CN108250258A - 一种利用发酵与超声波提取技术制备的新黄酮糖苷 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种利用发酵与超声波提取技术制备的新黄酮糖苷，所述新黄酮糖苷化合物1的结构如下：

Description

一种利用发酵与超声波提取技术制备的新黄酮糖苷
技术领域
本发明属于中药提取领域，具体涉及一种利用发酵与超声波提取技术制备的新黄酮糖苷。
背景技术
桑叶，又称为“神仙草”，根据我国古典中医药著作记载，桑叶具有养阴活血、疏风散热、清肺止咳的效果。现代医学表明，桑叶具有抗衰老、降血脂、降血糖等诸多药理作用。桑叶中含脂肪、多糖、纤维等，化学成分包括维生素、氨基酸、生物碱、黄酮类化合物、植物甾醇等。
补体是存在于人和动物血清或组织液中的一组不耐热、经活化后具有酶活性、可介导免疫应答和炎症反应的蛋白质。正常情况下，补体以酶元的形式存在，补体的功能主要是攻击外来病原和清除免疫复合物，并维持机体平衡。然而补体系统的非正常激活会引起人体免疫系统的过度反应，导致人体自身正常组织的损伤和炎症反应，是自身免疫性炎症反应的重要介质。因此，开发一种具有补体抑制活性的提取物或化合物，成为研究的热点。
发明内容
本发明提供一种桑叶黄酮提取物，其特征在于所述桑叶黄酮提取物的制备方法包括如下步骤：
(1)将干燥的桑叶粉碎与适量的酵母粉和α-乙酰乳酸脱羧酶混匀，加适量的水，调pH至6.0，于30-40℃下，发酵24-48小时后，加体积分数95％的乙醇溶液，超声提取3-5小时后，过滤，滤液浓缩得粗提物；
(2)步骤(1)得到的粗提物经大孔树脂吸附，先用体积分数为5-10％的乙醇溶液洗脱2个柱体积(去杂)，再用体积分数为40-60％的乙醇溶液洗脱3-5个柱体积，并收集该洗脱液、经活性炭脱色、浓缩、干燥即得所述桑叶黄酮提取物。
步骤(1)所述粉碎优选粉碎至20-80目，每千克桑叶使用酵母粉60-80克、α-乙酰乳酸脱羧酶8-10克，每千克桑叶使用水1.2-1.5L、95％的乙醇溶液2.0-3.0L，超声波频率为30-50kHz；
步骤(2)中大孔树脂的型号优选HPD-826、HPD-722、AB-8、D101型。
所述桑叶黄酮提取物中化合物1的含量在11％以上，化合物1的结构如下：
本发明的另一实施方案提供一种桑叶黄酮提取物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)将干燥的桑叶粉碎与适量的酵母粉和α-乙酰乳酸脱羧酶混匀，加适量的水，调pH至6.0，于30-40℃下，发酵24-48小时后，加体积分数95％的乙醇溶液，超声提取3-5小时后，过滤，滤液浓缩得粗提物；
(2)步骤(1)得到的粗提物经大孔树脂吸附，先用体积分数为5-10％的乙醇溶液洗脱2个柱体积(去杂)，再用体积分数为40-60％的乙醇溶液洗脱3-5个柱体积，并开始收集该洗脱液、经活性炭脱色、浓缩、干燥即得所述桑叶黄酮提取物。
步骤(1)所述粉碎优选粉碎至20-80目，每千克桑叶使用酵母粉60-80克、α-乙酰乳酸脱羧酶8-10克，每千克桑叶使用水1.2-1.5L、95％的乙醇溶液2.0-3.0L，超声波频率为30-50kHz；
步骤(2)中大孔树脂的型号优选HPD-826、HPD-722、AB-8、D101型。
所述桑叶黄酮提取物中化合物1的总含量在11％以上，化合物1的结构如下：
本发明的另一实施方案提供上述桑叶黄酮提取物在制备抗补体药物中的应用。
本发明的另一实施方案提供一种药物组合物，其特征在于所述药物组合物以上述桑叶黄酮提取物作为有效成分。所述药物组合物还任选包括药学上可接受的药用辅料(优选稀释剂、赋形剂、载体)；还任选包括其他抗补体药物；所述药物组合物的剂型优选固体制剂或液体制剂。
本发明的另一实施方案提供一种从桑叶黄酮提取物中分离化合物1的方法，其特征在于包括如下步骤：
取桑叶黄酮提取物(由上述方法制备)用1-2倍质量的甲醇溶解后，经SephadexLH-20凝胶柱层析，洗脱剂为体积比为1：1的CH2Cl2/MeOH混合溶剂，洗脱2倍柱体积后开始收集洗脱液，收集2倍柱体积的洗脱液后减压浓缩，再经高效液相色谱HPLC制备，得化合物1。
HPLC制备的色谱条件为：色谱柱为Agilent C18,9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH∶H2O＝70∶30。
本发明的另一实施方案提供上述黄酮化合物1或其药学上可接受的盐，其特征在于化合物1的结构如下：
本发明的另一实施方案提供上述黄酮化合物1的制备方法。
本发明的另一实施方案提供上述黄酮化合物1或其药学上可接受的盐在制备抗补体药物中的应用。
本发明的另一实施方案提供一种药物组合物，其特征在于所述药物组合物以上述黄酮化合物1或其药学上可接受的盐作为有效成分。所述药物组合物还任选包括药学上可接受的药用辅料(优选稀释剂、赋形剂、载体)；还任选包括其他抗补体药物；所述药物组合物的剂型优选固体制剂或液体制剂。
本发明中术语“药学上可接受的盐”是指非毒性的无机或有机酸和/或碱的加成盐，可参见“Salt selection for basic drugs”,Int.J.Pharm.(1986),33,201–217。
具体实施方式
为了便于对本发明的进一步理解，下面提供的实施例对其做了更详细的说明。但是这些实施例仅供更好的理解发明而并非用来限定本发明的范围或实施原则，本发明的实施方式不限于以下内容。
实施例1
(1)将干燥的桑叶(1.0kg)粉碎至20-80目后与酵母粉(60g)和α-乙酰乳酸脱羧酶(8g)混匀，加水1.2L，调pH至6.0，于30℃下，发酵48小时后，加体积分数95％的乙醇溶液(3.0L)，超声提取3小时(50kHz)后，过滤，滤液浓缩得粗提物；
(2)步骤(1)得到的粗提物经D101型大孔树脂吸附，先用体积分数为5％的乙醇溶液洗脱2个柱体积(去杂)，再用体积分数为40％的乙醇溶液洗脱5个柱体积，并收集该5个柱体积的洗脱液、经活性炭脱色、浓缩、干燥即得所述桑叶黄酮提取物(752mg，以下简称产品A)。
实施例2
(1)将干燥的桑叶(1.0kg)粉碎至20-80目后与酵母粉(80g)和α-乙酰乳酸脱羧酶(10g)混匀，加水1.5L，调pH至6.0，于40℃下，发酵24小时后，加体积分数95％的乙醇溶液(2.0L)，超声提取5小时(30kHz)后，过滤，滤液浓缩得粗提物；
(2)步骤(1)得到的粗提物经HPD-826型大孔树脂吸附，先用体积分数为10％的乙醇溶液洗脱2个柱体积(去杂)，再用体积分数为60％的乙醇溶液洗脱3个柱体积，并收集该3个柱体积的洗脱液、经活性炭脱色、浓缩、干燥即得所述桑叶黄酮提取物(731mg，以下简称产品B)。
实施例3
取桑叶黄酮提取物(产品A，100mg)物用100mg甲醇溶解后上样，经Sephadex LH-20凝胶柱层析，洗脱剂为体积比为1：1的CH2Cl2/MeOH混合溶剂，洗脱2倍柱体积后开始收集洗脱液，收集2倍柱体积的洗脱液(即第3、4BV的洗脱液)后减压浓缩，再经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为Agilent C18,9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH∶H2O＝70∶30，得化合物1(11.2mg)。
结构确证数据：化合物1：ESIMS m/z 505.1[M+H]+；1H,13C NMR数据见下表。
化合物1的1H,13C NMR数据(Acetone-d6，400/100MHz)
实施例4
取桑叶黄酮提取物(产品B，100mg)用200mg甲醇溶解后上样，经Sephadex LH-20凝胶柱层析，洗脱剂为体积比为1：1的CH2Cl2/MeOH混合溶剂，洗脱2倍柱体积后开始收集洗脱液，收集2倍柱体积的洗脱液(即第3、4BV的洗脱液)后减压浓缩，再经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为Agilent C18,9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH∶H2O＝70∶30，得化合物1(11.8mg)。化合物1结构确证数据与实施例3一致。
实施例5
(1)将干燥的桑叶(1.0kg)粉碎至20-80目加水1.2L，调pH至6.0，于30℃下，发酵48小时后，加体积分数95％的乙醇溶液(3.0L)，超声提取3小时(50kHz)后，过滤，滤液浓缩得粗提物；
(2)步骤(1)得到的粗提物经D101型大孔树脂吸附，先用体积分数为5％的乙醇溶液洗脱2个柱体积(去杂)，再用体积分数为40％的乙醇溶液洗脱5个柱体积，并收集该5个柱体积的洗脱液、经活性炭脱色、浓缩、干燥即得产品C(521mg)。产品C经HPLC分析，其含少量芦丁和绿原酸，并未发现化合物1。
产品A、B经HPLC分析，其色谱峰一致，并且化合物1的含量在11％以上。
实施例6
按照中国专利(申请号：201610384844.X)公开的经典途径补体抑制试验的方法进行测试，得出50％抑制溶血所需供试品的浓度(CH50)，见下表。
化合物 CH50(mg/mL)
化合物1 0.121±0.020
化合物5 >1.000
产品A 0.307±0.020
产品B 0.312±0.020
产品C >1.000
肝素钠 0.053±0.008
化合物5的结构为

Claims (7)

1.一种新黄酮糖苷化合物1或其药学上可接受的盐，其特征在于化合物1的结构如下：
2.权利要求1所述的新黄酮糖苷化合物1或其药学上可接受的盐在制备抗补体药物中的应用。
3.一种药物组合物，其特征在于所述药物组合物以权利要求1所述的新黄酮糖苷化合物1或其药学上可接受的盐作为有效成分。
4.权利要求3所述的药物组合物，其特征在于所述药物组合物还任选包括药学上可接受的药用辅料。
5.权利要求4所述的药物组合物，其特征在于所述药学上可接受的药用辅料优选稀释剂、赋形剂、载体。
6.权利要求3-5任一项所述的药物组合物，其特征在于所述药物组合物还任选包括其他抗补体药物。
7.权利要求3-6任一项所述的药物组合物，其特征在于所述药物组合物的剂型优选固体制剂或液体制剂。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN1403080A (zh) * 2002-10-21 2003-03-19 中国人民解放军第二军医大学 山奈酚及其衍生物用于制备防治心脑血管疾病药物的用途
US20090036518A1 (en) * 2005-04-12 2009-02-05 Taipei Medical University Pharmaceutical composition containing flavonoids
CN102304158A (zh) * 2011-05-20 2012-01-04 中国人民解放军第二军医大学 酰化黄酮苷化合物及其在制备补体抑制剂药物中的应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1403080A (zh) * 2002-10-21 2003-03-19 中国人民解放军第二军医大学 山奈酚及其衍生物用于制备防治心脑血管疾病药物的用途
US20090036518A1 (en) * 2005-04-12 2009-02-05 Taipei Medical University Pharmaceutical composition containing flavonoids
CN102304158A (zh) * 2011-05-20 2012-01-04 中国人民解放军第二军医大学 酰化黄酮苷化合物及其在制备补体抑制剂药物中的应用

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