CN108210902A - 预防和治疗脂肪肝的药物及其用途 - Google Patents

预防和治疗脂肪肝的药物及其用途 Download PDF

Info

Publication number
CN108210902A
CN108210902A CN201710465726.6A CN201710465726A CN108210902A CN 108210902 A CN108210902 A CN 108210902A CN 201710465726 A CN201710465726 A CN 201710465726A CN 108210902 A CN108210902 A CN 108210902A
Authority
CN
China
Prior art keywords
plasminogen
pro
gly
glu
thr
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201710465726.6A
Other languages
English (en)
Inventor
李季男
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shenzhen Life Science Research Institute Co Ltd
Original Assignee
Shenzhen Life Science Research Institute Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shenzhen Life Science Research Institute Co Ltd filed Critical Shenzhen Life Science Research Institute Co Ltd
Publication of CN108210902A publication Critical patent/CN108210902A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • A61K38/484—Plasmin (3.4.21.7)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21007—Plasmin (3.4.21.7), i.e. fibrinolysin

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明涉及一种预防和/或治疗受试者脂肪肝及其相关病症的方法，包括给药受试者有效量的纤溶酶原；另一方面，本发明还涉及用于预防和/或治疗受试者脂肪肝及其相关病症的包含纤溶酶原的药物、药物组合物、制品、试剂盒。

Description

预防和治疗脂肪肝的药物及其用途
技术领域
本发明涉及一种预防和/或治疗脂肪代谢紊乱及其相关病症的方法，包括给药易患或患有脂肪代谢紊乱及其相关病症的受试者有效量的纤溶酶原，以消减脂肪在身体组织器官的异常沉积，从而实现预防和/或治疗脂肪代谢紊乱及其相关病症、并发症的目的。
背景技术
脂肪代谢紊乱又称为脂肪代谢障碍，是代谢性疾病中的一种，是由原发性或获得性因素造成的血液及其他组织器官中脂质(脂类)及其代谢产物质和量的异常。脂质的代谢包括脂类在小肠内消化、吸收，由淋巴系统进入血循环(通过脂蛋白转运)，经肝脏转化，储存于脂肪组织，需要时被组织利用。脂质在体内的主要功用是氧化供能，脂肪组织是机体的能量仓库，脂肪也能协同皮肤、骨骼、肌肉保护内脏，防止体温散发和帮助食物中脂溶性维生素的吸收。磷脂是所有细胞膜的重要结构成分，胆固醇是胆酸和类固醇激素(肾上腺皮质激素和性腺激素)的前体。脂类代谢受遗传、神经体液、激素、酶以及肝脏等组织器官的调节。当这些因素有异常时，可造成脂代谢紊乱和有关器官的病理生理变化，如高脂蛋白血症及其造成的临床综合征、肥胖症、脂肪肝等。
高脂蛋白血症(Hyperlipoproteinemia)由血液中的脂蛋白过高所致。血液中的脂质如甘油三脂(TG)、游离胆固醇(FC)、胆固醇脂(CE)和磷脂等很少溶于水，只有与载脂蛋白(APO)组成巨分子复合物(脂蛋白)，才能在血中溶解、运转和代谢。当血脂高于正常人上限即为高脂血症(Hyperlipemia)。由于血脂在血中以脂蛋白形式运输，故高脂血症也称为高脂蛋白血症。一般以成人空腹血甘油三脂超过160mg/dl，胆固醇超过260mg/dl，儿童胆固醇超过160mg/dl为标准[1]。
高脂蛋白血症(高脂血症)是动脉粥样硬化病变的重要原因之一，是体内脂质代谢异常的表现。由于血脂或脂蛋白的种类不同，超出正常范围的血脂或脂蛋白种类也可不同，所以世界卫生组织(WHO)将高脂蛋白血症分为五型：Ⅰ型，主要是乳糜微粒增加，血清混浊呈乳白色，其中含大量甘油三酯(TG)；Ⅱ型，又分成Ⅱa型和Ⅱb两亚型，前者主要为低密度脂蛋 (LDL)明显增加，后者极低密度脂蛋白(VLDL)也有增加；Ⅲ型，血清常混浊LDL和VLDL皆有增加，电泳上两者融合；Ⅳ型，主要为VLDL增加，血清或有混浊；V型，乳糜微粒及VLDL皆有增加，血清混浊呈乳白色。其中以Ⅱ型和Ⅳ型最常见[1]。
高脂血症根据病因可分为原发性和继发性两大类。原发性多由于脂质和脂蛋白代谢先天性缺陷(或遗传性缺陷)以及某些环境因素(包括饮食、营养和药物等)通过未知的机理而引起。继发性主要继发于某种疾病，如糖尿病、肝脏疾病、肾脏疾病、甲状腺疾病，以及饮酒、肥胖。饮食与生活方式等环境因素也是该病的病因。
糖尿病常合并脂质代谢紊乱因此糖尿病又称为“糖脂病”[2]。糖尿病的发病机制与B细胞功能损伤及胰岛素抵抗相关，表现为慢性高血糖，而糖代谢的紊乱又常合并脂质代谢的紊乱。糖尿病脂代谢紊乱已经成为心血管疾病独立的危险因素,其主要表现为高甘油三脂血症、低水平的HDL、以及LDL浓度增加。
糖尿病脂质代谢紊乱的发生机制尚不清楚,但众多证据表明胰岛素抵抗是其发生的中心环节。近年来的研究还发现肠胰岛素抵抗也参与其中。对糖尿病动物模型和人群研究发现与脂代谢相关的某些基因表达异常进一步导致胰岛素抵抗。糖尿病患者动脉粥样硬化的发生与多种因素相关，但血浆脂质水平的异常是最主要的因素。研究表明，糖尿病患者心血管疾病的发病率和死亡率明显高于非糖尿病患者,糖尿病已经成为心血管疾病的独立危险因素[3]。
近年来，肾病与脂代谢紊乱的关系愈来愈引人注目，在慢性进行性肾损伤时常伴随脂代谢异常，而高脂血症又可促进并加重肾脏的损害，除了介导肾小球损伤外，在小管间质损伤中也起作用。1913年Munk首先描述了肾病综合征的血脂异常。有学者报道，70％-10％的肾病综合征患者可出现高脂血症。其主要表现为血总胆固醇(TC)明显增加，且以低密度脂蛋白胆固醇升高为主，甘油三酯(TG)的轻度增加,其中低密度脂蛋白(LDL) 的升高与尿蛋白有一定的相关性[4]。慢性肾功能不全患者以中度甘油三酯血症为主，血浆总胆固醇水平一般正常，VLDLC、中等密度脂蛋白胆固醇 (IDLC)中胆固醇增加。高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)减少，各种脂蛋白中的甘油三酯含量均增加。其根本原因就是尿毒症环境对甘油三酯的合成及分解代谢的不利影响以及对胆固醇逆向转运的抑制作用[5]。
随着肾移植疗法的普遍推广以及各种新型免疫抑制剂(特别是CsA、强的松)的广泛应用，慢性肾功能衰竭(CRF)病人的生存期显著延长，然而肾移植后高脂血症的发生率非常高。肾移植术后高脂血症主要表现为血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)、极低密度脂蛋白胆固醇(VLDLC)水平增高[6]。
临床研究证实，脂质代谢紊乱与糖尿病肾病之间有一定的相关性。糖尿病患者脂代谢紊乱，升高的脂类沉积在肾小球基底膜，刺激基底膜细胞增殖和细胞外间质生成。早在1936年，Kimmelstiel和Wilson便在糖尿病肾病患者的肾小动脉、肾小球和肾小管内发现有大量的脂质沉积[7]。脂代谢异常使肾小球和肾小管间质纤维化是导致肾功能进行性损害的重要原因之一[8]。
脂代谢紊乱也可导致肥胖症(肥胖综合症)的发生。肥胖症分单纯性和继发性两类。单纯性肥胖指无明显内分泌代谢疾病的肥胖。又可分为体质性肥胖及获得性肥胖两种。体质性肥胖有家族遗传史，患者自幼进食丰富，入量过剩，从小肥胖，脂肪细胞呈增生肥大。获得性肥胖大多由于营养过度和/或体力活动减少所致，如人到中年后生活物质条件的改善、疾病恢复和休养充分、产后停止体育锻炼或体力劳动等。脂肪细胞呈肥大变化，没有增生现象，治疗效果较好。继发性肥胖主要为神经内分泌疾病所致。神经内分泌对代谢有重要调节作用：①下丘脑有调节食欲的中枢，中枢神经系统炎症后遗症、创伤、肿瘤等均可引起下丘脑功能异常，使食欲旺盛而造成肥胖。②胰岛素分泌增多，如早期非胰岛素依赖型糖尿病患者注射过多胰岛素，致高胰岛素血症；胰岛B细胞瘤分泌过多的胰岛素，这都使脂肪合成增加，引起肥胖。③垂体功能低减,特别是促性腺激素及促甲状腺激素减少引起性腺及甲状腺功能低下时，可发生肥胖症。④经产妇或口服女性避孕药者易发生肥胖，这提示雌激素有促进脂肪合成的作用。⑤皮质醇增多症常伴有向心性肥胖。⑥甲状腺功能减退，由于代谢率低下，脂肪堆积，且伴粘液水肿。⑦性腺低下也可肥胖，如肥胖性生殖无能症(脑性肥胖症，弗洛利克氏综合征，外伤、脑炎、垂体瘤、颅咽管瘤等损伤下丘脑所致,表现为向心性肥胖,伴尿崩症及性发育迟缓)。
脂代谢紊乱常导致脂肪肝。脂肪肝是指由于各种原因引起的肝细胞内脂肪堆积过多的病变。肝脏在脂质代谢中起着特别重要的作用，它能合成脂蛋白，有利于脂质运输，也是脂肪酸氧化和酮体形成的主要场所。正常时肝含脂质量不多,约为4％，其中主要是磷脂。若肝脏不能及时将脂肪运出，脂肪在肝细胞中堆积，即形成脂肪肝。
脂肪肝可以是一个独立的疾病也可以由其它原因所致，例如肥胖性脂肪肝、酒精性脂肪肝、快速减肥性脂肪肝、营养不良性脂肪肝、糖尿病脂肪肝、药物性脂肪肝等。
某些药物或化学毒物通过抑制蛋白质的合成而致脂肪肝，如四环素、肾上腺皮质激素、嘌呤霉素、环已胺、吐根碱以及砷、铅、银、汞等。降脂药也可通过干扰脂蛋白的代谢而形成脂肪肝。
脂肪肝的危害之一是其促进动脉粥样硬化的形成，导致动脉粥样硬化的原因之一是脂肪肝患者常伴有高血脂症，血液粘稠度增加，其中的低密度脂蛋白(LDL)因其分子量极小，很容易穿过动脉血管内膜在血管壁沉着，使动脉弹性降低，管径变窄，柔韧性减弱，最终导致血液循环障碍。脂肪肝的危害之二是诱发或加重高血压、冠心病，容易导致心肌梗塞而猝死。脂肪肝的危害之三是脑病脂肪肝综合征(Reye综合征)。脂肪肝的危害之四是导致肝硬化、肝功能衰竭、肝癌。
脂肪肝是肝脏脂代谢失调的产物，同时又是加重肝脏损伤的致病因素，这是一种互为因果、恶性循环的发展。肝细胞中脂滴增多，使肝细胞脂肪变性、肿大，细胞核被挤压偏离中心。脂肪的代谢工要在线粒体中进行，脂肪向细胞外运输主要通过光面内质网，脂肪在肝细胞内的堆积进一步加重线粒体和内质网的负担降低其功能，进而影响其他营养素、激素、维生素的代谢。长期的肝细胞变性会导致肝细胞的再生障碍和坏死，进而形成肝纤维化、肝硬化。肝硬化继发肝细胞癌的机率较高。
脂肪肝的危害之五是急性妊娠性脂肪肝，病死率高。此病又称产科急性黄色肝萎缩，是一种较少见、预后凶险的妊娠合并症。多发生在怀孕的最后三个月，临床表现常与急重肝相似，可出现急性肝功能衰竭、胰腺炎、肾功能衰竭、全身凝血异常而导致快速死亡，首次妊娠的孕妇居多。
脂肪肝的危害之六是诱发或加重糖尿病。肥胖性脂肪肝患者若血糖浓度超过正常水平，虽未达到糖尿病的诊断标准，一般认为是糖尿病前期。脂肪肝与糖尿病常常相伴而生，而且互相影响，这给临床治疗带来了更大的困难。
本发明研究发现纤溶酶原可以预防和/或消减脂肪在身体组织器官的异常沉积，例如可以预防和消减脂质在血液、血管壁、内脏器官以及器官间的组织内的异常沉积，改善这些组织器官的功能，从而为脂肪代谢紊乱及其相关病症、以及其伴随的疾病或并发症提供了全新的预防和治疗方案
发明概述
本发明涉及如下各项：
在一方面，本发明涉及：项1.一种用于预防和/或治疗受试者脂肪肝及其相关病症的方法，包括给药受试者预防和/或治疗有效量的纤溶酶原，所述受试者患有、怀疑患有脂肪肝及其相关病症或具有患上脂肪肝及其相关病状的风险。
项2.项1的方法，其中所述脂肪肝包括肥胖性脂肪肝、酒精性脂肪肝、快速减肥性脂肪肝、营养不良性脂肪肝、糖尿病脂肪肝、药物性脂肪肝。
在又一方面，本发明涉及：项3.一种用于预防和/或治疗受试者脂肪肝及其相关病症的方法，包括给药受试者预防和/或治疗有效量的纤溶酶原，其中所述脂肪肝为内分泌紊乱疾病、糖代谢疾病、肝脏疾病、肾脏疾病、心血管疾病、肠道疾病、甲状腺疾病、胆囊或胆道疾病、肥胖症、饮酒、药物治疗引发或伴随的。
项4.项3的方法，其中所述脂肪肝为高血压、糖尿病、慢性肝炎、肾损伤、慢性肾小球肾炎、慢性肾盂肾炎、肾病综合征、肾功能不全、肾移植、尿毒症、甲状腺功能低下、阻塞性胆囊炎、阻塞性胆管炎、雌激素治疗引发或伴随的。
在又一方面，本发明涉及：项5.一种用于预防和/或治疗受试者肝脏脂质沉积及其相关病症的方法，包括给药受试者预防和/或治疗有效量的纤溶酶原，所述受试者患有、怀疑患有肝脏脂质沉积及其相关病症或具有患上脂肪肝及其相关病状的风险。
项6.项5的方法，其中所述肝脏脂质沉积为内分泌紊乱疾病、糖代谢疾病、肝脏疾病、肾脏疾病、心血管疾病、肠道疾病、甲状腺疾病、胆囊或胆道疾病、肥胖症、饮酒、药物治疗引发或伴随的。
项7.项6的方法，其中所述肝脏脂质沉积为高血压、糖尿病、慢性肝炎、肾损伤、慢性肾小球肾炎、慢性肾盂肾炎、肾病综合征、肾功能不全、肾移植、尿毒症、甲状腺功能低下、阻塞性胆囊炎、阻塞性胆管炎、药物治疗引发或伴随的。
在又一方面，本发明涉及：项8.一种消减动脉粥样硬化受试者肝脏脂质沉积的方法，包括给药所述受试者有效量的纤溶酶原。
在又一方面，本发明涉及：项9.一种消减糖尿病受试者肝脏脂质沉积的方法，包括给药所述受试者有效量的纤溶酶原。
在又一方面，本发明涉及：项10.一种消减高脂血症受试者肝脏脂质沉积的方法，包括给药所述受试者有效量的纤溶酶原。
项11.项10的方法，其中所述高脂血症为选自如下的一项或多项：血清甘油三酯(TG)升高、血清低密度脂蛋白(LDL)升高、极低密度脂蛋白 (VLDL)升高。
项12.项10或11的方法，其中所述高脂血症包括高胆固醇血症、高甘油三酯血症、混合型高脂血症和低高密度脂蛋白血症。
项13.根据项1-12任一项的方法，其中所述纤溶酶原可与一种或多种其它药物或治疗方法联合施用。
项14.项13的方法，其中所述一种或多种其它药物包括糖尿病治疗用药物、动脉粥样硬化治疗用药物、肾病综合征治疗用药物、肾功能不全治疗用药物、尿毒症治疗用药物、肾移植治疗用药物、脂肪肝治疗用药物、肝硬化治疗用药物、肥胖症治疗用药物。
项15.根据项14的方法，其中所述其它药物包括：降血脂药物、抗血小板药物、降血压药物、扩张血管药物、降血糖药物、抗凝血药物、溶血栓药物，保肝药物，抗心律失常药物，强心药物，利尿药物，抗感染药物、抗病毒药物、免疫调节药物、炎症调节类药物、抗肿瘤药物、激素类药物、甲状腺素。
项16.一种用于项1-15任一项的方法的纤溶酶原。
在又一方面，本发明涉及：项17.一种药物组合物，其包含药学上可接受的载剂和用于项1-15中任一项所述方法的纤溶酶原。
在又一方面，本发明涉及：项18.一种预防性或治疗性试剂盒，其包含： (i)用于项1-15中任一项所述方法的纤溶酶原和(ii)用于递送所述纤溶酶原至所述受试者的构件(means)。
项19.根据项18所述的试剂盒，其中所述构件为注射器或小瓶。
项20.项18或19的试剂盒，其还包含标签或使用说明书，该标签或使用说明书指示所述纤溶酶原被投予至所述受试者以实施项1-15中任一项所述方法。
在又一方面，本发明涉及：项21.一种制品，其包含：
包含标签的容器；和
包含(i)用于项1-15中任一项所述方法的纤溶酶原或包含纤溶酶原的药物组合物，其中所述标签指示所述纤溶酶原或组合物被投予至所述受试者以实施项1-15中任一项所述方法。
项22.项20的试剂盒或项21的制品，还包含另外的一个或多个构件或容器，该构件或容器中含有其他药物。
项23.项22的试剂盒或制品，其中所述其他药物选自如下一项或多项：糖尿病治疗用药物、动脉粥样硬化治疗用药物、肾病综合征治疗用药物、肾功能不全治疗用药物、尿毒症治疗用药物、肾移植治疗用药物、脂肪肝治疗用药物、肝硬化治疗用药物、肥胖症治疗用药物。
项24.项23的试剂盒或制品，其中所述其他药物选自如下一项或多项：降血脂药物、抗血小板药物、降血压药物、扩张血管药物、降血糖药物、抗凝血药物、溶血栓药物，保肝药物，抗心律失常药物，强心药物，利尿药物，抗感染药物、抗病毒药物、免疫调节药物、炎症调节类药物、抗肿瘤药物、激素类药物、甲状腺素。
项25.根据项1-15任一项的方法或项16的纤溶酶原、项17的药物组合物、项19-20、22-24任一项的试剂盒或项21-24任一项的制品，其中所述纤溶酶原与序列2、6、8、10或12具有至少75％、80％、85％、90％、 95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性，并且仍然具有纤溶酶原活性。
项26.根据项1-15任一项的方法或项16的纤溶酶原、项17的药物组合物、项19-20、22-24任一项的试剂盒或项21-24任一项的制品，其中所述纤溶酶原是在序列2、6、8、10或12的基础上，添加、删除和/或取代1- 100、1-90、1-80、1-70、1-60、1-50、1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、 1-15、1-10、1-5、1-4、1-3、1-2、1个氨基酸，并且仍然具有纤溶酶原活性的蛋白质。
项27.根据项1-15任一项的方法或项16的纤溶酶原、项17的药物组合物、项19-20、22-24任一项的试剂盒或项21-24任一项的制品，其中所述纤溶酶原是包含纤溶酶原活性片段、并且仍然具有纤溶酶原活性的蛋白质。
项28.根据项1-15任一项的方法或项16的纤溶酶原、项17的药物组合物、项19-20、22-24任一项的试剂盒或项21-24任一项的制品，其中所述纤溶酶原选自Glu-纤溶酶原、Lys-纤溶酶原、小纤溶酶原、微纤溶酶原、delta-纤溶酶原或它们的保留纤溶酶原活性的变体。
项29.根据项1-15任一项的方法或项16的纤溶酶原、项17的药物组合物、项19-20、22-24任一项的试剂盒或项21-24任一项的制品，其中所述纤溶酶原为天然或合成的人纤溶酶原、或其仍然保留纤溶酶原活性的变体或片段。
项30.根据项1-15任一项的方法或项16的纤溶酶原、项17的药物组合物、项19-20、22-24任一项的试剂盒或项21-24任一项的制品，其中所述纤溶酶原为来自灵长类动物或啮齿类动物的人纤溶酶原直向同系物或其仍然保留纤溶酶原活性的变体或片段。
项31.根据项1-15任一项的方法或项16的纤溶酶原、项17的药物组合物、项19-20、22-24任一项的试剂盒或项21-24任一项的制品，其中所述纤溶酶原的氨基酸如序列2、6、8、10或12所示。
项32.根据项1-15任一项的方法或项16的纤溶酶原、项17的药物组合物、项19-20、22-24任一项的试剂盒或项21-24任一项的制品，其中所述纤溶酶原是人天然纤溶酶原。
项33.根据项1-15任一项的方法或项16的纤溶酶原、项17的药物组合物、项19-20、22-24任一项的试剂盒或项21-24任一项的制品，其中所述受试者是人。
项34.根据项1-15任一项的方法或项16的纤溶酶原、项17的药物组合物、项19-20、22-24任一项的试剂盒或项21-24任一项的制品，其中所述受试者缺乏或缺失纤溶酶原。
项35.根据项34的方法、纤溶酶原、药物组合物、试剂盒或制品，所述缺乏或缺失是先天的、继发的和/或局部的。
本发明还涉及纤溶酶原用于实施项1-15任一项的方法的用途。
本发明还涉及纤溶酶原在制备用于项1-15任一项的方法的药物、药物组合物、制品、试剂盒中的用途。
本发明还涉及预防和/或治疗受试者脂肪代谢紊乱及其相关病症。
一方面，本发明涉及预防和/或治疗受试者脂肪代谢紊乱及其相关病症的方法，包括给药受试者预防和/或治疗有效量的纤溶酶原，其中所述受试者易患脂肪代谢紊乱、患有脂肪代谢紊乱或罹患其它疾病并伴有脂肪代谢紊乱。本发明还涉及纤溶酶原用于预防和/或治疗受试者脂肪代谢紊乱及其相关病症的用途。本发明还涉及纤溶酶原在制备用于预防和/或治疗受试者脂肪代谢紊乱及其相关病症的药物、药物组合物、制品、试剂盒中的用途。进一步地，本发明还涉及用于预防和/或治疗受试者脂肪代谢紊乱及其相关病症的纤溶酶原。本发明还涉及用于预防和/或治疗受试者脂肪代谢紊乱及其相关病症的包含纤溶酶原的药物、药物组合物、制品、试剂盒。
在一些实施方案中，所述脂肪代谢紊乱为内分泌紊乱疾病、糖代谢疾病、肝脏疾病、肾脏疾病、心血管疾病、肠道疾病、甲状腺疾病、胆囊或胆道疾病、肥胖症、饮酒、药物治疗引发或伴随的脂肪代谢紊乱。在一些实施方案中，所述脂肪代谢紊乱为高血压、糖尿病、慢性肝炎、肝硬化、肾损伤、慢性肾小球肾炎、慢性肾盂肾炎、肾病综合征、肾功能不全、肾移植、尿毒症、甲状腺功能低下、阻塞性胆囊炎、阻塞性胆管炎、药物或激素治疗引发或伴随的脂肪代谢紊乱。在一些实施方案中，所述脂肪代谢紊乱为高脂血症、高脂蛋白血症、脂肪肝、动脉粥样硬化、肥胖症、脏器脂肪沉积。在又一些实施方案中，所述动脉粥样硬化包括包括主动脉粥样硬化、冠状动脉粥样硬化、脑动脉粥样硬化、肾动脉粥样硬化、肝动脉粥样硬化、肠系膜动脉粥样硬化、下肢动脉粥样硬化。
在又一个方面，本发明涉及预防和/或消减受试者脂肪在身体组织器官异常沉积的方法，包括给药受试者有效量的纤溶酶原。本发明还涉及纤溶酶原用于预防和/或消减受试者脂肪在身体组织器官异常沉积的用途。本发明还涉及纤溶酶原在制备用于预防和/或消减受试者脂肪在身体组织器官异常沉积的药物、药物组合物、制品、试剂盒中的用途。进一步地，本发明还涉及用于预防和/或消减受试者脂肪在身体组织器官异常沉积的纤溶酶原。本发明还涉及用于预防和/或消减受试者脂肪在身体组织器官异常沉积的包含纤溶酶原的药物、药物组合物、制品、试剂盒。
在又一个方面，本发明涉及预防和/或治疗受试者脂肪在身体组织器官异常沉积导致的病症的方法，包括给药受试者有效量的纤溶酶原。本发明还涉及纤溶酶原用于预防和/或治疗受试者脂肪在身体组织器官异常沉积导致的病症的用途。本发明还涉及纤溶酶原在制备用于预防和/或治疗受试者脂肪在身体组织器官异常沉积导致的病症的药物、药物组合物、制品、试剂盒中的用途。进一步地，本发明还涉及用于预防和/或治疗受试者脂肪在身体组织器官异常沉积导致的病症的包含纤溶酶原的药物、药物组合物、制品、试剂盒。
在一些实施方案中，所述脂肪在身体组织器官异常沉积是指脂肪在血液，皮下组织、血管壁、内脏器官的异常沉积。在一些实施方案中，所述脂肪在身体组织器官异常沉积导致的病症包括肥胖症，高脂血症、高脂蛋白血症、脂肪肝、动脉粥样硬化、脂质性心脏损害、脂质性肾损害，脂质性胰岛损害。
在又一个方面，本发明涉及预防和/或治疗受试者脂肪代谢紊乱所致病症的方法，包括给药受试者有效量的纤溶酶原。本发明还涉及纤溶酶原用于预防和/或治疗受试者脂肪代谢紊乱所致病症的用途。本发明还涉及纤溶酶原在制备用于预防和/或治疗受试者脂肪代谢紊乱所致病症的药物、药物组合物、制品、试剂盒中的用途。进一步地，本发明还涉及用于预防和/或治疗受试者脂肪代谢紊乱所致病症的纤溶酶原。本发明还涉及用于预防和/或治疗受试者脂肪代谢紊乱所致病症的包含纤溶酶原的药物、药物组合物、制品、试剂盒。在一些实施方案中，所述病症包括肥胖症，高脂血症、高脂蛋白血症、脂肪肝、动脉粥样硬化、脂质性心脏组织损伤，脂质性肾损伤。
在又一个方面，本发明涉及通过减少脂肪异常沉积治疗受试者疾病的方法，包括给药受试者有效量的纤溶酶原。本发明还涉及纤溶酶原用于通过减少脂肪异常沉积治疗受试者疾病的用途。本发明还涉及纤溶酶原在制备用于通过减少脂肪异常沉积治疗受试者疾病的药物、药物组合物、制品、试剂盒中的用途。进一步地，本发明还涉及用于通过减少脂肪异常沉积治疗受试者疾病的纤溶酶原。本发明还涉及通过减少脂肪异常沉积治疗受试者疾病的包含纤溶酶原的药物、药物组合物、制品、试剂盒。
在一些实施方案中，所述疾病包括动脉粥样硬化、冠心病、心绞痛、心肌梗死、心律失常、脂肪肝、肝硬化，脑缺血、脑梗死、肾功能不全、肾病综合征、肾功能不全、肥胖症。
在又一个方面，本发明涉及预防和/或治疗受试者组织器官脂质性损伤的方法，包括给药受试者有效量的纤溶酶原。本发明还涉及纤溶酶原用于预防和/或治疗受试者组织器官脂质性损伤的用途。本发明还涉及纤溶酶原在制备用于预防和/或治疗受试者组织器官脂质性损伤的药物、药物组合物、制品、试剂盒中的用途。进一步地，本发明还涉及用于预防和/或治疗受试者组织器官脂质性损伤的纤溶酶原。本发明还涉及用于预防和/或治疗受试者组织器官脂质性损伤的包含纤溶酶原的药物、药物组合物、制品、试剂盒。
在一些实施方案中，所述组织器官包括动脉管壁、心脏、肝脏、肾脏、胰腺。
在又一个方面，本发明涉及改善受试者高脂血症的方法，包括给药受试者有效量的纤溶酶原。本发明还涉及纤溶酶原用于改善受试者高脂血症的用途。本发明还涉及纤溶酶原在制备用于改善受试者高脂血症的药物、药物组合物、制品、试剂盒中的用途。进一步地，本发明还涉及用于改善受试者高脂血症的纤溶酶原。本发明还涉及用于改善受试者高脂血症的包含纤溶酶原的药物、药物组合物、制品、试剂盒。
在一些实施方案中，所述高脂血症选自如下的一项或多项：高胆固醇血症、高甘油三酯血症、混合型高脂血症和低高密度脂蛋白血症。
在又一个方面，本发明涉及降低受试者动脉粥样硬化风险的方法，包括给药受试者有效量的纤溶酶原。本发明还涉及纤溶酶原用于降低受试者动脉粥样硬化风险的用途。本发明还涉及纤溶酶原在制备用于降低受试者动脉粥样硬化风险的药物、药物组合物、制品、试剂盒中的用途。进一步地，本发明还涉及用于降低受试者动脉粥样硬化风险的纤溶酶原。本发明还涉及用于降低受试者动脉粥样硬化风险的包含纤溶酶原的药物、药物组合物、制品、试剂盒。
在一些实施方案中，所述受试者患有高血压、肥胖症、糖尿病、慢性肝炎、肝硬化、肾损伤、慢性肾小球肾炎、慢性肾盂肾炎、肾病综合征、肾功能不全、肾移植、尿毒症、甲状腺功能低下、阻塞性胆囊炎或阻塞性胆管炎，或所述受试者服用影响脂肪代谢的药物或激素。在一些实施方案中，所述纤溶酶原通过选自如下的一项或多项降低受试者动脉粥样硬化风险：降低血中总胆固醇水平、甘油三酯水平、低密度脂蛋白水平、提高血中高密度脂蛋白水平。
在又一个方面，本发明涉及通过改善受试者高脂血症治疗疾病的方法，包括给药受试者有效量的纤溶酶原。本发明还涉及纤溶酶原用于通过改善受试者高脂血症治疗疾病的用途。本发明还涉及纤溶酶原在制备用于通过改善受试者高脂血症治疗疾病的药物、药物组合物、制品、试剂盒中的用途。进一步地，本发明还涉及用于通过改善受试者高脂血症治疗疾病的纤溶酶原。本发明还涉及用于通过改善受试者高脂血症治疗疾病的包含纤溶酶原的药物、药物组合物、制品、试剂盒。
在一些实施方案中，所述病症包括糖尿病、高血压、动脉粥样硬化、冠心病、心绞痛、心肌梗死、心律失常、慢性肝炎、脂肪肝、肝硬化，脑供血不足、脑缺血、脑梗死、慢性肾炎、慢性肾盂肾炎、肾功能不全、肾病综合征、尿毒症、肥胖症。
在又一个方面，本发明涉及预防和/或治疗受试者高血脂相关病症的方法，包括给药受试者有效量的纤溶酶原。本发明还涉及纤溶酶原用于预防和/或治疗受试者高血脂相关病症的用途。本发明还涉及纤溶酶原在制备用于预防和/或治疗受试者高血脂相关病症的药物、药物组合物、制品、试剂盒中的用途。进一步地，本发明还涉及用于预防和/或治疗受试者高血脂相关病症的纤溶酶原。本发明还涉及用于预防和/或治疗受试者高血脂相关病症的包含纤溶酶原的药物、药物组合物、制品、试剂盒。在一些实施方案中，所述病症包括糖尿病、高血压、动脉粥样硬化、冠心病、心绞痛、心肌梗死、心律失常、慢性肝炎、脂肪肝、肝硬化，脑供血不足、脑缺血、脑梗死、慢性肾炎、慢性肾盂肾炎、肾功能不全、肾病综合征、尿毒症、肥胖症。
在本发明的上述任一实施方案中，所述纤溶酶原可与一种或多种其它药物或治疗方法联合施用。在一些实施方案中，所述一种或多种其它药物包括高血压治疗药物、糖尿病治疗用药物、动脉粥样硬化治疗用药物、慢性肾小球肾炎治疗药物、慢性肾盂肾炎治疗药物、肾病综合征治疗用药物、肾功能不全治疗用药物、尿毒症治疗用药物、肾移植治疗用药物、脂肪肝治疗用药物、肝硬化治疗用药物、肥胖症治疗用药物。在一些实施方案中，所述其它药物包括：降血脂药物、抗血小板药物、降血压药物、扩张血管药物、降血糖药物、抗凝血药物、溶血栓药物，保肝药物，抗心律失常药物，强心药物，利尿药物，抗感染药物、抗病毒药物、免疫调节药物、炎症调节类药物、抗肿瘤药物、激素类药物、甲状腺素。在一些进一步的实施方案中，所述药物包括降血脂药物：他汀类；贝特类；烟酸；消胆胺；安妥明；不饱和脂肪酸如益寿宁、血脂平及心脉乐；藻酸双酯钠；抗血小板药物：阿司匹林；潘生丁；氯吡格雷；西洛他；扩张血管药物：肼苯哒嗪；硝酸甘油和消心痛；硝普钠；α硝受体阻断剂如哌唑嗪；α受体阻断剂如酚妥拉明；β拉受体兴奋剂如舒喘灵；卡托普利、依那普利；心痛定、硫氮卓酮；柳丁氨酸、长压定、前列腺素、心钠素；溶血栓药物：尿激酶和链激酶；组织型纤溶酶原激活剂；单链尿激酶型纤溶酶原激活剂；TNK-组织型纤溶酶原激活剂；抗凝血药物：肝素；依诺肝素；那曲肝素；比伐卢定。
在本发明的上述任一实施方案中，所述纤溶酶原可与序列2、6、8、10 或12具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性，并且仍然具有纤溶酶原活性。在一些实施方案中，所述纤溶酶原是在序列2、6、8、10或12的基础上，添加、删除和/或取代1-100、 1-90、1-80、1-70、1-60、1-50、1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1- 15、1-10、1-5、1-4、1-3、1-2、1个氨基酸，并且仍然具有纤溶酶原活性的蛋白质。
在一些实施方案中，所述纤溶酶原是包含纤溶酶原活性片段、并且仍然具有纤溶酶原活性的蛋白质。在一些实施方案中，所述纤溶酶原选自 Glu-纤溶酶原、Lys-纤溶酶原、小纤溶酶原、微纤溶酶原、delta-纤溶酶原或它们的保留纤溶酶原活性的变体。在一些实施方案中，所述纤溶酶原为天然或合成的人纤溶酶原、或其仍然保留纤溶酶原活性的变体或片段。在一些实施方案中，所述纤溶酶原为来自灵长类动物或啮齿类动物的人纤溶酶原直向同系物或其仍然保留纤溶酶原活性的变体或片段。在一些实施方案中，所述纤溶酶原的氨基酸如序列2、6、8、10或12所示。在一些实施方案中，所述纤溶酶原是人天然纤溶酶原。
在一些实施方案中，所述受试者是人。在一些实施方案中，所述受试者缺乏或缺失纤溶酶原。在一些实施方案中，所述缺乏或缺失是先天的、继发的和/或局部的。
在一些实施方案中，所述药物组合物包含药学上可接受的载剂和用于前述方法的纤溶酶原。在一些实施方案中，所述试剂盒可以是预防性或治疗性试剂盒，其包含：(i)用于前述方法的纤溶酶原和(ii)用于递送所述纤溶酶原至所述受试者的构件(means)。在一些实施方案中，所述构件为注射器或小瓶。在一些实施方案中，所述试剂盒还包含标签或使用说明书，该标签或使用说明书指示将所述纤溶酶原投予所述受试者以实施前述任一方法。
在一些实施方案中，所述制品包含：含有标签的容器；和包含(i)用于前述方法的纤溶酶原或包含纤溶酶原的药物组合物，其中所述标签指示将所述纤溶酶原或组合物投予所述受试者以实施前述任一方法。
在一些实施方案中，所述试剂盒或制品还包含另外的一个或多个构件或容器，该构件或容器中含有其他药物。在一些实施方案中，所述其他药物选自下组：降血脂药物、抗血小板药物、降血压药物、扩张血管药物、降血糖药物、抗凝血药物、溶血栓药物，保肝药物，抗心律失常药物，强心药物，利尿药物，抗感染药物、抗病毒药物、免疫调节药物、炎症调节类药物、抗肿瘤药物、激素类药物、甲状腺素。
在前述方法的一些实施方案中，所述纤溶酶原可通过全身或局部给药，优选通过以下途径施用：静脉内、肌内、皮下给予纤溶酶原来进行治疗。在前述方法的一些实施方案中，所述纤溶酶原与适当的多肽载体或稳定剂组合施用。在前述方法的一些实施方案中，所述纤溶酶原以每天0.0001- 2000mg/kg、0.001-800mg/kg、0.01-600mg/kg、0.1-400mg/kg、1-200mg/kg、 1-100mg/kg、10-100mg/kg(以每公斤体重计算)或0.0001-2000mg/cm2、0.001-800mg/cm2、0.01-600mg/cm2、0.1-400mg/cm2、1-200mg/cm2、1- 100mg/cm2、10-100mg/cm2(以每平方厘米体表面积计算)的剂量施用，优选至少重复一次，优选至少每天施用。
本发明明确涵盖了属于本发明实施方案之间的技术特征的所有组合，并且这些组合后的技术方案在本申请中已经明确公开，就像上述技术方案已经单独且明确公开一样。另外，本发明还明确涵盖各个实施方案及其要素的之间的组合，该组合后的技术方案在本文中明确公开。
定义
本发明所述的“脂肪代谢紊乱”又称“脂肪代谢异常”、“脂肪代谢障碍”，为脂肪代谢发生异常、紊乱或障碍所引发的临床或病理表现的总称。在本文中，“脂肪代谢紊乱”、“脂肪代谢异常”、“脂肪代谢障碍”可互换使用。本发明中“脂肪代谢”、“脂代谢”、“脂质代谢”可互换使用。
“脂肪代谢紊乱相关病症”是与脂肪代谢紊乱相关的病症的总称。所述的相关，可以是病因相关、发病机理相关、病理表现相关、临床症状相关和/或治疗原则相关。
“血脂”是甘油三酯、胆固醇和磷脂等的总称，脂蛋白是由载脂蛋白和血脂组成的球型大分子复合体，由于脂蛋白包含胆固醇、甘油三酯的成分不同及密度大小不同被分为5大类：乳糜微粒(CM)极低密度脂蛋白 (VLDL)中密度脂蛋白(IDL)低密度脂蛋白(LDL)高密度脂蛋白 (HDL)。依据血脂危险水平，临床最常见的异常脂蛋白血症类型：高胆固醇血症、高甘油三酯血症、混合型高脂血症和低高密度脂蛋白血症。继发性血脂异常见于糖尿病、甲状腺功能低下、肾病综合症、肾移植、严重肝病、阻塞性胆道疾病、肥胖症、饮酒、药物治疗，例如雌激素治疗等，如能排除继发性血脂异常可考虑原发性血脂异常。
“高血脂”是指血浆中的胆固醇、甘油三脂、磷脂和未脂化的脂酸等血脂成分增高的病理状况。
“高血脂相关病症”是指病因、发病机理、病理表现、临床症状和/或治疗原则与高血脂相关的病症。优选所述病症包括但不限于糖尿病、高血压、动脉粥样硬化、冠心病、心绞痛、心肌梗死、心律失常、慢性肝炎、脂肪肝、肝硬化，脑供血不足、脑缺血、脑梗死、慢性肾炎、慢性肾盂肾炎、肾功能不全、肾病综合征、尿毒症、肥胖症。
由于脂肪代谢或运转异常使血浆中一种或几种脂质异常称为“高脂血症”、“高血脂症”或“血脂异常”(dyslipidemia)。
由于脂质不溶或微溶于水，必须与蛋白质结合成脂蛋白才能在血液循环中运转，因此高脂血症常为“高脂蛋白血症”的反映。
本发明的“高血脂相关病症”也可称为“高脂血症相关病症”、“高脂蛋白血症相关病症”。
“脂肪肝”是指由于各种原因引起的肝细胞内脂肪堆积过多的病变，其可以是一个独立的疾病也可以由其它原因所致，例如肥胖性脂肪肝、酒精性脂肪肝、快速减肥性脂肪肝、营养不良性脂肪肝、糖尿病脂肪肝、药物性脂肪肝等。
在脂肪肝情况下，肝细胞中脂滴增多，使肝细胞脂肪变性、肿大，细胞核被挤压偏离中心。脂肪的代谢工要在线粒体中进行，脂肪向细胞外运输主要通过光面内质网，脂肪在肝细胞内的堆积进一步加重线粒体和内质网的负担降低其功能，进而影响其他营养素、激素、维生素的代谢。长期的肝细胞变性会导致肝细胞的再生障碍和坏死，进而形成肝纤维化、肝硬化。
“动脉粥样硬化”是一种慢性的、渐进性动脉疾病，发病时动脉中沉积的脂肪部分或全部堵塞血流。当原本光滑、坚实的动脉内膜变粗糙、增厚，并被脂肪、纤维蛋白、钙和细胞碎屑堵塞时，便出现动脉粥样硬化。动脉粥样硬化是个渐进的过程。当血液中的脂类浓度大大增加时，便会沿着动脉壁形成脂肪条纹。这些条纹会导致脂肪和胆固醇沉积，这些沉淀依附在原本平滑的动脉内膜上，从而形成小结。这些小结下面继而长出纤维化的瘢痕组织，导致钙沉积。沉积的钙逐渐演变为无法除去的白垩状坚硬薄膜 (称为动脉粥样斑)。动脉内部的这层永久薄膜会阻碍动脉的正常扩张和收缩，从而减缓了动脉内的血流速度，从而很容易形成血块，妨碍或阻止血液流经动脉。
人们尚未确定动脉粥样硬化的确切原因，但是人们已经发现了重要的致病因素：高脂血症、高血压、有吸烟史、有动脉粥样硬化家族史(60岁以前患上该病)或糖尿病。高脂血症能促进脂肪条纹的形成。因高血压对动脉施加一定的恒力，加速了动脉阻塞和硬化过程，因此能增加动脉粥样硬化的患病率。抽烟可以引致动脉收缩，限制血液流动，因而为动脉阻塞创造了条件。糖尿病也能促使动脉粥样硬化的发生，特别是对于很小的动脉。
仅就动脉粥样硬化症而言，人们感觉不到任何症状。仅当与体内的某个重要器官相连的动脉被堵塞后，才会发现此病。因该器官中的动脉受阻而引起的症状较为明显。例如，如果心脏供血动脉部分受阻，人们就可能感到心绞痛；但是如果完全被阻塞，就可能导致心脏病(由受阻动脉供血的心脏组织死亡)。如果动脉粥样硬化影响到脑部动脉，人们会感觉眩晕、视线模糊和晕厥，甚至可能导致中风(由受阻动脉供血的脑组织死亡，从而引起神经损伤，如受死亡脑组织控制的肢体出现瘫痪)。通向肾部的动脉受阻还可能导致肾衰竭。通向眼部的血管受阻可能导致失明。四肢动脉阻塞可能导致各肢体的病变。
动脉粥样硬化是冠心病、脑梗死、外周血管病的主要原因。脂质代谢障碍为动脉粥样硬化的病变基础，其特点是受累动脉病变从内膜开始，一般先有脂质和复合糖类积聚、出血及血栓形成，进而纤维组织增生及钙质沉着，并有动脉中层的逐渐蜕变和钙化，导致动脉壁增厚变硬、血管腔狭窄。病变常累及大中肌性动脉，一旦发展到足以阻塞动脉腔，则该动脉所供应的组织或器官将缺血或坏死。
动脉粥样硬化是一种全身性疾病，一个器官血管发生动脉粥样硬化病变，意味着其他地方的血管也可能已经存在同样的病变；同样，一个器官发生血管事件，意味着其他地方发生血管事件的危险性增加。
发明详述
纤溶酶是纤溶酶原激活系统(PA系统)的关键组分。它是一种广谱的蛋白酶，能够水解细胞外基质(ECM)的几个组分，包括纤维蛋白、明胶、纤连蛋白、层粘连蛋白和蛋白聚糖[9]。此外，纤溶酶能将一些金属蛋白酶前体(pro-MMPs)激活形成具有活性的金属蛋白酶(MMPs)。因此纤溶酶被认为是胞外蛋白水解作用的一个重要的上游调节物[10,11]。纤溶酶是由纤溶酶原通过两种生理性的PAs：组织型纤溶酶原激活剂(tPA)或尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)蛋白水解形成的。由于纤溶酶原在血浆和其他体液中相对水平较高，传统上认为PA系统的调节主要通过PAs的合成和活性水平实现。PA系统组分的合成受不同因素严格调节，如激素、生长因子和细胞因子。此外，还存在纤溶酶和PAs的特定生理抑制剂。纤溶酶的主要抑制剂是α2-抗纤溶酶(α2-antiplasmin)。PAs的活性同时被uPA和tPA的纤溶酶原激活剂抑制剂-1(PAI-1)抑制以及主要抑制uPA的溶酶原激活剂抑制剂-2(PAI-2)调节。某些细胞表面具有直接水解活性的uPA特异性细胞表面受体(uPAR)[12,13]。
纤溶酶原是一个单链糖蛋白，由791个氨基酸组成，分子量约为92 kDa[14,15]。纤溶酶原主要在肝脏合成，大量存在于胞外液中。血浆中纤溶酶原含量约为2μM。因此纤溶酶原是组织和体液中蛋白质水解活性的一个巨大的潜在来源[16,17]。纤溶酶原存在两种分子形式：谷氨酸-纤溶酶原(Glu- plasminogen)和赖氨酸-纤溶酶原(Lys-plasminogen)。天然分泌和未裂解形式的纤溶酶原具有一个氨基末端(N-末端)谷氨酸，因此被称为谷氨酸-纤溶酶原。然而，在纤溶酶存在时，谷氨酸-纤溶酶原在Lys76-Lys77处水解成为赖氨酸-纤溶酶原。与谷氨酸-纤溶酶原相比，赖氨酸-纤溶酶原与纤维蛋白具有更高的亲和力，并可以更高的速率被PAs激活。这两种形式的纤溶酶原的Arg560-Val561肽键可被uPA或tPA切割，导致二硫键连接的双链蛋白酶纤溶酶的形成[18]。纤溶酶原的氨基末端部分包含五个同源三环，即所谓的kringles，羧基末端部分包含蛋白酶结构域。一些kringles含有介导纤溶酶原与纤维蛋白及其抑制剂α2-AP特异性相互作用的赖氨酸结合位点。最新发现一个纤溶酶原为38kDa的片段，其中包括kringles1-4，是血管生成的有效抑制剂。这个片段被命名为血管抑素，可通过几个蛋白酶水解纤溶酶原产生。
纤溶酶的主要底物是纤维蛋白，纤维蛋白的溶解是预防病理性血栓形成的关键[19]。纤溶酶还具有对ECM几个组分的底物特异性，包括层粘连蛋白、纤连蛋白、蛋白聚糖和明胶，表明纤溶酶在ECM重建中也起着重要作用[15,20,21]。间接地，纤溶酶还可以通过转化某些蛋白酶前体为活性蛋白酶来降解ECM的其他组分，包括MMP-1，MMP-2，MMP-3和MMP-9。因此，有人提出，纤溶酶可能是细胞外蛋白水解的一个重要的上游调节器[22]。此外，纤溶酶具有激活某些潜在形式的生长因子的能力[23-25]。在体外，纤溶酶还能水解补体系统的组分并释放趋化补体片段。
“纤溶酶”是存在于血液中的一种非常重要的酶，能将纤维蛋白凝块水解为纤维蛋白降解产物和D-二聚体。
“纤溶酶原”是纤溶酶的酶原形式，根据swiss prot中的序列，按含有信号肽的天然人源纤溶酶原氨基酸序列(序列4)计算由810个氨基酸组成，分子量约为90kD，主要在肝脏中合成并能够在血液中循环的糖蛋白，编码该氨基酸序列的cDNA序列如序列3所示。全长的纤溶酶原包含七个结构域：位于C末端的丝氨酸蛋白酶结构域、N末端的Pan Apple(PAp)结构域以及5个Kringle结构域(Kringle1-5)。参照swiss prot中的序列，其信号肽包括残基Met1-Gly19，PAp包括残基Glu20-Val98，Kringle1包括残基Cys103-Cys181，Kringle2包括残基Glu184-Cys262，Kringle3包括残基 Cys275-Cys352，Kringle4包括残基Cys377-Cys454，Kringle5包括残基 Cys481-Cys560。根据NCBI数据，丝氨酸蛋白酶域包括残基Val581- Arg804。
Glu-纤溶酶原是天然全长的纤溶酶原，由791个氨基酸组成(不含有19 个氨基酸的信号肽)，编码该序列的cDNA序列如序列1所示，其氨基酸序列如序列2所示。在体内，还存在一种是从Glu-纤溶酶原的第76-77位氨基酸处水解从而形成的Lys-纤溶酶原，如序列6所示，编码该氨基酸序列的cDNA序列如序列5所示。Delta-纤溶酶原(δ-plasminogen)是全长纤溶酶原缺失了Kringle2-Kringle5结构的片段，仅含有Kringle1和丝氨酸蛋白酶域[26,27]，有文献报道了delta-纤溶酶原的氨基酸序列(序列8)[27]，编码该氨基酸序列的cDNA序列如序列7。小纤溶酶原(Mini-plasminogen)由 Kringle5和丝氨酸蛋白酶域组成，有文献报道其包括残基Val443-Asn791 (以不含有信号肽的Glu-纤溶酶原序列的Glu残基为起始氨基酸)[28]，其氨基酸序列如序列10所示，编码该氨基酸序列的cDNA序列如序列9所示。而微纤溶酶原(Micro-plasminogen)仅含有丝氨酸蛋白酶结构域，有文献报道其氨基酸序列包括残基Ala543-Asn791(以不含有信号肽的Glu-纤溶酶原序列的Glu残基为起始氨基酸)[29]，也有专利文献CN102154253A报道其序列包括残基Lys531-Asn791(以不含有信号肽的Glu-纤溶酶原序列的 Glu残基为起始氨基酸)，本专利序列参考专利文献CN102154253A，其氨基酸序列如序列12所示，编码该氨基酸序列的cDNA序列如序列11所示。
本发明的“纤溶酶”与“纤维蛋白溶酶”、“纤维蛋白溶解酶”可互换使用，含义相同；“纤溶酶原”与“纤溶酶原”、“纤维蛋白溶解酶原”可互换使用，含义相同。
在本申请中，所述纤溶酶原“缺乏”的含义为受试者体内纤溶酶原的含量或活性比正常人低，低至足以影响所述受试者的正常生理功能；所述纤溶酶原“缺失”的含义为受试者体内纤溶酶原的含量或活性显著低于正常人，甚至活性或表达极微，只有通过外源提供才能维持正常生理功能。
本领域技术人员可以理解，本发明纤溶酶原的所有技术方案适用于纤溶酶，因此，本发明描述的技术方案涵盖了纤溶酶原和纤溶酶。
在循环过程中，纤溶酶原采用封闭的非活性构象，但当结合至血栓或细胞表面时，在纤溶酶原激活剂(plasminogen activator，PA)的介导下，其转变为呈开放性构象的活性纤溶酶。具有活性的纤溶酶可进一步将纤维蛋白凝块水解为纤维蛋白降解产物和D-二聚体，进而溶解血栓。其中纤溶酶原的PAp结构域包含维持纤溶酶原处于非活性封闭构象的重要决定簇，而 KR结构域则能够与存在于受体和底物上的赖氨酸残基结合。已知多种能够作为纤溶酶原激活剂的酶，包括：组织纤溶酶原激活剂(tPA)、尿激酶纤溶酶原激活剂(uPA)、激肽释放酶和凝血因子XII(哈格曼因子)等。
“纤溶酶原活性片段”是指在纤溶酶原蛋白中，能够与底物中的靶序列结合并发挥蛋白水解功能的活性片段。本发明涉及纤溶酶原的技术方案涵盖了用纤溶酶原活性片段代替纤溶酶原的技术方案。本发明所述的纤溶酶原活性片段为包含纤溶酶原的丝氨酸蛋白酶域的蛋白质，优选，本发明所述的纤溶酶原活性片段包含序列14、与序列14具有至少80％、90％、95％、 96％、97％、98％、99％同源性的氨基酸序列的蛋白质。因此，本发明所述的纤溶酶原包括含有该纤溶酶原活性片段、并且仍然保持该纤溶酶原活性的蛋白。
目前，对于血液中纤溶酶原及其活性测定方法包括：对组织纤溶酶原激活剂活性的检测(t-PAA)、血浆组织纤溶酶原激活剂抗原的检测(t-PAAg)、对血浆组织纤溶酶原活性的检测(plgA)、血浆组织纤溶酶原抗原的检测 (plgAg)、血浆组织纤溶酶原激活剂抑制物活性的检测、血浆组织纤溶酶原激活剂抑制物抗原的检测、血浆纤维蛋白溶酶-抗纤维蛋白溶酶复合物检测 (PAP)。其中最常用的检测方法为发色底物法：向受检血浆中加链激酶(SK) 和发色底物，受检血浆中的PLG在SK的作用下，转变成PLM，后者作用于发色底物，随后用分光光度计测定，吸光度增加与纤溶酶原活性成正比。此外也可采用免疫化学法、凝胶电泳、免疫比浊法、放射免疫扩散法等对血液中的纤溶酶原活性进行测定。
“直系同源物或直系同系物(ortholog)”指不同物种之间的同源物，既包括蛋白同源物也包括DNA同源物，也称为直向同源物、垂直同源物。其具体指不同物种中由同一祖先基因进化而来的蛋白或基因。本发明的纤溶酶原包括人的天然纤溶酶原，还包括来源于不同物种的、具有纤溶酶原活性的纤溶酶原直系同源物或直系同系物。
“保守取代变体”是指其中一个给定的氨基酸残基改变但不改变蛋白质或酶的整体构象和功能，这包括但不限于以相似特性(如酸性，碱性，疏水性，等)的氨基酸取代亲本蛋白质中氨基酸序列中的氨基酸。具有类似性质的氨基酸是众所周知的。例如，精氨酸、组氨酸和赖氨酸是亲水性的碱性氨基酸并可以互换。同样，异亮氨酸是疏水氨基酸，则可被亮氨酸，蛋氨酸或缬氨酸替换。因此，相似功能的两个蛋白或氨基酸序列的相似性可能会不同。例如，基于MEGALIGN算法的70％至99％的相似度(同一性)。“保守取代变体”还包括通过BLAST或FASTA算法确定具有60％以上的氨基酸同一性的多肽或酶，若能达75％以上更好，最好能达85％以上，甚至达90％以上为最佳，并且与天然或亲本蛋白质或酶相比具有相同或基本相似的性质或功能。
“分离的”纤溶酶原是指从其天然环境分离和/或回收的纤溶酶原蛋白。在一些实施方案中，所述纤溶酶原会纯化(1)至大于90％、大于95％、或大于98％的纯度(按重量计)，如通过Lowry法所确定的，例如超过99％(按重量计)，(2)至足以通过使用旋转杯序列分析仪获得N端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度，或(3)至同质性，该同质性是通过使用考马斯蓝或银染在还原性或非还原性条件下的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)确定的。分离的纤溶酶原也包括通过生物工程技术从重组细胞制备，并通过至少一个纯化步骤分离的纤溶酶原。
术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用，指任何长度的氨基酸的聚合形式，其可以包括遗传编码的和非遗传编码的氨基酸，化学或生物化学修饰的或衍生化的氨基酸，和具有经修饰的肽主链的多肽。该术语包括融合蛋白，包括但不限于具有异源氨基酸序列的融合蛋白，具有异源和同源前导序列(具有或没有N端甲硫氨酸残基)的融合物；等等。
关于参照多肽序列的“氨基酸序列同一性百分数(％)”定义为在必要时引入缺口以实现最大百分比序列同一性后，且不将任何保守替代视为序列同一性的一部分时，候选序列中与参照多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分率。为测定百分比氨基酸序列同一性目的的对比可以以本领域技术范围内的多种方式实现，例如使用公众可得到的计算机软件，诸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员能决定用于比对序列的适宜参数，包括对所比较序列全长实现最大对比需要的任何算法。然而，为了本发明的目的，氨基酸序列同一性百分数值是使用序列比较计算机程序ALIGN-2产生的。
在采用ALIGN-2来比较氨基酸序列的情况中，给定氨基酸序列A相对于给定氨基酸序列B的％氨基酸序列同一性(或者可表述为具有或包含相对于、与、或针对给定氨基酸序列B的某一％氨基酸序列同一性的给定氨基酸序列A)如下计算：
分数X/Y乘100
其中X是由序列比对程序ALIGN-2在该程序的A和B比对中评分为相同匹配的氨基酸残基的数目，且其中Y是B中的氨基酸残基的总数。应当领会，在氨基酸序列A的长度与氨基酸序列B的长度不相等的情况下， A相对于B的％氨基酸序列同一性会不等于B相对于A的％氨基酸序列同一性。除非另有明确说明，本文中使用的所有％氨基酸序列同一性值都是依照上一段所述，使用ALIGN-2计算机程序获得的。
如本文中使用的，术语“治疗”和“处理”指获得期望的药理和/或生理效果。所述效果可以是完全或部分预防疾病或其症状，和/或部分或完全治愈疾病和/或其症状，并且包括：(a)预防疾病在受试者体内发生，所述受试者可以具有疾病的素因，但是尚未诊断为具有疾病；(b)抑制疾病，即阻滞其形成；和(c)减轻疾病和/或其症状，即引起疾病和/或其症状消退。
术语“个体”、“受试者”和“患者”在本文中可互换使用，指哺乳动物，包括但不限于鼠(大鼠、小鼠)、非人灵长类、人、犬、猫、有蹄动物(例如马、牛、绵羊、猪、山羊)等。
“治疗有效量”或“有效量”指在对哺乳动物或其它受试者施用以治疗疾病时足以实现对疾病的所述预防和/或治疗的纤溶酶原的量。“治疗有效量”会根据所使用的纤溶酶原、要治疗的受试者的疾病和/或其症状的严重程度以及年龄、体重等而变化。
本发明纤溶酶原的制备
纤溶酶原可以从自然界分离并纯化用于进一步的治疗用途，也可以通过标准的化学肽合成技术来合成。当通过化学合成多肽时，可以经液相或固相进行合成。固相多肽合成(SPPS)(其中将序列的C末端氨基酸附接于不溶性支持物，接着序贯添加序列中剩余的氨基酸)是适合纤溶酶原化学合成的方法。各种形式的SPPS，诸如Fmoc和Boc可用于合成纤溶酶原。用于固相合成的技术描述于Barany和Solid-Phase Peptide Synthesis；第3-284页于The Peptides:Analysis,Synthesis,Biology.第2卷：Special Methods in PeptideSynthesis,Part A.,Merrifield,等J.Am.Chem.Soc.,85:2149-2156 (1963)；Stewart等,Solid Phase Peptide Synthesis,2nd ed.Pierce Chem.Co., Rockford,Ill.(1984)；和Ganesan A.2006Mini Rev.Med Chem.6:3-10和 Camarero JA等2005Protein PeptLett.12:723-8中。简言之，用其上构建有肽链的功能性单元处理小的不溶性多孔珠。在偶联/去保护的重复循环后，将附接的固相游离N末端胺与单个受N保护的氨基酸单元偶联。然后，将此单元去保护，露出可以与别的氨基酸附接的新的N末端胺。肽保持固定在固相上，之后将其切掉。
可以使用标准重组方法来生产本发明的纤溶酶原。例如，将编码纤溶酶原的核酸插入表达载体中，使其与表达载体中的调控序列可操作连接。表达调控序列包括但不限于启动子(例如天然关联的或异源的启动子)、信号序列、增强子元件、和转录终止序列。表达调控可以是载体中的真核启动子系统，所述载体能够转化或转染真核宿主细胞(例如COS或CHO细胞)。一旦将载体掺入合适的宿主中，在适合于核苷酸序列的高水平表达及纤溶酶原的收集和纯化的条件下维持宿主。
合适的表达载体通常在宿主生物体中作为附加体或作为宿主染色体 DNA的整合部分复制。通常，表达载体含有选择标志物(例如氨苄青霉素抗性、潮霉素抗性、四环素抗性、卡那霉素抗性或新霉素抗性)以有助于对外源用期望的DNA序列转化的那些细胞进行检测。
大肠杆菌(Escherichia coli)是可以用于克隆主题抗体编码多核苷酸的原核宿主细胞的例子。适合于使用的其它微生物宿主包括杆菌，诸如枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)和其他肠杆菌科(enterobacteriaceae)，诸如沙门氏菌属(Salmonella)、沙雷氏菌属(Serratia)、和各种假单胞菌属(Pseudomonas)物种。在这些原核宿主中，也可以生成表达载体，其通常会含有与宿主细胞相容的表达控制序列(例如复制起点)。另外，会存在许多公知的启动子，诸如乳糖启动子系统，色氨酸(trp)启动子系统，beta-内酰胺酶启动子系统，或来自噬菌体λ的启动子系统。启动子通常会控制表达，任选在操纵基因序列的情况中，并且具有核糖体结合位点序列等，以启动并完成转录和翻译。
其他微生物，诸如酵母也可用于表达。酵母(例如酿酒酵母(S. cerevisiae))和毕赤酵母(Pichia)是合适的酵母宿主细胞的例子，其中合适的载体根据需要具有表达控制序列(例如启动子)、复制起点、终止序列等。典型的启动子包含3-磷酸甘油酸激酶和其它糖分解酶。诱导型酵母启动于特别包括来自醇脱氢酶、异细胞色素C、和负责麦芽糖和半乳糖利用的酶的启动子。
在微生物外，哺乳动物细胞(例如在体外细胞培养物中培养的哺乳动物细胞)也可以用于表达并生成本发明的抗-Tau抗体(例如编码主题抗-Tau抗体的多核苷酸)。参见Winnacker,From Genes to Clones,VCH Publishers, N.Y.,N.Y.(1987)。合适的哺乳动物宿主细胞包括CHO细胞系、各种Cos 细胞系、HeLa细胞、骨髓瘤细胞系、和经转化的B细胞或杂交瘤。用于这些细胞的表达载体可以包含表达控制序列，如复制起点，启动子和增强子(Queen等,Immunol.Rev.89:49(1986))，以及必需的加工信息位点，诸如核糖体结合位点，RNA剪接位点，多聚腺苷酸化位点，和转录终止子序列。合适的表达控制序列的例子是白免疫球蛋白基因、SV40、腺病毒、牛乳头瘤病毒、巨细胞病毒等衍生的启动子。参见Co等,J.Immunol.148:1149 (1992)。
一旦合成(化学或重组方式)，可以依照本领域的标准规程，包括硫酸铵沉淀，亲和柱，柱层析，高效液相层析(HPLC)，凝胶电泳等来纯化本发明所述的纤溶酶原。该纤溶酶原是基本上纯的，例如至少约80％至85％纯的，至少约85％至90％纯的，至少约90％至95％纯的，或98％至99％纯的或更纯的，例如不含污染物，所述污染物如细胞碎片，除主题抗体以外的大分子，等等。
药物配制剂
可以通过将具有所需纯度的纤溶酶原与可选的药用载体，赋形剂，或稳定剂(Remington's Pharmaceutical Sciences,16版，Osol,A.ed.(1980))混合形成冻干制剂或水溶液制备治疗配制剂。可接受的载体、赋形剂、稳定剂在所用剂量及浓度下对受者无毒性，并包括缓冲剂例如磷酸盐，柠檬酸盐及其它有机酸；抗氧化剂包括抗坏血酸和蛋氨酸；防腐剂(例如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化己烷双胺；氯化苄烷铵(benzalkoniumchloride)，苯索氯铵；酚、丁醇或苯甲醇；烷基对羟基苯甲酸酯如甲基或丙基对羟基苯甲酸酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；间甲酚)；低分子量多肽 (少于约10个残基)；蛋白质如血清白蛋白，明胶或免疫球蛋白；亲水聚合物如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸如甘氨酸，谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖，二糖及其它碳水化合物包括葡萄糖、甘露糖、或糊精；螯合剂如EDTA；糖类如蔗糖、甘露醇、岩藻糖或山梨醇；成盐反离子如钠；金属复合物(例如锌-蛋白复合物)；和/或非离子表面活性剂，例如TWEENTM，PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。优选冻干的抗-VEGF 抗体配制剂在WO 97/04801中描述，其包含在本文中作为参考。
本发明的配制剂也可含有需治疗的具体病症所需的一种以上的活性化合物，优选活性互补并且相互之间没有副作用的那些。例如，抗高血压的药物，抗心律失常的药物，治疗糖尿病的药物等。
本发明的纤溶酶原可包裹在通过诸如凝聚技术或界面聚合而制备的微胶囊中，例如，可置入在胶质药物传送系统(例如，脂质体，白蛋白微球，微乳剂，纳米颗粒和纳米胶囊)中或置入粗滴乳状液中的羟甲基纤维素或凝胶-微胶囊和聚-(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊中。这些技术公开于Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition,Osol,A.Ed.(1980)。
用于体内给药的本发明的纤溶酶原必需是无菌的。这可以通过在冷冻干燥和重新配制之前或之后通过除菌滤膜过滤而轻易实现。
本发明的纤溶酶原可制备缓释制剂。缓释制剂的适当实例包括具有一定形状且含有糖蛋白的固体疏水聚合物半通透基质，例如膜或微胶囊。缓释基质实例包括聚酯、水凝胶(如聚(2-羟基乙基-异丁烯酸酯)(Langer等，J. Biomed.Mater.Res.,15:167-277(1981)；Langer,Chem.Tech.,12:98- 105(1982))或聚(乙烯醇)，聚交酯(美国专利3773919,EP 58,481)，L-谷氨酸与γ乙基-L-谷氨酸的共聚物(Sidman，等，Biopolymers 22:547(1983))，不可降解的乙烯－乙烯乙酸酯(ethylene-vinyl acetate)(Langer，等，出处同上)，或可降解的乳酸-羟基乙酸共聚物如Lupron DepotTM(由乳酸-羟基乙酸共聚物和亮氨酰脯氨酸(leuprolide)乙酸酯组成的可注射的微球体)，以及聚D-(-)- 3-羟丁酸。聚合物如乙烯-乙酸乙烯酯和乳酸-羟基乙酸能持续释放分子100 天以上，而一些水凝胶释放蛋白的时间却较短。可以根据相关机理来设计使蛋白稳定的合理策略。例如，如果发现凝聚的机理是通过硫代二硫键互换而形成分子间S-S键，则可通过修饰巯基残基、从酸性溶液中冻干、控制湿度、采用合适的添加剂、和开发特定的聚合物基质组合物来实现稳定。
给药和剂量
可以通过不同方式，例如通过静脉内，腹膜内，皮下，颅内，鞘内，动脉内(例如经由颈动脉)，肌内来实现本发明药物组合物的施用。
用于胃肠外施用的制备物包括无菌水性或非水性溶液、悬浮液和乳剂。非水性溶剂的例子是丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄榄油，和可注射有机酯，如油酸乙酯。水性载体包括水、醇性/水性溶液、乳剂或悬浮液，包括盐水和缓冲介质。胃肠外媒介物包含氯化钠溶液、林格氏右旋糖、右旋糖和氯化钠、或固定油。静脉内媒介物包含液体和营养补充物、电解质补充物，等等。也可以存在防腐剂和其他添加剂，诸如例如，抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂、和惰性气体，等等。
医务人员会基于各种临床因素确定剂量方案。如医学领域中公知的，任一患者的剂量取决于多种因素，包括患者的体型、体表面积、年龄、要施用的具体化合物、性别、施用次数和路径、总体健康、和同时施用的其它药物。本发明包含纤溶酶原的药物组合物的剂量范围可以例如为例如每天约0.0001至2000mg/kg，或约0.001至500mg/kg(例如0.02mg/kg，0.25 mg/kg，0.5mg/kg，0.75mg/kg，10mg/kg，50mg/kg等等)受试者体重。例如，剂量可以是1mg/kg体重或50mg/kg体重或在1-50mg/kg的范围，或至少1mg/kg。高于或低于此例示性范围的剂量也涵盖在内，特别是考虑到上述的因素。上述范围中的中间剂量也包含在本发明的范围内。受试者可以每天、隔天、每周或根据通过经验分析确定的任何其它日程表施用此类剂量。例示性的剂量日程表包括连续几天1-10mg/kg。在本发明的药物施用过程中需要实时评估治疗效果和安全性。
制品或药盒
本发明的一个实施方案涉及一种制品或药盒，其包含可用于治疗由糖尿病引起的心血管病及其相关病症的本发明纤溶酶原或纤溶酶。所述制品优选包括一个容器，标签或包装插页。适当的容器有瓶子，小瓶，注射器等。容器可由各种材料如玻璃或塑料制成。所述容器含有组合物，所述组合物可有效治疗本发明的疾病或病症并具有无菌入口(例如所述容器可为静脉内溶液包或小瓶，其含有可被皮下注射针穿透的塞子的)。所述组合物中至少一种活性剂为纤溶酶原/纤溶酶。所述容器上或所附的标签说明所述组合物用于治疗本发明所述由糖尿病引起的心血管病及其相关病症。所述制品可进一步包含含有可药用缓冲液的第二容器，诸如磷酸盐缓冲的盐水，林格氏溶液以及葡萄糖溶液。其可进一步包含从商业和使用者角度来看所需的其它物质，包括其它缓冲液，稀释剂，过滤物，针和注射器。此外，所述制品包含带有使用说明的包装插页，包括例如指示所述组合物的使用者将纤溶酶原组合物以及治疗伴随的疾病的其它药物给药患者。
附图简述
图1 24-25周糖尿病小鼠给予纤溶酶原35天后肝脏油红O染色图片。结果显示，给纤溶酶原组小鼠肝脏的脂质沉积面积要显著小于给溶媒PBS 对照组，且统计差异显著(*表示P<0.05)。说明纤溶酶原能减少脂肪在糖尿病小鼠肝脏中的沉积。
图2 ApoE动脉粥样硬化模型小鼠给予纤溶酶原30天后肝脏油红O染色代表性图片。A为给溶媒PBS对照组，B为给纤溶酶原组，C为定量分析结果。结果显示，给纤溶酶原组小鼠肝脏脂肪沉积明显少于给溶媒PBS 对照组，且定量分析统计差异显著(*表示P<0.05)。说明纤溶酶原能减少脂肪在动脉粥样硬化模型小鼠肝脏中的沉积。
图3 16周高脂血症模型小鼠给予纤溶酶原30天后肝脏油红O染色观察结果。A为给溶媒PBS对照组，B为给纤溶酶原组，C为定量分析结果。结果显示，给纤溶酶原组小鼠肝脏脂肪沉积明显少于给溶媒PBS对照组，且定量分析统计差异显著(*表示P<0.05)。说明纤溶酶原能改善脂肪在高脂血症模型小鼠肝脏中的沉积。
图4 16周高脂血症模型小鼠给予纤溶酶原30天后主动脉窦油红O染色观察结果。A、C为给溶媒PBS对照组，B、D为给纤溶酶原组，E为定量分析结果。结果显示，给纤溶酶原组小鼠主动脉窦脂肪沉积明显少于给溶媒PBS对照组，且统计差异显著(*表示P<0.05)。说明纤溶酶原能改善脂肪在高脂血症模型小鼠主动脉窦中的沉积。
图5 16周高脂血症模型小鼠给予纤溶酶原30天后主动脉窦HE染色代表性图片。A、C为给溶媒PBS对照组，B、D为给纤溶酶原组。结果显示，给溶媒PBS对照组主动脉管壁可见泡沫细胞沉积(箭头所指)，斑块沉积严重；给纤溶酶原组主动脉管壁仅可见轻度的泡沫细胞沉积，且内膜下未见明显的粥样斑块沉积，给纤溶酶原组主动脉损伤较轻。说明纤溶酶原能改善高脂血症模型小鼠主动脉窦内壁由于脂质沉积所导致的损伤。
图6 16周高脂血症模型小鼠给予纤溶酶原30天后心脏纤维蛋白免疫组化染色图片。A为给溶媒PBS对照组，B为给纤溶酶原组，C为定量分析结果。结果显示，给纤溶酶原组小鼠心脏纤维蛋白的阳性表达明显少于给溶媒PBS对照组，且统计差异显著(*表示P<0.05)。说明纤溶酶原能减少高血脂所致的心脏损伤。
图7 16周高脂血症模型小鼠给予纤溶酶原30天后心脏IgM免疫染色代表性图片。A为给溶媒PBS对照组，B为给纤溶酶原组。结果显示，给纤溶酶原组小鼠心脏IgM的阳性表达明显少于给溶媒PBS对照组，说明纤溶酶原能减轻高血脂所致心脏损伤。
图8 16周高脂血症模型小鼠给予纤溶酶原30天后心脏天狼星红染色代表性图片。A为给溶媒PBS对照组，B为给纤溶酶原组。结果显示，给纤溶酶原组胶原的沉积明显少于给溶媒PBS对照组，说明纤溶酶原能减轻高脂血症模型小鼠心脏纤维化。
图9 16周高脂血症模型小鼠给予纤溶酶原30天后血清肌钙蛋白检测结果。结果显示，给溶媒PBS对照组血清心肌肌钙蛋白浓度明显高于给纤溶酶原组，且统计差异显著(*表示P<0.05)。说明纤溶酶原能显著修复高血脂心脏的损伤。
图10 3％胆固醇高脂血症模型小鼠给予纤溶酶原10天和20天后血清高密度脂蛋白胆固醇检测结果。结果显示，给予纤溶酶原后给纤溶酶原组小鼠血清HDL-C浓度明显高于给溶媒PBS对照组，且二者在给药10天和20 天后高密度脂蛋白浓度均统计差异极显著(**表示P<0.01)。说明纤溶酶原能有效提高高脂血症模型小鼠血清中高密度脂蛋白胆固醇的含量，改善高脂血症模型小鼠血脂紊乱。
图11 3％胆固醇高脂血症模型小鼠给予纤溶酶原20天后血清总胆固醇检测结果。结果显示，给纤溶酶原组小鼠总胆固醇浓度明显低于给溶媒 PBS对照组，且统计差异显著(*表示P<0.05)。说明纤溶酶原能降低高脂血症模型小鼠血清中总胆固醇的含量，具有降低血脂的功能。
图12 3％胆固醇高脂血症模型小鼠给予纤溶酶原20天后血清低密度脂蛋白胆固醇检测结果。结果显示，给纤溶酶原组小鼠LDL-C浓度明显低于给溶媒PBS对照组，且统计差异显著(*表示P<0.05)。说明纤溶酶原能降低高脂血症模型小鼠血清中低密度脂蛋白胆固醇的含量，具有改善高血脂的功能。
图13 3％胆固醇高脂血症模型小鼠给予纤溶酶原20天后血清动脉粥样硬化指数检测结果。结果显示，给纤溶酶原组小鼠动脉粥样硬化指数明显低于给溶媒PBS对照组，且统计差异极显著(**表示P<0.01)。说明纤溶酶原能有效降低高脂血症模型小鼠发生动脉粥样硬化的风险。
图14 3％胆固醇高脂血症模型小鼠给予纤溶酶原20天后血清心脏风险险指数结果。结果显示，给纤溶酶原组CRI明显小于给溶媒PBS对照组，且统计差异极其显著(**表示P<0.01)。说明纤溶酶原能有效的降低高脂血症模型小鼠发生心脏疾病的风险。
图15 24-25周龄糖尿病小鼠给予纤溶酶原31天后主动脉HE染色图片。 A、C为给溶媒PBS对照组，B、D为给纤溶酶原组。结果显示，给溶媒 PBS对照组血管管壁有泡沫细胞沉积(箭头标识)，中层弹性膜排列紊乱，血管壁增厚，管壁凸凹不均；给纤溶酶原组中层弹性膜结构规则，呈波浪形，血管管壁厚度均匀。表明注射纤溶酶原对糖尿病所致的主动脉损伤具有一定的修复作用。
图16 26周龄糖尿病小鼠给予纤溶酶原35天后心室油红O染色代表性图片。A为给溶媒PBS对照组，B为给纤溶酶原组。结果显示，给纤溶酶原组小鼠心室脂质沉积(箭头标识)明显少于给溶媒PBS对照组。说明纤溶酶原能减少糖尿病小鼠心室脂质沉积，促进心室损伤的修复。
图17 26周龄糖尿病小鼠给予纤溶酶原35天后血清中高密度脂蛋白胆固醇的含量检测结果。结果显示，在对糖尿病小鼠连续注射人源纤溶酶源 35天后，给纤溶酶原组小鼠血清中HDL-C的含量高于给溶媒PBS对照组，且统计差异显著。说明注射纤溶酶原能促进血清高密度脂蛋白胆固醇的含量升高，改善糖尿病小鼠血脂紊乱。
图18 24-25周龄糖尿病小鼠给予纤溶酶原31天后血清中低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量检测结果。结果显示，糖尿病模型小鼠连续注射人源纤溶酶源31天后，给纤溶酶原组小鼠血清中的LDL-C含量低于给溶媒PBS对照组，统计差异接近显著(P＝0.1)。说明纤溶酶原能降低糖尿病小鼠血清中低密度脂蛋白胆固醇的含量。
图19 ApoE动脉粥样硬化模型小鼠给予纤溶酶原30天后血清总胆固醇检测结果。结果显示，给纤溶酶原组小鼠总胆固醇浓度明显低于给溶媒 PBS对照组，且统计差异显著(*表示P<0.05)。说明纤溶酶原能降低 ApoE动脉粥样硬化模型小鼠血清中总胆固醇的含量，改善动脉粥样硬化模型小鼠血脂紊乱。
图20 ApoE动脉粥样硬化模型小鼠给予纤溶酶原30天后血清甘油三酯检测结果。结果显示，给纤溶酶原组小鼠甘油三酯浓度明显低于给溶媒 PBS对照组，且统计差异显著(*表示P<0.05)。说明纤溶酶原能够降低 ApoE动脉粥样硬化模型小鼠血清中甘油三酯的含量，改善动脉粥样硬化模型小鼠血脂紊乱。
图21 ApoE动脉粥样硬化模型小鼠给予纤溶酶原30天后血清低密度脂蛋白胆固醇检测结果。结果显示，给纤溶酶原组小鼠LDL-C浓度明显低于给溶媒PBS对照组，且统计差异显著(*表示P<0.05)。说明纤溶酶原能降低ApoE动脉粥样硬化模型小鼠血清中低密度脂蛋白胆固醇的含量，改善动脉粥样硬化模型小鼠血脂紊乱。
图22 ApoE动脉粥样硬化模型小鼠给予纤溶酶原30天后主动脉窦油红 O染色代表性图片。A为给溶媒PBS对照组，B为给纤溶酶原组。结果显示，给纤溶酶原组小鼠主动脉窦脂肪沉积明显少于给溶媒PBS对照组。说明纤溶酶原能改善脂肪在动脉粥样硬化模型小鼠主动脉窦中的沉积。
图23 16周龄高脂血症模型小鼠给予纤溶酶原30天后主动脉窦天狼星红染色代表性图片。A、C为给溶媒PBS对照组，B、D为给纤溶酶原组。结果显示，给纤溶酶原组主动脉窦血管内壁胶原蛋白沉积(箭头标识)的面积明显小于给溶媒PBS对照组，说明纤溶酶原能消减高脂血症模型小鼠主动脉窦纤维化水平。
图24 ApoE动脉粥样硬化模型小鼠给予纤溶酶原30天后心脏系数统计结果。结果显示，给纤溶酶原组小鼠心脏脏器系数明显低于给溶媒PBS对照组。说明纤溶酶原能改善ApoE动脉粥样硬化模型小鼠心脏损伤所致的心脏代偿性肥大。
图25给予纤溶酶原30天后3％胆固醇高脂血症模型小鼠肾脏天狼星红染色观察结果。A为空白对照组，B为给溶媒PBS对照组，C为给纤溶酶原组，D为定量分析结果。结果显示，给纤溶酶原组肾脏胶原蛋白沉积 (箭头标识)明显少于给溶媒PBS对照组，且统计差异显著；给纤溶酶原组纤维化基本恢复到正常水平。说明纤溶酶原能有效减少3％胆固醇高脂血症模型小鼠肾脏纤维化。
图26给予纤溶酶原30天后3％胆固醇高脂血症模型小鼠肾脏油红O观察结果。A为空白对照组，B为给溶媒PBS对照组，C为给纤溶酶原组，D 为定量分析结果。结果显示，给纤溶酶原组小鼠肾脏脂肪沉积(箭头标识) 明显少于给溶媒PBS对照组，且定量分析统计差异显著；此外，给纤溶酶原组脂质沉积水平与空白对照组小鼠相似。说明纤溶酶原能消减脂肪在高脂血症模型小鼠肾脏中的沉积，从而减少脂肪沉积所致的肾脏损伤。
实施例
实施例1纤溶酶原改善糖尿病小鼠肝脏脂质沉积
24-25周龄雄性db/db小鼠10只，随机分为两组，给溶媒PBS对照组和给纤溶酶原组各5只。实验开始当天记为第0天并称重分组，第1天开始给纤溶酶原或PBS。给纤溶酶原组小鼠按2mg/0.2ml/只/天尾静脉注射纤溶酶原，给溶媒PBS对照组尾静脉注射给予相同体积的PBS，连续给药35 天。在第36天处死小鼠取肝脏组织4％多聚甲醛固定24-48小时，分别于15％、30％蔗糖中4℃过夜沉底，OCT包埋，冰冻切片厚度8μm，油红O 染色15min，75％酒精分化5秒，苏木素染核30s，甘油明胶封片。切片在 200倍光学显微镜下观察。
染色结果显示，给纤溶酶原组(图1B)小鼠肝脏的脂质沉积面积显著小于给溶媒PBS对照组(图1A)，且统计差异显著(P＝0.02)(图1C)。说明纤溶酶原能减少脂肪在糖尿病小鼠肝脏中的沉积。
实施例2纤溶酶原改善ApoE动脉粥样硬化小鼠肝脏脂质沉积
6周龄雄性ApoE小鼠13只饲喂高脂高胆固醇饲料(南通特洛菲， TP2031)16周以诱导动脉粥样硬化模型[30,31]。成模后的小鼠继续饲喂高脂高胆固醇饲料。在给药前三天每只取血50μl以检测总胆固醇(T-CHO)含量，并根据T-CHO含量随机分为两组，给溶媒PBS对照组7只，给纤溶酶原组6只。开始给药记为第1天，给纤溶酶原组小鼠尾静脉注射人源纤溶酶原1mg/0.1ml/只/天，给溶媒PBS对照组尾静脉注射同体积的PBS，给药 30天。于第31天处死小鼠，取材肝脏组织于4％多聚甲醛固定24-48小时，分别于15％、30％蔗糖中4℃过夜沉底，OCT包埋，冰冻切片厚度8μm，油红O染色15min，75％酒精分化5秒，苏木素染核30s，甘油明胶封片。切片在200倍光学显微镜下观察。
染色结果显示，给纤溶酶原组(图2B)小鼠肝脏脂肪沉积明显少于给溶媒PBS对照组(图2A)，且定量分析统计差异显著(P＝0.02)(图 2C)。说明纤溶酶原能减少脂肪在动脉粥样硬化模型小鼠肝脏中的沉积。
实施例3纤溶酶原消减脂肪在16周高脂血症模型小鼠肝脏中的沉积
6周龄雄性C57小鼠11只饲喂高脂高胆固醇饲料(南通特洛菲，货号 TP2031)16周以诱导高脂血症模型[32,33]，此模型定为16周高脂血症模型。成模后的小鼠继续饲喂高胆固醇饲料。在给药前三天每只取血50μl以检测总胆固醇(T-CHO)含量，并根据T-CHO含量随机分为两组，给溶媒PBS 对照组6只，给纤溶酶原组5只。开始给药记为第1天，给纤溶酶原组尾静脉注射人源纤溶酶原1mg/0.1ml/只/天，给溶媒PBS对照组尾静脉注射同体积的PBS。给药30天，并于第31天处死小鼠，取肝脏于4％多聚甲醛固定24-48小时，分别于15％、30％蔗糖中4℃过夜沉底，OCT包埋，冰冻切片厚度8μm，油红O染色15min，75％酒精分化5秒，苏木素染核30s，甘油明胶封片。切片在200倍光学显微镜下观察。
油红O染色可显示脂质沉积，反映脂质沉积的程度[34]。结果显示，给纤溶酶原组(图3B)小鼠肝脏脂肪沉积明显少于给溶媒PBS对照组(图 3A)，且定量分析统计差异显著(图1C)。说明纤溶酶原能消减脂肪在高脂血症模型小鼠肝脏中的沉积。
实施例4纤溶酶原减少脂质在16周高脂血症模型小鼠主动脉窦中的沉积
6周龄雄性C57小鼠11只饲喂高脂高胆固醇饲料(南通特洛菲，货号 TP2031)16周以诱导高脂血症模型[32,33]，此模型定为16周高脂血症模型。成模后的小鼠继续饲喂高胆固醇饲料。在给药前三天每只取血50μl以检测总胆固醇(T-CHO)含量，并根据T-CHO含量随机分为两组，给溶媒PBS 对照组6只，给纤溶酶原组5只。开始给药记为第1天，给纤溶酶原组尾静脉注射人源纤溶酶原1mg/0.1ml/只/天，给溶媒PBS对照组尾静脉注射同体积的PBS。给药30天，并于第31天处死小鼠，取心脏组织于4％多聚甲醛固定24-48小时，分别于15％、30％蔗糖中4℃过夜沉底，OCT包埋，主动脉窦冰冻切片厚度8μm，油红O染色15min，75％酒精分化5秒，苏木素染核30s，甘油明胶封片。切片在40(图4A、4B)、200倍(图4C、 4D)倍光学显微镜下观察。
结果显示，给纤溶酶原组(图4B、4D)小鼠主动脉窦脂肪沉积明显少于给溶媒PBS对照组(图4A、4C)，且统计差异显著(图2E)。说明纤溶酶原能减少脂质在高脂血症模型小鼠主动脉窦中的沉积。
实施例5纤溶酶原改善16周高脂血症模型小鼠主动脉窦损伤
6周龄雄性C57小鼠11只饲喂高脂高胆固醇饲料(南通特洛菲，货号TP2031)16周以诱导高脂血症模型[32,33]，此模型定为16周高脂血症模型。成模后的小鼠继续饲喂高胆固醇饲料。在给药前三天每只取血50μl以检测总胆固醇(T-CHO)含量，并根据T-CHO含量随机分为两组，给溶媒PBS 对照组6只，给纤溶酶原组5只。开始给药记为第1天，给纤溶酶原组尾静脉注射人源纤溶酶原1mg/0.1ml/只/天，给溶媒PBS对照组尾静脉注射同体积的PBS。给药30天，并于第31天处死小鼠，取心脏组织于4％多聚甲醛固定24-48小时。固定后的组织经酒精梯度脱水和二甲苯透明后进行石蜡包埋。固定后的组织样本经酒精梯度脱水和二甲苯透明后进行石蜡包埋。主动脉窦组织切片厚度为3μm，切片脱蜡复水并用苏木素和伊红染色(HE染色)，1％盐酸酒精分化后氨水返蓝并酒精梯度脱水封片，切片在40(图 5A、B)、200倍(图5C、D)光学显微镜下观察。
结果显示，给溶媒PBS对照组(图3A、C)主动脉窦内壁泡沫细胞沉积(箭头所指)，斑块沉积重；给纤溶酶原组(图3B、D)主动脉窦内壁仅可见轻度的泡沫细胞沉积，且内膜下未见明显的粥样斑块沉积，给纤溶酶原组主动脉窦内壁损伤较轻。说明纤溶酶原能改善高脂血症模型小鼠动脉窦内壁损伤。
实施例6纤溶酶原降低16周高脂血症模型小鼠心脏纤维蛋白的表达
6周龄雄性C57小鼠11只饲喂高脂高胆固醇饲料(南通特洛菲，货号 TP2031)16周以诱导高脂血症模型[32,33]，此模型定为16周高脂血症模型。成模后的小鼠继续饲喂高胆固醇饲料。在给药前三天每只取血50μl以检测总胆固醇(T-CHO)含量，并根据T-CHO含量随机分为两组，给溶媒PBS 对照组6只，给纤溶酶原组5只。开始给药记为第1天，给纤溶酶原组尾静脉注射人源纤溶酶原1mg/0.1ml/只/天，给溶媒PBS对照组尾静脉注射同体积的PBS。给药30天，并于第31天处死小鼠，取心脏组织于4％多聚甲醛固定24-48小时。固定后的组织经酒精梯度脱水和二甲苯透明后进行石蜡包埋。组织切片厚度为3μm，切片脱蜡复水后水洗1次。以3％双氧水孵育 15分钟，水洗2次，每次5分钟。5％的正常羊血清液(Vectorlaboratories,Inc.,USA)封闭30分钟；时间到后，弃除羊血清液，用PAP笔圈出组织。以3％双氧水孵育15分钟，水洗2次，每次5分钟。兔抗小鼠纤维蛋白抗体(Abcam)4℃孵育过夜，0.01MPBS洗2次，每次5分钟。山羊抗兔IgG(HRP)抗体(Abcam)二抗室温孵育1小时，PBS洗2次，每次5分钟。按DAB试剂盒(Vector laboratories,Inc.,USA)显色，水洗3次后苏木素复染30秒，流水冲洗5分钟。梯度酒精脱水、二甲苯透明并中性树胶封片，切片在200倍光学显微镜下观察。
纤维蛋白原是纤维蛋白的前体，在组织存在损伤的情况下，作为机体对损伤的一种应激反应，纤维蛋白原水解成纤维蛋白沉积在损伤部位[35,36]。因此，可将损伤局部纤维蛋白水平作为损伤程度的一个标志。
免疫组化染色结果显示，给纤溶酶原组小鼠(图6B)心脏纤维蛋白的阳性表达明显少于给溶媒PBS对照组(图6A)，且统计差异显著(图6C)，说明纤溶酶原能减少高血脂所致的心肌损伤。
实施例7纤溶酶原有效保护16周高脂血症模型小鼠心肌损伤
6周龄雄性C57小鼠11只饲喂高脂高胆固醇饲料(南通特洛菲，货号 TP2031)16周以诱导高脂血症模型[32,33]，此模型定为16周高脂血症模型。成模后的小鼠继续饲喂高胆固醇饲料。在给药前三天每只取血50μl以检测总胆固醇(T-CHO)含量，并根据T-CHO含量随机分为两组，给溶媒PBS 对照组6只，给纤溶酶原组5只。开始给药记为第1天，给纤溶酶原组尾静脉注射人源纤溶酶原1mg/0.1ml/只/天，给溶媒PBS对照组尾静脉注射同体积的PBS。给药30天，并于第31天处死小鼠，取心脏组织于4％多聚甲醛固定24-48小时。固定后的组织经酒精梯度脱水和二甲苯透明后进行石蜡包埋。组织切片厚度为3μm，切片脱蜡复水后水洗1次。以3％双氧水孵育15分钟，水洗2次，每次5分钟。5％的正常羊血清液(Vectorlaboratories,Inc.,USA)封闭30分钟；时间到后，弃除羊血清液，用PAP笔圈出组织。以3％双氧水孵育15分钟，水洗2次，每次5分钟。山羊抗鼠 IgM(HRP)抗体(Abcam)室温孵育1小时，PBS洗2次，每次5分钟。按 DAB试剂盒(Vector laboratories,Inc.,USA)显色，水洗3次后苏木素染核 30秒，流水冲洗5分钟。梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，切片在200倍光学显微镜下观察。
IgM抗体在清除凋亡和坏死细胞过程中发挥着重要作用，损伤的组织器官局部IgM抗体的水平与损伤程度呈正相关[37,38]。因此，检测组织器官局部IgM抗体的水平能够反映该组织器官的损伤程度。
免疫染色结果显示，给纤溶酶原组小鼠(图7B)心脏IgM的阳性表达明显少于给溶媒PBS对照组(图7A)，说明纤溶酶原能减少高脂血症模型动物心脏的损伤。
实施例8纤溶酶原减轻16周高脂血症模型小鼠心脏纤维化
6周龄雄性C57小鼠11只饲喂高脂高胆固醇饲料(南通特洛菲，货号 TP2031)16周以诱导高脂血症模型[32,33]，此模型定为16周高脂血症模型。成模后的小鼠继续饲喂高胆固醇饲料。在给药前三天每只取血50μl以检测总胆固醇(T-CHO)含量，并根据T-CHO含量随机分为两组，给溶媒PBS 对照组6只，给纤溶酶原组5只。开始给药记为第1天，给纤溶酶原组尾静脉注射人源纤溶酶原1mg/0.1ml/只/天，给溶媒PBS对照组尾静脉注射同体积的PBS。给药30天，并于第31天处死小鼠，取心脏组织于4％多聚甲醛固定24-48小时。固定后的组织经酒精梯度脱水和二甲苯透明后进行石蜡包埋。组织切片厚度为3μm，切片脱蜡复水后水洗1次，以0.1％天狼星红饱和苦味酸染色30分钟后，流水冲洗2min，苏木素染色1分钟，流水冲洗，1％盐酸酒精分化，氨水返蓝，流水冲洗，烘干后中性树胶封片，在200倍光学显微镜下观察。
天狼星红染色可使胶原持久染色，作为病理切片特殊染色方法，天狼星红染色可以特异显示胶原组织。
染色结果显示，给纤溶酶原组(图8B)胶原的沉积明显少于给溶媒 PBS对照组(图8A)，说明纤溶酶原能减轻高脂血症模型小鼠心脏组织胶原蛋白的沉积，减轻心肌纤维化。
实施例9纤溶酶原修复16周高脂血症模型小鼠心肌损伤
6周龄雄性C57小鼠11只饲喂高脂高胆固醇饲料(南通特洛菲，货号 TP2031)16周以诱导高脂血症模型[32,33]，此模型定为16周高脂血症模型。成模后的小鼠继续饲喂高胆固醇饲料。在给药前三天每只取血50μl以检测总胆固醇(T-CHO)含量，并根据T-CHO含量随机分为两组，给溶媒PBS 对照组6只，给纤溶酶原组5只。开始给药记为第1天，给纤溶酶原组尾静脉注射人源纤溶酶原1mg/0.1ml/只/天，给溶媒PBS对照组尾静脉注射同体积的PBS。给药30天，第30天给药后小鼠开始禁食，禁食16小时，第31天摘眼球取血，离心获得上清，采用心肌肌钙蛋白(Cardiac troponin I,CTNI)检测试剂盒(南京建成)检测血清中肌钙蛋白的浓度。
心肌肌钙蛋白I是心肌损伤的重要标志物，其血清浓度能够反映心肌损伤的程度[39]。
检测结果显示，给溶媒PBS对照组血清心肌肌钙蛋白浓度明显高于给纤溶酶原组，且统计差异显著(图9)。说明纤溶酶原能显著改善高脂血症模型小鼠心脏损伤。
实施例10纤溶酶原提高3％胆固醇高脂血症模型小鼠血清高密度脂蛋白胆固醇浓度
9周龄雄性C57小鼠16只饲喂3％胆固醇高脂饲料(南通特洛菲)4周，诱导高脂血症[32,33]，此模型定为3％胆固醇高脂血症模型。成模后的小鼠继续饲喂3％胆固醇高脂饲料。在给药前三天每只小鼠取血50μL，检测总胆固醇，并根据总胆固醇浓度和体重随机分为两组，每组各8只。开始给药记为第1天，给纤溶酶原组小鼠尾静脉注射人源纤溶酶原1mg/0.1ml/只/天，给溶媒PBS对照组尾静脉注射同体积的PBS，给药20天。在第10、20天小鼠禁食16小时，第11、21天扎眼眶静脉丛取血50μl，离心获得上清，用以检测血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)。本文中高密度脂蛋白胆固醇含量通过检测试剂盒(南京建成生物工程研究所，货号A112-1)所述方法检测。
高密度脂蛋白是一种抗动脉粥样硬化的血浆脂蛋白，是冠心病的保护因子，俗称“血管清道夫”。
检测结果显示，给纤溶酶原组小鼠血清HDL-C浓度明显高于给溶媒 PBS对照组，且二者在给药10、20天后HDL-C浓度均有统计学差异(图 10)。说明纤溶酶原能提高高脂血症模型小鼠血清中高密度脂蛋白胆固醇的含量，改善高脂血症小鼠血脂紊乱。
实施例11纤溶酶原降低3％胆固醇高脂血症模型小鼠血清总胆固醇水平
9周龄雄性C57小鼠16只饲喂3％胆固醇高脂饲料(南通特洛菲)4周，诱导高脂血症[32,33]，此模型定为3％胆固醇高脂血症模型。成模后的小鼠继续饲喂3％胆固醇高脂饲料。在给药前三天每只小鼠取血50μL，检测总胆固醇，并根据总胆固醇浓度和体重随机分为两组，每组各8只。开始给药记为第1天，给纤溶酶原组小鼠尾静脉注射人源纤溶酶原1mg/0.1ml/只/天，给溶媒PBS对照组尾静脉注射同体积的PBS，给药20天。在第20天小鼠禁食16小时，第21天扎眼眶静脉丛取血50μL，离心获得上清，采用总胆固醇检测试剂盒(南京建成生物工程研究所，货号A111-1)进行总胆固醇检测。
检测结果显示，给纤溶酶原组小鼠总胆固醇浓度明显低于给溶媒PBS 对照组，且统计差异显著(图11)。说明纤溶酶原能降低高脂血症模型小鼠血清中总胆固醇的含量。
实施例12纤溶酶原降低3％胆固醇高脂血症模型小鼠血清低密度脂蛋白胆固醇水平
9周龄雄性C57小鼠16只饲喂3％胆固醇高脂饲料(南通特洛菲)4周，诱导高脂血症[32,33]，此模型定为3％胆固醇高脂血症模型。成模后的小鼠继续饲喂3％胆固醇高脂饲料。在给药前三天每只小鼠取血50μl，检测总胆固醇，并根据总胆固醇浓度和体重随机分为两组，每组各8只。开始给药记为第1天，给纤溶酶原组小鼠尾静脉注射人源纤溶酶原1mg/0.1ml/只/天，给溶媒PBS对照组尾静脉注射同体积的PBS，给药20天。在第20天小鼠禁食16小时，第21天扎眼眶静脉丛取血50μL，离心获得上清，采用低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒(南京建成生物工程研究所，货号A113-1)进行低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)检测。
低密度脂蛋白是一种运载胆固醇进入外周组织细胞的脂蛋白颗粒，可被氧化成氧化低密度脂蛋白，当低密度脂蛋白，尤其是氧化修饰的低密度脂蛋白(OX-LDL)过量时，它携带的胆固醇便积存在动脉壁上，引发动脉硬化。因此低密度脂蛋白胆固醇被称为“坏的胆固醇”。
结果显示，给纤溶酶原组小鼠(LDL-C)浓度明显低于给溶媒PBS对照组，且统计差异显著(图12)。说明纤溶酶原能降低高脂血症模型小鼠血清中低密度脂蛋白胆固醇的含量，改善高脂血症小鼠血脂紊乱。
实施例13纤溶酶原降低3％胆固醇高脂血症模型小鼠动脉粥样硬化形成的风险
9周龄雄性C57小鼠16只饲喂3％胆固醇高脂饲料(南通特洛菲)4周，诱导高脂血症[32,33]，此模型定为3％胆固醇高脂血症模型。成模后的小鼠继续饲喂3％胆固醇高脂饲料。在给药前三天每只小鼠取血50μl，检测总胆固醇(T-CHO)，并根据总胆固醇浓度和体重随机分为两组，每组各8 只。开始给药记为第1天，给纤溶酶原组小鼠尾静脉注射人源纤溶酶原 1mg/0.1ml/只/天，给溶媒PBS对照组尾静脉注射同体积的PBS。在第20天给药后小鼠开始禁食，禁食16小时，第21天扎眼眶静脉丛取血50μL，离心获得上清，总胆固醇含量采用总胆固醇检测试剂盒(南京建成生物工程研究所，货号A111-1)进行检测；高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量采用高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒(南京建成生物工程研究所，货号A112-1)进行检测。
动脉粥样硬化指数，是临床上预测动脉粥样硬化的综合指标，认为它在用作对冠心病风险程度的估计方面临床意义比单项的总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白更大[40]。动脉粥样硬化指数＝(T-CHO- HDL-C)/HDL-C。
计算结果显示，给纤溶酶原组小鼠动脉粥样硬化指数明显低于给溶媒 PBS对照组，且统计差异显著(图13)。说明纤溶酶原能降低高脂血症模型小鼠发生动脉粥样硬化的风险。
实施例14纤溶酶原降低3％胆固醇高脂血症模型小鼠心脏发病风险
9周龄雄性C57小鼠16只饲喂3％胆固醇高脂饲料(南通特洛菲)4周，诱导高脂血症[32,33]，此模型定为3％胆固醇高脂血症模型。成模后的小鼠继续饲喂3％胆固醇高脂饲料。在给药前三天每只小鼠取血50μl，检测总胆固醇(T-CHO)，并根据总胆固醇浓度随机分为两组，每组各8只。开始给药记为第1天，给纤溶酶原组小鼠尾静脉注射人源纤溶酶原1mg/0.1ml/ 只/天，给溶媒PBS对照组尾静脉注射同体积的PBS。在第20天给药后小鼠开始禁食，禁食16小时，第21天扎眼眶静脉丛取血50μL，离心获得上清，总胆固醇含量采用总胆固醇检测试剂盒(南京建成生物工程研究所，货号A111-1)进行检测；高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量采用高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒(南京建成生物工程研究所，货号A112-1)进行检测。心脏风险指数＝T-CHO/HDL-C。
心脏风险指数(cardiac risk index，CRI)用以评估血脂紊乱诱发心脏疾病的风险[40]。
结果显示，给纤溶酶原组CRI明显小于给溶媒PBS对照组，且统计差异极其显著(图14)。说明纤溶酶原能有效的降低高脂血症模型小鼠发生心脏疾病的风险。
实施例15纤溶酶原减轻糖尿病小鼠主动脉管壁的损伤
24-25周龄雄性db/db小鼠10只，随机分为两组，给溶媒PBS对照组和给纤溶酶原组各5只。实验开始当天记为第0天称重分组，第1天开始给PBS或纤溶酶原，连续给药31天。给纤溶酶原组小鼠按2mg/0.2ml/只/ 天尾静脉注射纤溶酶原，给溶媒PBS对照组尾静脉注射给予相同体积的 PBS。在第32天处死小鼠并取主动脉在10％中性福尔马林固定液中固定24小时。固定后的主动脉经酒精梯度脱水和二甲苯透明后进行石蜡包埋。组织切片厚度为5μm，切片脱蜡复水并用苏木素和伊红染色(HE染色)，1％盐酸酒精分化后氨水返蓝并酒精梯度脱水封片，切片在400倍(图15A、B) 光学显微镜以及1000倍(图15C、D)油镜下观察。
糖尿病合并高血脂是糖尿病较为常见的并发症，是糖尿病大血管病变的重要危险因子[41]。
染色结果显示，给溶媒PBS对照组(图15A、C)血管管壁有泡沫细胞沉积(箭头标识)，中层弹性膜排列紊乱，血管壁增厚，管壁凸凹不均；给纤溶酶原组(图15B、D)中层弹性膜结构规则，呈波浪形，血管管壁厚度均匀。表明注射纤溶酶原可减轻糖尿病小鼠主动脉管壁的脂质沉积，对动脉管壁脂质沉积导致的损伤具有一定的保护作用。
实施例16纤溶酶原降低糖尿病小鼠心室脂质沉积
26周龄雄性db/db小鼠9只随机分组，给纤溶酶原组4只，给溶媒 PBS对照组5只。给纤溶酶原组尾静脉注射人源纤溶酶原2mg/0.2ml/只/天，给溶媒PBS对照组尾静脉注射同体积的PBS，给药35天。于第36天处死小鼠，取心脏于4％多聚甲醛固定24-48小时，分别于15％、30％蔗糖中4℃过夜沉底，OCT包埋，冰冻切片厚度8μm，油红O染色15min，75％酒精分化5秒，苏木素染核30s，甘油明胶封片。切片在200倍光学显微镜下观察。
结果显示，给纤溶酶原组小鼠(图16B)心室脂质沉积(箭头标识)明显少于给溶媒PBS对照组(图16A)。说明纤溶酶原能减少脂肪在糖尿病小鼠心室沉积，促进心室损伤的修复。
实施例17纤溶酶原提高糖尿病小鼠血清中的高密度脂蛋白胆固醇水平
26周龄雄性db/db小鼠20只随机分组，给纤溶酶原组11只，给溶媒 PBS对照组各9只。实验开始当天记为第0天并称重分组，第1天开始给纤溶酶原或PBS，连续给药35天。给纤溶酶原组尾静脉注射人源纤溶酶原 2mg/0.2ml/只/天，对照组尾静脉注射同体积的PBS。第36天小鼠摘眼球采全血，4℃3500r/min离心10分钟，取上清液并采用高密度脂蛋白检测试剂盒(南京建成生物工程研究所，货号A112-1)检测血清中高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)浓度。
检测结果显示，给纤溶酶原组小鼠血清中HDL-C的含量高于给溶媒 PBS对照组，统计差异显著(图17)。说明注射纤溶酶原能促进血清高密度脂蛋白胆固醇的含量升高，改善糖尿病血脂紊乱。
实施例18纤溶酶原降低糖尿病小鼠血清中低密度脂蛋白胆固醇
24-25周龄雄性db/db小鼠10只随机分组，给纤溶酶原组和给溶媒PBS 对照组各5只，并取3只db/m作为正常对照组。实验开始当天记为第0天称重分组，第1天开始给纤溶酶原或PBS，连续给药31天。给纤溶酶原组尾静脉注射人源纤溶酶原2mg/0.2ml/只/天，PBS对照组尾静脉注射同体积的PBS，正常对照组小鼠不作任何处理。第32天小鼠摘眼球采全血，4℃ 3500r/min离心10分钟，取上清液并采用低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒 (南京建成生物工程研究所，货号A113-1)检测血清中低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)浓度。
结果显示，糖尿病模型小鼠连续注射人源纤溶酶源31天后，给纤溶酶原组小鼠血清中的LDL-C含量低于给溶媒PBS对照组，且统计差异接近显著(P＝0.1)(图18)。说明纤溶酶原能降低血清中LDL-C的含量。
实施例19纤溶酶原降低ApoE动脉粥样硬化小鼠血清总胆固醇的含量
6周龄雄性ApoE小鼠13只饲喂高脂高胆固醇饲料(南通特洛菲， TP2031)16周以诱导动脉粥样硬化模型[30,31]。成模后的小鼠继续饲喂高脂高胆固醇饲料。在给药前三天每只取血50μl以检测总胆固醇(T-CHO)含量，并根据T-CHO含量随机分为两组，给溶媒PBS对照组7只，给纤溶酶原组6只。开始给药定为第1天，给纤溶酶原组小鼠尾静脉注射人源纤溶酶原1mg/0.1ml/只/天，给溶媒PBS对照组尾静脉注射同体积的PBS，给药 30天。在第30天小鼠禁食16小时，第31天摘除眼球取血，离心获得上清采用总胆固醇检测试剂盒(南京建成生物工程研究所，货号A111-1)进行总胆固醇检测。
检测结果显示，给纤溶酶原组小鼠总胆固醇浓度明显低于给溶媒PBS 对照组，且统计差异显著(P＝0.014)(图19)。说明纤溶酶原能降低 ApoE动脉粥样硬化模型小鼠血清中总胆固醇的含量，改善动脉粥样硬化的血脂紊乱。
实施例20纤溶酶原降低ApoE动脉粥样硬化小鼠血清甘油三酯的含量
6周龄雄性ApoE小鼠13只饲喂高脂高胆固醇饲料(南通特洛菲， TP2031)16周以诱导动脉粥样硬化模型[30,31]。成模后的小鼠继续饲喂高脂高胆固醇饲料。在给药前三天每只取血50μl以检测总胆固醇(T-CHO)含量，并根据T-CHO含量随机分为两组，给溶媒PBS对照组7只，给纤溶酶原组6只。开始给药记为第1天，给纤溶酶原组小鼠尾静脉注射人源纤溶酶原1mg/0.1ml/只/天，给溶媒PBS对照组尾静脉注射同体积的PBS，给药 30天。在第30天小鼠禁食16小时，第31天摘眼球取血，离心获得上清采用甘油三酯检测试剂盒(南京建成生物工程研究所，货号A110-1)进行甘油三酯检测。
检测结果显示，给纤溶酶原组小鼠甘油三酯浓度明显低于给溶媒PBS 对照组，且统计差异显著(P＝0.013)(图20)。说明纤溶酶原能降低 ApoE动脉粥样硬化模型小鼠血清中甘油三酯的含量，改善动脉粥样硬化血脂紊乱。
实施例21纤溶酶原降低ApoE动脉粥样硬化小鼠血清低密度脂蛋白胆固醇的含量
6周龄雄性ApoE小鼠13只饲喂高脂高胆固醇饲料(南通特洛菲，TP2031)16周以诱导动脉粥样硬化模型[30,31]。成模后的小鼠继续饲喂高脂高胆固醇饲料。在给药前三天每只取血50μl以检测总胆固醇(T-CHO)含量，并根据T-CHO含量随机分为两组，给溶媒PBS对照组7只，给纤溶酶原组6只。开始给药记为第1天，给纤溶酶原组小鼠尾静脉注射人源纤溶酶原1mg/0.1ml/只/天，给溶媒PBS对照组尾静脉注射同体积的PBS，给药 30天。第30天小鼠禁食16小时，第31天摘眼球取血，离心获得上清采用低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)检测试剂盒(南京建成生物工程研究所，货号A113-1)进行LDL-C检测。
结果显示，给纤溶酶原组小鼠LDL-C浓度明显低于给溶媒PBS对照组，且统计差异显著(P＝0.017)(图21)。说明纤溶酶原能降低ApoE动脉粥样硬化模型小鼠血清中低密度脂蛋白胆固醇含量，改善动脉粥样硬化模型小鼠血脂紊乱。
实施例22纤溶酶原改善脂质在ApoE动脉粥样硬化小鼠主动脉窦中的沉积
6周龄雄性ApoE小鼠13只饲喂高脂高胆固醇饲料(南通特洛菲， TP2031)16周以诱导动脉粥样硬化模型[30,31]。成模后的小鼠继续饲喂高脂高胆固醇饲料。在给药前三天每只取血50μl以检测总胆固醇(T-CHO)含量，并根据T-CHO含量随机分为两组，给溶媒PBS对照组7只，给纤溶酶原组6只。开始给药记为第1天，给纤溶酶原组小鼠尾静脉注射人源纤溶酶原1mg/0.1ml/只/天，给溶媒PBS对照组尾静脉注射同体积的PBS，给药 30天。于第31天处死小鼠，取心脏组织于4％多聚甲醛固定24-48小时，分别于15％、30％蔗糖中4℃过夜沉底，OCT包埋，冰冻切片厚度8μm，油红O染色15min，75％酒精分化5秒，苏木素染核30s，甘油明胶封片。切片在40倍光学显微镜下观察。
染色结果显示，给纤溶酶原组(图22B)小鼠主动脉窦脂肪沉积明显少于给溶媒PBS对照组(图22A)。说明纤溶酶原能减少脂质在动脉粥样硬化模型小鼠主动脉窦中的沉积。
实施例23纤溶酶原降低16周高脂血症模型小鼠主动脉窦纤维化
6周龄雄性C57小鼠11只饲喂高脂高胆固醇饲料(南通特洛菲，货号 TP2031)16周以诱导高脂血症模型[32,33]，此模型定为16周高脂血症模型。成模后的小鼠继续饲喂高胆固醇饲料。在给药前三天每只取血50μl以检测总胆固醇(T-CHO)含量，并根据T-CHO含量随机分为两组，给溶媒PBS 对照组6只，给纤溶酶原组5只。开始给药记为第1天，给纤溶酶原组尾静脉注射人源纤溶酶原1mg/0.1ml/只/天，给溶媒PBS对照组尾静脉注射同体积的PBS。给药30天，于第31天处死小鼠，取心脏于4％多聚甲醛固定 24-48小时。固定后的组织经酒精梯度脱水和二甲苯透明后进行石蜡包埋。主动脉窦切片厚度为3μm，切片脱蜡复水后水洗1次，以0.1％天狼星红饱和苦味酸染色30分钟后，流水冲洗2min，苏木素染色1分钟，流水冲洗，1％盐酸酒精分化，氨水返蓝，流水冲洗，烘干后中性树胶封片，在40(图 23A、23B)、200倍(图23C、23D)光学显微镜下观察。
结果显示，给纤溶酶原组(图23B,23D)主动脉窦血管内壁胶原蛋白沉积(箭头标识)的面积明显小于给溶媒PBS对照组(图23A、23C)，说明纤溶酶原能够消减高脂血症模型小鼠主动脉窦纤维化水平。
实施例24纤溶酶原改善ApoE动脉粥样硬化小鼠心脏代偿性肥大
6周龄雄性ApoE小鼠13只饲喂高脂高胆固醇饲料(南通特洛菲， TP2031)16周以诱导动脉粥样硬化模型[47,48]。成模后的小鼠在给药前三天每只取血50μl以检测总胆固醇(T-CHO)含量，并根据T-CHO含量随机分为两组，给溶媒PBS对照组7只，给纤溶酶原组6只。开始给药定为第 1天，给纤溶酶原组小鼠尾静脉注射人源纤溶酶原1mg/0.1mL/只/天，给溶媒PBS对照组尾静脉注射同体积的PBS。给药30天，给药期间继续饲喂高脂高胆固醇饲料。于给药的第31天称重后处死小鼠，取心脏称重，并计算心脏系数。心脏系数(％)＝心脏重量/体重×100。
结果显示，给纤溶酶原组小鼠心脏系数明显低于给溶媒PBS对照组 (图24)。说明纤溶酶原能减轻ApoE动脉粥样硬化模型小鼠由于心脏损伤所致的心脏代偿性肥大。
实施例25纤溶酶原降低3％胆固醇高脂血症模型小鼠肾脏纤维化
9周龄雄性C57小鼠16只饲喂3％胆固醇高脂饲料(南通特洛菲)4周，诱导高脂血症[32,33]，此模型定为3％胆固醇高脂血症模型，成模后的小鼠继续饲喂3％胆固醇高脂饲料。另取相同周龄的雄性C57小鼠5只作为空白对照组，实验期间饲喂普通维持饲料。在给药前三天每只小鼠取血50μL，检测总胆固醇，模型小鼠根据总胆固醇浓度和体重随机分为两组，给纤溶酶原组和给溶媒PBS对照组，每组各8只。开始给药记为第1天，给纤溶酶原组小鼠尾静脉注射人源纤溶酶原1mg/0.1ml/只/天，给溶媒PBS对照组尾静脉注射同体积的PBS，给药周期30天，于第31天处死小鼠，取肾脏于4％多聚甲醛固定24-48小时。固定后的组织经酒精梯度脱水和二甲苯透明后进行石蜡包埋。肾脏组织切片厚度为3μm，切片脱蜡复水后水洗1次，以0.1％天狼星红饱和苦味酸染色30分钟后，流水冲洗2min，苏木素染色1分钟，流水冲洗，1％盐酸酒精分化，氨水返蓝，流水冲洗，烘干后中性树胶封片，在200倍光学显微镜下观察。
结果显示，给纤溶酶原组(图25C)肾脏胶原蛋白沉积(箭头标识) 明显少于给溶媒PBS对照组(图25B)，且统计差异显著(图25D)；给纤溶酶原组纤维化基本恢复到正常水平(图25A)。说明纤溶酶原能有效的减少3％胆固醇高脂血症模型小鼠肾脏纤维化。
实施例26纤溶酶原降低3％胆固醇高脂血症模型小鼠肾脏脂肪沉积
9周龄雄性C57小鼠16只饲喂3％胆固醇高脂饲料(南通特洛菲)4周，诱导高脂血症[32,33]，此模型定为3％胆固醇高脂血症模型，成模后的小鼠继续饲喂3％胆固醇高脂饲料。另取相同周龄的雄性C57小鼠5只作为空白对照组，实验期间饲喂普通维持饲料。在给药前三天每只小鼠取血50μL，检测总胆固醇，模型小鼠根据总胆固醇浓度和体重随机分为两组，给纤溶酶原组和给溶媒PBS对照组，每组各8只。开始给药记为第1天，给纤溶酶原组小鼠尾静脉注射人源纤溶酶原1mg/0.1ml/只/天，给溶媒PBS对照组尾静脉注射同体积的PBS，给药30天。第31天处死小鼠，取肾脏于4％多聚甲醛固定24-48小时，分别于15％、30％蔗糖中4℃过夜沉底，OCT包埋，冰冻切片厚度8μm，油红O染色15min，75％酒精分化5秒，苏木素染核30秒，甘油明胶封片。切片在400倍光学显微镜下观察。
结果显示，给纤溶酶原组(图26C)小鼠肾脏脂肪沉积(箭头标识) 明显少于给溶媒PBS对照组(图26B)，且定量分析统计差异显著(图 26D)；此外，给纤溶酶原组脂质沉积水平与空白对照组小鼠(图26A)相似。说明纤溶酶原能消减脂肪在高脂血症模型小鼠肾脏中的沉积，从而减少脂肪沉积所致肾的脏损伤。
参考文献
[1]赵克健 主编.现代药学名词手册.北京：中国医药科技出版社.2004.第533页
[2]Shafrir E.,Raz.I.Diabetes:Mellitus or Lipidus[J].Diabetologia,2003,46:433-440.
[3]Mooradian AD.Cardiovascular disease in type 2diabetes mellitus:Current management guidelines[J].Arch Intern Med.2003,163:33-40.
[4]Appel G.Lipid adnormalities in renal disease[J].Kidney Int,1991,39:169.
[5]J Zah,Kov,H Varerkov,et al.,Dislipoproteinemia and Chronic KidneyFailure[J]. Vnitr Lek.2000,46(9):539-46.
[6]Effat Razeghi,Mohammadreza Shafipour et al.Lipid DisturbancesBefore and After Renal Transplant.Effat Razeghi et al/Experimental andClinical Transplantation(2011)4: 230-235
[7]Grone HJ.Glomerular lipids in non-hereditary forms ofglomerulopathy/glomerulo nephritis[J].Nephrol.Dial Transplant.1999,14:1595-1598.
[8]Larking RC.Dunlop ME,The link between hyperglycaemia and diabeticnephropathy [J]Athrosclerosis,2001,156(2):25-33.
[9]Alexander CM and Werb,Z.(1991).Extracellular matrix degradation.InCell Biology of Extracellular Matrix,Hay ED,ed.(New York:Plenum Press),pp.255-302.
[10]Werb,Z.,Mainardi,C.L.,Vater,C.A.,and Harris,E.D.,Jr.(1977).Endogenous activiation of latent collagenase by rheumatoid synovialcells.Evidence for a role of plasminogen activator.N.Engl.J.Med.296,1017-1023.
[11]He,C.S.,Wilhelm,S.M.,Pentland,A.P.,Marmer,B.L.,Grant,G.A.,Eisen,A.Z.,and Goldberg,G.I.(1989).Tissue cooperation in a proteolytic cascadeactivating human interstitial collagenase.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A 86,2632-2636.
[12]Stoppelli,M.P.,Corti,A.,Soffientini,A.,Cassani,G.,Blasi,F.,andAssoian,R.K. (1985).Differentiation-enhanced binding of the amino-terminalfragment of human urokinase plasminogen activator to a specific receptor onU937monocytes.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A 82,4939-4943.
[13]Vassalli,J.D.,Baccino,D.,and Belin,D.(1985).A cellular bindingsite for the Mr 55, 000 form of the human plasminogen activator,urokinase.J.Cell Biol.100,86-92.
[14]Wiman,B.and Wallen,P.(1975).Structural relationship between "glutamic acid"and "lysine"forms of human plasminogen and their interactionwith the NH2-terminal activation peptide as studied by affinitychromatography.Eur.J.Biochem.50,489-494.
[15]Saksela,O.and Rifkin,D.B.(1988).Cell-associated plasminogenactivation: regulation and physiological functions.Annu.Rev.Cell Biol.4,93-126.
[16]Raum,D.,Marcus,D.,Alper,C.A.,Levey,R.,Taylor,P.D.,and Starzl,T.E.(1980). Synthesis of human plasminogen by the liver.Science 208,1036-1037.
[17]Wallén P(1980).Biochemistry of plasminogen.In Fibrinolysis,KlineDL and Reddy KKN,eds.(Florida:CRC)
[18]Sottrup-Jensen,L.,Zajdel,M.,Claeys,H.,Petersen,T.E.,andMagnusson,S.(1975). Amino-acid sequence of activation cleavage site inplasminogen:homology with"pro"part of prothrombin.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A72,2577-2581.
[19]Collen,D.and Lijnen,H.R.(1991).Basic and clinical aspects offibrinolysis and thrombolysis.Blood 78,3114-3124.
[20]Alexander,C.M.and Werb,Z.(1989).Proteinases and extracellularmatrix remodeling.Curr.Opin.Cell Biol.1,974-982.
[21]Mignatti,P.and Rifkin,D.B.(1993).Biology and biochemistry ofproteinases in tumor invasion.Physiol Rev.73,161-195.
[22]Collen,D.(2001).Ham-Wasserman lecture:role of the plasminogensystem in fibrin- homeostasis and tissue remodeling.Hematology.(Am.Soc.Hematol.Educ.Program.)1-9.
[23]Rifkin,D.B.,Moscatelli,D.,Bizik,J.,Quarto,N.,Blei,F.,Dennis,P.,Flaumenhaft, R.,and Mignatti,P.(1990).Growth factor control of extracellularproteolysis.Cell Differ.Dev. 32,313-318.
[24]Andreasen,P.A.,Kjoller,L.,Christensen,L.,and Duffy,M.J.(1997).Theurokinase- type plasminogen activator system in cancer metastasis:areview.Int.J.Cancer 72,1-22.
[25]Rifkin,D.B.,Mazzieri,R.,Munger,J.S.,Noguera,I.,and Sung,J.(1999).Proteolytic control of growth factor availability.APMIS 107,80-85.
[26]Marder V J,Novokhatny V.Direct fibrinolytic agents:biochemicalattributes, preclinical foundation and clinical potential[J].Journal ofThrombosis and Haemostasis,2010, 8(3):433-444.
[27]Hunt J A,Petteway Jr S R,Scuderi P,et al.Simplified recombinantplasmin: production and fu-nctional comparison of a novel thrombolyticmolecule with plasma-derived plasmin[J].Thromb Haemost,2008,100(3):413-419.
[28]Sottrup-Jensen L,Claeys H,Zajdel M,et al.The primary structure ofhuman plasminogen:Isolation of two lysine-binding fragments and one“mini”-plasminogen(MW,38, 000)by elastase-catalyzed-specific limited proteolysis[J].Progress in chemical fibrinolysis and thrombolysis,1978,3:191-209.
[29]Nagai N,Demarsin E,Van Hoef B,et al.Recombinant humanmicroplasmin: production and potential therapeutic properties[J].Journal ofThrombosis and Haemostasis, 2003,1(2):307-313.
[30]Yutaka Nakashima,Andrew S.Plump,Elaine W.Raines etal.Arterioscler Thromb. 1994 Jan；14(1):133-40.
[31]Yvonne Nitschke,Gabriele Weissen-Plenz,Robert Terkeltaub etal.Npp1 promotes atherosclerosis in ApoE knockout mice.J.Cell.Mol.Med.Vol 15,No 11,2011 pp.2273-2283.
[32]Dominika Nackiewicz,Paromita Dey,Barbara Szczerba et al.Inhibitorof differentiation 3,a transcription factor regulates hyperlipidemiaassociated kidney disease. Nephron Exp Nephrol.2014；126(3):141–147.
[33]Ming Gu1,Yu Zhang.,Shengjie Fan et al.Extracts of RhizomaPolygonati Odorati Prevent High-Fat Diet-Induced Metabolic Disorders inC57BL/6 Mice.PLoS ONE 8(11): e81724.
[34]Siobhan M.Craige,PhD,Shashi Kant et al.Endothelial NADPH oxidase4 protects ApoE-/-mice from atherosclerotic lesions.Free Radic Biol Med.2015December；89:1–7.
[35]Dimitrios Davalos,Katerina Akassoglou.Fibrinogen as a keyregulator of inflammation in disease.Seminars in Immunopathology,2012.34(1):43-62.
[36]Valvi D,Mannino DM,Mullerova H,et al.Fibrinogen,chronicobstructive pulmonary disease(COPD)and outcomes in two United Statescohorts.Int J Chron Obstruct Pulmon Dis 2012；7:173–82.
[37]Zhang M,Takahashi K,Alicot EM,Vorup-Jensen T,Kessler B,et al.(2006) Activation of the lectin pathway by natural IgM in a model of ischemiareperfusion injury.J Immunol 177:4727–4734.
[38]Kim SJ,Gershov D,Ma X,Brot N,Elkon KB(2002)I-PLA2 Activationduring Apoptosis Promotes the Exposure of Membrane LysophosphatidylcholineLeading to Binding by Natural Immunoglobulin M Antibodies and ComplementActivation.The Journal of Experimental Medicine 196:655–665.
[39]R.Langhorn and J.L.Willesen.Cardiac Troponins in Dogs and Cats.JVet Intern Med 2016；30:36–50.
[40]Sungwon Lee,Youngjoo Lee,Jiyeon Kim et al.Atorvastatin androsuvastatin improve physiological parameters and alleviate immunedysfunction in metabolic disorders.Biochem Biophys Res Commun.2016 Sep 23；478(3):1242-7.
[41]Ametov AS,Kulidzhanian NK.Diabetes mellitus is an independentrisk factor for cardiovascular disease.Ter Arkh.2012；84(8):91-4。
序列表
<110> 深圳瑞健生命科学研究院有限公司
<120> 一种预防和治疗脂肪肝的方法
<130> PDK03573
<160> 14
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 2376
<212> DNA
<213> 不含有信号肽的天然纤溶酶原(Glu-PLG，Glu-纤维蛋白溶酶原)核酸序列
<400> 1
gagcctctgg atgactatgt gaatacccag ggggcttcac tgttcagtgt cactaagaag 60
cagctgggag caggaagtat agaagaatgt gcagcaaaat gtgaggagga cgaagaattc 120
acctgcaggg cattccaata tcacagtaaa gagcaacaat gtgtgataat ggctgaaaac 180
aggaagtcct ccataatcat taggatgaga gatgtagttt tatttgaaaa gaaagtgtat 240
ctctcagagt gcaagactgg gaatggaaag aactacagag ggacgatgtc caaaacaaaa 300
aatggcatca cctgtcaaaa atggagttcc acttctcccc acagacctag attctcacct 360
gctacacacc cctcagaggg actggaggag aactactgca ggaatccaga caacgatccg 420
caggggccct ggtgctatac tactgatcca gaaaagagat atgactactg cgacattctt 480
gagtgtgaag aggaatgtat gcattgcagt ggagaaaact atgacggcaa aatttccaag 540
accatgtctg gactggaatg ccaggcctgg gactctcaga gcccacacgc tcatggatac 600
attccttcca aatttccaaa caagaacctg aagaagaatt actgtcgtaa ccccgatagg 660
gagctgcggc cttggtgttt caccaccgac cccaacaagc gctgggaact ttgtgacatc 720
ccccgctgca caacacctcc accatcttct ggtcccacct accagtgtct gaagggaaca 780
ggtgaaaact atcgcgggaa tgtggctgtt accgtgtccg ggcacacctg tcagcactgg 840
agtgcacaga cccctcacac acataacagg acaccagaaa acttcccctg caaaaatttg 900
gatgaaaact actgccgcaa tcctgacgga aaaagggccc catggtgcca tacaaccaac 960
agccaagtgc ggtgggagta ctgtaagata ccgtcctgtg actcctcccc agtatccacg 1020
gaacaattgg ctcccacagc accacctgag ctaacccctg tggtccagga ctgctaccat 1080
ggtgatggac agagctaccg aggcacatcc tccaccacca ccacaggaaa gaagtgtcag 1140
tcttggtcat ctatgacacc acaccggcac cagaagaccc cagaaaacta cccaaatgct 1200
ggcctgacaa tgaactactg caggaatcca gatgccgata aaggcccctg gtgttttacc 1260
acagacccca gcgtcaggtg ggagtactgc aacctgaaaa aatgctcagg aacagaagcg 1320
agtgttgtag cacctccgcc tgttgtcctg cttccagatg tagagactcc ttccgaagaa 1380
gactgtatgt ttgggaatgg gaaaggatac cgaggcaaga gggcgaccac tgttactggg 1440
acgccatgcc aggactgggc tgcccaggag ccccatagac acagcatttt cactccagag 1500
acaaatccac gggcgggtct ggaaaaaaat tactgccgta accctgatgg tgatgtaggt 1560
ggtccctggt gctacacgac aaatccaaga aaactttacg actactgtga tgtccctcag 1620
tgtgcggccc cttcatttga ttgtgggaag cctcaagtgg agccgaagaa atgtcctgga 1680
agggttgtag gggggtgtgt ggcccaccca cattcctggc cctggcaagt cagtcttaga 1740
acaaggtttg gaatgcactt ctgtggaggc accttgatat ccccagagtg ggtgttgact 1800
gctgcccact gcttggagaa gtccccaagg ccttcatcct acaaggtcat cctgggtgca 1860
caccaagaag tgaatctcga accgcatgtt caggaaatag aagtgtctag gctgttcttg 1920
gagcccacac gaaaagatat tgccttgcta aagctaagca gtcctgccgt catcactgac 1980
aaagtaatcc cagcttgtct gccatcccca aattatgtgg tcgctgaccg gaccgaatgt 2040
ttcatcactg gctggggaga aacccaaggt acttttggag ctggccttct caaggaagcc 2100
cagctccctg tgattgagaa taaagtgtgc aatcgctatg agtttctgaa tggaagagtc 2160
caatccaccg aactctgtgc tgggcatttg gccggaggca ctgacagttg ccagggtgac 2220
agtggaggtc ctctggtttg cttcgagaag gacaaataca ttttacaagg agtcacttct 2280
tggggtcttg gctgtgcacg ccccaataag cctggtgtct atgttcgtgt ttcaaggttt 2340
gttacttgga ttgagggagt gatgagaaat aattaa 2376
<210> 2
<211> 791
<212> PRT
<213> 不含有信号肽的天然纤溶酶原(Glu-PLG，Glu-纤维蛋白溶酶原)氨基酸序列
<400> 2
Glu Pro Leu Asp Asp Tyr Val Asn Thr Gln Gly Ala Ser Leu Phe Ser
1 5 10 15
Val Thr Lys Lys Gln Leu Gly Ala Gly Ser Ile Glu Glu Cys Ala Ala
20 25 30
Lys Cys Glu Glu Asp Glu Glu Phe Thr Cys Arg Ala Phe Gln Tyr His
35 40 45
Ser Lys Glu Gln Gln Cys Val Ile Met Ala Glu Asn Arg Lys Ser Ser
50 55 60
Ile Ile Ile Arg Met Arg Asp Val Val Leu Phe Glu Lys Lys Val Tyr
65 70 75 80
Leu Ser Glu Cys Lys Thr Gly Asn Gly Lys Asn Tyr Arg Gly Thr Met
85 90 95
Ser Lys Thr Lys Asn Gly Ile Thr Cys Gln Lys Trp Ser Ser Thr Ser
100 105 110
Pro His Arg Pro Arg Phe Ser Pro Ala Thr His Pro Ser Glu Gly Leu
115 120 125
Glu Glu Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Asn Asp Pro Gln Gly Pro Trp
130 135 140
Cys Tyr Thr Thr Asp Pro Glu Lys Arg Tyr Asp Tyr Cys Asp Ile Leu
145 150 155 160
Glu Cys Glu Glu Glu Cys Met His Cys Ser Gly Glu Asn Tyr Asp Gly
165 170 175
Lys Ile Ser Lys Thr Met Ser Gly Leu Glu Cys Gln Ala Trp Asp Ser
180 185 190
Gln Ser Pro His Ala His Gly Tyr Ile Pro Ser Lys Phe Pro Asn Lys
195 200 205
Asn Leu Lys Lys Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Arg Glu Leu Arg Pro
210 215 220
Trp Cys Phe Thr Thr Asp Pro Asn Lys Arg Trp Glu Leu Cys Asp Ile
225 230 235 240
Pro Arg Cys Thr Thr Pro Pro Pro Ser Ser Gly Pro Thr Tyr Gln Cys
245 250 255
Leu Lys Gly Thr Gly Glu Asn Tyr Arg Gly Asn Val Ala Val Thr Val
260 265 270
Ser Gly His Thr Cys Gln His Trp Ser Ala Gln Thr Pro His Thr His
275 280 285
Asn Arg Thr Pro Glu Asn Phe Pro Cys Lys Asn Leu Asp Glu Asn Tyr
290 295 300
Cys Arg Asn Pro Asp Gly Lys Arg Ala Pro Trp Cys His Thr Thr Asn
305 310 315 320
Ser Gln Val Arg Trp Glu Tyr Cys Lys Ile Pro Ser Cys Asp Ser Ser
325 330 335
Pro Val Ser Thr Glu Gln Leu Ala Pro Thr Ala Pro Pro Glu Leu Thr
340 345 350
Pro Val Val Gln Asp Cys Tyr His Gly Asp Gly Gln Ser Tyr Arg Gly
355 360 365
Thr Ser Ser Thr Thr Thr Thr Gly Lys Lys Cys Gln Ser Trp Ser Ser
370 375 380
Met Thr Pro His Arg His Gln Lys Thr Pro Glu Asn Tyr Pro Asn Ala
385 390 395 400
Gly Leu Thr Met Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Ala Asp Lys Gly Pro
405 410 415
Trp Cys Phe Thr Thr Asp Pro Ser Val Arg Trp Glu Tyr Cys Asn Leu
420 425 430
Lys Lys Cys Ser Gly Thr Glu Ala Ser Val Val Ala Pro Pro Pro Val
435 440 445
Val Leu Leu Pro Asp Val Glu Thr Pro Ser Glu Glu Asp Cys Met Phe
450 455 460
Gly Asn Gly Lys Gly Tyr Arg Gly Lys Arg Ala Thr Thr Val Thr Gly
465 470 475 480
Thr Pro Cys Gln Asp Trp Ala Ala Gln Glu Pro His Arg His Ser Ile
485 490 495
Phe Thr Pro Glu Thr Asn Pro Arg Ala Gly Leu Glu Lys Asn Tyr Cys
500 505 510
Arg Asn Pro Asp Gly Asp Val Gly Gly Pro Trp Cys Tyr Thr Thr Asn
515 520 525
Pro Arg Lys Leu Tyr Asp Tyr Cys Asp Val Pro Gln Cys Ala Ala Pro
530 535 540
Ser Phe Asp Cys Gly Lys Pro Gln Val Glu Pro Lys Lys Cys Pro Gly
545 550 555 560
Arg Val Val Gly Gly Cys Val Ala His Pro His Ser Trp Pro Trp Gln
565 570 575
Val Ser Leu Arg Thr Arg Phe Gly Met His Phe Cys Gly Gly Thr Leu
580 585 590
Ile Ser Pro Glu Trp Val Leu Thr Ala Ala His Cys Leu Glu Lys Ser
595 600 605
Pro Arg Pro Ser Ser Tyr Lys Val Ile Leu Gly Ala His Gln Glu Val
610 615 620
Asn Leu Glu Pro His Val Gln Glu Ile Glu Val Ser Arg Leu Phe Leu
625 630 635 640
Glu Pro Thr Arg Lys Asp Ile Ala Leu Leu Lys Leu Ser Ser Pro Ala
645 650 655
Val Ile Thr Asp Lys Val Ile Pro Ala Cys Leu Pro Ser Pro Asn Tyr
660 665 670
Val Val Ala Asp Arg Thr Glu Cys Phe Ile Thr Gly Trp Gly Glu Thr
675 680 685
Gln Gly Thr Phe Gly Ala Gly Leu Leu Lys Glu Ala Gln Leu Pro Val
690 695 700
Ile Glu Asn Lys Val Cys Asn Arg Tyr Glu Phe Leu Asn Gly Arg Val
705 710 715 720
Gln Ser Thr Glu Leu Cys Ala Gly His Leu Ala Gly Gly Thr Asp Ser
725 730 735
Cys Gln Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Phe Glu Lys Asp Lys
740 745 750
Tyr Ile Leu Gln Gly Val Thr Ser Trp Gly Leu Gly Cys Ala Arg Pro
755 760 765
Asn Lys Pro Gly Val Tyr Val Arg Val Ser Arg Phe Val Thr Trp Ile
770 775 780
Glu Gly Val Met Arg Asn Asn
785 790
<210> 3
<211> 2433
<212> DNA
<213> 含有信号肽的天然纤溶酶原（来源于swiss prot）的核酸序列
<400> 3
atggaacata aggaagtggt tcttctactt cttttatttc tgaaatcagg tcaaggagag 60
cctctggatg actatgtgaa tacccagggg gcttcactgt tcagtgtcac taagaagcag 120
ctgggagcag gaagtataga agaatgtgca gcaaaatgtg aggaggacga agaattcacc 180
tgcagggcat tccaatatca cagtaaagag caacaatgtg tgataatggc tgaaaacagg 240
aagtcctcca taatcattag gatgagagat gtagttttat ttgaaaagaa agtgtatctc 300
tcagagtgca agactgggaa tggaaagaac tacagaggga cgatgtccaa aacaaaaaat 360
ggcatcacct gtcaaaaatg gagttccact tctccccaca gacctagatt ctcacctgct 420
acacacccct cagagggact ggaggagaac tactgcagga atccagacaa cgatccgcag 480
gggccctggt gctatactac tgatccagaa aagagatatg actactgcga cattcttgag 540
tgtgaagagg aatgtatgca ttgcagtgga gaaaactatg acggcaaaat ttccaagacc 600
atgtctggac tggaatgcca ggcctgggac tctcagagcc cacacgctca tggatacatt 660
ccttccaaat ttccaaacaa gaacctgaag aagaattact gtcgtaaccc cgatagggag 720
ctgcggcctt ggtgtttcac caccgacccc aacaagcgct gggaactttg tgacatcccc 780
cgctgcacaa cacctccacc atcttctggt cccacctacc agtgtctgaa gggaacaggt 840
gaaaactatc gcgggaatgt ggctgttacc gtgtccgggc acacctgtca gcactggagt 900
gcacagaccc ctcacacaca taacaggaca ccagaaaact tcccctgcaa aaatttggat 960
gaaaactact gccgcaatcc tgacggaaaa agggccccat ggtgccatac aaccaacagc 1020
caagtgcggt gggagtactg taagataccg tcctgtgact cctccccagt atccacggaa 1080
caattggctc ccacagcacc acctgagcta acccctgtgg tccaggactg ctaccatggt 1140
gatggacaga gctaccgagg cacatcctcc accaccacca caggaaagaa gtgtcagtct 1200
tggtcatcta tgacaccaca ccggcaccag aagaccccag aaaactaccc aaatgctggc 1260
ctgacaatga actactgcag gaatccagat gccgataaag gcccctggtg ttttaccaca 1320
gaccccagcg tcaggtggga gtactgcaac ctgaaaaaat gctcaggaac agaagcgagt 1380
gttgtagcac ctccgcctgt tgtcctgctt ccagatgtag agactccttc cgaagaagac 1440
tgtatgtttg ggaatgggaa aggataccga ggcaagaggg cgaccactgt tactgggacg 1500
ccatgccagg actgggctgc ccaggagccc catagacaca gcattttcac tccagagaca 1560
aatccacggg cgggtctgga aaaaaattac tgccgtaacc ctgatggtga tgtaggtggt 1620
ccctggtgct acacgacaaa tccaagaaaa ctttacgact actgtgatgt ccctcagtgt 1680
gcggcccctt catttgattg tgggaagcct caagtggagc cgaagaaatg tcctggaagg 1740
gttgtagggg ggtgtgtggc ccacccacat tcctggccct ggcaagtcag tcttagaaca 1800
aggtttggaa tgcacttctg tggaggcacc ttgatatccc cagagtgggt gttgactgct 1860
gcccactgct tggagaagtc cccaaggcct tcatcctaca aggtcatcct gggtgcacac 1920
caagaagtga atctcgaacc gcatgttcag gaaatagaag tgtctaggct gttcttggag 1980
cccacacgaa aagatattgc cttgctaaag ctaagcagtc ctgccgtcat cactgacaaa 2040
gtaatcccag cttgtctgcc atccccaaat tatgtggtcg ctgaccggac cgaatgtttc 2100
atcactggct ggggagaaac ccaaggtact tttggagctg gccttctcaa ggaagcccag 2160
ctccctgtga ttgagaataa agtgtgcaat cgctatgagt ttctgaatgg aagagtccaa 2220
tccaccgaac tctgtgctgg gcatttggcc ggaggcactg acagttgcca gggtgacagt 2280
ggaggtcctc tggtttgctt cgagaaggac aaatacattt tacaaggagt cacttcttgg 2340
ggtcttggct gtgcacgccc caataagcct ggtgtctatg ttcgtgtttc aaggtttgtt 2400
acttggattg agggagtgat gagaaataat taa 2433
<210> 4
<211> 810
<212> PRT
<213> 含有信号肽的天然纤溶酶原（来源于swiss prot）的氨基酸序列
<400> 4
Met Glu His Lys Glu Val Val Leu Leu Leu Leu Leu Phe Leu Lys Ser
1 5 10 15
Gly Gln Gly Glu Pro Leu Asp Asp Tyr Val Asn Thr Gln Gly Ala Ser
20 25 30
Leu Phe Ser Val Thr Lys Lys Gln Leu Gly Ala Gly Ser Ile Glu Glu
35 40 45
Cys Ala Ala Lys Cys Glu Glu Asp Glu Glu Phe Thr Cys Arg Ala Phe
50 55 60
Gln Tyr His Ser Lys Glu Gln Gln Cys Val Ile Met Ala Glu Asn Arg
65 70 75 80
Lys Ser Ser Ile Ile Ile Arg Met Arg Asp Val Val Leu Phe Glu Lys
85 90 95
Lys Val Tyr Leu Ser Glu Cys Lys Thr Gly Asn Gly Lys Asn Tyr Arg
100 105 110
Gly Thr Met Ser Lys Thr Lys Asn Gly Ile Thr Cys Gln Lys Trp Ser
115 120 125
Ser Thr Ser Pro His Arg Pro Arg Phe Ser Pro Ala Thr His Pro Ser
130 135 140
Glu Gly Leu Glu Glu Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Asn Asp Pro Gln
145 150 155 160
Gly Pro Trp Cys Tyr Thr Thr Asp Pro Glu Lys Arg Tyr Asp Tyr Cys
165 170 175
Asp Ile Leu Glu Cys Glu Glu Glu Cys Met His Cys Ser Gly Glu Asn
180 185 190
Tyr Asp Gly Lys Ile Ser Lys Thr Met Ser Gly Leu Glu Cys Gln Ala
195 200 205
Trp Asp Ser Gln Ser Pro His Ala His Gly Tyr Ile Pro Ser Lys Phe
210 215 220
Pro Asn Lys Asn Leu Lys Lys Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Arg Glu
225 230 235 240
Leu Arg Pro Trp Cys Phe Thr Thr Asp Pro Asn Lys Arg Trp Glu Leu
245 250 255
Cys Asp Ile Pro Arg Cys Thr Thr Pro Pro Pro Ser Ser Gly Pro Thr
260 265 270
Tyr Gln Cys Leu Lys Gly Thr Gly Glu Asn Tyr Arg Gly Asn Val Ala
275 280 285
Val Thr Val Ser Gly His Thr Cys Gln His Trp Ser Ala Gln Thr Pro
290 295 300
His Thr His Asn Arg Thr Pro Glu Asn Phe Pro Cys Lys Asn Leu Asp
305 310 315 320
Glu Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Gly Lys Arg Ala Pro Trp Cys His
325 330 335
Thr Thr Asn Ser Gln Val Arg Trp Glu Tyr Cys Lys Ile Pro Ser Cys
340 345 350
Asp Ser Ser Pro Val Ser Thr Glu Gln Leu Ala Pro Thr Ala Pro Pro
355 360 365
Glu Leu Thr Pro Val Val Gln Asp Cys Tyr His Gly Asp Gly Gln Ser
370 375 380
Tyr Arg Gly Thr Ser Ser Thr Thr Thr Thr Gly Lys Lys Cys Gln Ser
385 390 395 400
Trp Ser Ser Met Thr Pro His Arg His Gln Lys Thr Pro Glu Asn Tyr
405 410 415
Pro Asn Ala Gly Leu Thr Met Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Ala Asp
420 425 430
Lys Gly Pro Trp Cys Phe Thr Thr Asp Pro Ser Val Arg Trp Glu Tyr
435 440 445
Cys Asn Leu Lys Lys Cys Ser Gly Thr Glu Ala Ser Val Val Ala Pro
450 455 460
Pro Pro Val Val Leu Leu Pro Asp Val Glu Thr Pro Ser Glu Glu Asp
465 470 475 480
Cys Met Phe Gly Asn Gly Lys Gly Tyr Arg Gly Lys Arg Ala Thr Thr
485 490 495
Val Thr Gly Thr Pro Cys Gln Asp Trp Ala Ala Gln Glu Pro His Arg
500 505 510
His Ser Ile Phe Thr Pro Glu Thr Asn Pro Arg Ala Gly Leu Glu Lys
515 520 525
Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Gly Asp Val Gly Gly Pro Trp Cys Tyr
530 535 540
Thr Thr Asn Pro Arg Lys Leu Tyr Asp Tyr Cys Asp Val Pro Gln Cys
545 550 555 560
Ala Ala Pro Ser Phe Asp Cys Gly Lys Pro Gln Val Glu Pro Lys Lys
565 570 575
Cys Pro Gly Arg Val Val Gly Gly Cys Val Ala His Pro His Ser Trp
580 585 590
Pro Trp Gln Val Ser Leu Arg Thr Arg Phe Gly Met His Phe Cys Gly
595 600 605
Gly Thr Leu Ile Ser Pro Glu Trp Val Leu Thr Ala Ala His Cys Leu
610 615 620
Glu Lys Ser Pro Arg Pro Ser Ser Tyr Lys Val Ile Leu Gly Ala His
625 630 635 640
Gln Glu Val Asn Leu Glu Pro His Val Gln Glu Ile Glu Val Ser Arg
645 650 655
Leu Phe Leu Glu Pro Thr Arg Lys Asp Ile Ala Leu Leu Lys Leu Ser
660 665 670
Ser Pro Ala Val Ile Thr Asp Lys Val Ile Pro Ala Cys Leu Pro Ser
675 680 685
Pro Asn Tyr Val Val Ala Asp Arg Thr Glu Cys Phe Ile Thr Gly Trp
690 695 700
Gly Glu Thr Gln Gly Thr Phe Gly Ala Gly Leu Leu Lys Glu Ala Gln
705 710 715 720
Leu Pro Val Ile Glu Asn Lys Val Cys Asn Arg Tyr Glu Phe Leu Asn
725 730 735
Gly Arg Val Gln Ser Thr Glu Leu Cys Ala Gly His Leu Ala Gly Gly
740 745 750
Thr Asp Ser Cys Gln Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Phe Glu
755 760 765
Lys Asp Lys Tyr Ile Leu Gln Gly Val Thr Ser Trp Gly Leu Gly Cys
770 775 780
Ala Arg Pro Asn Lys Pro Gly Val Tyr Val Arg Val Ser Arg Phe Val
785 790 795 800
Thr Trp Ile Glu Gly Val Met Arg Asn Asn
805 810
<210> 5
<211> 2145
<212> DNA
<213> LYS77-PLG（Lys-纤溶酶原）核酸序列
<400> 5
aaagtgtatc tctcagagtg caagactggg aatggaaaga actacagagg gacgatgtcc 60
aaaacaaaaa atggcatcac ctgtcaaaaa tggagttcca cttctcccca cagacctaga 120
ttctcacctg ctacacaccc ctcagaggga ctggaggaga actactgcag gaatccagac 180
aacgatccgc aggggccctg gtgctatact actgatccag aaaagagata tgactactgc 240
gacattcttg agtgtgaaga ggaatgtatg cattgcagtg gagaaaacta tgacggcaaa 300
atttccaaga ccatgtctgg actggaatgc caggcctggg actctcagag cccacacgct 360
catggataca ttccttccaa atttccaaac aagaacctga agaagaatta ctgtcgtaac 420
cccgataggg agctgcggcc ttggtgtttc accaccgacc ccaacaagcg ctgggaactt 480
tgtgacatcc cccgctgcac aacacctcca ccatcttctg gtcccaccta ccagtgtctg 540
aagggaacag gtgaaaacta tcgcgggaat gtggctgtta ccgtgtccgg gcacacctgt 600
cagcactgga gtgcacagac ccctcacaca cataacagga caccagaaaa cttcccctgc 660
aaaaatttgg atgaaaacta ctgccgcaat cctgacggaa aaagggcccc atggtgccat 720
acaaccaaca gccaagtgcg gtgggagtac tgtaagatac cgtcctgtga ctcctcccca 780
gtatccacgg aacaattggc tcccacagca ccacctgagc taacccctgt ggtccaggac 840
tgctaccatg gtgatggaca gagctaccga ggcacatcct ccaccaccac cacaggaaag 900
aagtgtcagt cttggtcatc tatgacacca caccggcacc agaagacccc agaaaactac 960
ccaaatgctg gcctgacaat gaactactgc aggaatccag atgccgataa aggcccctgg 1020
tgttttacca cagaccccag cgtcaggtgg gagtactgca acctgaaaaa atgctcagga 1080
acagaagcga gtgttgtagc acctccgcct gttgtcctgc ttccagatgt agagactcct 1140
tccgaagaag actgtatgtt tgggaatggg aaaggatacc gaggcaagag ggcgaccact 1200
gttactggga cgccatgcca ggactgggct gcccaggagc cccatagaca cagcattttc 1260
actccagaga caaatccacg ggcgggtctg gaaaaaaatt actgccgtaa ccctgatggt 1320
gatgtaggtg gtccctggtg ctacacgaca aatccaagaa aactttacga ctactgtgat 1380
gtccctcagt gtgcggcccc ttcatttgat tgtgggaagc ctcaagtgga gccgaagaaa 1440
tgtcctggaa gggttgtagg ggggtgtgtg gcccacccac attcctggcc ctggcaagtc 1500
agtcttagaa caaggtttgg aatgcacttc tgtggaggca ccttgatatc cccagagtgg 1560
gtgttgactg ctgcccactg cttggagaag tccccaaggc cttcatccta caaggtcatc 1620
ctgggtgcac accaagaagt gaatctcgaa ccgcatgttc aggaaataga agtgtctagg 1680
ctgttcttgg agcccacacg aaaagatatt gccttgctaa agctaagcag tcctgccgtc 1740
atcactgaca aagtaatccc agcttgtctg ccatccccaa attatgtggt cgctgaccgg 1800
accgaatgtt tcatcactgg ctggggagaa acccaaggta cttttggagc tggccttctc 1860
aaggaagccc agctccctgt gattgagaat aaagtgtgca atcgctatga gtttctgaat 1920
ggaagagtcc aatccaccga actctgtgct gggcatttgg ccggaggcac tgacagttgc 1980
cagggtgaca gtggaggtcc tctggtttgc ttcgagaagg acaaatacat tttacaagga 2040
gtcacttctt ggggtcttgg ctgtgcacgc cccaataagc ctggtgtcta tgttcgtgtt 2100
tcaaggtttg ttacttggat tgagggagtg atgagaaata attaa 2145
<210> 6
<211> 714
<212> PRT
<213> LYS77-PLG（Lys-纤溶酶原）氨基酸序列
<400> 6
Lys Val Tyr Leu Ser Glu Cys Lys Thr Gly Asn Gly Lys Asn Tyr Arg
1 5 10 15
Gly Thr Met Ser Lys Thr Lys Asn Gly Ile Thr Cys Gln Lys Trp Ser
20 25 30
Ser Thr Ser Pro His Arg Pro Arg Phe Ser Pro Ala Thr His Pro Ser
35 40 45
Glu Gly Leu Glu Glu Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Asn Asp Pro Gln
50 55 60
Gly Pro Trp Cys Tyr Thr Thr Asp Pro Glu Lys Arg Tyr Asp Tyr Cys
65 70 75 80
Asp Ile Leu Glu Cys Glu Glu Glu Cys Met His Cys Ser Gly Glu Asn
85 90 95
Tyr Asp Gly Lys Ile Ser Lys Thr Met Ser Gly Leu Glu Cys Gln Ala
100 105 110
Trp Asp Ser Gln Ser Pro His Ala His Gly Tyr Ile Pro Ser Lys Phe
115 120 125
Pro Asn Lys Asn Leu Lys Lys Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Arg Glu
130 135 140
Leu Arg Pro Trp Cys Phe Thr Thr Asp Pro Asn Lys Arg Trp Glu Leu
145 150 155 160
Cys Asp Ile Pro Arg Cys Thr Thr Pro Pro Pro Ser Ser Gly Pro Thr
165 170 175
Tyr Gln Cys Leu Lys Gly Thr Gly Glu Asn Tyr Arg Gly Asn Val Ala
180 185 190
Val Thr Val Ser Gly His Thr Cys Gln His Trp Ser Ala Gln Thr Pro
195 200 205
His Thr His Asn Arg Thr Pro Glu Asn Phe Pro Cys Lys Asn Leu Asp
210 215 220
Glu Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Gly Lys Arg Ala Pro Trp Cys His
225 230 235 240
Thr Thr Asn Ser Gln Val Arg Trp Glu Tyr Cys Lys Ile Pro Ser Cys
245 250 255
Asp Ser Ser Pro Val Ser Thr Glu Gln Leu Ala Pro Thr Ala Pro Pro
260 265 270
Glu Leu Thr Pro Val Val Gln Asp Cys Tyr His Gly Asp Gly Gln Ser
275 280 285
Tyr Arg Gly Thr Ser Ser Thr Thr Thr Thr Gly Lys Lys Cys Gln Ser
290 295 300
Trp Ser Ser Met Thr Pro His Arg His Gln Lys Thr Pro Glu Asn Tyr
305 310 315 320
Pro Asn Ala Gly Leu Thr Met Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Ala Asp
325 330 335
Lys Gly Pro Trp Cys Phe Thr Thr Asp Pro Ser Val Arg Trp Glu Tyr
340 345 350
Cys Asn Leu Lys Lys Cys Ser Gly Thr Glu Ala Ser Val Val Ala Pro
355 360 365
Pro Pro Val Val Leu Leu Pro Asp Val Glu Thr Pro Ser Glu Glu Asp
370 375 380
Cys Met Phe Gly Asn Gly Lys Gly Tyr Arg Gly Lys Arg Ala Thr Thr
385 390 395 400
Val Thr Gly Thr Pro Cys Gln Asp Trp Ala Ala Gln Glu Pro His Arg
405 410 415
His Ser Ile Phe Thr Pro Glu Thr Asn Pro Arg Ala Gly Leu Glu Lys
420 425 430
Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Gly Asp Val Gly Gly Pro Trp Cys Tyr
435 440 445
Thr Thr Asn Pro Arg Lys Leu Tyr Asp Tyr Cys Asp Val Pro Gln Cys
450 455 460
Ala Ala Pro Ser Phe Asp Cys Gly Lys Pro Gln Val Glu Pro Lys Lys
465 470 475 480
Cys Pro Gly Arg Val Val Gly Gly Cys Val Ala His Pro His Ser Trp
485 490 495
Pro Trp Gln Val Ser Leu Arg Thr Arg Phe Gly Met His Phe Cys Gly
500 505 510
Gly Thr Leu Ile Ser Pro Glu Trp Val Leu Thr Ala Ala His Cys Leu
515 520 525
Glu Lys Ser Pro Arg Pro Ser Ser Tyr Lys Val Ile Leu Gly Ala His
530 535 540
Gln Glu Val Asn Leu Glu Pro His Val Gln Glu Ile Glu Val Ser Arg
545 550 555 560
Leu Phe Leu Glu Pro Thr Arg Lys Asp Ile Ala Leu Leu Lys Leu Ser
565 570 575
Ser Pro Ala Val Ile Thr Asp Lys Val Ile Pro Ala Cys Leu Pro Ser
580 585 590
Pro Asn Tyr Val Val Ala Asp Arg Thr Glu Cys Phe Ile Thr Gly Trp
595 600 605
Gly Glu Thr Gln Gly Thr Phe Gly Ala Gly Leu Leu Lys Glu Ala Gln
610 615 620
Leu Pro Val Ile Glu Asn Lys Val Cys Asn Arg Tyr Glu Phe Leu Asn
625 630 635 640
Gly Arg Val Gln Ser Thr Glu Leu Cys Ala Gly His Leu Ala Gly Gly
645 650 655
Thr Asp Ser Cys Gln Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Phe Glu
660 665 670
Lys Asp Lys Tyr Ile Leu Gln Gly Val Thr Ser Trp Gly Leu Gly Cys
675 680 685
Ala Arg Pro Asn Lys Pro Gly Val Tyr Val Arg Val Ser Arg Phe Val
690 695 700
Thr Trp Ile Glu Gly Val Met Arg Asn Asn
705 710
<210> 7
<211> 1245
<212> DNA
<213> delta-plg（delta-纤溶酶原）核酸序列
<400> 7
gagcctctgg atgactatgt gaatacccag ggggcttcac tgttcagtgt cactaagaag 60
cagctgggag caggaagtat agaagaatgt gcagcaaaat gtgaggagga cgaagaattc 120
acctgcaggg cattccaata tcacagtaaa gagcaacaat gtgtgataat ggctgaaaac 180
aggaagtcct ccataatcat taggatgaga gatgtagttt tatttgaaaa gaaagtgtat 240
ctctcagagt gcaagactgg gaatggaaag aactacagag ggacgatgtc caaaacaaaa 300
aatggcatca cctgtcaaaa atggagttcc acttctcccc acagacctag attctcacct 360
gctacacacc cctcagaggg actggaggag aactactgca ggaatccaga caacgatccg 420
caggggccct ggtgctatac tactgatcca gaaaagagat atgactactg cgacattctt 480
gagtgtgaag aggcggcccc ttcatttgat tgtgggaagc ctcaagtgga gccgaagaaa 540
tgtcctggaa gggttgtagg ggggtgtgtg gcccacccac attcctggcc ctggcaagtc 600
agtcttagaa caaggtttgg aatgcacttc tgtggaggca ccttgatatc cccagagtgg 660
gtgttgactg ctgcccactg cttggagaag tccccaaggc cttcatccta caaggtcatc 720
ctgggtgcac accaagaagt gaatctcgaa ccgcatgttc aggaaataga agtgtctagg 780
ctgttcttgg agcccacacg aaaagatatt gccttgctaa agctaagcag tcctgccgtc 840
atcactgaca aagtaatccc agcttgtctg ccatccccaa attatgtggt cgctgaccgg 900
accgaatgtt tcatcactgg ctggggagaa acccaaggta cttttggagc tggccttctc 960
aaggaagccc agctccctgt gattgagaat aaagtgtgca atcgctatga gtttctgaat 1020
ggaagagtcc aatccaccga actctgtgct gggcatttgg ccggaggcac tgacagttgc 1080
cagggtgaca gtggaggtcc tctggtttgc ttcgagaagg acaaatacat tttacaagga 1140
gtcacttctt ggggtcttgg ctgtgcacgc cccaataagc ctggtgtcta tgttcgtgtt 1200
tcaaggtttg ttacttggat tgagggagtg atgagaaata attaa 1245
<210> 8
<211> 414
<212> PRT
<213> delta-plg（delta-纤溶酶原）氨基酸序列
<400> 8
Glu Pro Leu Asp Asp Tyr Val Asn Thr Gln Gly Ala Ser Leu Phe Ser
1 5 10 15
Val Thr Lys Lys Gln Leu Gly Ala Gly Ser Ile Glu Glu Cys Ala Ala
20 25 30
Lys Cys Glu Glu Asp Glu Glu Phe Thr Cys Arg Ala Phe Gln Tyr His
35 40 45
Ser Lys Glu Gln Gln Cys Val Ile Met Ala Glu Asn Arg Lys Ser Ser
50 55 60
Ile Ile Ile Arg Met Arg Asp Val Val Leu Phe Glu Lys Lys Val Tyr
65 70 75 80
Leu Ser Glu Cys Lys Thr Gly Asn Gly Lys Asn Tyr Arg Gly Thr Met
85 90 95
Ser Lys Thr Lys Asn Gly Ile Thr Cys Gln Lys Trp Ser Ser Thr Ser
100 105 110
Pro His Arg Pro Arg Phe Ser Pro Ala Thr His Pro Ser Glu Gly Leu
115 120 125
Glu Glu Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Asn Asp Pro Gln Gly Pro Trp
130 135 140
Cys Tyr Thr Thr Asp Pro Glu Lys Arg Tyr Asp Tyr Cys Asp Ile Leu
145 150 155 160
Glu Cys Glu Glu Ala Ala Pro Ser Phe Asp Cys Gly Lys Pro Gln Val
165 170 175
Glu Pro Lys Lys Cys Pro Gly Arg Val Val Gly Gly Cys Val Ala His
180 185 190
Pro His Ser Trp Pro Trp Gln Val Ser Leu Arg Thr Arg Phe Gly Met
195 200 205
His Phe Cys Gly Gly Thr Leu Ile Ser Pro Glu Trp Val Leu Thr Ala
210 215 220
Ala His Cys Leu Glu Lys Ser Pro Arg Pro Ser Ser Tyr Lys Val Ile
225 230 235 240
Leu Gly Ala His Gln Glu Val Asn Leu Glu Pro His Val Gln Glu Ile
245 250 255
Glu Val Ser Arg Leu Phe Leu Glu Pro Thr Arg Lys Asp Ile Ala Leu
260 265 270
Leu Lys Leu Ser Ser Pro Ala Val Ile Thr Asp Lys Val Ile Pro Ala
275 280 285
Cys Leu Pro Ser Pro Asn Tyr Val Val Ala Asp Arg Thr Glu Cys Phe
290 295 300
Ile Thr Gly Trp Gly Glu Thr Gln Gly Thr Phe Gly Ala Gly Leu Leu
305 310 315 320
Lys Glu Ala Gln Leu Pro Val Ile Glu Asn Lys Val Cys Asn Arg Tyr
325 330 335
Glu Phe Leu Asn Gly Arg Val Gln Ser Thr Glu Leu Cys Ala Gly His
340 345 350
Leu Ala Gly Gly Thr Asp Ser Cys Gln Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu
355 360 365
Val Cys Phe Glu Lys Asp Lys Tyr Ile Leu Gln Gly Val Thr Ser Trp
370 375 380
Gly Leu Gly Cys Ala Arg Pro Asn Lys Pro Gly Val Tyr Val Arg Val
385 390 395 400
Ser Arg Phe Val Thr Trp Ile Glu Gly Val Met Arg Asn Asn
405 410
<210> 9
<211> 1104
<212> DNA
<213> Mini-plg（小纤维蛋白溶酶原）核酸序列
<400> 9
gtcaggtggg agtactgcaa cctgaaaaaa tgctcaggaa cagaagcgag tgttgtagca 60
cctccgcctg ttgtcctgct tccagatgta gagactcctt ccgaagaaga ctgtatgttt 120
gggaatggga aaggataccg aggcaagagg gcgaccactg ttactgggac gccatgccag 180
gactgggctg cccaggagcc ccatagacac agcattttca ctccagagac aaatccacgg 240
gcgggtctgg aaaaaaatta ctgccgtaac cctgatggtg atgtaggtgg tccctggtgc 300
tacacgacaa atccaagaaa actttacgac tactgtgatg tccctcagtg tgcggcccct 360
tcatttgatt gtgggaagcc tcaagtggag ccgaagaaat gtcctggaag ggttgtaggg 420
gggtgtgtgg cccacccaca ttcctggccc tggcaagtca gtcttagaac aaggtttgga 480
atgcacttct gtggaggcac cttgatatcc ccagagtggg tgttgactgc tgcccactgc 540
ttggagaagt ccccaaggcc ttcatcctac aaggtcatcc tgggtgcaca ccaagaagtg 600
aatctcgaac cgcatgttca ggaaatagaa gtgtctaggc tgttcttgga gcccacacga 660
aaagatattg ccttgctaaa gctaagcagt cctgccgtca tcactgacaa agtaatccca 720
gcttgtctgc catccccaaa ttatgtggtc gctgaccgga ccgaatgttt catcactggc 780
tggggagaaa cccaaggtac ttttggagct ggccttctca aggaagccca gctccctgtg 840
attgagaata aagtgtgcaa tcgctatgag tttctgaatg gaagagtcca atccaccgaa 900
ctctgtgctg ggcatttggc cggaggcact gacagttgcc agggtgacag tggaggtcct 960
ctggtttgct tcgagaagga caaatacatt ttacaaggag tcacttcttg gggtcttggc 1020
tgtgcacgcc ccaataagcc tggtgtctat gttcgtgttt caaggtttgt tacttggatt 1080
gagggagtga tgagaaataa ttaa 1104
<210> 10
<211> 367
<212> PRT
<213> Mini-plg（小纤维蛋白溶酶原）氨基酸序列
<400> 10
Val Arg Trp Glu Tyr Cys Asn Leu Lys Lys Cys Ser Gly Thr Glu Ala
1 5 10 15
Ser Val Val Ala Pro Pro Pro Val Val Leu Leu Pro Asp Val Glu Thr
20 25 30
Pro Ser Glu Glu Asp Cys Met Phe Gly Asn Gly Lys Gly Tyr Arg Gly
35 40 45
Lys Arg Ala Thr Thr Val Thr Gly Thr Pro Cys Gln Asp Trp Ala Ala
50 55 60
Gln Glu Pro His Arg His Ser Ile Phe Thr Pro Glu Thr Asn Pro Arg
65 70 75 80
Ala Gly Leu Glu Lys Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Gly Asp Val Gly
85 90 95
Gly Pro Trp Cys Tyr Thr Thr Asn Pro Arg Lys Leu Tyr Asp Tyr Cys
100 105 110
Asp Val Pro Gln Cys Ala Ala Pro Ser Phe Asp Cys Gly Lys Pro Gln
115 120 125
Val Glu Pro Lys Lys Cys Pro Gly Arg Val Val Gly Gly Cys Val Ala
130 135 140
His Pro His Ser Trp Pro Trp Gln Val Ser Leu Arg Thr Arg Phe Gly
145 150 155 160
Met His Phe Cys Gly Gly Thr Leu Ile Ser Pro Glu Trp Val Leu Thr
165 170 175
Ala Ala His Cys Leu Glu Lys Ser Pro Arg Pro Ser Ser Tyr Lys Val
180 185 190
Ile Leu Gly Ala His Gln Glu Val Asn Leu Glu Pro His Val Gln Glu
195 200 205
Ile Glu Val Ser Arg Leu Phe Leu Glu Pro Thr Arg Lys Asp Ile Ala
210 215 220
Leu Leu Lys Leu Ser Ser Pro Ala Val Ile Thr Asp Lys Val Ile Pro
225 230 235 240
Ala Cys Leu Pro Ser Pro Asn Tyr Val Val Ala Asp Arg Thr Glu Cys
245 250 255
Phe Ile Thr Gly Trp Gly Glu Thr Gln Gly Thr Phe Gly Ala Gly Leu
260 265 270
Leu Lys Glu Ala Gln Leu Pro Val Ile Glu Asn Lys Val Cys Asn Arg
275 280 285
Tyr Glu Phe Leu Asn Gly Arg Val Gln Ser Thr Glu Leu Cys Ala Gly
290 295 300
His Leu Ala Gly Gly Thr Asp Ser Cys Gln Gly Asp Ser Gly Gly Pro
305 310 315 320
Leu Val Cys Phe Glu Lys Asp Lys Tyr Ile Leu Gln Gly Val Thr Ser
325 330 335
Trp Gly Leu Gly Cys Ala Arg Pro Asn Lys Pro Gly Val Tyr Val Arg
340 345 350
Val Ser Arg Phe Val Thr Trp Ile Glu Gly Val Met Arg Asn Asn
355 360 365
<210> 11
<211> 750
<212> DNA
<213> Micro-plg（微纤维蛋白溶酶原）核酸序列
<400> 11
gccccttcat ttgattgtgg gaagcctcaa gtggagccga agaaatgtcc tggaagggtt 60
gtaggggggt gtgtggccca cccacattcc tggccctggc aagtcagtct tagaacaagg 120
tttggaatgc acttctgtgg aggcaccttg atatccccag agtgggtgtt gactgctgcc 180
cactgcttgg agaagtcccc aaggccttca tcctacaagg tcatcctggg tgcacaccaa 240
gaagtgaatc tcgaaccgca tgttcaggaa atagaagtgt ctaggctgtt cttggagccc 300
acacgaaaag atattgcctt gctaaagcta agcagtcctg ccgtcatcac tgacaaagta 360
atcccagctt gtctgccatc cccaaattat gtggtcgctg accggaccga atgtttcatc 420
actggctggg gagaaaccca aggtactttt ggagctggcc ttctcaagga agcccagctc 480
cctgtgattg agaataaagt gtgcaatcgc tatgagtttc tgaatggaag agtccaatcc 540
accgaactct gtgctgggca tttggccgga ggcactgaca gttgccaggg tgacagtgga 600
ggtcctctgg tttgcttcga gaaggacaaa tacattttac aaggagtcac ttcttggggt 660
cttggctgtg cacgccccaa taagcctggt gtctatgttc gtgtttcaag gtttgttact 720
tggattgagg gagtgatgag aaataattaa 750
<210> 12
<211> 249
<212> PRT
<213> Micro-plg（微纤维蛋白溶酶原）氨基酸序列
<400> 12
Ala Pro Ser Phe Asp Cys Gly Lys Pro Gln Val Glu Pro Lys Lys Cys
1 5 10 15
Pro Gly Arg Val Val Gly Gly Cys Val Ala His Pro His Ser Trp Pro
20 25 30
Trp Gln Val Ser Leu Arg Thr Arg Phe Gly Met His Phe Cys Gly Gly
35 40 45
Thr Leu Ile Ser Pro Glu Trp Val Leu Thr Ala Ala His Cys Leu Glu
50 55 60
Lys Ser Pro Arg Pro Ser Ser Tyr Lys Val Ile Leu Gly Ala His Gln
65 70 75 80
Glu Val Asn Leu Glu Pro His Val Gln Glu Ile Glu Val Ser Arg Leu
85 90 95
Phe Leu Glu Pro Thr Arg Lys Asp Ile Ala Leu Leu Lys Leu Ser Ser
100 105 110
Pro Ala Val Ile Thr Asp Lys Val Ile Pro Ala Cys Leu Pro Ser Pro
115 120 125
Asn Tyr Val Val Ala Asp Arg Thr Glu Cys Phe Ile Thr Gly Trp Gly
130 135 140
Glu Thr Gln Gly Thr Phe Gly Ala Gly Leu Leu Lys Glu Ala Gln Leu
145 150 155 160
Pro Val Ile Glu Asn Lys Val Cys Asn Arg Tyr Glu Phe Leu Asn Gly
165 170 175
Arg Val Gln Ser Thr Glu Leu Cys Ala Gly His Leu Ala Gly Gly Thr
180 185 190
Asp Ser Cys Gln Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Phe Glu Lys
195 200 205
Asp Lys Tyr Ile Leu Gln Gly Val Thr Ser Trp Gly Leu Gly Cys Ala
210 215 220
Arg Pro Asn Lys Pro Gly Val Tyr Val Arg Val Ser Arg Phe Val Thr
225 230 235 240
Trp Ile Glu Gly Val Met Arg Asn Asn
245
<210> 13
<211> 684
<212> DNA
<213> 丝氨酸蛋白酶（结构）域的核酸序列
<400> 13
gttgtagggg ggtgtgtggc ccacccacat tcctggccct ggcaagtcag tcttagaaca 60
aggtttggaa tgcacttctg tggaggcacc ttgatatccc cagagtgggt gttgactgct 120
gcccactgct tggagaagtc cccaaggcct tcatcctaca aggtcatcct gggtgcacac 180
caagaagtga atctcgaacc gcatgttcag gaaatagaag tgtctaggct gttcttggag 240
cccacacgaa aagatattgc cttgctaaag ctaagcagtc ctgccgtcat cactgacaaa 300
gtaatcccag cttgtctgcc atccccaaat tatgtggtcg ctgaccggac cgaatgtttc 360
atcactggct ggggagaaac ccaaggtact tttggagctg gccttctcaa ggaagcccag 420
ctccctgtga ttgagaataa agtgtgcaat cgctatgagt ttctgaatgg aagagtccaa 480
tccaccgaac tctgtgctgg gcatttggcc ggaggcactg acagttgcca gggtgacagt 540
ggaggtcctc tggtttgctt cgagaaggac aaatacattt tacaaggagt cacttcttgg 600
ggtcttggct gtgcacgccc caataagcct ggtgtctatg ttcgtgtttc aaggtttgtt 660
acttggattg agggagtgat gaga 684
<210> 14
<211> 228
<212> PRT
<213> 丝氨酸蛋白酶（结构）域的氨基酸序列
<400> 14
Val Val Gly Gly Cys Val Ala His Pro His Ser Trp Pro Trp Gln Val
1 5 10 15
Ser Leu Arg Thr Arg Phe Gly Met His Phe Cys Gly Gly Thr Leu Ile
20 25 30
Ser Pro Glu Trp Val Leu Thr Ala Ala His Cys Leu Glu Lys Ser Pro
35 40 45
Arg Pro Ser Ser Tyr Lys Val Ile Leu Gly Ala His Gln Glu Val Asn
50 55 60
Leu Glu Pro His Val Gln Glu Ile Glu Val Ser Arg Leu Phe Leu Glu
65 70 75 80
Pro Thr Arg Lys Asp Ile Ala Leu Leu Lys Leu Ser Ser Pro Ala Val
85 90 95
Ile Thr Asp Lys Val Ile Pro Ala Cys Leu Pro Ser Pro Asn Tyr Val
100 105 110
Val Ala Asp Arg Thr Glu Cys Phe Ile Thr Gly Trp Gly Glu Thr Gln
115 120 125
Gly Thr Phe Gly Ala Gly Leu Leu Lys Glu Ala Gln Leu Pro Val Ile
130 135 140
Glu Asn Lys Val Cys Asn Arg Tyr Glu Phe Leu Asn Gly Arg Val Gln
145 150 155 160
Ser Thr Glu Leu Cys Ala Gly His Leu Ala Gly Gly Thr Asp Ser Cys
165 170 175
Gln Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Phe Glu Lys Asp Lys Tyr
180 185 190
Ile Leu Gln Gly Val Thr Ser Trp Gly Leu Gly Cys Ala Arg Pro Asn
195 200 205
Lys Pro Gly Val Tyr Val Arg Val Ser Arg Phe Val Thr Trp Ile Glu
210 215 220
Gly Val Met Arg
225

Claims (10)

1.一种用于预防和/或治疗受试者脂肪肝及其相关病症的方法，包括给药受试者预防和/或治疗有效量的纤溶酶原，所述受试者患有、怀疑患有脂肪肝及其相关病症或具有患上脂肪肝及其相关病状的风险。
2.权利要求1的方法，其中所述脂肪肝包括肥胖性脂肪肝、酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪肝、快速减肥性脂肪肝、营养不良性脂肪肝、糖尿病脂肪肝、药物性脂肪肝。
3.一种用于预防和/或治疗受试者脂肪肝及其相关病症的方法，包括给药受试者预防和/或治疗有效量的纤溶酶原，其中所述脂肪肝为内分泌紊乱疾病、糖代谢疾病、肝脏疾病、肾脏疾病、心血管疾病、肠道疾病、甲状腺疾病、胆囊或胆道疾病、肥胖症、饮酒、药物治疗引发或伴随的。
4.权利要求3的方法，其中所述脂肪肝为高血压、糖尿病、慢性肝炎、肾损伤、慢性肾小球肾炎、慢性肾盂肾炎、肾病综合征、肾功能不全、肾移植、尿毒症、甲状腺功能低下、阻塞性胆囊炎、阻塞性胆管炎、雌激素治疗引发或伴随的。
5.一种用于预防和/或治疗受试者肝脏脂质沉积及其相关病症的方法，包括给药受试者预防和/或治疗有效量的纤溶酶原，所述受试者患有、怀疑患有肝脏脂质沉积及其相关病症或具有患上脂肪肝及其相关病状的风险。
6.权利要求5的方法，其中所述肝脏脂质沉积为内分泌紊乱疾病、糖代谢疾病、肝脏疾病、肾脏疾病、心血管疾病、肠道疾病、甲状腺疾病、胆囊或胆道疾病、肥胖症、饮酒、药物治疗引发或伴随的。
7.权利要求6的方法，其中所述肝脏脂质沉积为高血压、糖尿病、慢性肝炎、肾损伤、慢性肾小球肾炎、慢性肾盂肾炎、肾病综合征、肾功能不全、肾移植、尿毒症、甲状腺功能低下、阻塞性胆囊炎、阻塞性胆管炎、药物治疗引发或伴随的。
8.一种消减动脉粥样硬化受试者肝脏脂质沉积的方法，包括给药所述受试者有效量的纤溶酶原。
9.一种消减糖尿病受试者肝脏脂质沉积的方法，包括给药所述受试者有效量的纤溶酶原。
10.一种消减高脂血症受试者肝脏脂质沉积的方法，包括给药所述受试者有效量的纤溶酶原。
CN201710465726.6A 2016-12-15 2017-06-19 预防和治疗脂肪肝的药物及其用途 Pending CN108210902A (zh)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2016111622375 2016-12-15
CN201611161347 2016-12-15
CN201611161347X 2016-12-15
CN201611162237 2016-12-15

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN108210902A true CN108210902A (zh) 2018-06-29

Family

ID=62656680

Family Applications (8)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710466235.3A Pending CN108210904A (zh) 2016-12-15 2017-06-19 治疗动脉粥样硬化及其并发症的药物及其用途
CN201710465724.7A Pending CN108210900A (zh) 2016-12-15 2017-06-19 预防和治疗肥胖症的药物及其用途
CN201710465726.6A Pending CN108210902A (zh) 2016-12-15 2017-06-19 预防和治疗脂肪肝的药物及其用途
CN201710466263.5A Pending CN108210914A (zh) 2016-12-15 2017-06-19 预防和治疗脂肪代谢紊乱及其相关病症的药物及其用途
CN201710466253.1A Pending CN108210906A (zh) 2016-12-15 2017-06-19 治疗冠状动脉粥样硬化及其并发症的药物及其用途
CN201710465721.3A Pending CN108210898A (zh) 2016-12-15 2017-06-19 预防和治疗脂肪异常沉积导致的组织损伤的药物及其用途
CN201710465497.8A Pending CN108210896A (zh) 2016-12-15 2017-06-19 预防和治疗高脂血症的药物及其用途
CN201710465496.3A Pending CN108210895A (zh) 2016-12-15 2017-06-19 预防动脉粥样硬化及其并发症的药物及其用途

Family Applications Before (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710466235.3A Pending CN108210904A (zh) 2016-12-15 2017-06-19 治疗动脉粥样硬化及其并发症的药物及其用途
CN201710465724.7A Pending CN108210900A (zh) 2016-12-15 2017-06-19 预防和治疗肥胖症的药物及其用途

Family Applications After (5)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710466263.5A Pending CN108210914A (zh) 2016-12-15 2017-06-19 预防和治疗脂肪代谢紊乱及其相关病症的药物及其用途
CN201710466253.1A Pending CN108210906A (zh) 2016-12-15 2017-06-19 治疗冠状动脉粥样硬化及其并发症的药物及其用途
CN201710465721.3A Pending CN108210898A (zh) 2016-12-15 2017-06-19 预防和治疗脂肪异常沉积导致的组织损伤的药物及其用途
CN201710465497.8A Pending CN108210896A (zh) 2016-12-15 2017-06-19 预防和治疗高脂血症的药物及其用途
CN201710465496.3A Pending CN108210895A (zh) 2016-12-15 2017-06-19 预防动脉粥样硬化及其并发症的药物及其用途

Country Status (2)

Country Link
CN (8) CN108210904A (zh)
HK (7) HK1257236A1 (zh)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108671226A (zh) * 2018-08-08 2018-10-19 广州铭康生物工程有限公司 有效治疗中心静脉导管并发症的药物及其用途
CN110093412A (zh) * 2019-03-29 2019-08-06 南方医科大学南方医院 用于诊断动脉粥样硬化的分子标志物ugp2及应用
CN111100928A (zh) * 2020-01-09 2020-05-05 武汉科技大学 动脉粥样硬化生物标志物及动脉粥样硬化诊断试剂盒
EP4112069A4 (en) * 2020-02-26 2023-09-27 Talengen International Limited METHOD AND MEDICINE FOR THE PREVENTION AND TREATMENT OF AN ABNORMAL BLOOD PRESSURE PROBLEM
CN112305120B (zh) * 2020-10-30 2022-02-08 河北医科大学第二医院 代谢物在动脉粥样硬化性脑梗死中的应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101563100A (zh) * 2006-08-28 2009-10-21 欧姆尼治疗有限公司 用于预防和治疗牙周病、改善牙周创伤愈合以及促进口腔健康的新药物靶标
CN102532326A (zh) * 2011-11-18 2012-07-04 南京大学 一种肿瘤靶向的人纤溶酶原Kringle5变体及其应用

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1408431A (zh) * 2001-09-21 2003-04-09 北京华兴生生物技术有限公司 治疗与新生血管生成相关疾病的基因工程药物
WO2003066842A2 (de) * 2002-02-06 2003-08-14 Trommsdorff Gmbh & Co. Kg Arzneimittel Verfahren zur herstellung von rekombinanten proteinen in mikroorganismen
CN1668312A (zh) * 2002-05-13 2005-09-14 洛杉矶儿童医院 疤痕疙瘩和其它的皮肤或内部的创伤或损伤中异常疤痕形成的处理和抑制
CN101518533A (zh) * 2002-12-06 2009-09-02 法布罗根股份有限公司 脂肪调节
BR0316584A (pt) * 2002-12-10 2005-10-04 Wyeth Corp Derivados de ácido acético indol oxo-acetil amino substituìdo como inibidores do inibidor-1 do ativador do plasminogênio (pai-1)
JPWO2005026127A1 (ja) * 2003-09-11 2006-11-16 株式会社医薬分子設計研究所 プラスミノゲンアクチベータインヒビター−１阻害剤
KR101161819B1 (ko) * 2004-04-22 2012-07-03 테일크리스 바이오쎄러퓨틱스 아이엔씨. 재조합적으로 변형된 플라스민
WO2006095713A1 (ja) * 2005-03-08 2006-09-14 Institute Of Medicinal Molecular Design. Inc. プラスミノゲンアクチベータインヒビター－１阻害剤
JPWO2007111242A1 (ja) * 2006-03-24 2009-08-13 ロート製薬株式会社 メタボリック症候群改善剤
CA2666670A1 (en) * 2006-10-20 2008-05-02 Dow Global Technologies Inc. Uses of water-soluble cellulose derivatives for preventing or treating metabolic syndrome
US20090239868A1 (en) * 2007-10-23 2009-09-24 Institute Of Medical Molecular Design, Inc. Inhibitor of pai-1 production
RU2010120675A (ru) * 2007-10-23 2011-11-27 Инститьют Оф Медисинал Молекьюлар Дизайн, Инк. (Jp) Ингибитор продуцирования pai-1
MX2012000475A (es) * 2009-07-10 2012-03-26 Thrombogenics Nv Variantes de plasminogeno y plasmina.
EP3251686A1 (en) * 2009-08-12 2017-12-06 Cornell University Methods for preventing or treating metabolic syndrome
WO2011139974A2 (en) * 2010-05-03 2011-11-10 Abbott Laboratories Anti-pai-1 antibodies and methods of use thereof
EP2661493B1 (en) * 2011-01-05 2016-03-30 ThromboGenics N.V. Plasminogen and plasmin variants
KR20140010126A (ko) * 2011-03-03 2014-01-23 터서스 파마수티칼 엘엘씨 C16:1n7-팔미톨리에이트를 포함하는 조성물들 및 방법들
CN102188699A (zh) * 2011-05-06 2011-09-21 南京农业大学 一种治疗动脉粥样硬化的药物组合物及其制备方法和应用
CN103764163A (zh) * 2011-08-12 2014-04-30 斯路姆基因公司 纤溶酶原和纤溶酶变体
EA033403B1 (ru) * 2013-08-13 2019-10-31 Sanofi Sa Антитела к ингибитору активатора плазминогена 1 (pai-1) и пути их применения
WO2015026494A2 (en) * 2013-08-20 2015-02-26 Trustees Of Dartmouth College Methods for treating tissue fibrosis

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101563100A (zh) * 2006-08-28 2009-10-21 欧姆尼治疗有限公司 用于预防和治疗牙周病、改善牙周创伤愈合以及促进口腔健康的新药物靶标
CN102532326A (zh) * 2011-11-18 2012-07-04 南京大学 一种肿瘤靶向的人纤溶酶原Kringle5变体及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
NCBI: "NP_000292.1", 《NCBI》 *
QING XIAO等: "Plasminogen deficiency accelerates vessel wall disease in mice predisposed to atherosclerosis", 《PROC.NATL.ACAD.SCI.》 *

Also Published As

Publication number Publication date
HK1257234A1 (zh) 2019-10-18
HK1257237A1 (zh) 2019-10-18
HK1257233A1 (zh) 2019-10-18
HK1257240A1 (zh) 2019-10-18
HK1257583A1 (zh) 2019-10-25
CN108210914A (zh) 2018-06-29
CN108210900A (zh) 2018-06-29
HK1257236A1 (zh) 2019-10-18
CN108210896A (zh) 2018-06-29
HK1257239A1 (zh) 2019-10-18
CN108210906A (zh) 2018-06-29
CN108210898A (zh) 2018-06-29
CN108210895A (zh) 2018-06-29
CN108210904A (zh) 2018-06-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110114083A (zh) 一种预防和治疗脂肪肝的方法
CN108210902A (zh) 预防和治疗脂肪肝的药物及其用途
CN108463240A (zh) 一种预防或治疗糖尿病性视网膜病变的方法
CN110114081A (zh) 一种改善心脏病变的方法
CN110139668A (zh) 一种预防和治疗肝纤维化的方法
CN108210892A (zh) 预防和治疗肝纤维化的药物及其用途
WO2018107689A1 (zh) 一种预防和治疗脂质肾损伤的方法
CN106890320A (zh) 一种用于预防或治疗急性及慢性血栓的方法
CN108463236A (zh) 一种预防或治疗放射性和化学性损伤的方法
CN108210909A (zh) 预防和治疗脂质肾损伤的药物及其用途
CN106890324A (zh) 一种预防和治疗糖尿病肾病的方法
CN108210893A (zh) 预防和治疗肾纤维化的药物及其用途
CN108210917A (zh) 一种预防和治疗肥胖症的方法和药物
CN106890318A (zh) 一种预防和治疗糖尿病性心脏病的新方法
CN108210915A (zh) 改善心脏病变的药物及其用途
CN108210916A (zh) 一种预防和治疗骨质疏松的药物及其用途
CN106890319A (zh) 一种预防或治疗糖尿病性视网膜病变的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 1257237

Country of ref document: HK

RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20180629