CN108254459A - 一种微胶囊粉剂中苯并芘的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种微胶囊粉剂中苯并芘的检测方法，包括样品的前处理步骤，所述样品的前处理步骤为：将非极性溶剂加入微胶囊粉剂样品中，得到混合液，将所述混合液涡旋振荡30～60s后，进行超声提取5～10min，并于7000～10000r/min的转速下离心处理5～10min，取上清液作为待测液，整个过程避光处理。本发明提供的一种微胶囊粉剂中苯并芘的检测方法，能够对微胶囊粉剂中的苯并芘进行快速充分地提取，提取方法简单、效率高，能满足检测需要、检测准确度高。

Description

一种微胶囊粉剂中苯并芘的检测方法

技术领域

本发明涉及微胶囊检测技术领域，尤其涉及一种微胶囊粉剂中苯并芘的检测方法。

背景技术

DHA(二十二碳六烯酸)，俗称脑黄金，是一种对人体非常重要的不饱和脂肪酸，属于ω-3不饱和脂肪酸家族中的重要成员；ARA(二十碳四烯酸)，又名花生四烯酸，属Omega6族长链多元不饱和脂肪酸。DHA和ARA是人体组织器官的发育、神经系统细胞生长及维持的主要成分，尤其是大脑、神经、视觉细胞中的重要脂肪酸成分，在婴幼儿大脑和视觉系统发育中发挥着十分重要的作用，在幼儿时期属于必需脂肪酸，对胎婴儿智力和视力发育至关重要，是婴幼儿奶粉中不可或缺的营养物质，常以微胶囊粉剂的形式添加到奶粉中去，作为奶粉的重要配料，DHA、ARA微胶囊粉剂的质量控制备受关注。

DHA、ARA微胶囊技术是经高品质壁材按一定比例包埋DHA、ARA油脂形成的一种粉末状物质，直径一般为1～500μm，壁的厚度一般为0.5～150μm，能够有效延缓油脂的氧化，提高产品的稳定性，防止各种组分之间的相互干扰，更易于人体吸收和利用。

苯并芘又称苯并(α)芘，是一种公认的强致癌化合物，是多环芳烃中毒性最大的一种，被国际癌症研究中心列为2A类致癌物。可以通过呼吸、摄入和接触等途径进入人体，可损伤生殖系统，易导致皮肤癌、肺癌、上消化道肿瘤、动脉硬化和不育症等疾病。欧盟食品科学协会把苯并芘作为其他多环芳烃在食品和食用油中出现的标志。苯并芘在自然界中广泛分布，在油脂生产中的不当操作以及苯并芘的亲脂能力可能使其污染油脂。目前，由于食品污染所导致的疾病已成为全世界最为广泛关注的食品安全问题之一，我国国标限定植物油中为苯并(a)芘为10μg/kg。

现有检测苯并芘的技术主要有气相色谱、质谱联用法(GC-MS)、高效液相色谱法(HPLC)、傅里叶红外法(FT-IR)等，但并不直接适用于粉体微胶囊中苯并(a)芘的检测，目前并未发现对DHA、ARA微胶囊粉末中的苯并芘进行有效检测的方法，因此，开发一种简单、快速、准确性高的微胶囊粉末油脂苯并(a)芘的测定方法对于婴幼儿食品安全尤为重要。由于苯并(a)芘易溶于正己烷，微胶囊粉末由于其本身的特性，其中的大部分DHA、ARA油脂是被包埋在微胶囊内部，而微胶囊粉末的包埋壁材一般含有阿拉伯胶、醋酸纤维、羟丙基甲基纤维素、β-环糊精、糊精和麦芽糊精等物质，对包埋在壁材中的油脂中的苯并芘的提取产生较大影响，传统的苯并芘提取方法难以对微胶囊粉末中的苯并芘进行充分有效地提取，提取效率低，从而导致对微胶囊中苯并芘难以进行准确的测定。

发明内容

本发明的目的在于为了解决传统的苯并芘提取方法对微胶囊粉剂中的苯并芘提取不充分、提取效率低而造成测定准确性低的问题，提供一种微胶囊粉剂中苯并芘的检测方法。

本发明提供的一种微胶囊粉剂中苯并芘的检测方法，包括样品的前处理步骤，所述样品的前处理步骤为：将非极性溶剂加入微胶囊粉剂样品中，得到混合液，将所述混合液涡旋振荡30～60s后，进行超声提取5～10min，并于7000～10000r/min的转速下离心处理5～10min，取上清液作为待测液，整个过程避光处理。

微胶囊粉剂是将功能性油脂通过壁材包埋在微胶囊内，难以对油脂中的苯并芘进行直接测定，本发明的检测方法是在测定前对微胶囊粉剂进行前处理，用非极性溶剂在一定条件下对微胶囊粉剂先后进行涡旋振荡、超声提取，对包埋的壁材进行充分溶解破坏，使油脂快速高效地溶解在非极性溶剂中，然后通过快速离心处理，使溶解在非极性溶剂中的油脂与壁材充分分离，实现充分有效的提取，该方法对苯并芘的提取回收率可达到85.4％左右，与传统的提取方法相比提取率有极大的提升。由于苯并芘对光敏感易分解，故处理过程中需要进行避光处理，以防止苯并芘的损失影响最后测量结果。

优选地，按照所述样品的前处理步骤，用等量非极性溶剂重复处理两次，合并两次上清液作为待测液。

用非极性溶剂提取一次时，苯并芘的回收率相对较低，最高达到70.4％左右，当提取两次时，苯并芘的回收率最高达到85.4％左右，随着提取次数的增加，苯并芘的回收率基本不变，因此重复提取两次，既可以提高提取效率，还可缩短前处理时间、降低处理成本。

优选地，所述非极性溶剂为正己烷、石油醚或乙酸乙酯环己烷；优选正己烷。非极性溶剂选为正己烷、石油醚或乙酸乙酯环己烷，苯并芘的提取回收率在70～85.4％。

优选地，所述样品的前处理步骤中，还包括对所述上清液进行冷冻离心分离纯化的步骤或采用苯并芘分子印迹柱对所述上清液进行选择性吸附分离纯化的步骤。

多不饱和脂肪酸微胶囊粉剂分解后为复杂的样品，其中包括蛋白、油脂、乳糖等，经过前处理后苯并(a)芘还含有其他杂质成分，主要为油脂，因此还需要去除油脂。本发明通过冷冻离心分离纯化或采用苯并芘分子印迹柱对所述上清液进行选择性吸附分离纯化处理。苯并芘分子印迹柱是通过常规的分子印迹技术制得，即在一定致孔剂中，模板分子(苯并芘分子)与功能单体依靠官能团之间的共价或非共价作用形成主客体配合物，加入交联剂，通过引发剂、光或热等引发单体聚合，使主客体配合物与交联剂通过自由基共聚合在模板分子周围形成高联的刚性聚合物，将聚合物中的印迹分子洗脱或解离出来，即得到苯并芘分子印迹柱。苯并芘分子印迹柱留下了与苯并芘分子大小和形状相匹配的立体孔穴，同时孔穴中包含了精确排列的与苯并芘分子官能团互补的由功能单体提供的功能基团，类似生物自然的识别系统，这样的空穴对苯并芘分子及其类似物具有选择识别特性，对目标分子具有较高的吸附分离作用。

优选地，对所述上清液进行冷冻离心分离纯化的步骤具体过程如下：对所述上清液进行冷冻离心分离纯化的步骤具体过程如下：将所述上清液在30℃下氮气吹至近干，用甲醇定容至1mL，装入1mL离心管中，于-10℃，12000～15000r/min离心15～20min后取上清液即为待测液。

优选地，采用苯并芘分子印迹柱对所述上清液进行选择性吸附分离纯化的步骤具体过程如下：用5mL正己烷活化苯并芘分子印迹柱，待所述上清液过柱对苯并芘进行选择性吸附分离后，用6mL正己烷淋洗苯并芘分子印迹柱，接入泵抽干，用10mL二氯甲烷洗脱，得到洗脱液，将所述洗脱液在30℃下氮气吹干，用甲醇定容至1mL，涡旋振荡10s，用0.22μm的有机膜过滤后，取过滤液即为待测液。

先对苯并芘分子印迹柱进行活化，再对上样后的柱子进行淋洗，可以充分的提高柱子的吸附率，同时有效去除油状杂质，提高苯并芘的分离纯度。活化和淋洗柱子的用量不易过高，用量过高会导致苯并芘较易随淋洗液流失，从而降低柱子的吸附效率，本发明通过研究发现用5mL正己烷活化苯并芘分子印迹柱，过柱后，用6mL正己烷淋洗苯并芘分子印迹柱，苯并芘分子印迹柱对上述上清液中的苯并芘的吸附效率达到最佳，苯并芘的回收率可达到92％以上。

优选地，将所述待测液进行分离纯化后，用液相色谱-串联质谱仪对所述待测液中的苯并芘进行分析测定。

优选地，液相色谱分析中，流动相体系选取纯水和甲醇，柱温30±1℃，进样量2μl。

优选地，液相色谱分析中，洗脱条件：纯水和甲醇梯度洗脱，梯度洗脱条件为：0～2min，纯水与甲醇的用量(wt％)比为40:60；2～10min，纯水与甲醇的用量(wt％)比为2:98；10～12min，纯水与甲醇的用量(wt％)比为2:98；12～15min，纯水与甲醇的用量(wt％)比为40:60；其中流速为0.4mL/min。

优选地，串联质谱仪的检测条件为：采用电化学离子源正离子(APCI+)扫描，离子化电压为4000V，加热温度为600℃；喷雾气的量为50psi，辅助加热气的量为55psi。

本发明的有益效果在于：微胶囊粉剂是将油脂通过壁材包埋在微胶囊内，难以对油脂中的苯并芘进行直接测定，本发明的检测方法是在测定前对微胶囊粉剂进行前处理，用非极性溶剂在一定条件下对微胶囊粉剂先后进行涡旋振荡、超声提取，对包埋的壁材进行充分溶解破坏，使油脂快速高效地溶解在非极性溶剂中，然后通过快速离心处理，使溶解在非极性溶剂中的油脂与壁材充分分离，实现充分有效的提取，该方法对苯并芘的提取回收率能达到85.4％左右，与传统的提取方法相比提取率有极大的提升。

附图说明

图1为本发明的一种微胶囊粉剂中苯并芘的检测方法测定的苯并芘的色谱图；

图2为不同提取溶剂对苯并芘回收率的影响结果图；

图3为不同提取次数对苯并芘回收率的影响结果图；

图4为不同超声时间对苯并芘回收率的影响结果图。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。若未特别指明，实施例中所用技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。

实施例1

1、材料与仪器

材料：甲醇为LC-MS级，购于美国Fisher公司；乙酸乙酯、环己烷为HPLC级，购于美国Fisher公司；苯并(a)芘标准品；色谱柱，安捷伦ZORBAX SB-C18(100mm×2.1mm，3.5μm)；多不饱和脂肪酸微胶囊ARA和DHA粉剂，由嘉必优生物工程(武汉)有限公司提供。

仪器：Agilent1260高效液相色谱仪，购于美国Agilent公司；QTRAP4500质谱仪，购于美国sciex公司；冷冻离心机，购于美国sigma公司；氮吹仪，购于上海安谱科学仪器有限公司)；超声波清洗机，购于宁波新芝有限公司。

2、样品前处理

2.1标准溶液的配制

精确称取苯并芘标准品10mg，于100mL容量瓶中，乙腈溶解并定容，置于-20℃下保存，作为储备液待用。取100μL标准储备液于100mL容量瓶中，甲醇溶解并定容至100mL，作为标准中间液。使用时将标准中间溶液稀释为合适浓度。

2.2样品的提取

称取DHA微胶囊粉剂产品1.0g(精确至0.0001g)各3份于40mL塑料离心管中，分别加入100μL苯并(a)芘标准溶液(浓度7.5ng/mL)，加入10mL正己烷，涡旋30s，超声处理10min，7000r/min转速离心处理5min，取上清液，作为待测液，整个处理过程对样品进行避光处理。

2.3样品纯化(冷冻离心纯化)

将待净化样品30℃下氮气吹至近干，用甲醇定容至1mL，装入1mL离心管中，于-10℃，12000r/min离心15min后取上清液，装入1.5mL进样小瓶中，供液相色谱-串联质谱仪分析。

3、分析测定

3.1仪器条件

串联质谱仪的检测条件为：采用电化学离子源正离子(APCI+)进行一级质谱扫描，得到苯并芘的分子离子峰m/z253.0，以m/z253.0作为二级质谱，离子化电压为4000V，加热温度为600℃；喷雾气的量为50psi，辅助加热气的量为55psi。

以丰度较高226.1的作为定量离子，以丰度较低226.1的作为定性离子，并采用多反应监测(MRM)模式进行液相色谱分析。液相色谱条件：流动相：甲醇-纯水梯度洗脱，梯度洗脱条件为：0～2min，纯水与甲醇的用量(wt％)比为40:60；2～10min，纯水与甲醇的用量(wt％)比为2:98；10～12min，纯水与甲醇的用量(wt％)比为2:98；12～15min，纯水与甲醇的用量(wt％)比为40:60；其中流速为0.4mL/min，如表1中，其中流动相A为纯水，流动相B为甲醇；进样量：2μl；流速：0.4mL/min，柱温：30±1℃；洗脱条件：纯水和甲醇梯度洗脱，流速为0.4mL/min，分析时间为15min。纯水和甲醇梯度梯度洗脱条件见表1中，采用多反应监测(MRM)具体的离子采集参数见表2中。

表1色谱分离甲醇-纯水梯度洗脱条件

时间(min)	流动相A(％)	流动相B(％)
			0	40	60
2	2	98
			10	2	98
12	40	60
			15	40	60

表2多反应监测具体的离子采集参数

3.2测定

将合适浓度的苯并芘标准溶液，在指定的3.1的色谱条件下进样检测，以相对峰面积Y对浓度X进行回归，计算得回归方程。

关系曲线方程为:y＝0.0002x-0.0357，R＝0.9999，线性关系良好。

根据样品苯并芘相对峰面积通过标曲计算浓度，并计算回收率，苯并芘的平均提取回收率为70.4％。

实施例2

1、材料与仪器：同实施例1。

2、样品前处理

2.1标准溶液的配制：同实施例1。

2.2样品的提取

称取DHA微胶囊粉剂产品1.0g(精确至0.0001g)各3份于40mL塑料离心管中，分别加入100μL苯并(a)芘标准溶液(浓度7.5ng/mL)，加入10mL正己烷，涡旋60s，超声处理5min，7000r/min转速离心处理10min，取上清液，作为待测液，整个处理过程对样品进行避光处理。

2.3样品纯化(冷冻离心纯化)

将待净化样品30℃下氮气吹至近干，用甲醇定容至1mL，装入1mL离心管中，于-10℃，12000r/min离心15min后取上清液，装入1.5mL进样小瓶中，供液相色谱-串联质谱仪分析。

3、分析测定：同实施例1。计算得到苯并芘的平均提取回收率为72.5％。

实施例3

1、材料与仪器：同实施例1。

2、样品前处理

2.1标准溶液的配制：同实施例1。

2.2样品的提取

称取DHA微胶囊粉剂产品1.0g样品(精确至0.0001g)各3份于40mL塑料离心管中，分别加入100μL苯并(a)芘标准溶液(浓度7.5ng/mL)，加入10mL正己烷，涡旋30s，超声处理10min，10000r/min转速离心处理5min，取上清液，作为待测液，整个处理过程对样品进行避光处理。

2.3样品纯化(冷冻离心纯化)

将待净化样品30℃下氮气吹至近干，用甲醇定容至1mL，装入1mL离心管中，于-10℃，12000r/min离心20min后取上清液，装入1.5mL进样小瓶中，供液相色谱-串联质谱仪分析。

3、分析测定：同实施例1。计算得到苯并芘的平均提取回收率为73.8％。

实施例4

1、材料与仪器：同实施例1。

2、样品前处理

2.1标准溶液的配制：同实施例1。

2.2样品的提取

称取DHA微胶囊粉剂产品1.0g(精确至0.0001g)各3份于40mL塑料离心管中，分别加入100μL苯并(a)芘标准溶液(浓度7.5ng/mL)，加入10mL正己烷，涡旋30s，超声处理10min，7000r/min转速离心处理5min，取上清液，用10mL正己烷重复上述处理步骤再提取一次，合并两次上清液作为待测液，整个处理过程对样品进行避光处理。

2.3样品纯化(冷冻离心纯化)

将待净化样品30℃下氮气吹至近干，用甲醇定容至1mL，装入1mL离心管中，于-10℃，15000r/min离心15min后取上清液，装入1.5mL进样小瓶中，供液相色谱-串联质谱仪分析。

3、分析测定：同实施例1。计算得到苯并芘的平均提取回收率为85.4％。

实施例5

测定方法同实施例4，不同之处在于：非极性溶剂采用石油醚。苯并芘的提取回收率为71.8％。

实施例6

测定方法同实施例4，不同之处在于：非极性溶剂采用乙酸乙酯环己烷。苯并芘的提取回收率为78.0％。

实施例7

1、材料与仪器：同实施例4。

2、样品前处理

2.1标准溶液的配制：同实施例4。

2.2样品的提取

称取DHA微胶囊粉剂产品1.0g样品，于40mL塑料离心管中，加入10mL正己烷，涡旋30s，超声处理10min，7000r/min转速离心处理5min，取上清液，用10mL正己烷重复上述处理步骤再提取一次，合并两次上清液作为待测液，整个处理过程对样品进行避光处理。

2.3样品纯化(分子印迹柱分离提纯)

用5mL正己烷活化苯并芘分子印迹柱，待上清液上样过柱后，用6mL正己烷淋洗苯并芘分子印迹柱，分两次加入，淋洗后接入泵抽干，用10mL二氯甲烷洗脱，分两次加入，收集洗脱液即为待测液。苯并芘的提取回收率为92.4％。

3、分析测定：同实施例4，测定的苯并芘的色谱图如图1所示，由图1可以看出，本发明检测方法分析得到的峰形较好。

对比例1

测定方法同实施例4，不同之处在于：非极性溶剂采用甲醇。

对比例2

测定方法同实施例4，不同之处在于：分别用10mL正己烷重复处理步骤提取3次。

对比例3

测定方法同实施例4，不同之处在于：分别用10mL正己烷重复处理步骤提取4次。

试验例

1、提取溶剂的选择

通过将实施例4、5、6和对比例1进行比较，比较不同提取溶剂对苯并(a)芘回收率的影响，结果见图2所示。由图2可知，提取溶剂为正己烷、石油醚或乙酸乙酯环己烷时，苯并芘的提取回收率均在70～85.4％左右；提取溶剂为正己烷时，苯并芘的回收率最高，达到85.4％；而提取溶剂为甲醇时，苯并芘的回收率仅为54％左右；由此可见，不同提取溶剂对微胶囊粉剂中的苯并芘的提取效率影响较大，提取溶剂优选正己烷、石油醚或乙酸乙酯环己烷，最优选为正己烷。

2、提取次数的选择

通过将实施例1、4和对比例2、3进行比较，比较不同提取次数对苯并(a)芘回收率的影响，结果见图3所示。从图3可知，用正己烷提取1次时，苯并芘的回收率相对较低，最高达到70.4％左右，当提取2次时，苯并芘的回收率最高达到85.4％左右，随着提取次数的增加，苯并芘的回收率基本不变，因此重复提取2次，既可以提高提取效率，还可缩短前处理时间、降低处理成本。

3、超声时间的选择

按实施例4的测定方法，每次超声时间选取为5、10、20、30min，比较不同超声时间对苯并芘回收率的影响，结果见图4所示。从图4可知，随着超声时间的延长，各目标物的总体回收率先升高后降低，在，在超声时间10min时，回收率最高，因此优选超声时间10min，既可以保证回收率，还可以缩短工艺时间。

4、分子印迹柱分离提纯方法与传统的冷冻离心分离提纯方法对比

分别取DHA微胶囊粉剂产品1.0g样品(精确至0.0001g)各六份，向其个加入100μL苯并(a)芘标准溶液(浓度7.5ng/mL)，按照实施例7的方法进行提取测定，分别按照实施例7分子印迹小柱方法和对比例4冷冻离心方法对样品进行分离提纯，计算回收率，所得结果见表3。

表3不同处理方法对苯并芘的回收率的影响

由表3可以看出，过分子印迹柱的回收率可以达到91.9％以上，且回收率明显高于传统的冷冻离心分离提纯方法。

5、线性范围和方法的检出限

以实施例7为例，对线性范围和方法的检出限进行分析。

配制质量浓度为0.3、1、2.5、5、10、50ng/mL的系列标准工作液，以标准工作液浓度(ng/mL)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。回归方程为y＝0.0002x-0.0357，相关系数R²＝0.9999，线性范围为0.3～50mg/L，线性良好。以标准品色谱峰的信噪比等于3(S/N＝3)对应的浓度为方法的检出限(LOD)，

S/N＝10对应的浓度为方法的定量限(LOQ)，最终确定样品中检出限LOD为0.1μg/kg、定量限LOQ为0.3μg/kg。

6、回收率和精密度

以实施例7的测定方法为例，对回收率和精密度进行分析计算。

取均匀的同一微胶囊粉剂样品，分为三组，构成高、中、低三个加标组及一个空白对照组。加标水平分别为0.5、5、15mg/kg，每个水平用实施例7的测定方法重复测定6次，计算回收率，并计算RSDs值，表示方法的重复性。加标回收和精密度实验结果见表4。

表4回收率与精密度实验结果

由表4可知，不同ARA、DHA微胶囊粉样品中不同量加标回收率在84.3％～105.8％之间，相对标准偏差(RSD)在5.8％～16.7％之间，由此可知，本发明的检测方法具有较好的精密度和准确度，重复性好。

综上所述，本发明提供的一种微胶囊粉剂中苯并芘的检测方法，能够对微胶囊粉剂中的苯并芘进行快速充分地提取，提取方法简单、提取效率高，采用正己烷、石油醚或乙酸乙酯环己烷作为提取溶剂，苯并芘的提取回收率能达到70～85.4％，能完全满足检测需要、检测准确度高，同时结合高效液相色谱-串联质谱分析测定，采用大气化学电离源(APCI+)和多反应监测模式扫描(MRM)，得到的测定结果检出限为0.1μg/kg，线性范围为0.3～50mg/L，相关系数为0.9998，回收率在84.3％～105.8％之间，相对标准偏差(RSD)在5.8％～16.7％之间。本发明的检测方法具有较好的精密度和准确度，重复性好，可用于不同种类微胶囊粉剂中苯并芘的测定，尤其适用于ARA和DHA微胶囊粉剂中苯并芘的测定。

最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (10)

1.一种微胶囊粉剂中苯并芘的检测方法，其特征在于，包括样品的前处理步骤，所述样品的前处理步骤为：将非极性溶剂加入微胶囊粉剂样品中，得到混合液，将所述混合液涡旋振荡30～60s后，进行超声提取5～10min，并于7000～10000r/min的转速下离心处理5～10min，取上清液作为待测液，整个所述样品的前处理步骤在避光条件下进行。

2.根据权利要求1所述的微胶囊粉剂中苯并芘的检测方法，其特征在于，按照所述样品的前处理步骤，用等量非极性溶剂重复处理两次，合并两次上清液作为待测液。

3.根据权利要求2所述的微胶囊粉剂中苯并芘的检测方法，其特征在于，所述非极性溶剂为正己烷、石油醚或乙酸乙酯环己烷；优选正己烷。

4.根据权利要求3所述的微胶囊粉剂中苯并芘的检测方法，其特征在于，所述样品的前处理步骤中，还包括对所述上清液进行冷冻离心分离纯化的步骤或采用苯并芘分子印迹柱对所述上清液进行选择性吸附分离纯化的步骤。

5.根据权利要求4所述的微胶囊粉剂中苯并芘的检测方法，其特征在于，对所述上清液进行冷冻离心分离纯化的步骤具体过程如下：将所述上清液在30℃下氮气吹至近干，用甲醇定容至1mL，装入1mL离心管中，于-10℃，12000～15000r/min离心15～20min后取上清液即为待测液。

6.根据权利要求4所述的微胶囊粉剂中苯并芘的检测方法，其特征在于，采用苯并芘分子印迹柱对所述上清液进行选择性吸附分离纯化的步骤具体过程如下：用5mL正己烷活化苯并芘分子印迹柱，待所述上清液过柱对苯并芘进行选择性吸附分离后，用6mL正己烷淋洗苯并芘分子印迹柱，接入泵抽干，用10mL二氯甲烷洗脱，得到洗脱液，将所述洗脱液在30℃下氮气吹干，用甲醇定容至1mL，涡旋振荡10s，用0.22μm的有机膜过滤后，取过滤液即为待测液。

7.根据权利要求1～6任一项所述的微胶囊粉剂中苯并芘的检测方法，其特征在于，将所述待测液进行分离纯化后，用液相色谱-串联质谱仪对待测液中的苯并芘进行分析测定。

8.根据权利要求7所述的微胶囊粉剂中苯并芘的检测方法，其特征在于，液相色谱分析中，流动相体系选取纯水和甲醇，柱温30±1℃，进样量2μl。

9.根据权利要求8所述的微胶囊粉剂中苯并芘的检测方法，其特征在于，液相色谱分析中，洗脱条件：纯水和甲醇梯度洗脱，梯度洗脱条件为：0～2min，纯水与甲醇的用量(wt％)比为40:60；2～10min，纯水与甲醇的用量(wt％)比为2:98；10～12min，纯水与甲醇的用量(wt％)比为2:98；12～15min，纯水与甲醇的用量(wt％)比为40:60；其中流速为0.4mL/min。

10.根据权利要求9所述的微胶囊粉剂中苯并芘的检测方法，其特征在于，串联质谱仪的检测条件为：采用电化学离子源正离子(APCI+)扫描，离子化电压为4000V，加热温度为600℃；喷雾气的量为50psi，辅助加热气的量为55psi。