CN108276369B - 多硫代赤霉酸酯类化合物及其制备方法与抗肿瘤用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种如通式(Ⅰ)所示的多硫代赤霉酸酯类化合物、以其为活性成分的药物组合物、其制备方法及其在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明的多硫代赤霉酸酯类化合物具有赤霉酸基本骨架结构，1‑位、13‑位和17‑位连接两个或三个相同的烷硫基基团。该类化合物显示了对多种人肿瘤细胞珠良好的抑制活性。此类多硫代赤霉酸酯类化合物的制备是以含双α,β‑不饱和酮结构的赤霉酸衍生物与含巯基化合物在不同条件下反应制备的。
Description
技术领域：
本发明属于化学和医药领域，具体涉及一类多硫代赤霉酸酯类化合物及其制备方法与抗肿瘤用途。
背景技术：
恶性肿瘤严重威胁人类的健康和生命，随着中国人口老龄化和环境因素的影响，肿瘤发病率和致死率都呈现上升的趋势。当前主要的肿瘤治疗方法有手术治疗、放射治疗和药物治疗(即化疗)。恶性肿瘤是全身而非局部性疾病，作用于全身的药物治疗是目前最主要的治疗方法，在肿瘤的治疗中占有不可替代的重要位置。目前常用的化疗药物多因严重的毒副作用而限制了其应用，寻找具有新靶点、新结构，高活性、低毒性的化疗药物仍然是一项重要而急迫的工作。
赤霉素，一类天然的四环二萜类化合物，最主要的生理功能是促进植物生长发育，促进种子萌发，提高结实率，减少植物器官的凋落，改变植物雌雄比率等，主要被应用于农业生产。由于它分子结构中的官能团多且集中，因此在化学结构的改造上具有多种可能性。
在赤霉素结构改造与生物活性研究中，我们已获准两项发明专利(张洪彬,陈静波,刘建平,卿晨.3,15-二羰基赤霉酸类化合物及其酯和盐[P].ZL200410021939.2；张洪彬,陈静波,孙竹先,卿晨,刘建平,曾祥慧,张艳丽.13-卤代-3,15-二氧代赤霉酸酯及其制备方法 [P].ZL200810058297.1.)，以赤霉素GA3为起始原料，对其进行结构改造，获得了一类A 环具有α,β-不饱和酮结构，而D环具有α-亚甲基环戊酮结构的迈克尔反应受体类赤霉酸衍生物，发现此类化合物具有良好的抗肿瘤活性和多靶点抗肿瘤作用机制，还能明显逆转肿瘤细胞的多药耐药。GA3通过结构改造制备含双α,β-不饱和酮结构的赤霉酸衍生物的方法如图3所示。
在前期工作的基础上，本发明继续以含双α,β-不饱和酮结构的赤霉酸衍生物为原料，通过与含巯基化合物发生Michael加成应、取代反应，在目标物中引入羧基以增加水溶性，以利于提高生物利用度并为水溶性制剂的开发提供可能性；另外以含双α,β-不饱和酮结构的赤霉酸衍生物为原料，通过与无毒的半胱氨酸衍生物进行Michael加成反应、取代反应，以增加目标化合物的稳定性并尽量减小目标化合物在代谢过程中可能产生的毒性，设计并合成了本发明所述的多硫代赤霉酸酯类化合物，体外抗肿瘤活性实验结果表明：大多数此类化合物对多种人肿瘤细胞珠的增殖有明显的抑制作用。
发明内容：
本发明的目的在于提供一类现有技术中未见有报道的多硫代赤霉酸酯类化合物，以其为活性成分的药物组合物，其制备方法，以及其在制备抗肿瘤药物中的应用。
为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：
本发明首先提供一类如通式(Ⅰ)所示的多硫代赤霉酸酯类化合物或其药用盐，
通式(Ⅰ)中，R1为羧甲基、2‐羧基乙基、(R)‐2‐甲氧羰基‐2‐乙酰氨基乙基、(S)‐2‐甲氧羰基‐2‐乙酰氨基乙基；R2为SR1、氯、羟基、乙酰氧基；R3为C1～C8烷基、苄基或对甲氧基苄基。
所述的多硫代赤霉酸酯类化合物为3,15‐二氧‐1,13,17‐三烷硫基赤霉酸酯，或13‐氯‐3, 15‐二氧‐1,17‐二烷硫基赤霉酸酯，或13‐羟基‐3,15‐二氧‐1,17‐二烷硫基赤霉酸酯，或13‐乙酰氧基‐3,15‐二氧‐1,17‐二烷硫基赤霉酸酯，其结构特征为：1‐位和17‐位连接相同的烷硫基基团；13‐位连接的取代基与1‐位和17‐位连接的烷硫基基团相同，或者是氯、羟基、乙酰氧基；7‐位羧酸酯为烷基酯、苄基酯、对甲氧基苄基酯。
如通式(Ⅰ)所示的多硫代赤霉酸酯类化合物包括但不限于以下化合物：
3,15‐二氧‐1,13,17‐三羧甲硫基赤霉酸甲酯、3,15‐二氧‐1,13,17‐三(2‐羧基乙硫基)赤霉酸甲酯、3,15‐二氧‐1,13,17‐三((R)‐2‐甲氧羰基‐2‐乙酰氨基乙硫基)赤霉酸甲酯、3,15‐二氧‐1,13,17‐三((S)‐2‐甲氧羰基‐2‐乙酰氨基乙硫基)赤霉酸甲酯、3,15‐二氧‐1,13,17‐三羧甲硫基赤霉酸苄酯、3,15‐二氧‐1,13,17‐三(2‐羧基乙硫基)赤霉酸苄酯、3,15‐二氧‐1,13,17‐三((R)‐2‐甲氧羰基‐2‐乙酰氨基乙硫基)赤霉酸苄酯、3,15‐二氧‐1,13,17‐三((S)‐2‐甲氧羰基‐2‐乙酰氨基乙硫基)赤霉酸苄酯、3,15‐二氧‐1,13,17‐三羧甲硫基赤霉酸对甲氧基苄基酯、3,15‐二氧‐1,13,17‐三(2‐羧基乙硫基)赤霉酸对甲氧基苄基酯、3,15‐二氧‐1,13,17‐三((R)‐2‐甲氧羰基‐2‐乙酰氨基乙硫基)赤霉酸对甲氧基苄基酯、3,15‐二氧‐1,13,17‐三((S)‐2‐甲氧羰基‐2‐乙酰氨基乙硫基)赤霉酸对甲氧基苄基酯、13‐氯‐3,15‐二氧‐1,17‐二羧甲硫基赤霉酸甲酯、13‐氯‐3,15‐二氧‐1,17‐二(2‐羧基乙硫基)赤霉酸甲酯、13‐氯‐3,15‐二氧‐1,17‐二((R)‐2‐甲氧羰基‐2‐乙酰氨基乙硫基) 赤霉酸甲酯、13‐氯‐3,15‐二氧‐1,17‐二((S)‐2‐甲氧羰基‐2‐乙酰氨基乙硫基)赤霉酸甲酯、13‐氯‐3,15‐二氧‐1,17‐二羧甲硫基赤霉酸苄酯、13‐氯‐3,15‐二氧‐1,17‐二(2‐羧基乙硫基)赤霉酸苄酯、13‐氯‐3,15‐二氧‐1,17‐二((R)‐2‐甲氧羰基‐2‐乙酰氨基乙硫基)赤霉酸苄酯、13‐氯‐3,15‐二氧‐1,17‐二((S)‐2‐甲氧羰基‐2‐乙酰氨基乙硫基)赤霉酸苄酯、13‐氯‐3,15‐二氧‐1,17‐二羧甲硫基赤霉酸对甲氧基苄基酯、13‐氯‐3,15‐二氧‐1,17‐二(2‐羧基乙硫基)赤霉酸对甲氧基苄基酯、 13‐氯‐3,15‐二氧‐1,17‐二((R)‐2‐甲氧羰基‐2‐乙酰氨基乙硫基)赤霉酸对甲氧基苄基酯、13‐氯‐3,15‐二氧‐1,17‐二((S)‐2‐甲氧羰基‐2‐乙酰氨基乙硫基)赤霉酸对甲氧基苄基酯、13‐羟基‐3,15‐二氧‐1,17‐二羧甲硫基赤霉酸甲酯、13‐羟基‐3,15‐二氧‐1,17‐二(2‐羧基乙硫基)赤霉酸甲酯、 13‐羟基‐3,15‐二氧‐1,17‐二((R)‐2‐甲氧羰基‐2‐乙酰氨基乙硫基)赤霉酸甲酯、13‐羟基‐3,15‐二氧‐1,17‐二((S)‐2‐甲氧羰基‐2‐乙酰氨基乙硫基)赤霉酸甲酯、13‐羟基‐3,15‐二氧‐1,17‐二羧甲硫基赤霉酸苄酯、13‐羟基‐3,15‐二氧‐1,17‐二(2‐羧基乙硫基)赤霉酸苄酯、13‐羟基‐3,15‐二氧‐1,17‐二((R)‐2‐甲氧羰基‐2‐乙酰氨基乙硫基)赤霉酸苄酯、13‐羟基‐3,15‐二氧‐1,17‐二((S)‐2‐甲氧羰基‐2‐乙酰氨基乙硫基)赤霉酸苄酯、13‐羟基‐3,15‐二氧‐1,17‐二羧甲硫基赤霉酸对甲氧基苄基酯、13‐羟基‐3,15‐二氧‐1,17‐二(2‐羧基乙硫基)赤霉酸对甲氧基苄基酯、13‐羟基‐3,15‐二氧‐1,17‐二((R)‐2‐甲氧羰基‐2‐乙酰氨基乙硫基)赤霉酸对甲氧基苄基酯、13‐羟基‐3,15‐二氧‐1,17‐二((S)‐2‐甲氧羰基‐2‐乙酰氨基乙硫基)赤霉酸对甲氧基苄基酯、13‐乙酰氧基‐3,15‐二氧‐1,17‐二羧甲硫基赤霉酸甲酯、13‐乙酰氧基‐3,15‐二氧‐1,17‐二(2‐羧基乙硫基)赤霉酸甲酯、 13‐乙酰氧基‐3,15‐二氧‐1,17‐二((R)‐2‐甲氧羰基‐2‐乙酰氨基乙硫基)赤霉酸甲酯、13‐乙酰氧基‐3,15‐二氧‐1,17‐二((S)‐2‐甲氧羰基‐2‐乙酰氨基乙硫基)赤霉酸甲酯、13‐乙酰氧基‐3,15‐二氧‐1,17‐二羧甲硫基赤霉酸苄基酯、13‐乙酰氧基‐3,15‐二氧‐1,17‐二(2‐羧基乙硫基)赤霉酸苄基酯、13‐乙酰氧基‐3,15‐二氧‐1,17‐二((R)‐2‐甲氧羰基‐2‐乙酰氨基乙硫基)赤霉酸苄基酯、13‐乙酰氧基‐3,15‐二氧‐1,17‐二((S)‐2‐甲氧羰基‐2‐乙酰氨基乙硫基)赤霉酸苄基酯、13‐乙酰氧基‐3,15‐二氧‐1,17‐二羧甲硫基赤霉酸对甲氧基苄基酯、13‐乙酰氧基‐3,15‐二氧‐1,17‐二(2‐羧基乙硫基)赤霉酸对甲氧基苄基酯、13‐乙酰氧基‐3,15‐二氧‐1,17‐二((R)‐2‐甲氧羰基‐2‐乙酰氨基乙硫基)赤霉酸对甲氧基苄基酯、13‐乙酰氧基‐3,15‐二氧‐1,17‐二((S)‐2‐甲氧羰基‐2‐乙酰氨基乙硫基)赤霉酸对甲氧基苄基酯，
上述化合物对应的化学结构分别为：
以上结构式中：Me为甲基，Bn为苄基，PMB为对甲氧基苄基，Ac为乙酰基。
根据所述的通式(Ⅰ)所示的多硫代赤霉酸酯类化合物的药用盐，是指药学上可接受的盐，是本发明中涉及的含羧基的多硫代赤霉酸酯类化合物与碱金属或碱土金属氧化物、氢氧化物、甲氧基化物、乙氧基化物或碳酸盐反应转化成的羧酸盐，如锂盐、钠盐、钾盐、镁盐、钙盐、锶盐、铋盐。
本发明同时提供了含有治疗有效量的多硫代赤霉酸酯类化合物或其药用盐和药学上可接受的载体的药物组合物。
本发明还提供了通式(Ⅰ)所示的多硫代赤霉酸酯类化合物或其药用盐在制备抗肿瘤前药中的应用，其特征在于所述的前药是指通式(Ⅰ)所示的多硫代赤霉酸酯类化合物或其药用盐本身只具有较弱的抗肿瘤活性，甚至没有活性，但在给药后，在生理条件下，通过代谢或其他方式，被转化为相应的生物活性形式。
本发明继续提供所述的通式(Ⅰ)所示的多硫代赤霉酸酯类化合物的制备方法，该方法是按图2所示的方式，以具有结构通式(Ⅱ)的化合物：13‐氯‐3,15‐二氧赤霉酸酯或13‐羟基‐3,15‐二氧赤霉酸酯或13‐乙酰氧基‐3,15‐二氧赤霉酸酯为原料，在合适的溶剂中，在中性或碱性条件下，经与含巯基化合物反应生成3,15‐二氧‐1,13,17‐三烷硫基赤霉酸酯，或13‐氯‐3,15‐二氧‐1,17‐二烷硫基赤酸酯，或13‐羟基‐3,15‐二氧‐1,17‐二烷硫基赤霉酸酯，或13‐乙酰氧基‐3,15‐二氧‐1,17‐二烷硫基赤霉酸酯。
根据所述的通式(Ⅰ)的多硫代赤霉酸酯类化合物的制备方法，包括以下两条合成路线：
其中，R1为羧甲基、2‐羧基乙基、(R)‐2‐甲氧羰基‐2‐乙酰氨基乙基、(S)‐2‐甲氧羰基‐2‐乙酰氨基乙基；R3为C1～C8烷基、苄基或对甲氧基苄基；
原料A为13‐氯‐3,15‐二氧赤霉酸酯类化合物，原料B为13‐羟基‐3,15‐二氧赤霉酸酯类化合物或13‐乙酰氧基‐3,15‐二氧赤霉酸酯类化合物，原料A和原料B的合成制备参照专利 ZL200410021939.2和专利ZL200810058297.1方法进行；
上述合成路线(1)中，原料A与含巯基化合物在合适的溶剂中，室温或加热，无催化剂或碱性催化条件下发生加成反应、取代反应，生成3,15‐二氧‐1,13,17‐三烷硫基赤霉酸酯或 13‐氯‐3,15‐二氧‐1,17‐二烷硫基赤霉酸酯(化合物C)；
上述合成路线(1)中，各反应物和催化剂用量按摩尔比为：原料A/含巯基化合物/碱性催化剂＝1/2～4/0～1；
上述合成路线(1)中，合适的溶剂为N,N‐二甲基甲酰胺、二甲亚砜、乙腈、二氯甲烷、三氯甲烷、乙醚、环戊基甲基醚、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、四氢呋喃、1,4‐二氧六环、苯、甲苯、甲醇、乙醇、丙醇或丁醇中任意一种；
上述合成路线(1)中，反应温度为室温～相应反应溶剂的回流温度；
上述合成路线(1)中，碱性催化剂为三乙胺、吡啶、N‐甲基吗啡啉、二异丙基乙基胺、碳酸钾、碳酸铯中任意一种；
上述合成路线(1)中，反应时间为0.5～48小时；
上述合成路线(2)中，原料B与含巯基化合物在合适的溶剂中，室温或加热，无催化剂或碱催化条件下发生加成反应，生成13‐羟基‐3,15‐二氧‐1,17‐二烷硫基赤霉酸酯或者13‐乙酰氧基‐3,15‐二氧‐1,17‐二烷硫基赤霉酸酯(化合物D)；
上述合成路线(2)中，各反应物和催化剂用量按摩尔比为：原料A/含巯基化合物/碱性催化剂＝1/2～3/0～1；
上述合成路线(2)中，合适的溶剂为N,N‐二甲基甲酰胺、二甲亚砜、乙腈、二氯甲烷、三氯甲烷、乙醚、环戊基甲基醚、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、四氢呋喃、1,4‐二氧六环、苯、甲苯、甲醇、乙醇、丙醇或丁醇中任意一种；
上述合成路线(2)中，反应温度为室温～相应反应溶剂的回流温度；
上述合成路线(2)中，碱性催化剂为三乙胺、吡啶、N‐甲基吗啡啉、二异丙基乙基胺、碳酸钾、碳酸铯中任意一种；
上述合成路线(2)中，反应时间为0.5～48小时
本发明此外提供了上述多硫代赤霉酸酯类化合物或其药用盐在制备抗肿瘤药物中的应用，其中所述的肿瘤为白血病、肝癌、肺癌、乳腺癌、结肠癌、黑色素瘤。
本发明还提供了上述多硫代赤霉酸酯类化合物或其盐作为前药的用途，所述的前药是指上述多硫代赤霉酸酯类化合物或其药用盐自身可能具有较弱的活性，或甚至没有活性，但是在给药后，在生理条件下通过代谢或其他方式被转化为相应的生物活性形式。
赤霉素是五大植物激素之一，早在20世纪70年代就已投入农业生产，其主要的生理功能是促进植物生长发育，促进种子萌发，提高结实率，减少植物器官的凋落，改变植物雌雄比率等。赤霉素属于四环二萜类化合物，由于分子结构中存在较多的官能团，从而为化学结构的改造提供了多种可能。早期研究发现，具有α,β‐不饱和酮或α‐亚甲基环戊酮结构单元的萜类化合物大多具有抗肿瘤活性及抗菌活性。赤霉酸GA3为一四环二萜类天然产物，已实现商业化发酵生产，其分子中的A环可经氧化反应构建一个α,β‐不饱和酮结构，同时D环也具有改造为α‐亚甲基环戊酮的条件。我们以赤霉酸GA3为起始原料，对其进行结构改造，获得了一批如下结构式所示的迈克尔反应受体类赤霉酸衍生物，发现此类化合物具有
良好的抗肿瘤活性和多靶点抗肿瘤作用机制，还能明显逆转肿瘤细胞的多药耐药，获得两项中国发明专利(ZL200410021939.2；ZL200810058297.1.)授权。
在前期工作的基础上，本发明继续以含双α,β-不饱和酮结构的赤霉酸衍生物为原料，通过与含巯基化合物发生加成应、取代反应，在生成的多硫代赤霉酸酯类目标物中引入羧基以增加水溶性，以利于提高生物利用度并为水溶性制剂的开发提供可能性；另外以含双α,β-不饱和酮结构的赤霉酸衍生物为原料，通过与无毒的半胱氨酸衍生物进行加成反应、取代反应，制备多硫代赤霉酸酯类化合物，以增加目标化合物的稳定性并尽量减小目标化合物在代谢过程中可能产生的毒性，设计并合成了本发明所述的多硫代赤霉酸酯类化合物，体外抗肿瘤活性实验结果表明：大多数此类化合物对多种人肿瘤细胞珠增殖有明显的抑制作用。
本发明提供的多硫代赤霉酸酯类化合物是本发明人在赤霉素衍生物抗肿瘤研究前期工作的基础上，经结构优化得到的一类化合物，稳定性好，本身或作为前药具有较好的抗肿瘤活性，为提供一种抗肿瘤药物提供了新的思路和选择。
本发明的多硫代赤霉酸酯类化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。也可以与其他药物组成复方的形式使用，该药物组合物含有0.1～99％，优选为0.5～90％的本发明化合物，其余为药物学上可接受的，对人和动物无毒和惰性的药物制剂常用的药用载体和/或赋形剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。可以使用不同的药用辅料，制成固体制剂(片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂等)。
本发明所述的药物，可以包含多硫代赤霉酸酯类化合物或其药用盐以及一种或多种可药用的稀释剂或载体。可药用载体包括但不限于卵磷酯、维生素E、聚乙二醇、丙二醇、丙三醇、吐温或其他药物制剂用的表面活性剂、氧化铝、硬酯酸铝、离子交换材料、缓冲物质如磷酸盐、山梨酸、聚乙烯吡咯酮、纤维素物质、聚乙烯醇、羧甲基纤维素钠、羊毛酯、环糊精等可用于促进本发明所述化合物、其药用盐或前药药物传递的载体。
本发明所述的药物，可以包含多硫代赤霉酸酯类化合物或其药学上可接受的盐以及其他可药用辅料。可药用辅料包括但不限于：崩解剂如羧甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、海藻酸钠等，粘合剂如聚维酮K30、微晶纤维素、褐藻酸钠等，填充剂如无水乳糖、淀粉、葡萄糖、乳糖珠粒等，润滑剂如十二烷基硫酸镁、硬酯酸镁等，以及其他赋形剂、增溶剂、香味剂、着色剂等。
本发明所述的化合物可制成剂型包括但不限于颗粒剂、胶囊剂、片剂、口服剂、擦剂、软膏剂、针剂等。
附图说明：
图1为本发明通式(Ⅰ)所示的多硫代赤霉酸酯类化合物结构示意图。
图2为以具有结构通式(Ⅱ)的化合物为原料，与含巯基化合物反应生成通式(Ⅰ)所示的多硫代赤霉酸酯类化合物的流程图。
图3为GA3通过结构改造制备含双α,β-不饱和酮结构的赤霉酸衍生物的方法流程图。
具体实施方式：
下面结合附图，用本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此来限定本发明。
实施例1：
13‐羟基‐3,15‐二氧‐1,17‐二羧甲硫基赤霉酸甲酯(DSG0101)的制备和结构数据：
13‐羟基‐3,15‐二氧赤霉酸甲酯(372mg,1.0mmol)溶于三氯甲烷(10mL)中，然后加入巯基乙酸(0.15mL,1.33g/mL,2.2mmol,2.2eq.)和二异丙基乙基胺(0.050mL,0.78g/mL,0.3 mmol,0.3eq.)，70℃加热回流反应过夜。经TLC检测反应完毕后，减压蒸干溶剂。残余物经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯/醋酸＝2:3:0.005)得白色固体367mg，收率：66％。
1H‐NMR(300MHz,CD3OD):δ＝3.79(1H,d,J＝6.9Hz),3.61(3H,s),3.44(1H,d,J＝9.6Hz), 3.35(2H,s),3.30(1H,q),3.21(1H,d,J＝9.6Hz),3.00‐2.78(5H,m),2.63(1H,t),2.46(1H,d,J＝ 11.4Hz),2.12(1H,d,J＝11.4Hz),2.02‐1.95(1H,m),1.80(1H,q),1.14(3H,s)；
13C‐NMR(75MHz,CD3OD):δ＝216.62,200.00,174.90,174.35,173.22,172.62,96.02,76.70, 65.44,63.32,61.57,55.11,52.76,50.46,46.91,45.58,43.96,42.18,35.55,34.82,29.54,28.67, 18.10,10.73；
HRMS(ESI):m/z[M‐H]‐calcd for C24H28O11S2:555.1000；found:555.1002.
实施例2
13‐羟基‐3,15‐二氧‐1,17‐二(2‐羧基乙硫基)赤霉酸甲酯(DSG0102)的制备和结构数据：
制备方法同实施例1，巯基丙酸用量为(0.19mL,1.22g/mL,2.2mmol,2.2eq.)，其他反应物、催化剂、溶剂的用量和操作过程同实施例1，经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝2:3) 得白色固体467mg，收率：79.8％。
1H‐NMR(300MHz,CD3OD):δ＝3.65(1H,d,J＝6.6Hz),3.53(3H,s),3.17(1H,d,J＝9.6Hz), 2.89(1H,d,J＝9.6Hz),2.89‐2.70(5H,m),2.67(1H,d,J＝9.0Hz),2.61‐2.49(7H,m),2.03(2H,d, J＝11.7Hz),1.98‐1.65(4H,m),1.06(3H,s)；
13C‐NMR(75MHz,CD3OD):δ＝216.87,200.11,175.84,174.97,172.64,96.36,76.70,65.41, 63.25,62.14,55.03,52.70,50.52,46.92,45.07,44.26,42.23,35.48,29.65,29.14,28.97,27.77, 18.03,10.72；
HRMS(ESI):m/z[M‐H]‐calcd for C26H32O11S2:583.1313；found:583.1315.
实施例3：
13‐羟基‐3,15‐二氧‐1,17‐二((R)‐2‐甲氧羰基‐2‐乙酰氨基)乙硫基赤霉酸甲酯(DSG0103) 的制备和结构数据：
13‐羟基‐3,15‐二氧赤霉酸甲酯(372mg,1.0mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，再加入N‐乙酰基‐L‐半胱氨酸甲酯(390mg,2.2mmol,2.2eq.)和三乙胺(0.138mL,0.73g/mL,1.0mmol,1.0eq.)，常温反应过夜，TLC检测反应完毕后，减压蒸干溶剂。残余物经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝2:3)得白色固体656mg，收率：90.3％。
1H‐NMR(300MHz,CDCl3):δ＝6.66‐6.59(2H,m),4.86‐4.79(1H,m),4.75‐4.69(1H,m),3.76 (3H,s),3.74(3H,s),3.60(3H,s),3.50(1H,d,J＝7.0Hz),3.50(1H,d,J＝7.0Hz),3.32(1H,d,J＝ 9.6Hz),3.17(2H,dd,J＝13.6,4.3Hz),3.12‐3.03(1H,m),3.03‐2.97(2H,m),2.93(1H,t), 2.90‐2.83(2H,m),2.79(2H,t),2.72(1H,t),2.60‐2.07(5H,m),2.03(3H,s),2.01(3H,s),1.92(2H, dd,J＝17.7,7.1Hz),1.74‐1.63(1H,s),1.16(3H,s)；
13C NMR(75MHz,CDCl3):δ＝214.51,197.65,173.43,171.33,170.65,170.65,170.49, 170.49,94.60,76.02,64.36,61.81,59.27,53.44,53.15,52.93,52.48,51.88,51.67,59.50,45.30, 43.93,42.71,40.88,35.02,34.91,29.04,27.54,23.14,17.20,10.38；
HRMS(ESI):m/z[M+Na]+calcd for C32H42N2O13S2:749.2026；found:749.2028.
实施例4：
13‐羟基‐3,15‐二氧‐1,17‐二羧甲硫基赤霉酸对甲氧基苄基酯(DSG0104)的制备和结构数据：
制备方法同实施例1，3‐羟基‐3，15‐二氧赤霉酸对甲氧基苄基酯用量为(479mg,1.0 mmol)，其他反应物、催化剂、溶剂的用量和操作过程同实施例1，经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯/醋酸＝1:2:0.01)得淡黄色固体418mg，收率：63.0％。
1H‐NMR(300MHz,CD3OD):δ＝7.18(2H,d,J＝8.7Hz),6.84(2H,d,J＝8.7Hz),4.88(1H,d, J＝9.3Hz),4.82(1H,d,J＝9.3Hz),3.72(3H,s),3.56(2H,s),3.33(1H,d,J＝6.3Hz),3.07(1H,dd, J＝7.2,7.2Hz),2.94(1H,d,J＝10.2Hz),2.86(1H,dd,J＝6.3,6.3Hz),2.73‐2.56(3H,m), 2.35‐1.64(8H,m),1.22(1H,s),1.08(3H,s)；
13C‐NMR(75MHz,CD3OD):δ＝217.22,198.97,174.78,174.24,171.86,161.38,131.82, 128.48,115.12,95.35,76.38,68.24,64.00,63.69,61.61,57.96,55.76,51.55,50.06,44.98, 42.09,35.47,33.77,29.98,28.53,21.06,10.96；
HRMS(ESI):m/z[M‐H]‐calcd for C31H34O12S2:661.1419；found:661.1422.
实施例5：
13‐羟基‐3,15‐二氧‐1,17‐二(2‐羧基乙硫基)赤霉酸对甲氧基苄基酯(DSG0105)的制备和结构数据：
制备方法同实施例1,13‐羟基‐3,15‐二氧赤霉酸对甲氧基苄基酯用量为(479mg,1.0 mmol)，巯基丙酸用量为(0.19mL,1.22g/mL,2.2mmol,2.2eq.)，其他反应物、催化剂、溶剂的用量和操作过程同实施例1，经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯/醋酸＝2:3:0.04)得白色固体505mg，收率：73.1％。
1H‐NMR(300MHz,DMSO‐d6):δ＝7.24(2H,d,J＝8.7Hz),6.91(2H,d,J＝8.7Hz),4.91(1H, d,J＝12Hz),4.80(1H,d,J＝11.7Hz),3.75(3H,s),3.17(1H,d,J＝9.6Hz),3.08(1H,d,J＝9.6Hz), 3.80(2H,t),2.73‐2.50(11H,m),2.26(2H,q),1.87(1H,d,J＝11.4Hz),1.73‐1.63(3H,m),1.06 (3H,s)；
13C‐NMR(75MHz,DMSO‐d6):δ＝215.84,199.32,173.04,172.81,170.38,159.18,130.17, 127.03,113.80,94.66,74.57,66.32,63.50,61.26,60.89,55.02,53.33,48.40,45.61,43.12, 42.90,41.12,34.28,34.19,28.34,27.43,27.29,25.95,16.53,10.07；
HRMS(ESI):m/z[M‐H]‐calcd for C33H38O12S2:689.1732；found:689.1736.
实施例6
13‐羟基‐3,15‐二氧‐1,17‐二((R)‐2‐甲氧羰基‐2‐乙酰氨基)乙硫基赤霉酸对甲氧基苄基酯 (DSG0106)的制备和结构数据：
制备方法同实施例3，13‐羟基‐3,15‐二氧赤霉酸对甲氧基苄基酯用量为(479mg,1.0 mmol)，N‐乙酰基‐L‐半胱氨酸甲酯用量为(390mg,2.2mmol,2.2eq.)，其他反应物、催化剂、溶剂的用量和操作过程同实施例3,硅胶柱层析条件为(石油醚/乙酸乙酯＝1:2)，得白色固体785mg，收率：94.1％。
1H‐NMR(300MHz,CDCl3):δ＝7.19(2H,d,J＝8.6Hz),6.86(2H,d,J＝8.6Hz),6.55(2H,m), 4.93(2H,dd,J＝11.7Hz),4.89(1H,d,J＝11.6Hz),4.84‐4.76(1H,m),4.76‐4.70(1H,m),3.79 (3H,s),3.76(3H,s),3.75(3H,s),3.56‐3.42(2H,m),3.35(1H,d,J＝9.6Hz),3.24‐3.06(1H,m), 3.01(2H,dd,J＝13.7,5.1Hz),2.95‐2.85(2H,m),2.81(1H,d,J＝6.3Hz),2.77(1H,d,J＝10.0Hz), 2.74‐2.66(2H,m),2.59(2H,dd,J＝12.1,6.2Hz),2.41(2H,d,J＝11.4Hz),2.28(1H,dd,J＝8.1, 5.1Hz),2.11(1H,dd,J＝18.7,9.3Hz),2.02(3H,s),2.01(3H,s),1.92‐1.77(2H,m),1.64(1H,dd, J＝18.8,12.7Hz),1.15(3H,s)；
13C‐NMR(75MHz,CDCl3):δ＝214.55,197.61,173.42,171.33,170.64,170.49,170.40, 169.86,159.88,130.70,130.70,127.03,114.14,114.14,94.59,76.01,67.33,64.39,61.65,59.37, 55.38,53.45,53.17,52.94,51.92,51.55,49.64,45.69,43.95,42.69,40.82,35.07,34.95,29.15, 27.38,23.16,23.16,17.18,10.42；
HRMS(ESI):m/z[M+Na]+calcd for C39H48N2O14S2:855.2445；found:855.2451.
实施例7：
13‐氯‐3,15‐二氧‐1,17‐二羧甲硫基赤霉酸甲酯(DSG0201)的制备和结构数据：
制备方法同实施例1，13‐氯‐3,15‐二氧赤霉酸甲酯用量为(391mg,1.0mmol)，其他反应物、催化剂、溶剂的用量和操作过程同实施例1,经TLC检测反应完毕后，减压蒸干溶剂。残余物经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯/醋酸＝3:1:0.03)得白色固体432mg，收率：75.1％。
1H‐NMR(300MHz,CDCl3):δ＝8.72(2H,s),3.66(1H,d,J＝6.6Hz),3.59(3H,s),3.33(3H,s), 3.25(1H,d,J＝9.6Hz),3.10‐3.00(2H,m),2.69‐2.53(6H,m),2.44(1H,d,J＝11.7Hz),2.24‐2.17 (3H,m),2.12(1H,s),1.69(1H,s),1.14(3H,s)；
13C‐NMR(75MHz,CDCl3):δ＝211.97,197.57,175.48,173.99,173.14,170.15,94.33,66.52, 64.26,62.20,61.67,53.30,52.65,49.26,44.29,43.24,42.74,34.98,33.71,30.88,27.82,20.73, 17.41,10.31；
HRMS(ESI):m/z[M‐H]‐calcd for C24H27ClO10S2:573.0661；found:573.0665.
实施例8：
13‐氯‐3,15‐二氧‐1,17‐二(2‐羧基乙硫基)赤霉酸甲酯(DSG0202)的制备和结构数据：
制备方法同实施例1，13‐氯‐3,15‐二氧赤霉酸甲酯用量为(391mg,1.0mmol),巯基丙酸用量为(0.19mL,1.22g/mL,2.2mmol,2.2eq.)，其他反应物、催化剂、溶剂的用量和操作过程同实施例1，经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯/醋酸＝3:1:0.03)得白色固体346mg，收率： 57.3％。
1H‐NMR(300MHz,CDCl3):δ＝6.72(2H,s),3.58(3H,s),3.42(1H,d,J＝7.2Hz),3.27(1H,d, J＝9.6Hz),3.18‐2.62(14H,m),2.47(1H,d,J＝11.1Hz),2.26‐1.98(3H,m),1.70(1H,t),1.18(2H, s),1.14(3H,s)；
13C‐NMR(75MHz,CDCl3):δ＝211.22,197.36,173.23,170.09,94.25,66.61,64.26,61.77, 61.16,53.34,52.58,48.98,43.62,42.90,42.77,36.08,33.68,30.56,29.55,28.64,27.41,17.34, 10.46；
HRS(ESI):m/z[M‐H]‐calcd for C26H31ClO10S2:601.0974；found:601.0979.
实施例9：
13‐氯‐3,15‐二氧‐1,17‐二(R‐2‐甲氧羰基‐2‐乙酰氨基)乙硫基赤霉酸甲酯(DSG0203)的制备和结构数据：
制备方法同实施例3，13‐氯‐3,15‐二氧赤霉酸甲酯用量为(391mg,1.0mmol)，N‐乙酰基‐L‐半胱氨酸甲酯用量为(390mg,2.2mmol,2.2eq.),其他反应物、催化剂、溶剂的用量和操作过程同实施例3，硅胶柱层析条件为(石油醚/乙酸乙酯＝1:2)，得白色固体656mg，收率：89.0％。
1H‐NMR(300MHz,CDCl3):δ＝6.63(2H,m),4.83(1H,m),4.72(1H,m),3.76(3H,s),3.74 (3H,s),3.60(3H,s),3.50(1H,d,J＝7.0Hz),3.50(1H,d,J＝7.0Hz),3.32(1H,d,J＝9.6Hz),3.17 (2H,dd,J＝13.6,4.3Hz),3.12‐3.03(1H,m),3.03‐2.97(2H,m),2.93(1H,t),2.90‐2.83(2H,m), 2.79(2H,t),2.72(1H,t),2.60‐2.07(5H,m),2.03(3H,s),2.01(3H,s),1.92(2H,dd,J＝17.7,7.1 Hz),1.74‐1.63(1H,s),1.16(3H,s)；
13C‐NMR(75MHz,CDCl3):δ＝214.51,197.65,173.43,171.33,170.65,170.65,170.49, 170.49,94.60,67.42,64.36,61.81,59.27,53.44,53.15,52.93,52.48,51.88,51.67,59.50,45.30, 43.93,42.71,40.88,35.02,34.91,29.04,27.54,23.14,17.20,10.38；
HRMS(ESI):m/z[M+Na]+calcd for C32H41ClN2O12S2:767.1687；found:767.1691.
实施例10：
13‐氯‐3,15‐二氧‐1,17‐二羧甲硫基赤霉酸对甲氧基苄基酯(DSG0204)的制备和结构数据：
制备方法同实施例1，13‐氯‐3，15‐二氧赤霉酸对甲氧基苄基酯用量为(497mg,1.0mmol)，其他反应物、催化剂、溶剂的用量和操作过程同实施例1，经硅胶柱层析(石油醚 /乙酸乙酯/醋酸＝3:1:0.03)得白色固体458mg，收率：67.2％。
1H‐NMR(300MHz,CDCl3):δ＝7.22(2H,d,J＝8.7Hz),6.89(2H,d,J＝8.7Hz),5.05(1H,d,J ＝11.7Hz),4.93(1H,d,J＝11.7Hz),3.81(3H,s),3.70(1H,d,J＝6.6Hz),3.35‐3.32(2H,m),3.11 (1H,d,J＝7.2,6.9Hz),3.01‐2.73(7H,m),2.58(1H,t),2.38(1H,d,J＝11.7Hz),2.11(3H,s),1.19 (3H,s)；
13C‐NMR(75MHz,CDCl3):δ＝212.04,197.48,177.62,173.11,169.43,159.92,130.64, 126.80,114.14,94.26,67.54,66.43,64.27,62.37,61.63,55.33,53.28,49.35,44.48,44.37, 43.13,42.71,35.00,33.86,30.82,27.70,20.81,17.40,10.39；
HRMS(ESI):m/z[M‐H]‐calcd for C31H33ClO11S2:679.1080；found:679.1089.
实施例11：
13‐氯‐3,15‐二氧‐1,17‐二(2‐羧基乙硫基)赤霉酸对甲氧基苄基酯(DSG0205)的制备和结构数据：
制备方法同实施例1，13‐氯‐3，15‐二氧赤霉酸对甲氧基苄基酯用量为(497mg,1.0mmol)，巯基丙酸用量为(0.19mL,1.22g/mL,2.2mmol,2.2eq.)，其他反应物、催化剂、溶剂的用量和操作过程同实施例1，经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯/醋酸＝3:1:0.03)得淡黄色固体467mg，收率：65.8％。
1H‐NMR(300MHz,CDCl3):δ＝7.21(2H,d,J＝8.7Hz),6.89(2H,d,J＝8.7Hz),5.04(2H,q), 3.82(3H,s),3.46(1H,d,J＝6.9Hz),3.34(1H,d,J＝9.9Hz),3.09‐2.92(5H,m),2.85‐2.65(11H, m),2.48(1H,q),2.39(1H,d,J＝11.7Hz),2.34‐2.05(3H,m),1.74(1H,t),1.19(3H,s)；
13C‐NMR(75MHz,CDCl3):δ＝210.77,197.14,179.54,176.98,173.20,169.30,159.92, 130.57,126.92,114.10,94.04,67.38,66.50,64.29,61.76,60.90,55.31,53.34,49.02,43.75, 42.78,42.70,42.46,40.68,36.45,33.36,30.44,29.61,29.13,27.21,17.33,10.51；
HRMS(ESI):m/z[M‐H]‐calcd for C33H37ClO11S2:707.1393；found:707.1398.
实施例12
13‐氯‐3,15‐二氧‐1,17‐二((R)‐2‐甲氧羰基‐2‐乙酰氨基)乙硫基赤霉酸对甲氧基苄基酯 (DSG0206)的制备和结构数据：
制备方法同实施例3，13‐氯‐3，15‐二氧赤霉酸对甲氧基苄基酯用量为(497mg,1.0mmol)，N‐乙酰基‐L‐半胱氨酸甲酯(390mg,2.2mmol,2.2eq.)，其他反应物、催化剂、溶剂的用量和操作过程同实施例3，硅胶柱层析条件为(石油醚/乙酸乙酯＝1:2)，得白色固体785mg，收率：94.2％。
1H‐NMR(300MHz,CDCl3):δ＝7.19(2H,d,J＝8.6Hz),6.86(2H,d,J＝8.6Hz),6.55(2H,t), 4.99(1H,d,J＝11.6Hz),4.89(1H,d,J＝11.7Hz),4.85‐4.78(1H,m),4.73(1H,dd,J＝11.5,6.7 Hz),3.79(3H,s),3.76(3H,s),3.75(3H,s),3.56‐3.42(2H,m),3.35(1H,d,J＝9.6Hz),3.24‐3.06 (1H,m),3.01(2H,dd,J＝13.7,5.1Hz),2.95‐2.85(2H,m),2.81(1H,d,J＝6.3Hz),2.77(1H,d,J＝ 10.0Hz),2.74‐2.66(2H,m),2.59(2H,dd,J＝12.1,6.2Hz),2.41(2H,d,J＝11.4Hz),2.28(1H,dd, J＝8.1,5.1Hz),2.11(1H,dd,J＝18.7,9.3Hz),2.02(3H,s),2.01(3H,s),1.92‐1.77(2H,m),1.64 (1H,dd,J＝18.8,12.7Hz),1.15(3H,s)；
13C‐NMR(75MHz,CDCl3):δ＝214.55,197.61,173.42,171.33,170.64,170.49,170.40, 169.86,159.88,130.70,130.70,127.03,114.14,114.14,94.59,68.14,65.33,64.39,61.65,59.37, 55.38,53.45,53.17,52.94,51.92,51.55,49.64,45.69,43.95,42.69,40.82,35.07,34.95,29.15, 27.38,23.16,23.16,17.18,10.42；
HRMS(ESI):m/z[M+Na]+calcd for C39H47ClN2O13S2:873.2106；found:873.2124.
实施例13：
3,15‐二氧‐1,13,17‐三((R)‐2‐甲氧羰基‐2‐乙酰氨基乙硫基)赤霉酸甲酯(DSG0301)的制备和结构数据：
13‐氯‐3,15‐二氧赤霉酸甲酯(391mg,1.0mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，然后加入N‐乙酰基‐L‐半胱氨酸甲酯(585mg,3.3mmol,3.3eq.)和三乙胺(0.042mL,0.73g/mL,0.3mmol,0.3 eq.)，50℃回流反应6小时。经TLC检测反应完毕后，减压蒸干溶剂。硅胶柱层析(石油醚 /乙酸乙酯＝1:2)得白色固体837mg，收率：94.4％。
1H‐NMR(300MHz,CDCl3):δ＝6.89(1H,d,J＝7.7Hz),6.82(1H,d,J＝5.4Hz),6.73(1H,d,J ＝5.7Hz),4.78(2H,d,J＝5.8Hz),4.67(1H,d,J＝4.5Hz),3.74(3H,s),3.70(3H,s),3.68(3H,s), 3.56(3H,s),3.49(1H,d,J＝6.9Hz),3.28(1H,d,J＝9.4Hz),3.18‐2.74(12H,m),2.64(2H,d,J＝9.1Hz),2.47‐2.35(2H,m),2.10(1H,d,J＝11.8Hz),1.99(6H,s),1.95(3H,s),1.73(2H,d,J＝10.5 Hz),1.11(3H,s)；
13C‐NMR(75MHz,CDCl3):δ＝213.86,197.50,173.21,171.34,170.82,170.58,170.39, 170.35,170.18,170.18,94.55,64.18,60.36,60.21,58.85,53.02,52.95,52.90,52.65,52.41, 52.00,51.68,49.93,48.76,45.34,43.66,42.52,39.93,35.93,34.67,30.26,27.61,27.34,23.01, 23.01,23.01,22.95,17.31,10.25；
HRMS(ESI):m/z[M+Na]+calcd for C38H51N3O15S3:908.2380；found:908.2386.
实施例14：
3,15‐二氧‐1,13,17‐三((R)‐2‐甲氧羰基‐2‐乙酰氨基乙硫基)赤霉酸对甲氧基苄基酯 (DSG0302)的制备和结构数据：
制备方法同实施例13,13‐氯‐3，15‐二氧赤霉酸对甲氧基苄基酯用量为(497mg,1.0 mmol)，其他反应物、催化剂、溶剂的用量和操作过程同实施例13，经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:2)得白色固体803mg，收率：80.9％。
1H‐NMR(300MHz,CDCl3):δ＝7.19(2H,d,J＝8.5Hz),6.88(2H,d,J＝8.5Hz),6.78(1H,d,J ＝7.9Hz),6.66(1H,d,J＝7.5Hz),6.53(1H,d,J＝7.3Hz),5.02‐4.86(2H,m),4.81(1H,dd,J＝13.1, 7.1Hz),4.77‐4.60(2H,m),3.80(3H,s),3.74(6H,d,J＝2.0Hz),3.52(1H,t,J＝10.5Hz),3.50(1H, d,J＝6.9Hz),3.32(1H,d,J＝9.7Hz),3.10‐2.74(7H,m),2.75‐2.57(4H,m),2.28(1H,t,J＝10.8 Hz),2.11(1H,dd,J＝11.9,6.4Hz),2.04(3H,s),2.01(3H,s),2.00(3H,s),1.86‐1.55(3H,m),1.14 (3H,s)；
13C‐NMR(75MHz,CDCl3):δ＝213.56,197.44,173.27,171.40,170.82,170.62,170.35, 170.35,170.01,169.45,159.94,130.75,130.75,126.92,114.20,114.20,94.52,67.40,64.29, 60.36,57.94,55.41,55.41,53.07,53.01,52.91,52.75,51.73,51.73,49.84,48.69,45.28,43.81, 42.54,39.47,29.99,27.84,27.40,23.08,23.08,23.08,17.34,10.43；
HRMS(ESI):m/z[M+Na]+calcd for C45H57N3O16S3:1014.2799；found:1014.2804.
药效学实验：
一.细胞增殖抑制实验
1.实验试剂
MTS(3‐(4,5‐Dimethylthiazol‐2‐yl)‐5‐(3‐carboxymethoxyphenyl)‐2‐(4‐sulfophenyl)‐2H‐tetra zolium)、DMSO购自美国Sigma公司；DMEM、RPMI‐1640、青霉素/链霉素购自HyClone 公司；胰蛋白酶购自Bioind公司；CellTiter 
AQueous One SolutionCell Proliferation Assay kit 购自Promega公司。本发明所涉及的化合物均由本实验室自行合成制备。
实验中所用到的细胞A549、SMMC‐7721、HL‐60、MCF‐7、SW480、A‐375均购自中国科学院上海细胞库。
PBS缓冲液(pH 7.4，10×贮存液)配制：NaCl 80g，KH2PO4 2.4g，Na2HPO4·12H2O35.8 g，KCl 2g，调整pH至7.4，定容至1L，使用时稀释至1×缓冲液。
2.实验方法
MTS法检测细胞存活率：CellTiter 
AQueous One Solution细胞增殖检测试剂盒以比色法来检测细胞增殖以及细胞毒性等实验中的活细胞数量。该试剂包含一种新型四唑化合物 (3‐(4,5‐Dimethylthiazol‐2‐yl)‐5‐(3‐carboxymethoxyphenyl)‐2‐(4‐sulfophenyl)‐2H‐tetrazolium, inner salt,MTS)和一种电子偶联剂(phenazineethosulfate,PES)。PES能够增强化学稳定性，这使它能与MTS混合，形成一个稳定的溶液。MTS被细胞中的多种脱氢酶还原成有色的甲臜产物，可直接溶解于培养液中，在490nm处检测到的甲臜产物吸光值与培养物中活细胞的数量成正比。
具体步骤如下：
(1)用含10％胎牛血清的培养液将细胞悬液浓度调整为5×104个/mL，将100μL细胞悬液加入96孔板，即每孔接种5000个细胞，微孔板边孔中加入200μL灭菌水以平衡微孔板湿度，减小边缘效应。
(2)将培养板置于37℃，5％CO2培养箱中培养16-24h，细胞贴壁后达到对数生长期时可加化合物处理。
(3)用培养液配制最高浓度为80μM的待测化合物，按5倍进行梯度稀释，共配制5个浓度，即分别为80μM、16μM、3.2μM、0.64μM及0.128μM。
(4)将100μL稀释后的不同浓度化合物加入96孔板中，各检测浓度均设3个复孔。
(5)将细胞置于37℃，5％CO2培养箱中孵育48h后，停止培养，去除96孔板中的培养液，加入120μL MTS稀释液(即培养液:CellTiter
AQueous One Solution试剂＝5:1)。
(6)空白对照设置：由于CellTiter
AQueous One Solution Reagent与细胞培养基孵育后会在490nm有微量的自发产生的吸收光，因此需要设置3个重复的空白对照孔(无细胞)。该对照孔含有与实验孔等体积的细胞培养基和CellTiter
AQueous One SolutionReagent，实验孔的吸光值减去“无细胞”空白对照孔的吸光值，即可得到校正的吸光值。
(7)将培养板置于37℃，5％CO2培养箱孵育1-4h后，将培养板置于振荡器上低速振荡5min，在酶联免疫检测仪490nm处检测各孔的吸光值。记录OD值并计算不同浓度化合物处理下细胞的存活率及各待测化合物的IC50值。
3.实验结果：
表1多硫代赤霉酸酯类化合物抗肿瘤增殖作用
本发明的多硫代赤霉酸酯类化合物对白血病HL‐60、肝癌SMMC‐7721、肺癌A‐549、乳腺癌MCF‐7、结肠癌SW480、黑色素瘤A‐375共六个肿瘤细胞株进行了体外细胞增殖抑制实验，以顺铂作为阳性对照药物，结果表明大多数通式(Ⅰ)所示的17‐烷硫基赤霉酸酯类化合物对上述肿瘤细胞的增殖有明显的抑制作用，部分数据见上表1。
实施例15：
片剂的制备：
按实施例1‐14的方法制得本发明化合物，取其中一种化合物或几种化合物的混合物，按其与赋形剂重量比为1:5‐1:10的比例加入赋形剂，制粒压片。
实施例16：
口服液制剂的制备：
按实施例1‐5的方法制得本发明化合物，取其中一种化合物或几种化合物的混合物，按常规口服液制法制成口服液。
实施例17：
胶囊剂、颗粒剂、或冲剂的制备：
按实施例1‐5的方法制得本发明化合物，取其中一种化合物或几种化合物的混合物，按其与赋形剂重量比为5:1的比例加入赋形剂，制成胶囊或颗粒剂或冲剂。
Claims (8)
1.通式(Ⅰ)所示的多硫代赤霉酸酯类化合物或其药用盐，
2.根据权利要求1所述的通式(Ⅰ)所示的多硫代赤霉酸酯类化合物或其药用盐，其特征在于所述的多硫代赤霉酸酯类化合物是以下化合物：
以上结构式中：Me为甲基，Bn为苄基，PMB为对甲氧基苄基，Ac为乙酰基。
3.根据权利要求1所述的通式(Ⅰ)所示的多硫代赤霉酸酯类化合物或其药用盐，其特征在于所述的药用盐是指药学上可接受的盐，是权利要求1中涉及的含羧基的多硫代赤霉酸酯类化合物与碱金属或碱土金属氧化物、氢氧化物、甲氧基化物、乙氧基化物或碳酸盐反应转化成的羧酸盐，所述羧酸盐为锂盐、钠盐、钾盐、镁盐、钙盐、锶盐、铋盐。
4.含有治疗有效量的权利要求1或2所示的多硫代赤霉酸酯类化合物的任何一种或两种及以上的混合物或其药用盐和药学上可接受的载体的药物组合物。
5.权利要求1或2所示的多硫代赤霉酸酯类化合物或药用盐在制备抗肿瘤药物中的应用。
6.权利要求1或2所示的多硫代赤霉酸酯类化合物或药用盐和权利要求4所述的药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于所述的肿瘤为白血病、肝癌、肺癌、乳腺癌、结肠癌、黑色素瘤。
7.权利要求1所述的通式(I)所示的多硫代赤霉酸酯类化合物的制备方法，其特征在于：该方法是以具有结构通式(II)的化合物：13-氯-3，15-二氧赤霉酸酯，或13-羟基-3，15-二氧赤霉酸酯，或13-乙酰氧基-3，15-二氧赤霉酸酯类化合物为原料，在合适的溶剂中在中性或碱性条件下，按式1所示的方式：
与含巯基化合物反应生成通式(I)所示的多硫代赤霉酸酯类化合物：3，15-二氧-1，13，17-三烷硫基赤霉酸酯，或13-氯-3，15-二氧-1，17-二烷硫基赤霉酸酯，或13-羟基-3，15-二氧-1，17-二烷硫基赤霉酸酯，或13-乙酰氧基-3，15-二氧-1，17-二烷硫基赤霉酸酯。
8.根据权利要求7所述的通式(I)所示的多硫代赤霉酸酯类化合物的制备方法，其特征在于该方法包括以下两条合成路线：
(1)
(2)
其中，R1为羧甲基、2-羧基乙基、(R)-2-甲氧羰基-2-乙酰氨基乙基、(S)-2-甲氧羰基-2-乙酰氨基乙基；R3为C1～C8烷基、苄基或对甲氧基苄基；
原料A为13-氯-3,15-二氧赤霉酸酯类化合物，原料B为13-羟基-3,15-二氧赤霉酸酯类化合物或13-乙酰氧基-3,15-二氧赤霉酸酯类化合物；
上述合成路线(1)中，原料A与含巯基化合物在合适的溶剂中，室温或加热，无催化剂或碱性催化条件下发生加成反应和取代反应，生成3,15-二氧-1,13,17-三烷硫基赤霉酸酯或13-氯-3,15-二氧-1,17-二烷硫基赤霉酸酯(化合物C)；
上述合成路线(1)中，各反应物和催化剂用量按摩尔比为：原料A/含巯基化合物/碱性催化剂＝1/2～4/0～1；
上述合成路线(1)中，合适的溶剂为N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜、乙腈、二氯甲烷、三氯甲烷、乙醚、环戊基甲基醚、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、四氢呋喃、1,4-二氧六环、苯、甲苯、甲醇、乙醇、丙醇或丁醇中任意一种；
上述合成路线(1)中，反应温度为室温～相应反应溶剂的回流温度；
上述合成路线(1)中，碱性催化剂为三乙胺、吡啶、N-甲基吗啡啉、二异丙基乙基胺、碳酸钾、碳酸铯中任意一种；
上述合成路线(1)中，反应时间为0.5～48小时；
上述合成路线(2)中，原料B与含巯基化合物在合适的溶剂中，室温或加热，无催化剂或碱催化条件下发生加成反应，生成13-羟基-3,15-二氧-1,17-二烷硫基赤霉酸酯或13-乙酰氧基-3,15-二氧-1,17-二烷硫基赤霉酸酯(化合物D)；
上述合成路线(2)中，各反应物和催化剂用量按摩尔比为：原料B/含巯基化合物/碱性催化剂＝1/2～3/0～1；
上述合成路线(2)中，合适的溶剂为N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜、乙腈、二氯甲烷、三氯甲烷、乙醚、环戊基甲基醚、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、四氢呋喃、1,4-二氧六环、苯、甲苯、甲醇、乙醇、丙醇或丁醇中任意一种；
上述合成路线(2)中，反应温度为室温～相应反应溶剂的回流温度；
上述合成路线(2)中，碱性催化剂为三乙胺、吡啶、N-甲基吗啡啉、二异丙基乙基胺、碳酸钾、碳酸铯中任意一种；
上述合成路线(2)中，反应时间为0.5～48小时。
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