌JM109，利用抗生素进行平板筛选。随机挑选抗性菌落用目标基因特异引物F5H-F1/F5H-R1进行PCR验证，取PCR验证阳性克隆用引物F5H-F1/F5H-R1进行测序，选取测序正确的单菌落，使用离心柱型普通质粒小提试剂盒(天根)提取质粒，所得的质粒即为重组载体pCAMBIA1301-EuF5H。
实施例3：利用尾叶桉F5H基因调控烟草木质素单体合成
采用常规方法，将pCAMBIA1301-EuF5H重组载体导入农杆菌LBA4404，经抗生素平板筛选、PCR鉴定以及测序鉴定得到阳性菌株。按照常规方法农杆菌菌液侵染烟草叶片，经共培养、分化、壮苗、生根、移栽等阶段的培养后，获得转基因烟草小苗。
移栽8周后，采集小苗叶片提取总DNA，用特异性引物F5H-F/F5H-R对小苗进行PCR鉴定，能成功扩增出约1600bp条带的样品对应的植株可确定为阳性转基因植株。
阳性植株在生长上与野生型并没有明显差异，植株叶片展开，叶色翠绿，茎干挺直，9月龄时苗高达到1.7m左右，11月龄时开花结实。9月龄时采集样品用于表型检测，包括以下几方面检测：
(1)目标基因表达水平检测
采用烟草actin基因(EU938079)作为内参基因，尾叶桉F5H基因作为目标基因，设计荧光定量检测引物，序列如下：
P-actin-F CTGGAATCCATGAGACTACTTACAA；
P-actin-R AACCGCCACTGAGCACAATA；
P-EuF5H-F TCACCGCCAGGCTTATCAA；
P-EuF5H-R TCGTTCACCTTCGCTTCGT。
在转基因烟草植株茎尖向下第5节处采集叶片组织，以野生型烟草做为对照，采用RNA prep Pure多糖多酚植物总RNA提取试剂盒进行RNA提取，后采用RNA LA PCR反转录试剂盒合成cDNA。采用ABI SybrGreen PCR Master Mix(2X)试剂盒对基因表达水平进行荧光定量PCR检测。
在对野生型烟草进行检测时，管家基因actin基因可以正常检出，但经过40个循环的荧光定量检测，尾叶桉F5H基因仍检测不到信号，证实野生型烟草中并不存在上述基因表达，排除了内源基因对检测结果的干扰。
在对转基因植株进行检测时，除可以正常检测到actin基因外，也可检测到尾叶桉F5H基因的表达信号，说明转入的基因在植株体内可以进行表达。
(2)茎部纤维素、木质素含量检测
分别选取对照及转基因烟草植株，选择茎部顶端向下数第3节至第15节，摘去叶子，将茎杆切成小段，放置在60℃烘箱中烘干24小时后，粉碎过150目筛，用于木质素和纤维素含量检测。木质素含量测定采用Klason法测定，纤维素含量采用硝酸法测定。
结果发现转基因植株中木质素含量与野生型差异不显著，纤维素含量降低5.05％(表1)。
表1：转基因烟草中木质素、纤维素含量
植株编号 木质素含量(％) 纤维素含量(％)
野生型 13.26±0.07a 34.03±0.07a
转基因植株 13.21±0.15a 32.31±0.12b
注：同系列中不同字母表示在p<0.05水平上差异显著。
(3)茎部解剖结构观测
选取转基因植株及野生型植株茎部第5节和第7节横切，采用常规方法制成石蜡切片并进行番红-固绿染色，制好的切片用Nikon研究用光学显微镜进行观察，NIS-Elements软件拍照并测量。
首先对茎部横切的直径进行了测量(表2)，转化植株和野生型相比，在第5节直径差异不显著，平均直径在6200μm左右，第7节同样差异不显著，平均直径在8200μm左右，说明基因转化并没有影响茎部的生长发育。
在对茎部切片的木质部测量结果显示(表2)，在转化植株的第5节和第7节处，木质部厚度都与野生型差异不显著，说明基因转化对木质素总量的影响并不大。
表2：转基因植株茎部直径、木质部厚度变化
注：同一列中不同字母表示在p<0.05水平上差异显著。
取茎部第7节样品制成切片后进行染色，用Nikon研究用光学显微镜在高倍镜下观察木质部细胞解剖结构，NIS-Elements软件拍照并测量细胞面积、细胞壁厚度(如图1、2所示)。
从图1、2发现木质部细胞大多呈椭圆形或近长方形，摆列紧密，其间散落分布若干卵圆形或多边形的导管。这种排列紧密的结构，为植物提供了更强的支撑能力，转基因植株中在细胞形态上与野生型无明显差异，测量数据也显示茎部组织的细胞面积和细胞壁厚度差异不显著(表3)，说明外源基因的转化并没有显著影响细胞壁的生长、形成，也并未影响植物茎部的机械支撑功能，而实际的植株生长观测也并未发现转基因植株与野生型的差异。
表3：转基因植株木质部细胞壁厚度和细胞面积
植株编号 细胞面积(μm2) 细胞壁厚度(μm2)
野生型 135.46±42.30a 2.29±0.44a
转基因植株 150.64±43.33a 2.28±0.50a
注：同一列中不同字母表示在p<0.05水平上差异显著。
(4)木质素单体含量检测
分别选取对照及转基因烟草植株，选择茎部顶端向下数第3节至第15节，摘去叶子，将茎杆切成小段，放置在60℃烘箱中烘干24h后，用超速粉碎机粉碎后，过150目筛。
将粉末经硫代酸解反应处理后，采用Trace-GC Ultra and Trace-DSQ GC-MS(Thermo-Finnigan)进行检测，色谱柱使用DB-5ms(30m×0.25mm i.d.,0.25μm filmthickness,Agilent)。内标正二十四烷选取三个特征离子57、71、85，G木质素单体选取特征离子269，S单体选取特征离子299进行扫描。使用calibur 2.0工作站进行数据采集和分析。
表4中结果显示，转基因植株中G木质素含量比野生型降低4.83％，S木质素提高了31.44％，S/G比值提高38.11％。
表4：转基因烟草茎部木质素单体含量分析
植株编号 G木质素单体含量 S木质素单体含量 S/G
野生型 9.23±0.60a 8.03±0.49b 0.87±0.01a
转基因植株 8.78±0.90a 10.55±0.83a 1.20±0.12a
注：同列中不同字母表示在p<0.05水平上差异显著。
序列表
<110> 广西壮族自治区林业科学研究院
<120> 尾叶桉F5H基因及其应用
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1610
<212> DNA
<213> 尾叶桉(Eucalyptus urophylla)
<400> 1
gctaatccat ggatattttc tatttctatt cccaactcca gtctcttgtt caaactcaac 60
tccagcaatc tcccatgacc ctcctcctct ccgtcgtccc tcttctcctc ttcctcgggc 120
tcgtggctcg gctccggcgc aagccgccct tcccaccggg cccgaggggc ctcccggtca 180
tcgggaacat gctcatgatg ggggagctca cccaccgcgg cctcgcgagt ctggcgaaga 240
agtatggcgg gatcttccac ctccgcatgg gcttcctgca catggttgcc gtgtcgtccc 300
ccgacgtggc ccgccaggtc ctccaggtcc acgacgggat cttctcgaac cggcctgcca 360
ccatcgcgat cagctacctc acgtatgacc gggccgacat ggccttcgcg cactacggcc 420
cgttctggcg gcagatgcgg aagctgtgcg tgatgaagct cttcagccgg aagcgggctg 480
agtcgtggga gtcggtccgc gatgaggtgg acacgatggt gcgcaccgtc gcgggcagcg 540
aggggacctc cgtgaacatc ggcgagctcg tgttcgagct cacgcgggac atcatctacc 600
gcgcggcctt cggcacgagc tcgagcgagg gccaggacga gttcatcagc atactgcagg 660
agttctccaa attatttggc gccttcaaca tagccgattt tatcccgtac ctgagctgga 720
tcgatccgca agggctcacc gccaggctta tcaaggcgcg ccagtcgctg gacgggttca 780
tcgaccacat tatagatgat cacatggaca agaagagaaa caagacgagt tccggtggag 840
gcgatcaaga tgtcgatacc gacatggtgg acgatctgct ggccttctac tgcgacgaag 900
cgaaggtgaa cgagtccgac gatttgcaga actcgatcag gctaacgaga gacaacatca 960
aggccatcat catggacgtg atgttcggcg ggacggagac tgtggcgtca gctatcgagt 1020
gggccatggc ggagctcatg cgaagccccg aggacctgaa gaaggtccag caagaactcg 1080
cggatgtcgt gggcttagac cggagagtcg aggagagcga cttcgagaag ctgacctatc 1140
tcaagtgctg tctcaaagag accctccgcc tccacccgcc gatcccgctg ctcctccacg 1200
agacggcaga ggacgccgtg atctccggct accgcatccc cgcacggtct cgggtcatga 1260
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cgtcccggtt cctggagcca ggcatgcccg actacaaggg gagcaacttc gagttcatcc 1380
ctttcgggtc gggccggagg tcgtgcccag ggatgcagct cgggctctac gcgctcgaca 1440
tggccgtggc ccacctcctg cactgcttca cgtgggaact gcccgacggg atgaagccga 1500
gcgagatgga catgggcgac gtcttcgggc tcaccgcgcc gaggtccacc cggctcgtgg 1560
cggtgccgac tccgaggttg gtgggggctc tatattgagc aagcaaatgg 1610
<210> 2
<211> 529
<212> PRT
<213> 尾叶桉(Eucalyptus urophylla)
<400> 2
Met Asp Ile Phe Tyr Phe Tyr Ser Gln Leu Gln Ser Leu Val Gln Thr
1 5 10 15
Gln Leu Gln Gln Ser Pro Met Thr Leu Leu Leu Ser Val Val Pro Leu
20 25 30
Leu Leu Phe Leu Gly Leu Val Ala Arg Leu Arg Arg Lys Pro Pro Phe
35 40 45
Pro Pro Gly Pro Arg Gly Leu Pro Val Ile Gly Asn Met Leu Met Met
50 55 60
Gly Glu Leu Thr His Arg Gly Leu Ala Ser Leu Ala Lys Lys Tyr Gly
65 70 75 80
Gly Ile Phe His Leu Arg Met Gly Phe Leu His Met Val Ala Val Ser
85 90 95
Ser Pro Asp Val Ala Arg Gln Val Leu Gln Val His Asp Gly Ile Phe
100 105 110
Ser Asn Arg Pro Ala Thr Ile Ala Ile Ser Tyr Leu Thr Tyr Asp Arg
115 120 125
Ala Asp Met Ala Phe Ala His Tyr Gly Pro Phe Trp Arg Gln Met Arg
130 135 140
Lys Leu Cys Val Met Lys Leu Phe Ser Arg Lys Arg Ala Glu Ser Trp
145 150 155 160
Glu Ser Val Arg Asp Glu Val Asp Thr Met Val Arg Thr Val Ala Gly
165 170 175
Ser Glu Gly Thr Ser Val Asn Ile Gly Glu Leu Val Phe Glu Leu Thr
180 185 190
Arg Asp Ile Ile Tyr Arg Ala Ala Phe Gly Thr Ser Ser Ser Glu Gly
195 200 205
Gln Asp Glu Phe Ile Ser Ile Leu Gln Glu Phe Ser Lys Leu Phe Gly
210 215 220
Ala Phe Asn Ile Ala Asp Phe Ile Pro Tyr Leu Ser Trp Ile Asp Pro
225 230 235 240
Gln Gly Leu Thr Ala Arg Leu Ile Lys Ala Arg Gln Ser Leu Asp Gly
245 250 255
Phe Ile Asp His Ile Ile Asp Asp His Met Asp Lys Lys Arg Asn Lys
260 265 270
Thr Ser Ser Gly Gly Gly Asp Gln Asp Val Asp Thr Asp Met Val Asp
275 280 285
Asp Leu Leu Ala Phe Tyr Cys Asp Glu Ala Lys Val Asn Glu Ser Asp
290 295 300
Asp Leu Gln Asn Ser Ile Arg Leu Thr Arg Asp Asn Ile Lys Ala Ile
305 310 315 320
Ile Met Asp Val Met Phe Gly Gly Thr Glu Thr Val Ala Ser Ala Ile
325 330 335
Glu Trp Ala Met Ala Glu Leu Met Arg Ser Pro Glu Asp Leu Lys Lys
340 345 350
Val Gln Gln Glu Leu Ala Asp Val Val Gly Leu Asp Arg Arg Val Glu
355 360 365
Glu Ser Asp Phe Glu Lys Leu Thr Tyr Leu Lys Cys Cys Leu Lys Glu
370 375 380
Thr Leu Arg Leu His Pro Pro Ile Pro Leu Leu Leu His Glu Thr Ala
385 390 395 400
Glu Asp Ala Val Ile Ser Gly Tyr Arg Ile Pro Ala Arg Ser Arg Val
405 410 415
Met Ile Asn Ala Trp Ala Ile Gly Arg Asp Pro Gly Ser Trp Thr Glu
420 425 430
Pro Asp Lys Phe Lys Pro Ser Arg Phe Leu Glu Pro Gly Met Pro Asp
435 440 445
Tyr Lys Gly Ser Asn Phe Glu Phe Ile Pro Phe Gly Ser Gly Arg Arg
450 455 460
Ser Cys Pro Gly Met Gln Leu Gly Leu Tyr Ala Leu Asp Met Ala Val
465 470 475 480
Ala His Leu Leu His Cys Phe Thr Trp Glu Leu Pro Asp Gly Met Lys
485 490 495
Pro Ser Glu Met Asp Met Gly Asp Val Phe Gly Leu Thr Ala Pro Arg
500 505 510
Ser Thr Arg Leu Val Ala Val Pro Thr Pro Arg Leu Val Gly Ala Leu
515 520 525
Tyr

Claims (9)

1.一种尾叶桉F5H基因，其特征在于，其cDNA序列具有如下特征：具有SEQ ID NO.1所示的DNA序列；或者其编码具有SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的多肽。
2.一种植物表达载体，其特征在于：包含如权利要求1所述的尾叶桉F5H基因或其片段。
3.根据权利要求2所述的植物表达载体，其特征在于，所述植物表达载体为pCAMBIA3301。
4.根据权利要求3所述的植物表达载体，其特征在于，所述植物表达载体为重组载体pCAMBIA3301-EuF5H。
5.一种宿主细胞，其特征在于：包含如权利要求1所述的尾叶桉F5H基因或其片段或者如权利要求2～4中任一项所述的植物表达载体。
6.根据权利要求5所述的宿主细胞，其特征在于：所述宿主细胞选自大肠杆菌、农杆菌或植物细胞。
7.一种如权利要求1所述的尾叶桉F5H基因在调控植物木质素单体合成方面的应用，其特征在于，将所述基因或其片段转化入植物。
8.一种如权利要求2至4任一所述的植物表达载体在调控植物木质素单体合成方面的应用，其特征在于，将所述植物表达载体转化入植物。
9.一种如权利要求5或6所述的宿主细胞在调控植物木质素单体合成方面的应用，其特征在于，用所述宿主细胞侵染植物。
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