CN108244658A - 一种含有菊苣营养成分的解酒护肝剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于保健品领域，尤其涉及一种含有菊苣营养成分的解酒护肝剂及其制备方法。所述解酒护肝剂由菊苣低聚肽、菊苣香豆素、中药提取物、蜂蜜和去离子水按一定配比制备而成，其中菊苣低聚肽和菊苣香豆素提取自菊苣根，菊苣低聚肽富含丙氨酸、亮氨酸等氨基酸，能促进生成乙醇脱氢酶的辅酶NAD+，有利于乙醇在体内的分解代谢，抑制血液中乙醇的升高，达到解酒目的；菊苣香豆素能加快细胞修复，对肝脏细胞有明显的保护作用。中药提取物由葛根花、葛根、三七、水飞蓟、菊花、枳子、肉豆蔻提取制备而成。本发明通过有效成分间的相互配伍能抑制酒精的胃肠吸收，加快对乙醇的代谢，降低酒精对肝细胞的损伤，能起到显著的解酒醒酒、护肝保肝功效。
Description
技术领域
本发明属于保健品领域，尤其涉及一种含有菊苣营养成分的解酒护肝剂及其制备方法。
背景技术
人们在社会交际、工作应酬等方面往往无法避免饮酒，甚至常常过量饮酒造成醉酒。过量饮酒有害健康，酒中的乙醇对人体组织、器官有直接的毒害作用。人体中，对乙醇最敏感的器官是肝脏，过量饮酒会损伤肝细胞，干扰肝细胞的正常代谢，进而可致酒精性肝炎及肝硬化；还会引起肝脏脂肪合成增多，使血清中甘油三酯含量增高，发生甘油三酯血症的可能性增大。醉酒时，乙醇在体内的吸收率大于氧化代谢率，较多乙醇经血液循环进入人体，导致中枢神经系统障碍，自律神经平衡失调，引起心脏加速和血液中的水分和电解质平衡失调，最终造成头痛、晕眩、局部皮肤过敏，肠胃不适等酒后症状。另外，酗酒者易情绪激动，神志不清，控制能力下降，易与人发生冲突，引发各种安全和暴力事故。
近年来，已有不少解酒的医药保健食品、饮料和药物的报导和产品的上市，但不同配方的解酒制品的效果是有很大差别的，目前市场上的各式解酒醒酒产品功效甚微；而且大多解酒药的成分为兴奋剂、维生素与氨基酸等，提供的只是安慰和缓解头痛的作用，不能帮助解酒，更谈不上护肝。
发明内容
为解决上述现有技术的不足，本发明提供了一种含有菊苣营养成分的解酒护肝剂及其制备方法。
本发明的技术方案：
一种含有菊苣营养成分的解酒护肝剂的制备方法，所述方法步骤如下：
步骤一、制备菊苣低聚肽和菊苣香豆素：
(1)、原料预处理：
将新鲜菊苣根清洗后切成小块，充分干燥后粉碎至80目，将菊苣粉与水混合，得到菊苣粉悬浮液，向菊苣粉悬浮液中加入非蛋白复合酶，一定温度且全程搅拌下酶水解一定时间，升温使复合酶失活，制得菊苣破壁悬浮液；
(2)、制备菊苣蛋白粗提液：
按一定体积比向步骤(1)得到的菊苣破壁悬浮液中加入pH值为中性的Tris-HCl缓冲溶液，搅拌均匀后于一定温度下搅拌浸提，收集浸提液；重复浸提一次并将两次浸提液合并，用滤膜将浸提液过滤，收集澄清滤液并置于超滤膜装置进行超滤，收集截留液即为菊苣蛋白粗提液；
(3)、酶解菊苣蛋白粗提液制备菊苣低聚肽：
将步骤(2)得到的菊苣蛋白粗提液浓缩至原来体积的1/5，冷却至室温，得到菊苣蛋白浓缩液，将浓缩液pH值调至8.5～9.5，加入碱性蛋白酶，在一定温度下进行酶解，酶解过程中滴加NaOH溶液维持体系pH值，酶解完成后向酶解体系中加入HCl将体系pH调至5～7，加入中性蛋白酶，在一定温度下完成酶解后升温使蛋白酶失活，自然冷却至室温后调节pH值为中性，得到酶解液；利用SephadexG-25将酶解液中得到的酶解蛋白分级，收集分子量为500～1000Da的菊苣低聚肽，采用真空干燥法制得菊苣低聚肽粉；
(4)、提取菊苣香豆素：
收集步骤(2)滤膜过滤浸提液后的滤渣，按一定质量体积比向其中加入乙醇，采用加热回流提取的方法提取菊苣香豆素，提取2～3次，合并提取液得到菊苣香豆素粗提液；向所述菊苣香豆素粗提液中加入NaOH，边加边搅拌，将pH值调至7～8，过滤除去杂质，收集滤液并向其中加入盐酸，边加边搅拌，将pH值调至2～3，反应体系置于4℃冷藏20～24h后抽滤处理，收集滤渣并真空干燥制得菊苣香豆素；
步骤二、制备中药提取物：
将充分干燥的葛根花、葛根、三七、水飞蓟、菊花、枳子、肉豆蔻分别粉碎至50～80目，将所得上述各中药粉末按任意比例混合制成中药混合物粉末，取100g中药混合物粉末放入1L萃取釜进行萃取，超临界CO2流体萃取操作流程为液态CO2→高压泵→萃取釜(进入超临界状态)→分离釜Ⅰ→分离釜Ⅱ→循环；在一定CO2流体流量、萃取釜温度、萃取压力和分离釜Ⅰ、分离釜Ⅱ压力、分离釜温度下进行萃取，萃取过程中使用无水乙醇作为夹带剂，无水乙醇用量为500mL，萃取2～3h即得中药提取物；
步骤三、制备解酒护肝剂：
称取如下重量份的原料：菊苣低聚肽30～80份、菊苣香豆素6～10份、中药提取物20～30份、蜂蜜10～20份和去离子水200份，经搅拌混合均匀后过滤除杂、灌装、高温灭菌，即制得所述含有菊苣营养成分的解酒护肝剂。
进一步的，步骤一(1)所述非蛋白复合酶是由纤维素酶、果胶酶和淀粉酶按配比1～5:1～3:1～4组成，非蛋白复合酶的添加量为菊苣粉质量的0.1～0.8％，所述酶水解温度为35～42℃，所述搅拌转速为40～50rpm，所述酶水解时间为6h，所述使复合酶失活是将酶解体系温度升至90～100℃并保持10分钟使复合酶失活。
进一步的，步骤一(2)所述菊苣破壁悬浮液与Tris-HCl缓冲溶液的体积比为1:10～15；所述Tris-HCl缓冲溶液的摩尔浓度为0.01mol/L；所述搅拌浸提的温度为4℃，搅拌浸提时间为3～6h，所述滤膜为0.45μm滤膜，所述超滤的截留分子量为30000Da。
进一步的，步骤一(3)所述碱性蛋白酶的加酶量为菊苣蛋白浓缩液重量的0.03～0.06％，酶解温度为55～70℃，酶解时间为1～2h；所述中性蛋白酶的加酶量为菊苣蛋白浓缩液重量的0.2～0.3％，酶解温度为50～60℃，酶解时间为1～2h，所述使蛋白酶失活是将酶解体系温度升至90～100℃并保持10分钟使蛋白酶失活，所述真空干燥条件均为65℃，0.08Mpa压力下干燥3h。
进一步的，步骤一(4)所述步骤S2滤膜过滤浸提液后的滤渣与乙醇的质量体积比为1g：10mL；所述乙醇的质量浓度为70～90％；所述加热回流提取的时间为2h；所述真空干燥条件均为65℃，0.08Mpa压力下干燥3h。
进一步的，步骤二所述萃取过程中CO2流体流量为20L/h，萃取釜温度为45℃，萃取压力为30MPa，分离釜Ⅰ、分离釜Ⅱ的压力均为6MPa，分离温度均为室温。
一种本发明所述制备方法制备的含有菊苣营养成分的解酒护肝剂，包括如下重量份的原料：菊苣低聚肽30～80份、菊苣香豆素6～10份、中药提取物20～30份、蜂蜜10～20份和去离子水200份。
进一步的，所述解酒护肝剂包括如下重量份的原料：菊苣低聚肽50份、菊苣香豆素8份、中药提取物15份、蜂蜜15份和去离子水200份。
本发明的有益效果：
一、本发明利用酶解法制备小分子低聚肽效率高、工艺简单，将常规提取菊苣多糖时废弃的可溶性菊苣蛋白充分利用起来，制备的菊苣低聚肽分子量小、易于人体吸收，且富含丙氨酸、亮氨酸和谷氨酸等氨基酸，口服本发明解酒护肝剂能够显著提高血清中的丙氨酸及亮氨酸的含量，从而能够产生稳定的分解乙醇的辅脱氢酶，增强肝脏乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶的活性，促进体内乙醇的分解和代谢，从而降低血液中乙醇的浓度，减少乙醛堆积并将已有的乙醛氧化为无毒的乙酸，并进一步转化为二氧化碳和水，以此抑制血液中乙醇的升高，达到解酒的目的。摄入酒精会抑制谷氨酸的产生，口服本发明解酒护肝剂能够补充血液中因受酒精抑制而减少的谷氨酸，谷氨酸能够参加脑的蛋白和糖代谢，促进氧化，改善中枢神经活动，有维持和促进脑细胞功能的作用，从而维持脑细胞的能量供应和神经活动，减少酒精造成的神经系统症状。
同时本发明利用碱溶酸析法从提取菊苣粗蛋白剩余的滤渣中提取得到的菊苣香豆素能够加速细胞修复速度，对肝脏细胞有明显的保护作用。本发明从菊苣出发同时制备出具有解酒功能的菊苣低聚肽和具有护肝功能的菊苣香豆素，既节约了原料成本，又提高了菊苣营养价值和经济价值，与传统菊苣原药入药相比，比发明解酒护肝剂中经深加工提取制备的有效成分解酒护肝的效果更突出。
二、本发明配伍的中药提取物具有明显的解酒护肝的作用，对机体功能的恢复起到了整体调节和全面平衡的作用。其中，葛根花能迅速排除体内酒精，消除残余的酒精在肝、胃中的积淀，对于喝酒过量所致的头痛头晕，烦渴呕吐，胸膈饱胀等均有作用；葛根有提高肝脏乙醇脱氢酶(ADH)的活性作用，可增强肝脏解毒功能，防止由于酒精摄入过量引起的酒醉，宿醉，酒精中毒等，有良好的防醉和解酒功效，还可预防肝脏功能障碍引起的急性肝炎；三七能显著降低酒精性肝损伤，减轻肝组织脂肪变性，对酒精性肝损伤具有保护作用；水飞蓟能对肝脏细胞形成一层保护膜，阻挡酒精等毒性物质入侵损害肝脏；可以明显减轻酒精过量对肝脏的损伤，水飞蓟能刺激蛋白质的合成，可促进肝脏细胞修复，助长细胞新生；菊花有疏散风热，养肝护肝，清热解毒的作用，可以使肝脏功能提高，促进乙醇分解，能够缓解醉酒后头晕头痛的症状，起到解酒醒酒的作用；枳子具有明显的延缓和减少乙醇吸收的作用，能有效地降低乙醇在体内的蓄积浓度，故有醒酒安神的作用；肉豆蔻具有温中行气、固肠止泻、消食、解酒毒的作用，可治醉酒后脘腹饱胀，呕吐等症。
本发明采用超临界CO2提取方法之制备中药提取物，通过控制萃取压力和温度来提高超临界CO2流体对药物活性成分的溶解性，从而提高提取率和纯度；完成萃取后通过减压使CO2气化，不残留溶剂杂质，利于后续纯化；萃取过程中使用乙醇作为夹带剂提高了药物活性成分的提取率，且乙醇易于分离，对后续纯化不造成任何影响；本发明提取过程中不使用有机溶剂，不仅降低了提取成本，更绿色环保，安全高效。
本发明配方中添加的蜂蜜，不但可以改善解酒保肝剂的口感，还因蜂蜜中含有一种特殊的果糖，可以促进酒精的分解吸收，减轻醉酒后的头痛症状。
三、本发明含有菊苣营养成分的解酒护肝剂通过各有效成分见的配伍，一方面抑制酒精的胃肠吸收，加强乙醇在胃肠道的首过效应，降低血液中的乙醇；另一方面加快对乙醇的代谢，同样通过降低酒后血液中乙醇的浓度，降低酒精对肝细胞的损伤，保护肝脏组织细胞，把酒中的有害物质通过尿液排出体外，能起到很好地解酒醒酒、护肝保肝的功效。
本发明含有菊苣营养成分的解酒护肝剂以中药材为原材料制备，对人体无毒副作用，解酒效果快速显著，同时能缓解和修复酒精引起的肝损伤，且制备工艺简单高效，具有巨大的社会效益和应用前景。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案做进一步的说明，但并不局限于此，凡是对本发明技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的保护范围中。
实施例1
一种含有菊苣营养成分的解酒护肝剂的制备方法，所述方法步骤如下：
步骤一、制备菊苣低聚肽和菊苣香豆素：
(1)、原料预处理：
将新鲜菊苣根清洗后切成小块，充分干燥后粉碎至80目，将菊苣粉与水混合，得到菊苣粉悬浮液，向菊苣粉悬浮液中加入非蛋白复合酶，一定温度且全程搅拌下酶水解一定时间，升温使复合酶失活，制得菊苣破壁悬浮液；
(2)、制备菊苣蛋白粗提液：
按一定体积比向步骤(1)得到的菊苣破壁悬浮液中加入pH值为中性的Tris-HCl缓冲溶液，搅拌均匀后于一定温度下搅拌浸提，收集浸提液；重复浸提一次并将两次浸提液合并，用滤膜将浸提液过滤，收集澄清滤液并置于超滤膜装置进行超滤，收集截留液即为菊苣蛋白粗提液；
(3)、酶解菊苣蛋白粗提液制备菊苣低聚肽：
将步骤(2)得到的菊苣蛋白粗提液浓缩至原来体积的1/5，冷却至室温，得到菊苣蛋白浓缩液，将浓缩液pH值调至8.5～9.5，加入碱性蛋白酶，在一定温度下进行酶解，酶解过程中滴加NaOH溶液维持体系pH值，酶解完成后向酶解体系中加入HCl将体系pH调至5～7，加入中性蛋白酶，在一定温度下完成酶解后升温使蛋白酶失活，自然冷却至室温后调节pH值为中性，得到酶解液；利用SephadexG-25将酶解液中得到的酶解蛋白分级，收集分子量为500～1000Da的菊苣低聚肽，采用真空干燥法制得菊苣低聚肽粉；
(4)、提取菊苣香豆素：
收集步骤(2)滤膜过滤浸提液后的滤渣，按一定质量体积比向其中加入乙醇，采用加热回流提取的方法提取菊苣香豆素，提取2～3次，合并提取液得到菊苣香豆素粗提液；向所述菊苣香豆素粗提液中加入NaOH，边加边搅拌，将pH值调至7～8，过滤除去杂质，收集滤液并向其中加入盐酸，边加边搅拌，将pH值调至2～3，反应体系置于4℃冷藏20～24h后抽滤处理，收集滤渣并真空干燥制得菊苣香豆素；
步骤二、制备中药提取物：
将充分干燥的葛根花、葛根、三七、水飞蓟、菊花、枳子、肉豆蔻分别粉碎至50～80目，将所得上述各中药粉末按任意比例混合制成中药混合物粉末，取100g中药混合物粉末放入1L萃取釜进行萃取，超临界CO2流体萃取操作流程为液态CO2→高压泵→萃取釜(进入超临界状态)→分离釜Ⅰ→分离釜Ⅱ→循环；在一定CO2流体流量、萃取釜温度、萃取压力和分离釜Ⅰ、分离釜Ⅱ压力、分离釜温度下进行萃取，萃取过程中使用无水乙醇作为夹带剂，无水乙醇用量为500mL，萃取2～3h即得中药提取物；
步骤三、制备解酒护肝剂：
称取如下重量份的原料：菊苣低聚肽30～80份、菊苣香豆素6～10份、中药提取物20～30份、蜂蜜10～20份和去离子水200份，经搅拌混合均匀后过滤除杂、灌装、高温灭菌，即制得所述含有菊苣营养成分的解酒护肝剂。
实施例2
一种含有菊苣营养成分的解酒护肝剂的制备方法，所述方法步骤如下：
步骤一、制备菊苣低聚肽和菊苣香豆素：
(1)、原料预处理：
将新鲜菊苣根清洗后切成小块，充分干燥后粉碎至80目，将菊苣粉与水混合，得到菊苣粉悬浮液，向菊苣粉悬浮液中加入非蛋白复合酶，所述非蛋白复合酶由纤维素酶、果胶酶和淀粉酶按配比1～5:1～3:1～4组成，非蛋白复合酶的添加量为菊苣粉质量的0.1～0.8％，35～42℃且全程40～50rpm搅拌下酶水解6h，将酶解体系温度升至90～100℃并保持10分钟使复合酶失活，制得菊苣破壁悬浮液；
(2)、制备菊苣蛋白粗提液：
按体积比为1:10～15向步骤(1)得到的菊苣破壁悬浮液中加入pH值为中性的Tris-HCl缓冲溶液，所述Tris-HCl缓冲溶液的摩尔浓度为0.01mol/L，搅拌均匀后于4℃温度下搅拌浸提3～6h，收集浸提液；重复浸提一次并将两次浸提液合并，用0.45μm滤膜将浸提液过滤，收集澄清滤液并置于截留分子量为30000Da的超滤膜装置进行超滤，收集截留液即为菊苣蛋白粗提液；
(3)、酶解菊苣蛋白粗提液制备菊苣低聚肽：
将步骤(2)得到的菊苣蛋白粗提液浓缩至原来体积的1/5，冷却至室温，得到菊苣蛋白浓缩液，将浓缩液pH值调至8.5～9.5，加入碱性蛋白酶，所述碱性蛋白酶的加酶量为菊苣蛋白浓缩液重量的0.03～0.06％，在55～70℃温度下酶解1～2h，酶解过程中滴加NaOH溶液维持体系pH值，酶解完成后向酶解体系中加入HCl将体系pH调至5～7，加入中性蛋白酶，所述中性蛋白酶的加酶量为菊苣蛋白浓缩液重量的0.2～0.3％，在50～60℃温度下酶解1～2h后，将酶解体系温度升至90～100℃并保持10分钟使蛋白酶失活，自然冷却至室温后调节pH值为中性，得到酶解液；利用SephadexG-25将酶解液中得到的酶解蛋白分级，收集分子量为500～1000Da的菊苣低聚肽，采用65℃，0.08Mpa压力下真空干燥3h制得菊苣低聚肽粉；
(4)、提取菊苣香豆素：
收集步骤(2)滤膜过滤浸提液后的滤渣，按质量体积比为1g：10mL向其中加入乙醇，所述乙醇的质量浓度为70～90％，采用加热回流提取的方法提取菊苣香豆素2h，提取2～3次，合并提取液得到菊苣香豆素粗提液；向所述菊苣香豆素粗提液中加入NaOH，边加边搅拌，将pH值调至7～8，过滤除去杂质，收集滤液并向其中加入盐酸，边加边搅拌，将pH值调至2～3，反应体系置于4℃冷藏20～24h后抽滤处理，收集滤渣并65℃，0.08Mpa压力下真空干燥3h制得菊苣香豆素；
步骤二、制备中药提取物：
将充分干燥的葛根花、葛根、三七、水飞蓟、菊花、枳子、肉豆蔻分别粉碎至50～80目，将所得上述各中药粉末按任意比例混合制成中药混合物粉末，取100g中药混合物粉末放入1L萃取釜进行萃取，超临界CO2流体萃取操作流程为液态CO2→高压泵→萃取釜(进入超临界状态)→分离釜Ⅰ→分离釜Ⅱ→循环；萃取过程中CO2流体流量为20L/h，萃取釜温度为45℃，萃取压力为30MPa，分离釜Ⅰ、分离釜Ⅱ的压力均为6MPa，分离温度均为室温，萃取过程中使用无水乙醇作为夹带剂，无水乙醇用量为500mL，萃取2～3h即得中药提取物；
步骤三、制备解酒护肝剂：
称取如下重量份的原料：菊苣低聚肽30～80份、菊苣香豆素6～10份、中药提取物20～30份、蜂蜜10～20份和去离子水200份，经搅拌混合均匀后过滤除杂、灌装、高温灭菌，即制得所述含有菊苣营养成分的解酒护肝剂。
实施例3
一种含有菊苣营养成分的解酒护肝剂的制备方法，所述方法步骤如下：
步骤一、制备菊苣低聚肽和菊苣香豆素：
(1)、原料预处理：
将新鲜菊苣根清洗后切成小块，充分干燥后粉碎至80目，将菊苣粉与水混合，得到菊苣粉悬浮液，向菊苣粉悬浮液中加入非蛋白复合酶，所述非蛋白复合酶由纤维素酶、果胶酶和淀粉酶按配比5:3:4组成，非蛋白复合酶的添加量为菊苣粉质量的0.2％，37℃且全程40rpm搅拌下酶水解6h，将酶解体系温度升至90～100℃并保持10分钟使复合酶失活，制得菊苣破壁悬浮液；
(2)、制备菊苣蛋白粗提液：
按体积比为1:11向步骤(1)得到的菊苣破壁悬浮液中加入pH值为中性的Tris-HCl缓冲溶液，所述Tris-HCl缓冲溶液的摩尔浓度为0.01mol/L，搅拌均匀后于4℃温度下搅拌浸提3h，收集浸提液；重复浸提一次并将两次浸提液合并，用0.45μm滤膜将浸提液过滤，收集澄清滤液并置于截留分子量为30000Da的超滤膜装置进行超滤，收集截留液即为菊苣蛋白粗提液；
(3)、酶解菊苣蛋白粗提液制备菊苣低聚肽：
将步骤(2)得到的菊苣蛋白粗提液浓缩至原来体积的1/5，冷却至室温，得到菊苣蛋白浓缩液，将浓缩液pH值调至8.5，加入碱性蛋白酶，所述碱性蛋白酶的加酶量为菊苣蛋白浓缩液重量的0.03％，在55℃温度下酶解1h，酶解过程中滴加NaOH溶液维持体系pH值，酶解完成后向酶解体系中加入HCl将体系pH调至5，加入中性蛋白酶，所述中性蛋白酶的加酶量为菊苣蛋白浓缩液重量的0.2％，在50℃温度下酶解1h后，将酶解体系温度升至90～100℃并保持10分钟使蛋白酶失活，自然冷却至室温后调节pH值为中性，得到酶解液；利用SephadexG-25将酶解液中得到的酶解蛋白分级，收集分子量为500～1000Da的菊苣低聚肽，采用65℃，0.08Mpa压力下真空干燥3h制得菊苣低聚肽粉；
(4)、提取菊苣香豆素：
收集步骤(2)滤膜过滤浸提液后的滤渣，按质量体积比为1g：10mL向其中加入乙醇，所述乙醇的质量浓度为70％，采用加热回流提取的方法提取菊苣香豆素2h，提取2～3次，合并提取液得到菊苣香豆素粗提液；向所述菊苣香豆素粗提液中加入NaOH，边加边搅拌，将pH值调至7～8，过滤除去杂质，收集滤液并向其中加入盐酸，边加边搅拌，将pH值调至2～3，反应体系置于4℃冷藏20～24h后抽滤处理，收集滤渣并65℃，0.08Mpa压力下真空干燥3h制得菊苣香豆素；
步骤二、制备中药提取物：
将充分干燥的葛根花、葛根、三七、水飞蓟、菊花、枳子、肉豆蔻分别粉碎至50～80目，将所得上述各中药粉末按任意比例混合制成中药混合物粉末，取100g中药混合物粉末放入1L萃取釜进行萃取，超临界CO2流体萃取操作流程为液态CO2→高压泵→萃取釜(进入超临界状态)→分离釜Ⅰ→分离釜Ⅱ→循环；萃取过程中CO2流体流量为20L/h，萃取釜温度为45℃，萃取压力为30MPa，分离釜Ⅰ、分离釜Ⅱ的压力均为6MPa，分离温度均为室温，萃取过程中使用无水乙醇作为夹带剂，无水乙醇用量为500mL，萃取2～3h即得中药提取物；
步骤三、制备解酒护肝剂：
称取如下重量份的原料：菊苣低聚肽30～80份、菊苣香豆素6～10份、中药提取物20～30份、蜂蜜10～20份和去离子水200份，经搅拌混合均匀后过滤除杂、灌装、高温灭菌，即制得所述含有菊苣营养成分的解酒护肝剂。
实施例4
一种含有菊苣营养成分的解酒护肝剂的制备方法，所述方法步骤如下：
步骤一、制备菊苣低聚肽和菊苣香豆素：
(1)、原料预处理：
将新鲜菊苣根清洗后切成小块，充分干燥后粉碎至80目，将菊苣粉与水混合，得到菊苣粉悬浮液，向菊苣粉悬浮液中加入非蛋白复合酶，所述非蛋白复合酶由纤维素酶、果胶酶和淀粉酶按配比4:2:3组成，非蛋白复合酶的添加量为菊苣粉质量的0.3％，38℃且全程50rpm搅拌下酶水解6h，将酶解体系温度升至90～100℃并保持10分钟使复合酶失活，制得菊苣破壁悬浮液；
(2)、制备菊苣蛋白粗提液：
按体积比为1:12向步骤(1)得到的菊苣破壁悬浮液中加入pH值为中性的Tris-HCl缓冲溶液，所述Tris-HCl缓冲溶液的摩尔浓度为0.01mol/L，搅拌均匀后于4℃温度下搅拌浸提4h，收集浸提液；重复浸提一次并将两次浸提液合并，用0.45μm滤膜将浸提液过滤，收集澄清滤液并置于截留分子量为30000Da的超滤膜装置进行超滤，收集截留液即为菊苣蛋白粗提液；
(3)、酶解菊苣蛋白粗提液制备菊苣低聚肽：
将步骤(2)得到的菊苣蛋白粗提液浓缩至原来体积的1/5，冷却至室温，得到菊苣蛋白浓缩液，将浓缩液pH值调至9.0，加入碱性蛋白酶，所述碱性蛋白酶的加酶量为菊苣蛋白浓缩液重量的0.04％，在60℃温度下酶解2h，酶解过程中滴加NaOH溶液维持体系pH值，酶解完成后向酶解体系中加入HCl将体系pH调至6，加入中性蛋白酶，所述中性蛋白酶的加酶量为菊苣蛋白浓缩液重量的0.3％，在55℃温度下酶解2h后，将酶解体系温度升至90～100℃并保持10分钟使蛋白酶失活，自然冷却至室温后调节pH值为中性，得到酶解液；利用SephadexG-25将酶解液中得到的酶解蛋白分级，收集分子量为500～1000Da的菊苣低聚肽，采用65℃，0.08Mpa压力下真空干燥3h制得菊苣低聚肽粉；
(4)、提取菊苣香豆素：
收集步骤(2)滤膜过滤浸提液后的滤渣，按质量体积比为1g：10mL向其中加入乙醇，所述乙醇的质量浓度为75％，采用加热回流提取的方法提取菊苣香豆素2h，提取2～3次，合并提取液得到菊苣香豆素粗提液；向所述菊苣香豆素粗提液中加入NaOH，边加边搅拌，将pH值调至7～8，过滤除去杂质，收集滤液并向其中加入盐酸，边加边搅拌，将pH值调至2～3，反应体系置于4℃冷藏20～24h后抽滤处理，收集滤渣并65℃，0.08Mpa压力下真空干燥3h制得菊苣香豆素；
步骤二、制备中药提取物：
将充分干燥的葛根花、葛根、三七、水飞蓟、菊花、枳子、肉豆蔻分别粉碎至50～80目，将所得上述各中药粉末按任意比例混合制成中药混合物粉末，取100g中药混合物粉末放入1L萃取釜进行萃取，超临界CO2流体萃取操作流程为液态CO2→高压泵→萃取釜(进入超临界状态)→分离釜Ⅰ→分离釜Ⅱ→循环；萃取过程中CO2流体流量为20L/h，萃取釜温度为45℃，萃取压力为30MPa，分离釜Ⅰ、分离釜Ⅱ的压力均为6MPa，分离温度均为室温，萃取过程中使用无水乙醇作为夹带剂，无水乙醇用量为500mL，萃取2～3h即得中药提取物；
步骤三、制备解酒护肝剂：
称取如下重量份的原料：菊苣低聚肽30～80份、菊苣香豆素6～10份、中药提取物20～30份、蜂蜜10～20份和去离子水200份，经搅拌混合均匀后过滤除杂、灌装、高温灭菌，即制得所述含有菊苣营养成分的解酒护肝剂。
实施例5
一种含有菊苣营养成分的解酒护肝剂的制备方法，所述方法步骤如下：
步骤一、制备菊苣低聚肽和菊苣香豆素：
(1)、原料预处理：
将新鲜菊苣根清洗后切成小块，充分干燥后粉碎至80目，将菊苣粉与水混合，得到菊苣粉悬浮液，向菊苣粉悬浮液中加入非蛋白复合酶，所述非蛋白复合酶由纤维素酶、果胶酶和淀粉酶按配比3:1:2组成，非蛋白复合酶的添加量为菊苣粉质量的0.5％，40℃且全程40rpm搅拌下酶水解6h，将酶解体系温度升至90～100℃并保持10分钟使复合酶失活，制得菊苣破壁悬浮液；
(2)、制备菊苣蛋白粗提液：
按体积比为1:13向步骤(1)得到的菊苣破壁悬浮液中加入pH值为中性的Tris-HCl缓冲溶液，所述Tris-HCl缓冲溶液的摩尔浓度为0.01mol/L，搅拌均匀后于4℃温度下搅拌浸提5h，收集浸提液；重复浸提一次并将两次浸提液合并，用0.45μm滤膜将浸提液过滤，收集澄清滤液并置于截留分子量为30000Da的超滤膜装置进行超滤，收集截留液即为菊苣蛋白粗提液；
(3)、酶解菊苣蛋白粗提液制备菊苣低聚肽：
将步骤(2)得到的菊苣蛋白粗提液浓缩至原来体积的1/5，冷却至室温，得到菊苣蛋白浓缩液，将浓缩液pH值调至9.5，加入碱性蛋白酶，所述碱性蛋白酶的加酶量为菊苣蛋白浓缩液重量的0.05％，在65℃温度下酶解1h，酶解过程中滴加NaOH溶液维持体系pH值，酶解完成后向酶解体系中加入HCl将体系pH调至7，加入中性蛋白酶，所述中性蛋白酶的加酶量为菊苣蛋白浓缩液重量的0.2％，在60℃温度下酶解1h后，将酶解体系温度升至90～100℃并保持10分钟使蛋白酶失活，自然冷却至室温后调节pH值为中性，得到酶解液；利用SephadexG-25将酶解液中得到的酶解蛋白分级，收集分子量为500～1000Da的菊苣低聚肽，采用65℃，0.08Mpa压力下真空干燥3h制得菊苣低聚肽粉；
(4)、提取菊苣香豆素：
收集步骤(2)滤膜过滤浸提液后的滤渣，按质量体积比为1g：10mL向其中加入乙醇，所述乙醇的质量浓度为80％，采用加热回流提取的方法提取菊苣香豆素2h，提取2～3次，合并提取液得到菊苣香豆素粗提液；向所述菊苣香豆素粗提液中加入NaOH，边加边搅拌，将pH值调至7～8，过滤除去杂质，收集滤液并向其中加入盐酸，边加边搅拌，将pH值调至2～3，反应体系置于4℃冷藏20～24h后抽滤处理，收集滤渣并65℃，0.08Mpa压力下真空干燥3h制得菊苣香豆素；
步骤二、制备中药提取物：
将充分干燥的葛根花、葛根、三七、水飞蓟、菊花、枳子、肉豆蔻分别粉碎至50～80目，将所得上述各中药粉末按任意比例混合制成中药混合物粉末，取100g中药混合物粉末放入1L萃取釜进行萃取，超临界CO2流体萃取操作流程为液态CO2→高压泵→萃取釜(进入超临界状态)→分离釜Ⅰ→分离釜Ⅱ→循环；萃取过程中CO2流体流量为20L/h，萃取釜温度为45℃，萃取压力为30MPa，分离釜Ⅰ、分离釜Ⅱ的压力均为6MPa，分离温度均为室温，萃取过程中使用无水乙醇作为夹带剂，无水乙醇用量为500mL，萃取2～3h即得中药提取物；
步骤三、制备解酒护肝剂：
称取如下重量份的原料：菊苣低聚肽30～80份、菊苣香豆素6～10份、中药提取物20～30份、蜂蜜10～20份和去离子水200份，经搅拌混合均匀后过滤除杂、灌装、高温灭菌，即制得所述含有菊苣营养成分的解酒护肝剂。
实施例6
一种含有菊苣营养成分的解酒护肝剂的制备方法，所述方法步骤如下：
步骤一、制备菊苣低聚肽和菊苣香豆素：
(1)、原料预处理：
将新鲜菊苣根清洗后切成小块，充分干燥后粉碎至80目，将菊苣粉与水混合，得到菊苣粉悬浮液，向菊苣粉悬浮液中加入非蛋白复合酶，所述非蛋白复合酶由纤维素酶、果胶酶和淀粉酶按配比2:2:2组成，非蛋白复合酶的添加量为菊苣粉质量的0.7％，41℃且全程50rpm搅拌下酶水解6h，将酶解体系温度升至90～100℃并保持10分钟使复合酶失活，制得菊苣破壁悬浮液；
(2)、制备菊苣蛋白粗提液：
按体积比为1:14向步骤(1)得到的菊苣破壁悬浮液中加入pH值为中性的Tris-HCl缓冲溶液，所述Tris-HCl缓冲溶液的摩尔浓度为0.01mol/L，搅拌均匀后于4℃温度下搅拌浸提6h，收集浸提液；重复浸提一次并将两次浸提液合并，用0.45μm滤膜将浸提液过滤，收集澄清滤液并置于截留分子量为30000Da的超滤膜装置进行超滤，收集截留液即为菊苣蛋白粗提液；
(3)、酶解菊苣蛋白粗提液制备菊苣低聚肽：
将步骤(2)得到的菊苣蛋白粗提液浓缩至原来体积的1/5，冷却至室温，得到菊苣蛋白浓缩液，将浓缩液pH值调至9.5，加入碱性蛋白酶，所述碱性蛋白酶的加酶量为菊苣蛋白浓缩液重量的0.06％，在70℃温度下酶解2h，酶解过程中滴加NaOH溶液维持体系pH值，酶解完成后向酶解体系中加入HCl将体系pH调至7，加入中性蛋白酶，所述中性蛋白酶的加酶量为菊苣蛋白浓缩液重量的0.3％，在60℃温度下酶解2h后，将酶解体系温度升至90～100℃并保持10分钟使蛋白酶失活，自然冷却至室温后调节pH值为中性，得到酶解液；利用SephadexG-25将酶解液中得到的酶解蛋白分级，收集分子量为500～1000Da的菊苣低聚肽，采用65℃，0.08Mpa压力下真空干燥3h制得菊苣低聚肽粉；
(4)、提取菊苣香豆素：
收集步骤(2)滤膜过滤浸提液后的滤渣，按质量体积比为1g：10mL向其中加入乙醇，所述乙醇的质量浓度为85％，采用加热回流提取的方法提取菊苣香豆素2h，提取2～3次，合并提取液得到菊苣香豆素粗提液；向所述菊苣香豆素粗提液中加入NaOH，边加边搅拌，将pH值调至7～8，过滤除去杂质，收集滤液并向其中加入盐酸，边加边搅拌，将pH值调至2～3，反应体系置于4℃冷藏20～24h后抽滤处理，收集滤渣并65℃，0.08Mpa压力下真空干燥3h制得菊苣香豆素；
步骤二、制备中药提取物：
将充分干燥的葛根花、葛根、三七、水飞蓟、菊花、枳子、肉豆蔻分别粉碎至50～80目，将所得上述各中药粉末按任意比例混合制成中药混合物粉末，取100g中药混合物粉末放入1L萃取釜进行萃取，超临界CO2流体萃取操作流程为液态CO2→高压泵→萃取釜(进入超临界状态)→分离釜Ⅰ→分离釜Ⅱ→循环；萃取过程中CO2流体流量为20L/h，萃取釜温度为45℃，萃取压力为30MPa，分离釜Ⅰ、分离釜Ⅱ的压力均为6MPa，分离温度均为室温，萃取过程中使用无水乙醇作为夹带剂，无水乙醇用量为500mL，萃取2～3h即得中药提取物；
步骤三、制备解酒护肝剂：
称取如下重量份的原料：菊苣低聚肽30～80份、菊苣香豆素6～10份、中药提取物20～30份、蜂蜜10～20份和去离子水200份，经搅拌混合均匀后过滤除杂、灌装、高温灭菌，即制得所述含有菊苣营养成分的解酒护肝剂。
实施例7
本实施例是按照实施例6提供的制备方法制备的含有菊苣营养成分的解酒护肝剂。
实施例8
本实施例与实施例7的区别仅在于，实施例8提供的含有菊苣营养成分的解酒护肝剂中原料的重量份为菊苣低聚肽50份、菊苣香豆素8份、中药提取物15份、蜂蜜15份和去离子水200份。
对比例1
本对比例与实施例7的区别仅在于，对比例1提供的药剂中原料的重量份为菊苣香豆素8份、中药提取物15份、蜂蜜15份和去离子水200份。
对比例2
本对比例与实施例7的区别仅在于，对比例2提供的药剂中原料的重量份为菊苣提取物50份、中药提取物15份、蜂蜜15份和去离子水200份，其中菊苣提取物由与实施例6步骤二中的超临界CO2流体萃取技术相同的提取方法制备所得。
实施例效果实验
1、乙醇脱氢酶激活实验
实验方法：乙醇+NAD+→乙醛+NADH+，在340nm波长下，测定每分钟NADH吸光度的变化值A大小与乙醇含量成正比。
取实施例8样品各分2个剂量组(50倍、100倍稀释)，样品：乙醇＝1:1混匀后1min测定吸光度变化值，结果如表1所示，
表1
由表1数据可以看出，本发明含有菊苣低聚肽的解酒护肝剂能够通过提高血清中的丙氨酸及亮氨酸的含量产生更多的乙醇脱氢酶的辅酶NAD+，NAD+含量和活性的提高可促进乙醇脱氢酶的活性，从而有利于乙醇在体内的分解代谢，抑制血液中乙醇的升高，达到解酒的目的。而不添加菊苣低聚肽或仅添加菊苣提取物的药剂并没有起到高效分解乙醇的药效，进一步说明了菊苣低聚肽的显著解酒效果。
2、解酒效果实验
实验方法：先灌胃实施例8的解酒剂再灌胃饮用酒(56度富裕老窖)。小鼠醉酒与否以翻正反射消失作为指标，即将小鼠背向下轻轻放在动物笼里，若仰位姿势保持30s以上，则认为翻正反射消失。
取小鼠(雌雄兼用)30只，随机分为2组，每组15只。分为:空白对照组和受试药物组(实施例8解酒剂)。禁食12h后，空白对照组灌胃0.1mL/10g蒸馏水，受试药物组灌胃0.1mL/10g固体饮料。2组均在30min后，以0.1mL/10g体重的剂量灌胃饮用酒。记录各组的醉酒(翻正反射消失)和醒酒(翻正反射恢复)时间(以给酒后开始计时)，结果如表2所示；
表2
由表2数据可以看出，本发明含有菊苣营养成分的解酒护肝剂可以显著延长小鼠的醉酒潜伏时间，同时也显著缩短了小鼠的醉酒时间，说明本发明解酒护肝剂可以起到延缓醉酒和解酒的效果。
3、抑制引发肝炎实验
实验方法：小鼠18-22g，雄性，每组10只，共分2组：空白组(正常健康)、对照组(酒精性发炎的肝细胞)，小鼠适应性生长1周后根据实验剂量给药。经口灌胃实施例8制备的解酒护肝剂，灌胃量为1ml/每天；2周后，灌胃给酒0.14ml/10g体重，取小鼠右叶肝脏0.5cm*0.5cm*0.2cm，切片观察，两组肝组织均无发炎现象。
Claims (8)
1.一种含有菊苣营养成分的解酒护肝剂的制备方法，其特征在于所述方法步骤如下：
步骤一、制备菊苣低聚肽和菊苣香豆素：
(1)、原料预处理：
将新鲜菊苣根清洗后切成小块，充分干燥后粉碎至80目，将菊苣粉与水混合，得到菊苣粉悬浮液，向菊苣粉悬浮液中加入非蛋白复合酶，一定温度且全程搅拌下酶水解一定时间，升温使复合酶失活，制得菊苣破壁悬浮液；
(2)、制备菊苣蛋白粗提液：
按一定体积比向步骤(1)得到的菊苣破壁悬浮液中加入pH值为中性的Tris-HCl缓冲溶液，搅拌均匀后于一定温度下搅拌浸提，收集浸提液；重复浸提一次并将两次浸提液合并，用滤膜将浸提液过滤，收集澄清滤液并置于超滤膜装置进行超滤，收集截留液即为菊苣蛋白粗提液；
(3)、酶解菊苣蛋白粗提液制备菊苣低聚肽：
将步骤(2)得到的菊苣蛋白粗提液浓缩至原来体积的1/5，冷却至室温，得到菊苣蛋白浓缩液，将浓缩液pH值调至8.5～9.5，加入碱性蛋白酶，在一定温度下进行酶解，酶解过程中滴加NaOH溶液维持体系pH值，酶解完成后向酶解体系中加入HCl将体系pH调至5～7，加入中性蛋白酶，在一定温度下完成酶解后升温使蛋白酶失活，自然冷却至室温后调节pH值为中性，得到酶解液；利用SephadexG-25将酶解液中得到的酶解蛋白分级，收集分子量为500～1000Da的菊苣低聚肽，采用真空干燥法制得菊苣低聚肽粉；
(4)、提取菊苣香豆素：
收集步骤(2)滤膜过滤浸提液后的滤渣，按一定质量体积比向其中加入乙醇，采用加热回流提取的方法提取菊苣香豆素，提取2～3次，合并提取液得到菊苣香豆素粗提液；向所述菊苣香豆素粗提液中加入NaOH，边加边搅拌，将pH值调至7～8，过滤除去杂质，收集滤液并向其中加入盐酸，边加边搅拌，将pH值调至2～3，反应体系置于4℃冷藏20～24h后抽滤处理，收集滤渣并真空干燥制得菊苣香豆素；
步骤二、制备中药提取物：
将充分干燥的葛根花、葛根、三七、水飞蓟、菊花、枳子、肉豆蔻分别粉碎至50～80目，将所得上述各中药粉末按任意比例混合制成中药混合物粉末，取100g中药混合物粉末放入1L萃取釜进行萃取，超临界CO2流体萃取操作流程为液态CO2→高压泵→萃取釜(进入超临界状态)→分离釜Ⅰ→分离釜Ⅱ→循环；在一定CO2流体流量、萃取釜温度、萃取压力和分离釜Ⅰ、分离釜Ⅱ压力、分离釜温度下进行萃取，萃取过程中使用无水乙醇作为夹带剂，无水乙醇用量为500mL，萃取2～3h即得中药提取物；
步骤三、制备解酒护肝剂：
称取如下重量份的原料：菊苣低聚肽30～80份、菊苣香豆素6～10份、中药提取物20～30份、蜂蜜10～20份和去离子水200份，经搅拌混合均匀后过滤除杂、灌装、高温灭菌，即制得所述含有菊苣营养成分的解酒护肝剂。
2.根据权利要求1所述一种含有菊苣营养成分的解酒护肝剂的制备方法，其特征在于步骤一(1)所述非蛋白复合酶是由纤维素酶、果胶酶和淀粉酶按配比1～5:1～3:1～4组成，非蛋白复合酶的添加量为菊苣粉质量的0.1～0.8％，所述酶水解温度为35～42℃，所述搅拌转速为40～50rpm，所述酶水解时间为6h，所述使复合酶失活是将酶解体系温度升至90～100℃并保持10分钟使复合酶失活。
3.根据权利要求1或2所述一种含有菊苣营养成分的解酒护肝剂的制备方法，其特征在于步骤一(2)所述菊苣破壁悬浮液与Tris-HCl缓冲溶液的体积比为1:10～15；所述Tris-HCl缓冲溶液的摩尔浓度为0.01mol/L；所述搅拌浸提的温度为4℃，搅拌浸提时间为3～6h，所述滤膜为0.45μm滤膜，所述超滤的截留分子量为30000Da。
4.根据权利要求3所述一种含有菊苣营养成分的解酒护肝剂的制备方法，其特征在于步骤一(3)所述碱性蛋白酶的加酶量为菊苣蛋白浓缩液重量的0.03～0.06％，酶解温度为55～70℃，酶解时间为1～2h；所述中性蛋白酶的加酶量为菊苣蛋白浓缩液重量的0.2～0.3％，酶解温度为50～60℃，酶解时间为1～2h，所述使蛋白酶失活是将酶解体系温度升至90～100℃并保持10分钟使蛋白酶失活，所述真空干燥条件均为65℃，0.08Mpa压力下干燥3h。
5.根据权利要求4所述一种含有菊苣营养成分的解酒护肝剂的制备方法，其特征在于步骤一(4)所述步骤S2滤膜过滤浸提液后的滤渣与乙醇的质量体积比为1g：10mL；所述乙醇的质量浓度为70～90％；所述加热回流提取的时间为2h；所述真空干燥条件均为65℃，0.08Mpa压力下干燥3h。
6.根据权利要求5上述一种含有菊苣营养成分的解酒护肝剂的制备方法，其特征在于步骤二所述萃取过程中CO2流体流量为20L/h，萃取釜温度为45℃，萃取压力为30MPa，分离釜Ⅰ、分离釜Ⅱ的压力均为6MPa，分离温度均为室温。
7.一种如权利要求1-6任一权利要求所述制备方法制备的含有菊苣营养成分的解酒护肝剂，其特征在于所述解酒护肝剂包括如下重量份的原料：菊苣低聚肽30～80份、菊苣香豆素6～10份、中药提取物20～30份、蜂蜜10～20份和去离子水200份。
8.根据权利要求7所述一种含有菊苣营养成分的解酒护肝剂，其特征在于所述解酒护肝剂包括如下重量份的原料：菊苣低聚肽50份、菊苣香豆素8份、中药提取物15份、蜂蜜15份和去离子水200份。
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