CN108245606A - 一种治疗糖尿病肾病的金蝉花组方药物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供的治疗糖尿病肾病的金蝉花组方药物及其制备方法,属于中药领域,该治疗糖尿病肾病的金蝉花组方药物由以下重量份的原料制成:金蝉花18~22份、生地14~16份、淮山药14~16份、枸杞子8~12份、山茱萸8~12份、怀牛膝8~12份、灸黄芪14~16份、丹参8~12份、茯神8~12份、甘菊花5~7份;此组方药物配伍科学严谨,君臣佐使完备;具有益气养阴,活血化瘀,滋补肝肾,对糖尿病肾病达到标本兼治之功效。经研究数据表明:该金蝉花组方药物的水提物能有效抑制醛糖还原酶,减少肾小管上皮细胞TGF‑β1蛋白、α‑SMA蛋白及FN蛋白的表达,从而减少肾小球细胞的损伤,缓解肾小球硬化,抑制肾小管间质纤维化,减轻肾脏的病理变化,扼制并逆转病情的发展,对糖尿病肾病起到很较好的治疗和保护作用。
Description
技术领域
本发明涉及中药领域,尤其涉及一种治疗糖尿病肾病的金蝉花组方药物及其制备方法。
背景技术
糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)属微血管并发症的一种,是糖尿病最严重的并发症之一。DN经过慢性肾功能不全最终可发展为终末期肾病(ESRD),其发病人数逐年增长,I型糖尿病(T1DM)DN发病率为30%~40%,II型糖康病(T2DM)为15%~20%。在欧美国家DN巳成为慢性肾衰竭(chronic renal failure,CRF)最终进行血液透析和肾移植的首要原因。在美国,由于DN导致ESRD的患者约占全部ESRD病例的40%;在我国,DN约占ESRD的8%左右,部分经济发达地区巳达到15%。
DN的发病机制尚未完全阐明,目前研究主要集中在遗传基因易感性、血流动力学异常、代谢紊乱(糖代谢紊乱、脂代谢紊乱)、高血压、多种细胞因子的异常表达及炎症反应、氧化应激等方面。糖尿病时,脑组织、肝脏、肌肉等部位的糖代谢都会发生严重障碍,其中神经、眼、肾脏等部位的糖代谢明显增强,其中约有50%的葡萄糖由肾脏代谢,由于肾脏的糖负荷增加,就会出现肾脏损害。研究表明肾小球细胞内持续的高糖环境会导致葡萄糖多元醇代谢通路激活,而醛糖还原酶(aldehyde reductase,AR)是其限速酶。AR在还原型辅酶Ⅱ协助下,使葡萄糖大量转化为山梨醇,引起细胞渗透性损伤,并使细胞内谷胱甘肽和肌醇水平下降、NADH/NAD+比值增高、Na-K-ATP酶失活,促使晚期糖基化终末产物(AGEs)及纤维连接蛋白(FN)增加,加剧肾小球氧化反应,这一系列改变加重DN肾小球硬化和肾小管间质纤维化的程度。同时DN也是一种炎症密切相关性疾病。肾脏在高血糖、血流动力学紊乱等病理状态下巨噬细胞大量浸润,且肾脏固有细胞可产生白细胞介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子β1(TGF-β1)等多种炎症因子,这些炎症因子可通过自分泌和旁分泌方式放大炎症反应,进而促进核转录因子(NF-κB)的表达、活性氧生成;最终引起足突状细胞凋亡进而导致肾小球硬化及肾小管间质纤维化。
既往认为DN的早期病变部位在肾小球,近年来的研究发现肾小管病变无论从发病时间或发病机制看均有其独立性,并且肾小管病变及肾间质纤维化的程度与肾功能的相关性比肾小球硬化与肾功能的相关性更为密切,故小管间质纤维化的发生机制越来越受到人们重视。肾小管上皮细胞正常情况下表达上皮细胞的标志蛋白角蛋白(CK),不表达间质细胞的标志蛋白波形蛋白(Vim)及a-平滑肌肌动蛋白(小SMA),但在病理状态下,肾小管上皮细胞失去上皮细胞的特性而获得肌成纤维细胞的特性,转化为间质肌成纤维细胞的过程称为EMT。正常人肾间质中成纤维细胞含量并不像肺、脾、淋巴结等那样丰富。动物研究表明,当小鼠发生肾纤维化时,肾间质中的成纤维细胞大约36%来源于肾小管细胞EMT,而TGF-β1信号通路在DN早期肾小管上皮细胞的EMT中发挥重要作用。最近研究表明,在人肾近曲小管上皮细胞中TGF-β1/Smad3可以直接下调E-cadherin的表达,而TGF-β1/Smad2可以诱导基质金属蛋白酶(MMP)2表达,从而破坏肾小管上皮细胞间的连接,促使其向肾间质转移,加剧肾间质纤维化。
由于DN早期症状隐匿,不容易被察觉,大多在出现明显蛋白尿或浮肿时才被发现。一旦发生临床蛋白尿,则缺乏有效方法逆转肾损害,多数患者将在数年后转入CRF,而透析或肾移植治疗方法的效果也较非糖尿病患者差,同时高昂的治疗费用也使广大患者望而却步。同时,现代医学对DN无特异性治疗,治疗手段较少,目前主要根据其发病危险因素,以控制饮食、血压、血糖、血脂,减少尿蛋白,抗血栓等合并症及并发症的治疗为主。因此寻求新的DN治疗方式受到了临床医生及社会大众的高度关注。
发明内容
针对上述存在的问题,本发明提供一种治疗糖尿病肾病的金蝉花组方药物及其制备方法,此组方药物配伍科学严谨,君臣佐使完备。具有益气养阴,活血化瘀,滋补肝肾之功效,对糖尿病肾病标本兼治。经课题组实验研究数据表明:该金蝉花组方药物的水提物能有效抑制醛糖还原酶,减少肾小管上皮细胞TGF-β1蛋白、α-SMA蛋白及FN蛋白的表达,从而减少肾小球细胞的损伤,缓解肾小球硬化,抑制肾小管间质纤维化,减轻肾脏的病理变化,扼制并逆转病情的发展,对糖尿病肾病起到很较好的治疗和保护作用。
为了实现上述目的,本发明采取的技术方案为:
一种治疗糖尿病肾病的金蝉花组方药物,其中,该药物是由以下重量份的原料制成:金蝉花18~22份、生地14~16份、淮山药14~16份、枸杞子8~12份、山茱萸8~12份、怀牛膝8~12份、灸黄芪14~16份、丹参8~12份、茯神8~12份、甘菊花5~7份。
上述的治疗糖尿病肾病的金蝉花组方药物,其中,该药物是由以下重量份的原料制成:金蝉花20份、生地15份、淮山药15份、枸杞子10份、山茱萸10份、怀牛膝10份、灸黄芪15份、丹参10份、茯神10份、甘菊花6份。
上述的治疗糖尿病肾病的金蝉花组方药物,其中,该药物制备成片剂、丸剂、散剂、硬胶囊剂、颗粒剂、口服液中的一种或多种。
如上述的治疗糖尿病肾病的金蝉花组方药物的制备方法,其中,包括:
(1)取干燥的金蝉花20份、生地15份、淮山药15份、枸杞子10份、山茱萸10份、怀牛膝10份、灸黄芪15份、丹参10份、茯神10份、甘菊花6份药材,混合均匀后得到金蝉花混合药物,粉碎所述金蝉花混合药物;
(2)采用6号筛对所述粉碎后的金蝉花混合药物进行筛分,得到金蝉花混合药粉末;
(3)准确称取所述金蝉花混合药粉末10g,放入样品瓶;
(4)按照1:10的料液比加入蒸馏水至所述样品瓶中,而后轻轻摇匀,置于超声提取仪中,于40℃、300W条件下超声处理2次,得到金蝉花药物溶液;
(5)加压抽滤分离所述金蝉花药物溶液,合并金蝉花提取液,减压浓缩至20ml,得到浓缩金蝉花药物溶液;
(6)将所述浓缩金蝉花药物溶液置于-4℃冰箱中预冷冻处理12-24h;
(7)将样品瓶的瓶盖换成封口膜,并在所述封口膜上扎15~20个小孔后,置于冻干机中冻干48h,得到金蝉花、生地、淮山药、枸杞子、山茱萸、怀牛膝、灸黄芪、丹参、茯神以及甘菊花的金蝉花混合药水提取物冻干粉,于4℃冰箱中保存。
(8)将所述金蝉花混合药水提取物冻干粉制备成片剂、丸剂、散剂、硬胶囊剂、颗粒剂、口服液中的一种或多种。
上述的治疗糖尿病肾病的金蝉花组方药物的制备方法,其中,步骤(1)中,采用组织粉碎机粉碎所述金蝉花混合药物。
上述技术方案具有如下优点或者有益效果:
本发明提供的治疗糖尿病肾病的金蝉花组方药物,由以下重量份的原料制成:金蝉花18~22份、生地14~16份、淮山药14~16份、枸杞子8~12份、山茱萸8~12份、怀牛膝8~12份、灸黄芪14~16份、丹参8~12份、茯神8~12份、甘菊花5~7份;此组方药物配伍科学严谨,君臣佐使完备。具有益气养阴,活血化瘀,滋补肝肾,对糖尿病肾病,达到标本兼治之功效。经课题组实验研究数据表明:该金蝉花组方药物的水提物能有效抑制醛糖还原酶,减少肾小管上皮细胞TGF-β1蛋白、α-SMA蛋白及FN蛋白的表达,从而减少肾小球细胞的损伤,缓解肾小球硬化,抑制肾小管间质纤维化,减轻肾脏的病理变化,扼制并逆转病情的发展,对糖尿病肾病起到很较好的治疗和保护作用。
附图说明
通过阅读参照以下附图对非限制实施例所作的详细描述,本发明及其特征、外形和优点将会变得更加明显,在全部附图中相同的标记指示相同的部分,并未刻意按照比例绘制附图,重点在于示出本发明的主旨。
图1是四个小组作用下对HK-2细胞形态的影响的示意图;
图2是四个小组作用下,HK-2细胞α-SMA蛋白表达水平的示意图;
图3是四个小组作用下,HK-2细胞FN蛋白表达水平的示意图。
具体实施方式
下面结合附图和具体的实施例对本发明作进一步的说明,但是不作为本发明的限定。
实施例1:
本发明实施例1提供的治疗糖尿病肾病的金蝉花组方药物是由以下重量份的原料制成:金蝉花20份、生地15份、淮山药15份、枸杞子10份、山茱萸10份、怀牛膝10份、灸黄芪15份、丹参10份、茯神10份、甘菊花6份。
本发明实施例1提供的治疗糖尿病肾病的金蝉花组方药物的制备方法包括:
(1)取干燥的金蝉花20份、生地15份、淮山药15份、枸杞子10份、山茱萸10份、怀牛膝10份、灸黄芪15份、丹参10份、茯神10份、甘菊花6份药材,混合均匀后得到金蝉花混合药物,采用组织粉碎机粉碎金蝉花混合药物;
(2)采用6号筛对粉碎后的金蝉花混合药物进行筛分,得到金蝉花混合药粉末;
(3)准确称取金蝉花混合药粉末10g,放入样品瓶;
(4)按照1:10的料液比加入蒸馏水至样品瓶中,而后轻轻摇匀,置于超声提取仪中,于40℃、300W条件下超声处理2次,得到金蝉花药物溶液;
(5)加压抽滤分离金蝉花药物溶液,合并金蝉花提取液,减压浓缩至20ml,得到浓缩金蝉花药物溶液;
(6)将浓缩金蝉花药物溶液置于-4℃冰箱中预冷冻处理12-24h;
(7)将样品瓶的瓶盖换成封口膜,并在封口膜上扎15~20个小孔后,置于冻干机中冻干48h,得到金蝉花、生地、淮山药、枸杞子、山茱萸、怀牛膝、灸黄芪、丹参、茯神以及甘菊花的金蝉花混合药水提取物冻干粉,于4℃冰箱中保存。
(8)将金蝉花混合药水提取物冻干粉制备成片剂、丸剂、散剂、硬胶囊剂、颗粒剂、口服液中的一种或多种。
在本发明实施例1提供的治疗糖尿病肾病的金蝉花组方药物中,金蝉花滋补强壮,灸黄芪益气为君,淮山药益气养阴、补益脾肺、补肾固精,生地清热凉血、养阴生津,怀牛膝活血化瘀、补肝肾、强筋骨、利尿通淋、引血下行,丹参活血化瘀、凉血消痈、养血安神,山茱萸补益肝肾、收敛固摄为臣,枸杞子滋补肝肾、明目、润肺,茯神利水渗湿、健脾安神,甘菊花疏风散热、解读明目为佐使,诸药合用益气养阴、活血化瘀、标本兼治疗。经课题组实验研究数据表明:该金蝉花组方药物的水提物能有效抑制醛糖还原酶,减少肾小管上皮细胞TGF-β1蛋白、α-SMA蛋白及FN蛋白的表达,从而减少肾小球细胞的损伤,缓解肾小球硬化,抑制肾小管间质纤维化,减轻肾脏的病理变化,扼制并逆转病情的发展,对糖尿病肾病起到很较好的治疗和保护作用。
在本发明实施例1提供的治疗糖尿病肾病的金蝉花组方药物的制备方法中,采用超声处理料液比为1:10的金蝉花混合药粉末和蒸馏水,保证有效成份得到充分溶出提取。
在本发明实施例1提供的治疗糖尿病肾病的金蝉花组方药物的制备方法中,将样品瓶的瓶盖换成封口膜,并在封口膜上扎15~20个小孔,能够加快溶媒挥发增强冷冻干燥的质量。
在本发明实施例1提供的治疗糖尿病肾病的金蝉花组方药物的制备方法中,步骤(7)中得到的金蝉花混合药水提取物冻干粉有0.8653g,其得率为8.65%。
肾小管上皮细胞向间充质细胞的转分化(EMT)是肾间质纤维化主要特征之一,肾间质纤维化是几乎所有肾脏疾病进展到终末期肾衰竭的共同通路和主要病理基础。在EMT的发生过程中,α-SMA是目前公认的肾小管上皮细胞向EMT转分化的标志物,同时还是预测RTF严重程度的重要指标;转化生长因子TGF-β1可通过多种信号转导参与调节EMT,是最强的促肾小管上皮细胞转分化因子。
因此,本发明实施例1中还研究了高糖及金蝉花混合药水提取物对HK-2细胞形态的影响,研究了本发明实施例1提供的金蝉花混合药水提取物对醛糖还原酶AR的影响,研究了使用本发明实施例1提供的金蝉花混合药水提取物后通过Elisa检测HK2细胞上清液中TGF-β1的含量,研究了使用本发明实施例1提供的金蝉花混合药水提取物后采用WesternBlot检测α-SMA、FN蛋白表达的影响。
进行上述的研究,方法分为以下四步:
第一步:配制金蝉花混合药水提取物溶液:取10mg金蝉花混合药水提取物冻干粉(上述方法中的步骤7所得),用适量的DMSO溶解,而后用双蒸水配成浓度为5mg/ml的保存液,需要不同浓度时进行稀释即可。(本发明实施例1中,金蝉花混合药水提取物溶液即为金蝉花组方药物的水提物)
第二步:进行细胞培养及传代,HK2细胞采用含10%FBS+DMEM低糖培养基、37℃、5%CO2培养箱中培养,隔日换液。镜下观察细胞融合度达80-90%时,吸去原有培养基,用PBS清洗两次,加入500μL胰酶消化细胞,按1:2传代。取对数生长期的细胞进行实验。
第三步:进行药物干预与分组,细胞继续培养至80%以上融合后,用无血清培养基同步化24h,待细胞进入静止期,随后将HK-2细胞分为5组:①正常糖对照组(5.5mmol/LD-葡萄糖),②高糖组(30mmol/L D-葡萄糖),③阳性对照组(30mmol/L D-葡萄糖+贝那普利),④治疗组低剂量(30mmol/L D-葡萄糖+金蝉花混合药水提取物溶液0.1mg/ml),⑤治疗组高剂量(30mmol/L D-葡萄糖+金蝉花混合药水提取物溶液0.5mg/ml)。
第四步:在倒置显微镜下观察高糖及金蝉花混合药水提取物溶液处理对HK-2细胞形态的影响,用30mmol/L高糖诱导HK-2细胞48h,倒置显微镜下观察各组HK-2细胞形态并拍照。
(1)图1是A、B、C、D四个小组作用下对HK-2细胞形态的影响的示意图,如图所示;图1中A是正常糖对照组,B是高糖组,C是金蝉花混合药水提取物溶液低剂量组,D是金蝉花混合药水提取物溶液高剂量组;高糖诱导HK-2细胞48h后,HK-2细胞形态发生明显改变,由铺路石样穿变为梭形长条状。加入0.1mg/ml、0.5mg/ml金蝉花混合药水提取物溶液组与高糖共处理48h后,细胞变密,但大部分细胞形态仍呈现鹅卵石或铺路石状。
(2)金蝉花混合药水提取物溶液对醛糖还原酶的影响
表1金蝉花组方药物的水提物吸光度随时间的变化
表1是在依帕司他0.5mg/ml,金蝉花混合药水提取物溶液0.1mg/ml,金蝉花混合药水提取物溶液0.5mg/ml浓度下各个孔的吸光度变化。
药物 | 样品浓度 | 抑制率(%) |
依帕司他 | 0.5 | 60.4% |
金蝉花混合药水提取物溶液低剂量 | 0.1 | 38.2% |
金蝉花混合药水提取物溶液高剂量 | 0.5 | 50.2% |
表2金蝉花组方药物的水提物对醛糖还原酶的抑制作用
由上述表1和表2的实验数据表明:金蝉花组方药物的水提物能有效抑制醛糖还原酶,且其抑制率与剂量呈正相关,从而能够有效减少对肾小球细胞的损伤。
(3)Elisa检测HK2细胞上清液中TGF-β1的含量
将HK-2细胞用含10%FBS的DMEM低糖培养基制成浓度为1×105mL-1的细胞悬液,接种于24孔板中,每孔1mL,每组三复孔,于48h收集上清液,按照试剂盒说明书操作,酶标仪450nm处测OD值,检测相应的TGF-β1浓度(pg/mL)。检测结果如下表3:
组别 | TGF-β1(pg/mL) |
正常组 | 422.84±19.01 |
高糖组 | 547.39±12.76 |
阳性对照组 | 425.39±14.58 |
金蝉花混合药水提取物溶液低剂量组 | 490.77±20.65 |
金蝉花混合药水提取物溶液高剂量组 | 448.32±16.50 |
表3培养48h后HK-2细胞上清液中TGF-β1蛋白的表达
由上表3的实验数据显示金蝉花组方药物的水提物能减少肾小管上皮细胞TGF-β1蛋白的表达,可有效减缓肾小球的硬化,减轻肾脏病理变化,扼制病情的发展。
(4)Western Blot检测α-SMA、FN蛋白
①细胞准备
取对数生长期的HK-2细胞以1×105/ml的密度接种于25cm2的培养瓶中,按照上述研究方法第三步分组,待细胞长至60-70%融合时,用无血清培养基饥饿细胞24h。弃上清液,根据研究分组更换为含或不含干预因素的无血清培养基。
②总蛋白的提取
各研究组预处理48h后,吸尽培养液,用PBS冲洗2-3次,加入lml裂解缓冲液(50mmol/LTris-Cl pH 8.0,150mmol/L NaCI,1%NP-40,0.5%sodium Deoxycholate,0.1%SDS,100μg/ml PMSF,2μg/ml Aprotinin),置于冰上充分裂解,用刮棒将细胞刮下,然后将细胞碎片和裂解液移至0.6ml离心管中。加入等体积的2×SDS(临用前加入5×DTT液),超声震荡5分钟,立即放入水浴锅中100℃煮10分钟,4℃、12000rpm离心10分钟,取上清分装,按Braford蛋白定量试剂盒说明书测定蛋白含量,调整各标本蛋白含量一致。
③结果
结果用均数±标准差(x±s)表示,采用SPSS 19.0软件进行统计分析。组间差异比较采用单因素方差分析,两两比较用LSD检验。p<0.05认为差异显著,p<0.01认为差异极其显著。
图2是四个小组作用下,HK-2细胞α-SMA蛋白表达水平的示意图;图3是四个小组作用下,HK-2细胞FN蛋白表达水平的示意图;如图所示,本实验中,四个小组分别是:正常组、高糖组、金蝉花混合药水提取物溶液低剂量组和金蝉花混合药水提取物溶液高剂量组;正常组HK-2细胞的α-SMA的蛋白几乎不表达,而高糖组的α-SMA蛋白表达显著增高,阳性对照组较高糖组的α-SMA表达显著下降,金蝉花混合药水提取物溶液低剂量组、金蝉花混合药水提取物溶液高剂量组的α-SMA蛋白表达较高糖组有所下降,而且金蝉花混合药水提取物溶液高剂量组较金蝉花混合药水提取物溶液低剂量组α-SMA蛋白表达下降更显著。高糖刺激HK-2细胞48h后可明显促进HK-2细胞FN分泌,与正常对照组相比有显著性差异。金蝉花混合药水提取物溶液呈剂量依赖性抑制FN分泌。
组别 | α-SMA/β-actin |
正常组 | 0.2203±0.013 |
高糖组 | 1.0303±0.044 |
金蝉花混合药水提取物溶液低剂量组 | 0.7770±0.034 |
金蝉花混合药水提取物溶液高剂量组 | 0.4803±0.014 |
表4 HK-2细胞α-SMA的蛋白表达的半定量分析
表5 HK-2细胞FN的蛋白表达的半定量分析
由上述表4和表5的实验数据表明,金蝉花组方药物的水提物减少肾小管上皮细胞的α-SMA蛋白及FN蛋白表达,抑制肾小管间质纤维化,逆转糖尿病肾病的病情发展,对糖尿病肾病起到较好的治疗和保护作用。
综上所述,本发明实施例1提供的治疗糖尿病肾病的金蝉花组方药物,由以下重量份的原料制成:金蝉花20份、生地15份、淮山药15份、枸杞子10份、山茱萸10份、怀牛膝10份、灸黄芪15份、丹参10份、茯神10份、甘菊花6份;本发明金蝉花组方药物配伍科学严谨,君臣佐使完备。具有益气养阴,活血化瘀,滋补肝肾,对糖尿病肾病,达到标本兼治之功效。经课题组实验研究数据表明:该金蝉花组方药物的水提物能有效抑制醛糖还原酶,减少肾小管上皮细胞TGF-β1蛋白、α-SMA蛋白及FN蛋白的表达,从而减少肾小球细胞的损伤,缓解肾小球硬化,抑制肾小管间质纤维化,减轻肾脏的病理变化,扼制并逆转病情的发展,对糖尿病肾病起到很较好的治疗和保护作用。
本领域技术人员应该理解,本领域技术人员结合现有技术以及上述实施例可以实现所述变化例,在此不予赘述。这样的变化例并不影响本发明的实质内容,在此不予赘述。
以上对本发明的较佳实施例进行了描述。需要理解的是,本发明并不局限于上述特点实施方式,其中未尽详细描述的设备和结构应该理解为用本领域中的普通方式予以实施;任何熟悉本领域的技术人员,在不脱离本发明技术方案作出许多可能的变动和修饰,或修改为等同变化的等效实施例,这并不影响本发明的实质内容,因此,凡是未脱离本发明技术方案的内容,依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同变化及修饰,均属于本发明技术方案保护的范围内。
Claims (5)
1.一种治疗糖尿病肾病的金蝉花组方药物,其特征在于,该药物是由以下重量份的原料制成:金蝉花18~22份、生地14~16份、淮山药14~16份、枸杞子8~12份、山茱萸8~12份、怀牛膝8~12份、灸黄芪14~16份、丹参8~12份、茯神8~12份、甘菊花5~7份。
2.如权利要求1所述的治疗糖尿病肾病的金蝉花组方药物,其特征在于,该药物是由以下重量份的原料制成:金蝉花20份、生地15份、淮山药15份、枸杞子10份、山茱萸10份、怀牛膝10份、灸黄芪15份、丹参10份、茯神10份、甘菊花6份。
3.如权利要求1或2所述的治疗糖尿病肾病的金蝉花组方药物,其特征在于,该药物制备成片剂、丸剂、散剂、硬胶囊剂、颗粒剂、口服液中的一种或多种。
4.如权利要求3所述的治疗糖尿病肾病的金蝉花组方药物的制备方法,其特征在于,包括:
(1)取干燥的金蝉花20份、生地15份、淮山药15份、枸杞子10份、山茱萸10份、怀牛膝10份、灸黄芪15份、丹参10份、茯神10份、甘菊花6份药材,混合均匀后得到金蝉花混合药物,粉碎所述金蝉花混合药物;
(2)采用6号筛对所述粉碎后的金蝉花混合药物进行筛分,得到金蝉花混合药粉末;
(3)准确称取所述金蝉花混合药粉末10g,放入样品瓶;
(4)按照1:10的料液比加入蒸馏水至所述样品瓶中,而后轻轻摇匀,置于超声提取仪中,于40℃、300W条件下超声处理2次,得到金蝉花药物溶液;
(5)加压抽滤分离所述金蝉花药物溶液,合并金蝉花提取液,减压浓缩至20ml,得到浓缩金蝉花药物溶液;
(6)将所述浓缩金蝉花药物溶液置于-4℃冰箱中预冷冻处理12-24h;
(7)将样品瓶的瓶盖换成封口膜,并在所述封口膜上扎15~20个小孔后,置于冻干机中冻干48h,得到金蝉花、生地、淮山药、枸杞子、山茱萸、怀牛膝、灸黄芪、丹参、茯神以及甘菊花的金蝉花混合药水提取物冻干粉,于4℃冰箱中保存。
(8)将所述金蝉花混合药水提取物冻干粉制备成片剂、丸剂、散剂、硬胶囊剂、颗粒剂、口服液中的一种或多种。
5.如权利要求4所述的治疗糖尿病肾病的金蝉花组方药物的制备方法,其特征在于,步骤(1)中,采用组织粉碎机粉碎所述金蝉花混合药物。
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