CN108157187A - 一种构树简便组培方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种构树简便组培方法，选取带芽点的健壮枝条于室内进行水培，剪去叶片留叶柄；用0.05％的升汞处理6‑9min，接种至培养基中；选取生长周期为26‑30天，利用顶芽、茎段及基部丛生芽进行繁殖，用酒精消毒后，用0.1%的升汞溶液消毒6min，取出用无菌水冲洗后，接种于诱导培养基上培养；将步骤2的芽苗切成带腋芽的茎段接种到增殖培养基上，30日转接一次；选取步骤3)增殖培养中高度为2.5‑4cm的构树组培苗，保留3片以上展开的大叶，基部叶柄贴茎杆切除，同时将展开的腋芽切除，切口以下留出1mm的茎杆，切口部位没入培养基中，培养25‑28天；所得的构树生根苗的生根率为90‑98％；种植于含有营养基的营养杯或穴盘中，培养45‑60天，即得构树大棚生根苗。
Description
技术领域
本发明涉及植物种植的技术领域，具体涉及一种构树简便组培方法。
背景技术
构树别名褚桃，为落叶乔木，高10-20m；树皮暗灰色；小枝密生柔毛。树冠张开，卵形至广卵形；树皮平滑，浅灰色或灰褐色，不易裂，全株含乳汁。为强阳性树种，适应性特强，抗逆性强。构树具有速生、适应性强、分布广、易繁殖、热量高、轮伐期短的特点。其根系浅，侧根分布很广，生长快，萌芽力和分蘖力强，耐修剪。抗污染性强。在中国的温带、热带均有分布，不论平原、丘陵或山地都能生长，其叶是很好的猪饲料，其韧皮纤维是造纸的高级原料，材质洁白，其根和种子均可入药，树液可治皮肤病，经济价值很高。由于其良好的经济价值，市场上对于其需求与日剧增，但是传统的养殖方式，种植周期长，且品质差，难以满足市场的巨大需求。构树组织培养，一方面可以扩大其繁殖系数，从而实现规模化繁殖；另一方面，可以在保存其原有的优良性状的基础上，实现构树种苗的快速繁殖和壮苗生产。构树组织培养的成本主要包括组培苗生产所需的培养基、设施设备、供电成本、耗材和人工成本。常规的构树组织培养方法要求接种过程、培养过程都在无菌培养基中进行，无菌消毒耗能大，人工操作成本高。因此，迫切需要建立一种操作过程简单，周期短，增殖系数稳定，成本低的组培方法。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种构树简便组培方法。
一种构树简便组培方法，包括如下的步骤:
(1)构树无菌苗的获取
选取带芽点的健壮枝条于室内进行水培，待新芽萌发出来后切割成1-2cm长的顶芽或带腋芽的茎段，剪去叶片留3-5mm叶柄，用75％酒精擦拭外植体表面，用洗衣粉水浸泡2min，再置于流水下冲洗0.5-1h；在超净工作台上，用0.05％的升汞处理6-9min，用无菌水冲洗5次，接种至培养基中，每瓶接种2株，获得构树无菌苗；
(2)无菌苗的继代
选取生长周期为26-30天，生长健壮、叶片浓绿的构树无菌苗，利用顶芽、茎段及基部丛生芽进行繁殖，其中顶芽高0.8-1.4cm、茎段高0.5-1cm，至少含一个腋芽，基部愈伤组织含2-4个小芽，用酒精消毒后，用0.1%的升汞溶液消毒6min，取出用无菌水冲洗后，接种于诱导培养基上培养；
(3)增殖培养:将步骤2的芽苗切成带腋芽的茎段接种到增殖培养基上，30日转接一次；培养室温度为26℃，光照12h，光照强度为1400lx；
(4)构树组培苗生根培养
选取步骤3)增殖培养中高度为2.5-4cm的构树组培苗，保留3片以上展开的大叶，基部叶柄贴茎杆切除，同时将展开的腋芽切除，切口以下留出1mm的茎杆，接种至生根培养基中，切口部位没入培养基中，培养25-28天，即得构树生根苗；所得的构树生根苗的生根率为90-98％；
(5)炼苗与移栽
将构树生根苗根系上的培养基洗净，种植于含有营养基的营养杯或穴盘中，湿度为80％-90％，待新根及新叶发出后接膜通风，培养45-60天，即得构树大棚生根苗。
所述步骤(2)中的构树组培苗的培养条件中温度为28℃，光照12h，光照强度为1400lx。
所述步骤(3)中的诱导培养基包括阿拉伯糖2～10g/L，葡萄糖0.5～2.5g/L，甘油5～25g/L，蛋白胨8～12g/L，磷酸盐6.5～7.4g/L，硫酸盐1.1～1.3g/L，氯化铵2.6～2.7g/L。
所述步骤（4）中的增殖培养基包括噻苯隆、萘乙酸、活性炭、硝酸铈、维生素、琼脂粉和白砂糖。
所述步骤(5)中的营养基包括两层，其中下层2/3容量为体积比为菜园土:珍珠岩:蛭石:草炭＝2:2:1:1混合的营养基，上层1/3为体积比为蛭石:珍珠岩＝1:1的营养基。
采用本发明所提供的构树组培苗生根培养方法，控制扩繁比例为1:3-3，控制苗的株高为2.5-4cm后在进行生根培养，生根的比例达90％以上；降低了生产成本，工厂化生产的可生根苗数量与可扩繁苗数量比值应大于0.75。节省操作步骤和生产成本，更适于工业化生产。为实验林木组培产业化，简化产业化流程，缩减步骤，控制人工，有利于成本控制，进而促进木本植物组织培养的产业化。
具体实施方式
以下对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例1
一种构树简便组培方法，包括如下的步骤:
(1)构树无菌苗的获取
选取带芽点的健壮枝条于室内进行水培，待新芽萌发出来后切割成2cm长的顶芽或带腋芽的茎段，剪去叶片留4mm叶柄，用75％酒精擦拭外植体表面，用洗衣粉水浸泡2min，置于流水下冲洗1h；在超净工作台上，用0.05％的升汞处理6min，用无菌水冲洗5次，接种至培养基中，每瓶接种2株，获得构树无菌苗；
(2)无菌苗的继代
选取生长周期为30天，生长健壮、叶片浓绿的构树无菌苗，利用顶芽、茎段及基部丛生芽进行繁殖，其中顶芽高0.8cm、茎段高1cm，至少含一个腋芽，基部愈伤组织含2个小芽，用酒精消毒后，用0.1%的升汞溶液消毒6min，取出用无菌水冲洗后，接种于诱导培养基上培养；
(3)增殖培养:将步骤2的芽苗切成带腋芽的茎段接种到增殖培养基上，30日转接一次；培养室温度为26℃，光照12h，光照强度为1400lx；
(4)构树组培苗生根培养
选取步骤3)增殖培养中高度为2.5cm的构树组培苗，保留3片以上展开的大叶，基部叶柄贴茎杆切除，同时将展开的腋芽切除，切口以下留出1mm的茎杆，接种至生根培养基中，切口部位没入培养基中，培养25天，即得构树生根苗；所得的构树生根苗的生根率为95％；
(5)炼苗与移栽
将构树生根苗根系上的培养基洗净，种植于含有营养基的营养杯或穴盘中，湿度为80％％，待新根及新叶发出后接膜通风，培养45天，即得构树大棚生根苗。
实施例2-6组培步骤如下表：
| 实施例2 | 实施例3 | 实施例4 | 实施例5 | 实施例6 | |
| 顶芽长度 | 2 | 3 | 3 | 2.5 | 3 |
| 叶柄长度 | 4 | 3.5 | 5 | 4.2 | 4 |
| 升汞处理时间 | 8 | 8 | 8 | 7 | 9 |
| 生长周期 | 28 | 27 | 26 | 30 | 30 |
| 顶芽高 | 1.4 | 1.2 | 0.8 | 1.3 | 1.3 |
| 茎段高 | 0.5 | 0.6 | 0.6 | 0.5 | 0.6 |
| 基部愈伤组织芽数 | 2 | 3 | 3 | 4 | 2 |
| 培养天数 | 30 | 28 | 27 | 28 | 28 |
| 生根率 | 94 | 97 | 99 | 95 | 95 |
实施例6
本实施例提供了一种构树简便组培方法，不同于实施例1-5的是:
所述步骤(2)中的构树组培苗的培养条件中温度为28℃，光照12h，光照强度为1400lx；所述步骤(3)中的诱导培养基包括阿拉伯糖2～10g/L，葡萄糖0.5～2.5g/L，甘油5～25g/L，蛋白胨8～12g/L，磷酸盐6.5～7.4g/L，硫酸盐1.1～1.3g/L，氯化铵2.6～2.7g/L；所述步骤（4）中的增殖培养基包括噻苯隆、萘乙酸、活性炭、硝酸铈、维生素、琼脂粉和白砂糖；所述步骤(5)中的营养基包括两层，其中下层2/3容量为体积比为菜园土:珍珠岩:蛭石:草炭＝2:2:1:1混合的营养基，上层1/3为体积比为蛭石:珍珠岩＝1:1的营养基。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种构树简便组培方法，包括如下的步骤:
(1)构树无菌苗的获取
选取带芽点的健壮枝条于室内进行水培，待新芽萌发出来后切割成1-2cm长的顶芽或带腋芽的茎段，剪去叶片留3-5mm叶柄，用75％酒精擦拭外植体表面，用洗衣粉水浸泡2min，再置于流水下冲洗0.5-1h；在超净工作台上，用0.05％的升汞处理6-9min，用无菌水冲洗5次，接种至培养基中，每瓶接种2株，获得构树无菌苗；
(2)无菌苗的继代
选取生长周期为26-30天，生长健壮、叶片浓绿的构树无菌苗，利用顶芽、茎段及基部丛生芽进行繁殖，其中顶芽高0.8-1.4cm、茎段高0.5-1cm，至少含一个腋芽，基部愈伤组织含2-4个小芽，用酒精消毒后，用0.1%的升汞溶液消毒6min，取出用无菌水冲洗后，接种于诱导培养基上培养；
(3)增殖培养:将步骤2的芽苗切成带腋芽的茎段接种到增殖培养基上，30日转接一次；培养室温度为26℃，光照12h，光照强度为1400lx；
(4)构树组培苗生根培养
选取步骤3)增殖培养中高度为2.5-4cm的构树组培苗，保留3片以上展开的大叶，基部叶柄贴茎杆切除，同时将展开的腋芽切除，切口以下留出1mm的茎杆，接种至生根培养基中，切口部位没入培养基中，培养25-28天，即得构树生根苗；所得的构树生根苗的生根率为90-98％；
(5)炼苗与移栽
将构树生根苗根系上的培养基洗净，种植于含有营养基的营养杯或穴盘中，湿度为80％-90％，待新根及新叶发出后接膜通风，培养45-60天，即得构树大棚生根苗。
2.根据权利要求1所述的构树简便组培方法，其特征在于所述步骤(2)中的构树组培苗的培养条件中温度为28℃，光照12h，光照强度为1400lx。
3.根据权利要求2所述的构树简便组培方法，其特征在于所述步骤(3)中的诱导培养基包括阿拉伯糖2～10g/L，葡萄糖0.5～2.5g/L，甘油5～25g/L，蛋白胨8～12g/L，磷酸盐6.5～7.4g/L，硫酸盐1.1～1.3g/L，氯化铵2.6～2.7g/L。
4.根据权利要求/3所述的构树简便组培方法，其特征在于所述步骤（4）中的增殖培养基包括噻苯隆、萘乙酸、活性炭、硝酸铈、维生素、琼脂粉和白砂糖。
5.根据权利要求/3所述的构树简便组培方法，其特征在于所述步骤(5)中的营养基包括两层，其中下层2/3容量为体积比为菜园土:珍珠岩:蛭石:草炭＝2:2:1:1混合的营养基，上层1/3为体积比为蛭石:珍珠岩＝1:1的营养基。
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