CN108318682A - 猪瘟病毒抗体间接化学发光定性检测试剂盒及其检测方法 - Google Patents

猪瘟病毒抗体间接化学发光定性检测试剂盒及其检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108318682A
CN108318682A CN201810174996.6A CN201810174996A CN108318682A CN 108318682 A CN108318682 A CN 108318682A CN 201810174996 A CN201810174996 A CN 201810174996A CN 108318682 A CN108318682 A CN 108318682A
Authority
CN
China
Prior art keywords
serum
chemiluminescence
swine fever
solution
fever virus
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201810174996.6A
Other languages
English (en)
Inventor
张永光
潘丽
孙跃峰
马中元
吕建亮
常惠芸
祁林林
陈豪泰
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Lanzhou Veterinary Research Institute of CAAS
Original Assignee
Lanzhou Veterinary Research Institute of CAAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lanzhou Veterinary Research Institute of CAAS filed Critical Lanzhou Veterinary Research Institute of CAAS
Priority to CN201810174996.6A priority Critical patent/CN108318682A/zh
Publication of CN108318682A publication Critical patent/CN108318682A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56983—Viruses
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
    • G01N33/535—Production of labelled immunochemicals with enzyme label or co-enzymes, co-factors, enzyme inhibitors or enzyme substrates

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)

Abstract

本发明公开了一种猪瘟病毒抗体间接化学发光定性检测试剂盒，包括96孔抗原包被化学发光板、标准阴性血清、标准阳性血清、酶标猪二抗、血清稀释液、化学发光底物液；本发明还公开了所述试剂盒进行猪瘟病毒抗体化学发光检测方法，本发明将猪瘟Erns、E2蛋白抗原结构域在E.Coli高效表达，成功将蛋白复性为具有功能的可溶性蛋白，既解决了非特异性反应的问题，又能检测针对不同线性表位、构像表位的抗体；与国内现有CSFV抗体检测试剂盒比较，本发明的试剂盒具有检测时间短、重复性好、特异性强等特点，同时提高了检测敏感性以及检测结果的符合率。

Description

猪瘟病毒抗体间接化学发光定性检测试剂盒及其检测方法
技术领域
本发明属于免疫学技术领域，尤其涉及一种猪瘟病毒抗体间接化学发光定性检测试剂盒及其检测方法。
背景技术
目前国内现有的猪瘟病毒(CSFV)抗体检测方法主要有猪瘟间接血凝、正向间接血凝，间接ELISA、单抗阻断ELISA等方法；其中所使用的血凝检测试剂盒敏感性差，符合率低，无法客观地反应猪群针对猪瘟免疫的抗体水平；单抗阻断ELISA只是针对E2蛋白的单一表位，虽然特异性高，但当猪体针对该表位的抗体丰度不足时，检测结果会有假阴性产生；而间接ELISA试剂盒，有的是表达抗原单个表位的重复序列，有的是合成的表位肽段，这些蛋白作为诊断抗原容易漏检，且产品稳定性差，检出结果符合率低，无法准确判断猪瘟抗体的免疫保护水平。针对以上问题，并没有行之有效的检测方法或试剂盒来解决，本发明原核诱导表达了猪瘟结构蛋白构象依赖的抗原结构域，经IDEXX试剂盒单抗和猪瘟阳性多抗血清验证，该蛋白具有良好的反应原性，且生产成本低于真核表达的蛋白，生产工艺简便易行，同时以该蛋白为诊断抗原的检测方法大大缩短了检测时间，提高了样品的检出率和检测灵敏度。
发明内容
本发明的目的在于提供一种猪瘟病毒抗体间接化学发光定性检测试剂盒及其检测方法，旨在解决上述背景技术中现有猪瘟病毒抗体检测试剂盒重复性差，检测结果符合率低，无法客观反应猪群针对猪瘟免疫的抗体水平的问题。
本发明是这样实现的，一种猪瘟病毒抗体间接化学发光定性检测试剂盒，该试剂盒包括96孔抗原包被化学发光板、标准阴性血清、标准阳性血清、血清稀释液、酶标猪二抗、化学发光底物液，所述试剂盒在进行猪瘟病毒抗体化学发光检测过程中，洗涤后的抗原包被化学发光板中需加入酶标板稳定剂封闭。
优选地，所述96孔抗原包被化学发光板中抗原为Erns、E2蛋白抗原，抗原包被浓度为200ng/孔，包被条件为4℃过夜。
优选地，所述酶标板稳定剂为20mmol/L Na2HPO4+50mmol/L NaCl+5mmol/L EDTA+体积分数为5％的小牛血清。
优选地，所述血清稀释液为20mmol/L Na2HPO4+100mmol/L NaCl+体积分数4％的小牛血清+体积分数为0.1％的Tween20+体积分数为2％的E.Coli裂解液。
本发明进一步提供了一种利用上述试剂盒进行猪瘟病毒抗体间接化学发光定性检测方法，该检测方法包括如下步骤：
(1)CSFV Erns、E2蛋白抗原结构域的原核诱导表达；
CSFV Erns蛋白100-145aa+GGSSGG+E2蛋白N端145aa通过NdeI、XhoI酶切位点克隆至PET-30a载体，阳性质粒转化至BL21 DE3 plysS菌株，卡纳抗性LB平板37℃培养筛选单克隆，培养诱导后收集菌液；
(2)蛋白纯化
纯化过程中用蛋白复性液将蛋白低温透析复性，蛋白复性液为50mmol/L Tris+50mmol/L NaCl+体积分数为5％的甘油+0.5mmol/L EDTA+质量体积分数为0.1％的PEG6000；
(3)抗原包被96孔化学发光板；
(4)加入酶标板稳定剂封闭；
(5)待检血清经稀释后加入化学发光板温育，再加入酶标猪二抗温育后加入化学发光底物液，37℃作用5min后读取化学发光值。
优选地，(4)中，所述酶标板稳定剂为20mmol/L Na2HPO4+50mmol/L NaCl+5mmol/LEDTA+体积分数为5％的小牛血清，封闭条件为37℃封闭2h。
优选地，(5)中，所述待检血清用血清稀释液按1:40稀释。
优选地，(5)中，所述化学发光底物液为等体积比例的底物A溶液和底物B溶液，底物A溶液为化学发光增强剂，底物B溶液为鲁米诺。
优选地，所述底物A溶液为0.01mmol/L IPP+2mmol/L的H2O2+体积分数为0.001％的Tween20，溶剂为0.02mmol/L、PH＝7.0磷酸-柠檬酸盐缓冲液。
优选地，所述底物B溶液为0.01mmol/L的鲁米诺+质量体积分数为0.01％的牛血清白蛋白+0.01mmol/L EDTA，溶剂为0.02mol/L、pH＝8.5的Tris缓冲液。
相比于现有技术的缺点和不足，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明检测试剂盒是将猪瘟Erns和E2蛋白抗原结构域重组并在E.Coli高效表达，抗原纯度达95％以上，解决了非特异性反应的问题；
(2)原核诱导表达，蛋白产量高，生产工艺较真核表达抗原简便易行；
(3)成功将蛋白复性为具有功能性的可溶性蛋白，可检测针对不同线性表位、构像表位的抗体，弥补了现有猪瘟单抗竞争、阻断检测试剂盒敏感性不足的缺点，提高了检测结果的准确率；
(4)采用酶促化学发光反应系统判定结果，提高了检测灵敏度；
(5)本发明检测试剂盒具有检测时间短，重复性好、特异性强等优点。
附图说明
图1是本发明实施例提供的Erns、E2蛋白抗原结构域嵌合表达的结果图；图中：M-标记；1-菌液诱导后蛋白表达；2-菌液超声裂解后上清液；3-菌液超声破碎后蛋白沉淀。
图2是本发明实施例提供的蛋白纯化的结果图；图中：M-标记；1-蛋白上样前样品；2-蛋白上样后流穿液；3-杂蛋白洗脱流穿液；4，5-目的蛋白洗脱样品。
图3是本发明实施例提供的蛋白复性后的纯化结果图；图中：M-标记；1，2，3-目的蛋白透析复性后进一步纯化的样品。
图4是本发明实施例提供的检测试剂盒的敏感性特异性试验结果图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例：
1、抗原表达：将CSFV C株Erns蛋白100-145aa+GGSSGG+E2蛋白N端145aa克隆至PET-30a载体，阳性质粒转化至BL21DE3plysS菌株，卡纳抗性LB平板筛选单克隆，37℃，LB培养基摇菌过夜；将过夜菌液按体积比(v/v)1:100转接至新鲜LB培养基，37℃，200rpm摇3h至OD600值达到0.6左右，加入终浓度1mmol/L的IPTG继续摇菌4h，6000rpm离心收集菌液。蛋白表达结果如图1所示。
2、蛋白纯化：预冷PBS重悬菌体，超声破碎；4℃、10000rpm离心收集沉淀，用IBwash buffer洗涤包涵体，IB wash buffer为：50mmol/L Tris+500mmol/L NaCl+5mmol/LEDTA+体积分数为1％的tritonX-100，PH＝8.0；然后4℃、10000rpm离心收集沉淀；再用binding buffer重悬沉淀，binding buffer为：20mmol/L NaH2PO4+500mmol/L NaCl+5mmol/L咪唑+8mol/L urea；重悬沉淀后加入还原剂β-ME 4℃摇床孵育过夜，经Ni2+亲和层析柱除去杂蛋白后，用1M咪唑洗脱目的蛋白，蛋白纯化结果如图2所示；纯化后的蛋白再用蛋白复性液低温透析复性，蛋白复性液为50mmol/L Tris+50mmol/L NaCl+体积分数为5％的甘油+质量体积分数为0.1％的PEG6000，复性后的蛋白用阴离子交换柱再次纯化，收集蛋白。蛋白复性后的纯化结果如图3所示。
3、抗原包被：将抗原用PH＝9.6碳酸盐缓冲液稀释到200ng/0.1ml，以100ul每孔的量加到化学发光板中，4℃包被过夜。
4、取出化学发光板，用体积分数为0.05％tween20的磷酸盐缓冲液洗化学发光板3次，加入200ul酶标板稳定剂，37℃封闭2h；所用酶标板稳定剂为：20mmol/L Na2HPO4+50mmol/L NaCl+5mmol/L EDTA+体积分数为5％的小牛血清。
5、甩干稳定液，37℃干燥30min后将化学发光板放入自封袋，加入干燥剂并抽真空，4℃可长期保存。
6、待检血清用血清稀释液稀释，稀释比例分别选择1:10，1:20，1:40，1:80，37℃反应30min，再用体积分数为0.05％tween20磷酸盐缓冲液洗3次，拍干残留液体；所述血清稀释液为：20mmol/L Na2HPO4+50mmol/L NaCl+体积分数4％的小牛血清+体积分数0.1％Tween20+体积分数为2％的E.Coli裂解液，PH＝7.4。
7、加入100ul酶标猪二抗，37℃反应30min，再用体积分数为0.05％tween20磷酸盐缓冲液洗化学发光板3次，拍干残留液体；
8、加入等体积比例的底物A溶液和底物B溶液进行显色，底物A溶液为化学发光增强剂，其组成为0.01mmol/L IPP+2mmol/L的H2O2+体积分数为0.001％的Tween20，溶剂为0.02mmol/L、PH＝7.0磷酸-柠檬酸盐缓冲液。底物B溶液为鲁米诺，其组成为0.01mmol/L的鲁米诺+质量体积分数为0.01％的牛血清白蛋白+0.1mmol/L EDTA，溶剂为0.02mol/L、pH＝8.5的Tris缓冲液。
检测试剂盒的敏感性特异性结果如图4所示，由图可知，600份背景清楚的猪血清初步检测，ROC曲线分析，表明选取的蛋白作为诊断抗原具有良好的敏感性、特异性、可靠性。
9、采用化学发光仪读取发光值，4种血清稀释比例的结果如下表1所示，由表1可知，当待检血清用血清稀释液按1:40稀释时，P/N值最大，因此将该稀释度作为最佳血清稀释度。
表1不同血清稀释比例下化学发光读数
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种猪瘟病毒抗体间接化学发光定性检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括96孔抗原包被化学发光板、标准阴性血清、标准阳性血清、血清稀释液、酶标猪二抗、化学发光底物液，所述试剂盒在进行猪瘟病毒抗体化学发光检测过程中，洗涤后的抗原包被化学发光板中需加入酶标板稳定剂封闭。
2.如权利要求1所述的猪瘟病毒抗体间接化学发光定性检测试剂盒，其特征在于，所述96孔抗原包被化学发光板中抗原为Erns、E2蛋白抗原，抗原包被浓度为200ng/孔，包被条件为4℃过夜。
3.如权利要求1所述的猪瘟病毒抗体间接化学发光定性检测试剂盒，其特征在于，所述酶标板稳定剂为20mmol/L Na2HPO4+50mmol/L NaCl+5mmol/L EDTA+体积分数为5％的小牛血清。
4.如权利要求1所述的猪瘟病毒抗体间接化学发光定性检测试剂盒，其特征在于，所述血清稀释液为20mmol/L Na2HPO4+100mmol/L NaCl+体积分数4％的小牛血清+体积分数为0.01％的Tween20+体积分数为2％的E.Coli裂解液。
5.一种利用权利要求1-4任一项所述的试剂盒进行猪瘟病毒抗体间接化学发光定性检测方法，其特征在于，所述检测方法包括如下步骤：
(1)CSFV Erns、E2蛋白抗原结构域的原核诱导表达
CSFV Erns蛋白100-145aa+GGSSGG+E2蛋白N端145aa通过NdeI、XhoI酶切位点克隆至PET-30a载体，阳性质粒转化至BL21DE3plysS菌株，卡纳抗性LB平板37℃培养筛选单克隆，培养诱导后收集菌液；
(2)蛋白纯化
纯化过程中用蛋白复性液将蛋白低温透析复性，蛋白复性液为50mmol/L Tris+50mmol/L NaCl+体积分数为5％的甘油+0.5mmol/L EDTA+质量体积分数为0.1％的PEG6000；
(3)纯化抗原包被96孔化学发光板；
(4)加入酶标板稳定剂封闭；
(5)待检血清经稀释后加入化学发光板温育，再加入酶标猪二抗温育后加入化学发光底物液，37℃作用5min后读取化学发光值。
6.如权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述酶标板稳定剂为20mmol/L Na2HPO4+50mmol/L NaCl+5mmol/L EDTA+体积分数为5％的小牛血清，封闭条件为37℃封闭2h。
7.如权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述待检血清用血清稀释液按1:40稀释。
8.如权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述化学发光底物液为等体积比例的底物A溶液和底物B溶液，底物A溶液为化学发光增强剂，底物B溶液为鲁米诺。
9.如权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述底物A溶液为0.01mmol/L IPP+2mmol/L的H2O2+体积分数为0.001％的Tween20，溶剂为0.01mmol/L、PH＝7.0磷酸-柠檬酸盐缓冲液。
10.如权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述底物B溶液为0.01mmol/L的鲁米诺+质量体积分数为0.01％的牛血清白蛋白+0.01mmol/L EDTA，溶剂为0.02mol/L、pH＝8.5的Tris缓冲液。
CN201810174996.6A 2018-03-02 2018-03-02 猪瘟病毒抗体间接化学发光定性检测试剂盒及其检测方法 Pending CN108318682A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810174996.6A CN108318682A (zh) 2018-03-02 2018-03-02 猪瘟病毒抗体间接化学发光定性检测试剂盒及其检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810174996.6A CN108318682A (zh) 2018-03-02 2018-03-02 猪瘟病毒抗体间接化学发光定性检测试剂盒及其检测方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN108318682A true CN108318682A (zh) 2018-07-24

Family

ID=62900223

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810174996.6A Pending CN108318682A (zh) 2018-03-02 2018-03-02 猪瘟病毒抗体间接化学发光定性检测试剂盒及其检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108318682A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111796105A (zh) * 2020-07-30 2020-10-20 中国农业科学院兰州兽医研究所 一种非洲猪瘟病毒磁微粒化学发光抗体检测试剂盒及其应用

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19848937A1 (de) * 1998-10-23 2000-05-11 Hoechst Roussel Vet Gmbh Verfahren zum Nachweis der Erreger der bovinen Virusdiarrhoe sowie Testkit zu dessen Durchführung
CN101196518A (zh) * 2006-12-07 2008-06-11 北京科美东雅生物技术有限公司 丙型肝炎病毒抗体化学发光法诊断试剂盒及其制备方法
CN203101397U (zh) * 2013-02-27 2013-07-31 郑州中道生物技术有限公司 猪瘟病毒抗体、猪蓝耳病病毒抗体和猪伪狂犬病病毒抗体的elisa检测试剂盒
CN103882051A (zh) * 2014-03-20 2014-06-25 北京市农林科学院 一种检测猪瘟病毒抗体的elisa方法及检测试剂盒
CN105527442A (zh) * 2014-09-30 2016-04-27 洛阳普莱柯万泰生物技术有限公司 一种猪瘟抗体检测系统及其制备方法
KR101652962B1 (ko) * 2016-04-15 2016-09-02 대한민국 돼지열병 바이러스 생마커백신주 접종 돼지와 돼지열병 바이러스 야외주 감염 돼지의 항체 감별용 키트 및 이를 이용한 감별방법
CN106483286A (zh) * 2016-07-18 2017-03-08 洛阳莱普生信息科技有限公司 一种猪瘟病毒抗体竞争化学发光定量检测试剂盒

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19848937A1 (de) * 1998-10-23 2000-05-11 Hoechst Roussel Vet Gmbh Verfahren zum Nachweis der Erreger der bovinen Virusdiarrhoe sowie Testkit zu dessen Durchführung
CN101196518A (zh) * 2006-12-07 2008-06-11 北京科美东雅生物技术有限公司 丙型肝炎病毒抗体化学发光法诊断试剂盒及其制备方法
CN203101397U (zh) * 2013-02-27 2013-07-31 郑州中道生物技术有限公司 猪瘟病毒抗体、猪蓝耳病病毒抗体和猪伪狂犬病病毒抗体的elisa检测试剂盒
CN103882051A (zh) * 2014-03-20 2014-06-25 北京市农林科学院 一种检测猪瘟病毒抗体的elisa方法及检测试剂盒
CN105527442A (zh) * 2014-09-30 2016-04-27 洛阳普莱柯万泰生物技术有限公司 一种猪瘟抗体检测系统及其制备方法
KR101652962B1 (ko) * 2016-04-15 2016-09-02 대한민국 돼지열병 바이러스 생마커백신주 접종 돼지와 돼지열병 바이러스 야외주 감염 돼지의 항체 감별용 키트 및 이를 이용한 감별방법
CN106483286A (zh) * 2016-07-18 2017-03-08 洛阳莱普生信息科技有限公司 一种猪瘟病毒抗体竞争化学发光定量检测试剂盒

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MIN LIN ET AL.: "Enzyme-linked immunosorbent assay based on a chimeric antigen bearing antigenic regions of structural proteins Erns and E2 for serodiagnosis of classical swine fever virus infection", 《CLINICAL AND DIAGNOSTIC LABORATORY IMMUNOLOGY》 *
MIN LIN ET AL.: "Identification of antigenic regions of the Erns protein for pig antibodies elicited during classical swine fever virus infection", 《J. BIOCHEM.》 *
XUEWU LI ET AL.: "Development of an immunochromatographic strip for rapid detection of antibodies against classical swine fever virus", 《JOURNAL OF VIROLOGICAL METHODS》 *
XUEWU LI ET AL.: "Identification of host cell binding peptide from an overlapping peptide library for inhibition of classical swine fever virus infection", 《VIRUS GENES》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111796105A (zh) * 2020-07-30 2020-10-20 中国农业科学院兰州兽医研究所 一种非洲猪瘟病毒磁微粒化学发光抗体检测试剂盒及其应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
De Diego et al. The non-structural polyprotein 3ABC of foot-and-mouth disease virus as a diagnostic antigen in ELISA to differentiate infected from vaccinated cattle
US20060127885A1 (en) Method and devices for rapid diagnosis of foot-and-mouth disease
Zhu et al. Lateral flow assay for the detection of African swine fever virus antibodies using gold nanoparticle-labeled acid-treated p72
CN103792373A (zh) 猪伪狂犬病毒gE、gB和gD抗体的胶体金免疫层析检测试纸及制备方法
CN109709339B (zh) 检测牛或羊骨骼肌肌钙蛋白i的胶体金免疫层析试纸条及应用
CN106432440B (zh) 羊布鲁氏菌抗体ppa-elisa检测试剂盒及其制备方法
CN103308684A (zh) 一种猪伪狂犬病毒IgM抗体ELISA检测试剂盒
WO2015091736A1 (en) Improved diagnostic test for csfv antibodies
CN105891491A (zh) 试剂盒及其应用
CN106405093A (zh) 抗牛传染性鼻气管炎病毒抗体的检测试剂盒
US20230358757A1 (en) Antigen for 2019 novel coronavirus and detection use thereof
CN108956987B (zh) fiber2蛋白及其重组蛋白在检测鸭血清中鸭2型腺病毒抗体方面的应用
WO2023284476A1 (zh) 一种新型冠状病毒SARS-CoV-2抗体检测试纸条
CN101498730B (zh) 一种改良的双抗原夹心免疫检测法
CN111896749A (zh) 牛乳铁蛋白双抗体夹心胶体金免疫层析试纸条、制备方法、试剂盒和检测方法
Ren et al. A brief review of diagnosis of small ruminants brucellosis
CN109799351A (zh) 猪圆环病毒2型双抗体夹心elisa试剂盒及其应用
Haines et al. Immunohistochemical detection of swine influenza A virus in formalin-fixed and paraffin-embedded tissues.
CN108318682A (zh) 猪瘟病毒抗体间接化学发光定性检测试剂盒及其检测方法
CN105758846A (zh) 检测克伦特罗的化学发光酶联免疫检测试剂盒
CN110564816B (zh) 基于免疫双标记胶体金探针与杂交链式扩增检测单增李斯特菌的试剂盒和应用及检测方法
CN108957002B (zh) 具有双抗原夹心和双检测线的猪瘟病毒抗体定量检测试纸卡
CA1307462C (en) Rapid stick test for the diagnosis of bovine leukemia virus infection from serum or milk
CN104777312A (zh) 一种检测猪传染性胃肠炎病毒抗体的elisa试剂盒
CN108088988A (zh) 一种多肽抗原检测猪旋毛虫抗体的试剂盒及其检测方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20180724