CN108310470A

CN108310470A - 一种缓控释氧微球及其制备方法和用途

Info

Publication number: CN108310470A
Application number: CN201810174515.1A
Authority: CN
Inventors: 朱立新; 张志明; 王涵; 王一涵; 郭家松
Original assignee: Southern Medical University
Current assignee: Southern Medical University
Priority date: 2018-03-02
Filing date: 2018-03-02
Publication date: 2018-07-24
Anticipated expiration: 2038-03-02
Also published as: CN108310470B

Abstract

本发明公开了一种缓控释氧微球及其制备方法和用途，所述的缓控释氧微球为明胶为基质的微球，在微球内部包含过氧化无机物颗粒，优选地，所述的过氧化无机物选自CaO₂、MgO₂、NaCO₃、SrO₂、BaO₂、K₂O₂、Na₂O₂其中的一种或多种。本发明缓控释氧缓释材料具有大小可控、释氧时间长、释氧时间可控、突释率低、地细胞毒性、低免疫源性、制备过程相对简单、易于工业化等优点，在骨缺损修复的临床应用中具有较大的应用前景。

Description

一种缓控释氧微球及其制备方法和用途

技术领域

本发明属于骨织工程人工缓释材料的制备领域，特别涉及一种由明胶复合CaO₂构建的可控释氧型组织工程材料的制备方法。

背景技术

众所周知，人体中一些较小的骨缺损能自行修复，但是骨肿瘤切除，外伤性的大量骨缺失，骨坏死，骨代谢疾病等导致的大块骨缺损却不能自行修复而需要人为的干预。目前对于大块骨缺损可以用骨组织工程和骨移植的方法予以修复。其中骨移植包括自体移植，同种异体移植，异种异体移植，但是它们都有各自明显的缺陷，比如可能会造成疾病的传播，缺乏可以用于自体移植的组织以及捐赠者有较高的患病风险等。近几年，骨组织工程的研究取得了巨大进展。骨组织工程是当今研究的一个热点，可为修复大段骨缺损提供新的材料来源，被广泛认为具有重要的临床应用前景。在其近20年的发展过程中主要经历了两个阶段：

第一个阶段主要是物理填充和连接缺损的骨组织。其中运用较多的材料是高分子材料、生物金属材料和生物陶瓷。比如高分子材料中的聚乳酸、胶原、壳聚糖等，生物金属材料中的医用不锈钢、钴基合金、钛基合金、医用形状记忆合金和纯钽等，生物陶瓷中的羟基磷灰石和磷酸三钙等。但是仅仅机械连接修复骨缺损还不是真正意义的组织工程(即支架材料、种子细胞和细胞因子三位一体有生物活性的修复材料)。

第二个阶段主要是解决生物材料对种子细胞的支持或对细胞因子的缓释，以及种子细胞来源问题。近期人们常在用水凝胶填充在坚硬的高分子材料内解决支持材料的硬度和孔隙率等问题，为种子细胞提供一个类似于细胞外基质的存活环境；通过化学交联或微囊包裹等方法实现细胞因子的持续释放；通过干细胞诱导分化扩大种子细胞来源，促进种子细胞在支架材料中不断成骨分化，能逐步将修复材料转化为有生命的组织并可与宿主进行有机的整合。

尽管近20年来骨组织工程领域已经取得较大的进展，但是距离实际应用还有一些问题需要逐一解决。其中种子细胞的存活是目前制约骨组织工程研究与应用进展的一个重要问题。迄今为止，我们在Scientific Reports发表的文章是第一次用GFP和BrdU标记证实移植的细胞能长期存活并直接参与成骨。尽管如此，我们必须承认只有少部分移植细胞能长期存活。其实种子细胞在宿主中存活问题也是困扰整个组织工程领域的问题。影响种子细胞存活的因素是多方面的，其中缺氧被认为是最为关键的因素之一。骨组织本身的血供与其他组织相比就少很多，周边也缺乏血供丰富的软组织，也就是说能从周边渗入到组织工程材料中的氧非常少。据报道，骨组织工程修复过程最快需要约2周才能有血管开始长入组织工程支架中，在这段时间内支架中种子细胞就处于严重缺氧状态，所以绝大部分种子细胞无法存活下来。这个问题已经引起部分学者的高度重视，目前向组织工程材料中添加释氧剂已有报道，但是存在释氧时程短(大部分报道为数小时到数天)。如此短时间释氧极有可能造成高浓度氧反而引起细胞氧中毒。虽然目前有释氧材料用于组织工程的报道；但是，他们都存在一定的缺陷，如释氧时间短、突释率高、释氧不可控、制备过程复杂、释氧材料体积大等。目前针对上述缺点仍无有效的解决方案。

发明内容

为了解决上述存在的问题，本发明采用乳化交联固化冷冻干燥法制作的明胶-CaO₂释氧微球具有大小可控、释氧时间长、释氧时间可控、突释率低、低细胞毒性、低(无)免疫源性、制备过程相对简单、易于工业化等优点。基于以上的优点，本发明的可控释氧缓释材料在骨缺损修复以及其他需要缓慢释放氧气的领域的临床应用中具有较大的应用前景。

本发明的目的在于提供一种由明胶复合CaO₂构建的可控释氧型组织工程材料及其制备方法。

本发明的一个方面提供了一种缓控释氧微球，其为明胶为基质的微球，在微球内部包含过氧化无机物颗粒，优选地，所述的过氧化无机物选自CaO₂、MgO₂、NaCO₃、SrO₂、BaO₂、K₂O₂、Na₂O₂其中的一种或多种。

在本发明的技术方案中，所述缓控释氧微球通过以下方法制备而成：

1)配制明胶水溶液；

2)制备油相分散相：融化油相，并加入表面活性剂乳化；

3)制备明胶/过氧化无机物混悬乳液：将过氧化无机物加入步骤1)制得的明胶溶液中；

4)制备缓控释氧微球：将明胶/过氧化无机物乳液加入油相分散相中，在加热状态下，以500—3000rpm转速不断搅拌；降温至10℃以下，并在500—3000rpm转速下加入交联剂后在加热条件下进行交联，然后以有机溶剂进行清洗、冻干即得缓控释氧微球。

本发明另一个方面提供了可控释氧微球的制备方法，其包括如下步骤：

1)制备明胶溶液：将明胶以水溶液溶解；

2)制备油相分散相：融化油相，并加入表面活性剂乳化；

在本发明的技术方案中，明胶水溶液的浓度为0.2～2g/ml，优选为0.4-1.2g/ml。

在本发明的技术方案中，明胶水溶液的溶液为水、PBS缓冲液、HNSS溶液、生理盐水。

在本发明的技术方案中，步骤1)、2)中，反应温度为37.5℃-65℃。

在本发明的技术方案中，步骤4)中，加热反应的温度为37.5℃-65℃。

在本发明的技术方案中，步骤4)的转速优选为800-2000rpm。

在本发明的技术方案中，所述的疏水性分散相选自液体石蜡、食用油、花生油、大豆油、玉米油、橄榄油、葵花籽油中的一种或多种的组合。

在本发明的技术方案中，乳化剂选自Span80。

在本发明的技术方案中，步骤4)中清洗微球的方法为，采用有机溶剂进行清洗。优选地，所述有机溶剂选自无水乙醇、异丙醇、丙酮。

在本发明的技术方案中，所述交联剂选自戊二醛或者京尼平。

本发明另一个方面提供了一种修复骨骼的支架。

本发明再一个方面提供了释氧微球用于制备缓控持续释氧型组织工程材料的用途。

本发明所采取的技术方案是：

一种由明胶复合CaO₂构建的新型可控缓慢持续释氧型组织工程材料的制备

方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)胶溶液的制备：制备浓度为0.2～0.8g/ml的明胶溶液，具体方法如下：

①称取2-8g明胶于烧杯中，然后加入10mlPBS，置于磁力搅拌器上以300—1000rpm搅拌5min左右；

②用一次性无菌封口膜将①密封，置于40-54℃条件下让明胶充分溶于PBS中(约30min—90min)，备用；

纳米纤维薄膜的制备：配制胶原蛋白粉末的六氟异丙醇溶液，将该溶液制成纳米纤维薄膜，体内实验备用；

2)制备液体石蜡分散相：具体方法如下：

①将液体石蜡置于40-54℃条件下预热1h；

②取50—200ml(可根据需要调整石蜡用量，也可以大于200ml)于250ml烧杯中，置于加热磁力搅拌器(54℃)上，以500—2000rpm搅拌，同时加入0.5—2ml乳化剂Span80，持续搅拌，充分乳化20min；

3)明胶/CaO₂乳液的制备：称取1—4g的CaO₂加入1)中的明胶溶液中，不断搅拌，混合均匀。

4)制备明胶/CaO₂微球，具体方法如下：

①将3)所得的混悬乳液加入2)中，加热条件下(37.5-65℃)，以500—3000rpm转速不断搅拌20min；20min后置于4℃条件下搅拌30min，转速不变，同时加入适量交联剂(50％戊二醛，0.1—2ml)；30min后置于4℃条件下静置5—10min；

②弃上清，加入适量(因微球制备的具体条件不同而不同)异丙醇，500—2000rpm搅拌5—30min，静置；

③弃上清，加入适量(因微球制备的具体条件不同而不同)丙酮，500—2000rpm搅拌5—30min，静置；

④弃上清，加入无水(因微球制备的具体条件不同而不同)无水乙醇，500—2000rpm搅拌5—30min，静置；

⑤将②—④重复2—3次，静置，弃上清，与滤纸中过滤，-20℃暂时冻存

⑥冷冻干燥机中将第⑤步所得的微球置于真空、-80～-60℃条件下冷冻干燥6—24h，

⑦将冻干的微球密封保存，需要时可用标准分子筛筛选后，紫外消毒后使用。

进一步的，上述步骤1)中所述的明胶具体类型根据自身实验条件选择不同的明胶类型。

进一步的，在上述步骤1)中所述的明胶浓度为0.2～0.8g/ml，但其具体浓度可根据实验具体要求进行调整。

进一步的，上述步骤1)、2)中所采用的恒温条件可采用恒等温水浴锅、恒温箱。

进一步的，上述步骤2)—①中采用的温度可为37.5℃—65℃之间的任何一个值，时间以明胶充分溶解为标准。

进一步的，上述步骤2)—②中，所采用的磁力搅拌器类型可为磁力搅拌器、电动搅拌器等实验室常用搅拌器。

进一步的，上述步骤2)—②中，采用的搅拌速度可根据制备微球的大小进行选择，原则是在其他实验条件不变的情况下，在一定范围内搅拌速度越高，粒径越小。

进一步的，上述步骤2)—②中，采用的乳化剂采用Span80，具体用量可根据制备微球的大小进行选择，原则是在其他实验条件不变的情况下，在一定范围内乳化剂含量越高，微球粒径越小。

进一步的，上述步骤2)—②中，采用的乳化时间可根据制备微球的大小进行选择，原则是在其他实验条件不变的情况下，在一定范围内乳化时间越长，乳化越充分，微球粒径越小。

进一步的，上述步骤3)中，采用的CaO₂的量可根据具体条件调整，使明胶与CaO₂的比例适合自己的要求即可。

进一步的，上述步骤4)—①中，采用的搅拌温度可在37.5-65℃之间，理论上在此区间内，温度越高，越有利于成球均匀

进一步的，上述步骤4)—①中，采用的搅拌速度可根据自身试验对微球粒径的要求来设定，理论上在其他条件不表的情况下，在一定范围内搅拌速度越高，微球粒径越小

进一步的，上述步骤4)—①中，高温条件下的搅拌时间可根据实际情况来进行设定，理论上是在一定范围内，搅拌时间越长，成球越均匀。

进一步的，上述步骤4)—①中，可以选择不同的方法来实现低温条件，如实验室专用低温房间(4℃)、冰水浴等。

进一步的，上述步骤4)—①中，低温条件下的搅拌时间可在一定范围内，如30—90min，理论上，低温搅拌挑时间越长，越有利于微球的固化，可以较少微球之间的粘连。

进一步的，上述步骤4)—①中，选用的交联剂，可以是不同浓度的戊二醛或者京尼平。

进一步的，上述步骤4)—②③④中，采用的异丙醇、丙酮的量及次数以彻底除去石蜡或食用坚果油为度，无水乙醇使用的次数及量以彻底除去异石蜡、食用坚果油、异丙醇、丙酮为度，此3步的搅拌时间可为根据实际情况做调整，理论上洗涤次数越多、洗涤时间越长，洗涤效果越好。

进一步的，上述步骤4)—⑤中，采用的过滤器械，可以选用滤纸，目的在于充分滤去无水乙醇、最大限度减少微球损耗。

进一步的，上述步骤4)—⑤中，在冷冻干燥之前的预冻，可以是-20或者-80℃，预冻时间20—60min。

进一步的，上述步骤4)—⑥中，冷冻干燥时间以微球充分冻干为准。

进一步的，上述步骤4)—⑦中，微球的消毒方法，可以选用紫外照射、环氧乙烷、低温消毒等消毒方式。

有益效果

1、发明制备的人工可控释氧微球较好的解决了释氧时间短、释氧不可控、突释率高的缺点，在保证较长的释氧时程、低突释率、释氧可控的基础上能让释氧微球的外形更可控，可根据实验具体要求，改变释氧微球粒径大小。

2、本发明利用乳化交联固化冷冻干燥法制备的释氧微球，能让释氧剂(CaO₂)均匀分散在明胶中，有助于微球持续平稳释氧，大大降低了突释率，从而避免了位于释氧微球周围的细胞因高氧浓度而产生氧中毒，极大的提高了细胞的存活率。

3、本发明制备的释氧微球具有较高的硬度，与支架材料复合后，大大提高了支架材料的机械强度，从而更加有利于支架材料用于骨缺损的修复。

4、本发明制备的释氧微球具有原材料来源广泛、制备工艺简单，极易于大规模推广应用，在骨缺损修复中具有广泛的应用前景。

附图说明

图1为本发明由明胶复合CaO₂构建的新型可控缓慢持续释氧型组织工程材料的制备工艺流程图。

图2为本发明中释氧材料示意图。

图3为本发明释氧微球实体图，图A为75-125μm释氧微球，图B为125-200μm释氧微球，C图为200-300μm释氧微球。

图4为不同转速制备的释氧微球扫描电镜图，图A为1500rpm，图B为1000rpm，图C为500rpm制备得到的微球。

图5为不同转速下制备的释氧微球的粒度分析，图A为1500rpm，图B为1000rpm，图C为500rpm制备得到的微球。

图6为本发明释氧微球释氧效能检测。

图7为发明释氧微球促进细胞在低氧条件下存活的预实验结果；其中左列为A组：释氧微球，右列为B组：无释氧微球，其为在氧浓度为0的培养箱中培养三天的结果图。第一行亮斑代表活细胞，第二行亮斑代表死细胞，第三行为存活细胞/死亡细胞和DAPI叠加图。

图8为释氧微球混合SAP胶、BMSCs、纳米纤维薄膜植入SD大鼠体内后的释氧效能检测。

图9为大鼠骨缺损修复效果，A为阳性对照组用空白微球的结果；B为用本释氧材料修复骨缺损的预实验结果。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

实施例1制备释氧微球

1)明胶溶液的制备：制备浓度为0.8g/ml的明胶溶液，具体方法如下：

①称取8g明胶于烧杯中，然后加入10mlPBS，置于磁力搅拌器上以500rpm搅拌5min左右；

②用一次性无菌封口膜将①密封，置于54℃条件下让明胶充分溶于PBS中(50min)，备用；

2)制备液体石蜡分散相：具体方法如下：

①将液体石蜡置于54℃条件下预热1h；

②取100ml于250ml烧杯中，置于加热磁力搅拌器(54℃)上，以1500rpm搅拌，同时加入1ml乳化剂Span80，持续搅拌，充分乳化20min；

3)明胶/CaO₂乳液的制备：称取4g的CaO₂加入1)中的明胶溶液，不断搅拌，混合均匀；

4)制备明胶/CaO₂微球，具体方法如下：

①将3)所得的混悬乳液加入2)中，加热条件下(37.5-65℃)，以1500rpm转速不断搅拌20min；20min后置于4℃条件下搅拌30min，转速不变，同时加入适量交联剂(50％戊二醛，0.1ml)；30min后置于4℃条件下静置10min；

②弃上清，加入200ml异丙醇，800rpm搅拌20min，静置；

③弃上清，加200ml丙酮，800rpm搅拌20min，静置；

④弃上清，加入无水乙醇200ml，800rpm搅拌20min，静置；

⑤将②—④重复2—3次，静置，弃上清，于滤纸中过滤，-20℃暂时冻存

⑥冷冻干燥机中将第⑤部所得的微球置于真空、-80～条件下冷冻干燥14h，

本实施例制备的释氧微球如图3A、图4A和图5A所示，从中可以看出微球大小均匀，表面较光滑。

实施例2制备释氧微球

2)制备液体石蜡分散相：具体方法如下：

①将液体石蜡置于54℃条件下预热1h；

②取100ml于250ml烧杯中，置于加热磁力搅拌器(54℃)上，以1000rpm搅拌，同时加入1ml乳化剂Span80，持续搅拌，充分乳化20min；

3)明胶/CaO₂乳液的制备：称取4g的CaO₂加入1)中的明胶溶，不断搅拌，混合均匀

4)制备明胶/CaO₂微球，具体方法如下：

①将3)所得的混悬乳液加入2)中，加热条件下(37.5-65℃)，以1000rpm转速不断搅拌20min；20min后置于4℃条件下搅拌30min，转速不变，同时加入适量交联剂(50％戊二醛，0.1ml)；30min后置于4℃条件下静置10min；

②弃上清，加入200ml异丙醇，800rpm搅拌20min，静置；

③弃上清，加200ml丙酮，800rpm搅拌20min，静置；

④弃上清，加入无水乙醇200ml，800rpm搅拌20min，静置；

本次实验制备的微球如图3B、图4B和图5B所示，因减小了搅拌速度，微球大小明胶比图3A、图4A和图5A增大，但微球大小分布较均匀，如需立即使用，可用标准分子筛筛选需要的微球进行下一步实验。

实施例3制备释氧微球

2)制备液体石蜡分散相：具体方法如下：

①将液体石蜡置于54℃条件下预热1h；

②取100ml于250ml烧杯中，置于加热磁力搅拌器(54℃)上，以500rpm搅拌，同时加入1ml乳化剂Span80，持续搅拌，充分乳化20min；

4)制备明胶/CaO₂微球，具体方法如下：

①将3)所得的混悬乳液加入2)中，加热条件下(37.5-65℃)，以500rpm转速不断搅拌20min；20min后置于4℃条件下搅拌30min，转速不变，同时加入适量交联剂(50％戊二醛，0.1ml)；30min后置于4℃条件下静置10min；

②弃上清，加入200ml异丙醇，800rpm搅拌20min，静置；

③弃上清，加200ml丙酮，800rpm搅拌20min，静置；

④弃上清，加入无水乙醇200ml，800rpm搅拌20min，静置；

⑥冷冻干燥机中将第⑤部所得的微球置于真空、-80℃条件下冷冻干燥14h，

本次结果如图3C、图4C和图5C所示，微球粒径进一步增大，比图3A、图4A、图5A以及图3B、图4B、图5B都大，原因在于制备过程中减小了搅拌速度，从而增加了微球粒径。

下面对上述实施例制备的释氧微球作进一步的效果检测。

实施例4释氧微球释氧效能检测

称取上述制备的微球90mg，加入4mL PBS液中，在设定的1天、3天、5天、7天、14天、21天、28天用溶氧仪检测氧浓度。

结果如图6所示，从图中可以看出，释氧微球在PBS液中能够缓慢持续释氧，有效释氧时间可达4周，并与未加释氧微球的PBS液的对照组对比。

实施例5释氧微球促进细胞在低氧(无氧)条件下的存活实验

将上述制备的微球混合水凝胶，置于含有BMSCs的24孔板中，置于氧浓度为0的培养箱中培养72H，进行活细胞/死细胞染色观察，并与未加释氧微球的对照组对比。

结果如图7所示，从图中可以看出，A组为实验组，加入释氧微球后，有部分细胞死亡，但细胞整体生长良好，而未加释氧微球B组可见，培养皿中细胞全部死亡，未见活细胞。上述结果说明，本实验制备的释氧微球能够促进细胞在低氧条件下的存活。

实施例6体内成骨修复实验

将上述制备的微球与纳米自聚合态水凝胶(SAP胶)/骨髓间充质干细胞(BMSCs)在96孔板中混合。选取SD大鼠为动物模型，在其左下肢股骨外侧髁钻取直径4-5mm，深5mm的孔，充分止血后，将上述混合物用SAP胶包裹成近似圆柱体后，在圆柱体两端分别放置一张纳米纤维薄膜，共同植入骨缺损处，其中纳米纤维薄膜的作用为固定支架，防止其在骨缺损处发生移位，随后逐层缝合伤口。分别于第3天、1周、2周、3周、4周时取材，取材后立即于-80℃冻存，于4周取材完毕后，将之前取材所得一齐冷冻干燥36h，随后置于15mL EP管中，加入3mL PBS溶液，1小时后用溶氧仪检测氧浓度。另外于12周时再次取材，观察成骨修复效果。

体内释氧结果如图8所示，从图中可以看出，其可以缓慢长期地在体内释氧，能长期保持体内具有有效氧浓度。

体内骨缺损修复预实验结果如图9所示，本图均为两组实验结果最佳数据，从图中可以看出，经过12W的修复，添加释氧微球组A骨缺损基本修复，而对照组B，部分未修复，结果说明，释氧材料组因增加了支架材料中的细胞存活率，从而增加了复合支架材料的成骨修复效果。

为本领域的专业技术人员容易理解，以上所述仅为本发明专利的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均落在本发明要求的保护范围之内。

本发明公开了一种由明胶复合CaO₂构建的新型可控缓慢持续释氧型组织工程材料的制备方法。该法将明胶和CaO2制备成大小不同的可控释氧微球备用；然后可根据骨组织工程支架材料孔径的大小选择不同粒径的释氧微球，以水凝胶为载体，将释氧微球置于支架材料内，结合种子细胞进行骨缺损修复。本发明制备的可控释氧微球较能够根据实验需求制备成不同粒径大小的微球，在保证较好的可控释氧效果、较低的突释性、较长的释氧时程的基础上，能促进种子细胞在低氧条件下存活，并能提高复合支架材料联合种子细胞对极限骨缺损的修复效果。

Claims

1.一种缓控释氧微球，其为明胶为基质的微球，在微球内部包含过氧化无机物颗粒，优选地，所述的过氧化无机物选自CaO₂、MgO₂、NaCO₃、SrO₂、BaO₂、K₂O₂、Na₂O₂其中的一种或多种。

2.一种权利要求1所述的缓控释氧微球的制备方法，其包括如下步骤：

1)制备明胶溶液：将明胶以水溶液溶解；

2)制备油相分散相：融化油相，并加入表面活性剂乳化；

3.根据权利要求2的制备方法，步骤1)中，

明胶溶液的浓度为0.2～2g/ml，优选为0.4-1.2g/ml；

明胶溶液的溶剂为水、PBS缓冲液、HNSS溶液、生理盐水。

4.根据权利要求2的制备方法，步骤2)中，

所述的油相选自液体石蜡或食用油。

所述乳化剂选自Span80、Twen80或二者的组合物；优选地，Span80或Span80与Twen80以8:2比例混合；

其中油相与乳化剂的质量比为100:1。

5.根据权利要求2的制备方法，步骤3)中，

CaO₂与明胶质量比为1:0.5-8，优选为1:1-3，更优选为1:2。

6.根据权利要求2的制备方法，步骤4)中，

交联剂选自戊二醛、京尼平；

搅拌速度为500-2000rpm；

有机溶剂选自以能够清洗掉油相的溶剂进行清洗，优选为依次以异丙醇、丙酮和无水乙醇进行清洗；

任选地，冻干完成后，包含以标准分子筛筛选、紫外消毒的步骤。

7.根据权利要求2-6的制备方法制备获得的缓控释氧微球。

8.权利要求1或权利要求7所述的缓控释氧微球在制备缓控持续释氧型组织工程材料的用途。

9.一种成骨修复材料，其由权利要求1或权利要求7所述的缓控释氧微球、具有成骨分化的细胞(成骨细胞、外周血干细胞、骨髓间充质干细胞)，高分子水凝胶制成；

优选地，高分子水凝胶选自纳米自聚合水凝胶(SAP胶)或温敏水凝胶替代；

更优选地，成骨修复材料外侧还包括作为固定支架的纳米纤维薄膜，所述纳米纤维膜为胶原蛋白粉末的六氟异丙醇溶液制成的纳米纤维薄膜。

10.权利要求1或权利要求8所述的缓控释氧微球在制备成骨修复生物材料中的用途；优选地，作为修复骨骼所用药物或者细胞的支架的用途。