CN108159096A - 一种野生人参总皂甙的提取方法及检测方法 - Google Patents

一种野生人参总皂甙的提取方法及检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种野生人参总皂甙的提取方法，将新鲜人参恒温干燥后粉碎，使用甲醇水溶液进行超声提取，得到提取液，加水和石油醚进行分液萃取，弃去石油醚层，合并剩余液体并浓缩；浓缩物溶解在水溶硅溶液中，加入正丁醇进行分液萃取，弃去正丁醇层，合并水溶硅层并浓缩，得到人参总皂甙。不需复杂的提取设备，提取后不需后续分离、纯化，提取物常温下稳定；本发明还公开了一种野生人参总皂甙的检测方法，配制人参皂甙标准溶液，配制上述提取方法所得人参总皂甙的测试液，采用香草醛‑高氯酸光度分析法进行检测计算，得到上述提取方法所得人参总皂甙的总皂甙量。本发明提取方法，总皂甙收率高，操作简单方便，适合工业化生产。

Description

一种野生人参总皂甙的提取方法及检测方法
技术领域
本发明属于分析技术领域，具体涉及一种人参总皂甙的提取方法及检测方法。
背景技术
人参(Panax ginseng)为五加科人参属植物人参的根和根茎，始载于《神农本草经》，列为上品，是传统的名贵药材，被誉为药中之王，具有大补元气，固脱，生津，安神的功效。主治气虚欲脱，劳伤虚损，倦怠，纳呆，呕吐，大便滑泄，气短，自汗，久咳虚喘，消渴，失眠，惊悸，健忘，阳痿，尿频，崩漏等一切气虚津伤之证。作为传统的名贵中药，人参具有多种确切的药理作用，如抗衰老、抗疲劳、抗氧化、抗肿瘤、抗糖尿病等。
总皂甙是从五加科植物人参的根、茎叶中提取精制而成，其富含十八种人参单体皂甙，主要适用于冠心病、心绞痛、心率过缓、过快、室性早博、血压失调、神经衰弱、更年期综合症、疲劳过度、病后、产后、术后身体虚弱等症状；久服可以延年益寿，并能增强体力，治疗癌症患者因放疗和化疗引起的免疫功能低下等症；有抗冷热应激作用。人参皂甙具有增强人体表面细胞的活力，抑制衰老等作用。同时实验结果表明，人参皂甙可以明显抑制脑和肝中过氧化脂质形成，减少大脑皮层和肝中脂褐素的含量，同时也能增加超氧化物歧化酶和过氧化氢酶在血液中的含量，具有抗氧化作用。
在测定人参总皂甙的过程中，总皂甙的提取一直是决定方法快慢的关键步骤。常用的提取方法是索氏提取法，索氏法是经典的提取方法，应用范围较广，提取比较彻底；缺点是提取时间长，操作繁琐，仅仅提取和萃取净化过程就需约2个工作日。近几年超声波提取法的应用大大缩短了提取时间，提高了工作效率。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种人参总皂甙的提取方法，该方法所使用的原料均为食品级，无污染，总皂甙收率高，操作简单方便，适合大规模工业化生产。本发明方法采用了甲醇水溶液进行人参总皂甙的提取，采用水溶硅溶液进行萃取，不需复杂的提取设备，提取后不需后续分离、纯化等处理，提取物常温下稳定、不分解，不产生二次化学反应、不变质；采用本发明方法，总皂甙收率高，操作简单方便，适合工业化生产。
本发明的第二目的在于提供一种采用上述提取方法提取的人参总皂甙的检测方法，方法简单易行，快速有效，便于推广。
为了实现上述目的，采用以下技术方案：
一种野生人参总皂甙的提取方法，包括如下步骤：
将新鲜人参恒温干燥后粉碎，使用甲醇水溶液进行超声提取，得到提取液，加水和石油醚进行分液萃取，弃去石油醚层，合并剩余液体并浓缩；浓缩物溶解在水溶硅溶液中，加入正丁醇进行分液萃取，弃去正丁醇层，合并水溶硅层并浓缩，得到人参总皂甙。
所述水溶硅溶液为：将Na2SiO3·10H2O溶解在水中，得到水溶硅溶液，浓度为10mg/mL。
本发明中提供一种优选的提取方法，步骤如下：
1)、将新鲜人参恒温干燥至含水量为1-2％，将干燥人参粉碎至40-60目。
2)、将人参粉末与甲醇水溶液混合，放置在超声仪中进行超声提取，提取后对混合物进行抽滤，得到提取液，加入等体积的蒸馏水，备用。
3)、将步骤2)中的液体移至分液漏斗中，加入石油醚萃取2-3次，去除石油醚层，收集合并剩余液体，减压旋蒸浓缩至原体积的1/10。
4)、将步骤3)得到的浓缩物溶解在10-20倍体积的水溶硅溶液，再按照与溶解后等体积加入正丁醇，萃取，除去正丁醇层，同样方法萃取2-3次，收集水溶硅溶液层合并，减压旋蒸浓缩，得到人参总皂甙。
步骤4)所述水溶硅溶液为：将Na2SiO3·10H2O溶解在水中，得到水溶硅溶液，浓度为10mg/mL。
优选地，恒温干燥温度为40-50℃；
优选地，超声萃取中人参粉末与甲醇水溶液混合按照固体：液体体积比为1:5-10的比例进行；
优选地，甲醇水溶液中甲醇的体积分数为60-90％；
优选地，超声提取的条件为300-800W；
优选地，超声提取的温度50-70℃；
优选地，超声提取的时间为3-5小时。
本发明还提供一种野生人参总皂甙的检测方法，包括如下步骤：
配制人参皂甙标准溶液，配制上述提取方法得到的人参总皂甙测试液，采用香草醛-高氯酸光度分析法进行检测计算，得到上述提取方法所得人参总皂甙的总皂甙量。
优选地，所述标准溶液和测试液所使用溶剂均为甲醇溶液。
本发明中提供一种优选的野生人参总皂甙检测方法，步骤如下：
1)、配制人参皂甙标准溶液(1.0mg/mL)：精确称取10.0mg人参皂甙(Re)标准品，用甲醇溶解并定容至10mL。
2)、称取10mg上述提取方法所得总皂甙，准确加入2mL甲醇，加塞后放入超声波水浴中溶解，取出，备用。
3)、香草醛-高氯酸光度分析法：准确移取50μL上述溶液于另一10mL具塞试管中，放入水浴中挥干溶剂。取出后再依次加入0.2mL香草醛-冰乙酸溶液和0.8mL KClO4摇匀，置于60℃水浴中加热15min。取出后于冷水中冷却至室温，再加入5mL冰乙酸，摇匀，于560nm波长处测量吸光度，与标准对照，计算样品中总皂甙量，得到上述提取方法所得人参总皂甙的总皂甙量。
本发明的有益效果如下：
本发明方法采用了甲醇水溶液进行野生人参总皂甙的提取，采用水溶硅溶液进行萃取，不需复杂的提取设备，提取后不需后续分离、纯化等处理，提取物常温下稳定、不分解，不产生二次化学反应、不变质；采用本发明方法，总皂甙收率高，操作简单方便，适合工业化生产。
本发明建立的野生人参总皂甙的快速提取及测定方法，提高了分析速度及工作效率，节省试剂，降低了实验室劳动强度。本方法不仅快速，而且也比较准确，完全符合一般测试要求。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行具体描述，有必要在此指出的是本实施例只用于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的技术熟练人员可以根据以上发明的内容做出一些非本质的改进和调整。
实施例1：
1)、将新鲜人参在40℃条件下恒温干燥，干燥至含水量为1％，将干燥野生人参粉碎至40目。
2)、将人参粉末按照固体：液体体积比为1:5的比例与体积分数为60％的甲醇水溶液混合，放置在超声仪中进行超声提取，超声提取条件为500W，55℃，时间为3小时，提取后对混合物进行抽滤，得到提取液，加入等体积的蒸馏水，备用。
3)、将步骤(2)中的液体移至分液漏斗中，按照体积比为1:1，加入石油醚，萃取时间为10小时，将上层石油醚层去除，同样方法萃取2次，收集合并剩余液体，减压旋蒸浓缩至原体积的1/10。
4)、将步骤(3)得到的浓缩物溶解在15倍体积的水溶硅溶液，再按照与溶解后等体积加入正丁醇，萃取6小时，除去正丁醇层，同样方法萃取2次，收集水溶硅溶液层合并，减压旋蒸浓缩，得到人参总皂甙。
人参总皂甙的检测，包括如下步骤：
1)、人参皂甙标准溶液(1.0mg/mL)：精确称取10.0mg人参皂甙(Re)标准品，用甲醇溶解并定容至10mL。
2)、称取10mg上述提取方法所得总皂甙，准确加入2mL甲醇，加塞后放入超声波水浴中溶解，取出，备用。
3)、香草醛-高氯酸光度分析法：准确移取50μL上述溶液于另一10mL具塞试管中，放入水浴中挥干溶剂。取出后再依次加入0.2mL香草醛-冰乙酸溶液和0.8mL KClO4摇匀，置于60℃水浴中加热15min。取出后于冷水中冷却至室温，再加入5mL冰乙酸，摇匀，于560nm波长处测量吸光度，与标准对照，计算样品中总皂甙量。得到上述提取方法所得人参总皂甙的总皂甙的含量为：82％。
实施例2
1)、将新鲜人参在45℃条件下恒温干燥，干燥至含水量为1.5％，将干燥野生人参粉碎至50目。
2)、将人参粉末按照固体：液体体积比为1:7的比例与体积分数为75％的甲醇水溶液混合，放置在超声仪中进行超声提取，超声提取条件为800W，60℃，时间为5小时，提取后对混合物进行抽滤，得到提取液，加入等体积的蒸馏水，备用。
3)、将步骤(2)中的液体移至分液漏斗中，按照体积比为1:1，加入石油醚，萃取时间为13小时，将上层石油醚层去除，同样方法萃取3次，收集合并剩余液体，减压旋蒸浓缩至原体积的1/10。
4)、将步骤(3)得到的浓缩物溶解在15倍体积的水溶硅溶液，再按照与溶解后等体积加入正丁醇，萃取7小时，除去正丁醇层，同样方法萃取2次，收集水溶硅溶液层合并，减压旋蒸浓缩，得到人参总皂甙。
人参总皂甙的检测，包括如下步骤：
1)、人参皂甙标准溶液(1.0mg/mL)：精确称取10.0mg人参皂甙(Re)标准品，用甲醇溶解并定容至10mL。
2)、称取10mg上述提取方法所得总皂甙，准确加入2mL甲醇，加塞后放入超声波水浴中溶解，取出，备用。
3)、香草醛-高氯酸光度分析法：准确移取50μL上述溶液于另一10mL具塞试管中，放入水浴中挥干溶剂。取出后再依次加入0.2mL香草醛-冰乙酸溶液和0.8mL KClO4摇匀，置于60℃水浴中加热15min。取出后于冷水中冷却至室温，再加入5mL冰乙酸，摇匀，于560nm波长处测量吸光度，与标准对照，计算样品中总皂甙量。得到上述提取方法所得人参总皂甙的总皂甙的含量为：85％。
实施例3
1)、将新鲜人参在50℃条件下恒温干燥，干燥至含水量为2％，将干燥野生人参粉碎至60目。
2)、将人参粉末按照固体：液体体积比为1:10的比例与体积分数为90％的甲醇水溶液混合，放置在超声仪中进行超声提取，超声提取条件为700W，50℃，时间为4小时，提取后对混合物进行抽滤，得到提取液，加入等体积的蒸馏水，备用。
3)、将步骤(2)中的液体移至分液漏斗中，按照体积比为1:1，加入石油醚，萃取时间为14小时，将上层石油醚层去除，同样方法萃取3次，收集合并剩余液体，减压旋蒸浓缩至原体积的1/10。
4)、将步骤(3)得到的浓缩物溶解在20倍体积的水溶硅溶液，再按照与溶解后等体积加入正丁醇，萃取7小时，除去正丁醇层，同样方法萃取3次，收集水溶硅溶液层合并，减压旋蒸浓缩，得到人参总皂甙。
人参总皂甙的检测，包括如下步骤：
1)、人参皂甙标准溶液(1.0mg/mL)：精确称取10.0mg人参皂甙(Re)标准品，用甲醇溶解并定容至10mL。
2)、称取10mg上述提取方法所得总皂甙，准确加入2mL甲醇，加塞后放入超声波水浴中溶解，取出，备用。
3)、香草醛-高氯酸光度分析法：准确移取50μL上述溶液于另一10mL具塞试管中，放入水浴中挥干溶剂。取出后再依次加入0.2mL香草醛-冰乙酸溶液和0.8mL KClO4摇匀，置于60℃水浴中加热15min。取出后于冷水中冷却至室温，再加入5mL冰乙酸，摇匀，于560nm波长处测量吸光度，与标准对照，计算样品中总皂甙量。得到上述提取方法所得人参总皂甙的总皂甙的含量为：86％。
实施例4
1)、将新鲜人参在50℃条件下恒温干燥，干燥至含水量为2％，将干燥野生人参粉碎至60目。
2)、将人参粉末按照固体：液体体积比为1:10的比例与体积分数为90％的甲醇水溶液混合，放置在超声仪中进行超声提取，超声提取条件为300W，70℃，时间为4小时，提取后对混合物进行抽滤，得到提取液，加入等体积的蒸馏水，备用。
3)、将步骤(2)中的液体移至分液漏斗中，按照体积比为1:1，加入石油醚，萃取时间为14小时，将上层石油醚层去除，同样方法萃取3次，收集合并剩余液体，减压旋蒸浓缩至原体积的1/10。
4)、将步骤(3)得到的浓缩物溶解在10倍体积的水溶硅溶液，再按照与溶解后等体积加入正丁醇，萃取7小时，除去正丁醇层，同样方法萃取3次，收集水溶硅溶液层合并，减压旋蒸浓缩，得到人参总皂甙。
人参总皂甙的检测，包括如下步骤：
1)、人参皂甙标准溶液(1.0mg/mL)：精确称取10.0mg人参皂甙(Re)标准品，用甲醇溶解并定容至10mL。
2)、称取10mg上述提取方法所得总皂甙，准确加入2mL甲醇，加塞后放入超声波水浴中溶解，取出，备用。
3)、香草醛-高氯酸光度分析法：准确移取50μL上述溶液于另一10mL具塞试管中，放入水浴中挥干溶剂。取出后再依次加入0.2mL香草醛-冰乙酸溶液和0.8mL KClO4摇匀，置于60℃水浴中加热15min。取出后于冷水中冷却至室温，再加入5mL冰乙酸，摇匀，于560nm波长处测量吸光度，与标准对照，计算样品中总皂甙量。得到上述提取方法所得人参总皂甙的总皂甙的含量为：86％。

Claims (10)

1.一种野生人参总皂甙的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：
将新鲜人参恒温干燥后粉碎，使用甲醇水溶液进行超声提取，得到提取液；加水和石油醚进行分液萃取，弃去石油醚层，合并剩余液体并浓缩；浓缩物溶解在水溶硅溶液中，加入正丁醇进行分液萃取，弃去正丁醇层，合并水溶硅层并浓缩，得到人参总皂甙；
所述水溶硅溶液为：将Na2SiO3·10H2O溶解在水中，得到水溶硅溶液，浓度为10mg/mL。
2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，包括如下具体步骤：
1)、将新鲜人参恒温干燥至含水量为1-2％，将干燥人参粉碎至40-60目；
2)、将人参粉末与甲醇水溶液混合，放置在超声仪中进行超声提取，提取后对混合物进行抽滤，得到提取液，加入等体积的蒸馏水，备用；
3)、将步骤2)中的液体移至分液漏斗中，加入石油醚萃取2-3次，去除石油醚层，收集合并剩余液体，减压旋蒸浓缩至原体积的1/10；
4)、将步骤3)得到的浓缩物溶解在10-20倍体积的水溶硅溶液，再按照与溶解后等体积加入正丁醇，萃取，除去正丁醇层，同样方法萃取2-3次，收集水溶硅溶液层合并，减压旋蒸浓缩，得到人参总皂甙；
步骤4)所述水溶硅溶液为：将Na2SiO3·10H2O溶解在水中，得到水溶硅溶液，浓度为10mg/mL。
3.根据权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于，所述恒温干燥温度为40-50℃。
4.根据权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于，所述超声萃取中人参粉末与甲醇水溶液混合按照固体：液体体积比为1:5-10的比例进行。
5.根据权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于，所述甲醇水溶液中甲醇的体积分数为60-90％。
6.根据权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于，所述超声提取的条件为300-800W。
7.根据权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于，所述超声提取的温度50-70℃。
8.根据权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于，所述超声提取的时间为3-5小时。
9.根据权利要求1-6任一提取方法所得野生人参总皂甙的检测方法，包括如下步骤：
配制人参皂甙标准溶液，配制权利要求1-6任一提取方法所得人参总皂甙的测试液，采用香草醛-高氯酸光度分析法进行检测计算，得到上述提取方法所得人参总皂甙的总皂甙量。
10.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述标准溶液和测试液所使用溶剂均为甲醇溶液。
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