CN108126035B - 一种调节热应激大鼠血生化和肠道菌群的中药组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种调节热应激大鼠血生化和肠道菌群的中药组合物，其有包括以下重量份数组分制成的：紫锥菊20‑60份、黄芩20‑60份、藿香10‑50份、香薷10‑50份、陈皮8‑35份、白术3‑25份、甘草3‑25份。本发明还公开调节热应激大鼠血生化和肠道菌群的中药组合物的制备方法。本发明具有以下优点及有益效果：可通过影响热应激鸡血液生化指标以及调整盲肠肠道菌群，缓解热应激给鸡带来的损伤。
Description
【技术领域】
本发明涉及中医兽药领域，特别是一种调节热应激大鼠血生化和肠道菌群的中药组合物及其制备方法。
【背景技术】
热应激是机体面对高温环境时所产生的非特异性的一切生理反应。热应激可以使机体采食量、饮水量减少，生产性能降低，胃肠道持续性缺血，肠道菌群紊乱，消化功能失调等。肠道微生物是动物体最大、最重要的微生态系统，肠道在某些疾病过程中有着至关重要的作用，如肠道是脓毒症多器官功能障碍综合征的启动者。热应激条件下，动物机体肠道易发生缺血、缺氧性损害，上皮绒毛顶端脱落形成溃疡，肠道通透性增加等。
【发明内容】
本发明的目的是针对上述现技术存在的不足，提供一种能够清热泻火、解暑化湿、理气健脾，调节热应激大鼠血生化和肠道菌群的调节热应激大鼠血生化和肠道菌群的中药组合物。
本发明的另一目的是提供一种调节热应激大鼠血生化和肠道菌群的中药组合物的制备方法。
为了实现上述目的，本发明是这样实现的：一种调节热应激大鼠血生化和肠道菌群的中药组合物，其由包括以下重量份数组分制成的：紫锥菊20-60份、黄芩20-60份、藿香10-50份、香薷10-50份、陈皮8-35份、白术3-25份、甘草3-25份。
优选的，所述调节热应激大鼠血生化和肠道菌群的中药组合物，其由包括以下重量份数组分制成的：紫锥菊40份、黄芩40份、藿香30份、香薷30份、石膏20份、陈皮20份、白术10份、甘草10份。
优选的，所述调节热应激大鼠血生化和肠道菌群的中药组合物，还可以添加石膏8-35份、淮山5-15份。
一种调节热应激大鼠血生化和肠道菌群的中药组合物的制备方法，其包括的步骤如下：
(1)取香薷、藿香、陈皮浸泡于水中，提取挥发油；
(2)将步骤(1)得到的药渣加入锅中与紫锥菊、黄芩、石膏、白术、淮山、甘草用水煎煮；
(3)将步骤(2)所得的水煎液浓缩至密度为0.5-1.5g/mL；
(4)将步骤(1)所得的挥发油用吐温-80溶解，然后和步骤3)所得的浓缩液混匀，加入总质量0.1-0.5％的山梨酸钾防腐，制得煎液。优选的，所述山梨酸钾的添加量为0.3％。
所述(1)步骤中，浸泡时间为1h，所述挥发油的提取为水蒸气蒸馏法，可以直接加热蒸馏或通入水蒸汽蒸馏。
所述水蒸气蒸馏提取挥发油的蒸馏时间为8h，可以有效的提取药材中的挥发油。
所述(2)步骤中，加水为药材重量的5-12倍，石膏先15-45min，再一起煎煮1-3h，重复煎煮1-5次。优选的，加水为药材重量的8倍，石膏先30min，再一起煎煮2h，重复煎煮3次。
所述(3)步骤中，将步骤2)所得的水煎液使用旋转蒸发仪浓缩。
所述(4)步骤中挥发油与吐温-80的重量比为1:1-3，优选的，挥发油与吐温-80的重量比为1:2。
所述调节热应激大鼠血生化和肠道菌群的中药组合物给大鼠每天灌服7mg/kg·BW。
中药理论认为热应激是气分实热证为主，进而发展为营热、血热证。本发明调节热应激大鼠血生化和肠道菌群的中药组合物对热应激大鼠血生化和肠道菌群的影响进行了试验，试验结果显示试验结果显示，7d时与适温组相比高温组血清ALT、AST、TP、ALB、GLU显著改变(P<0.05)，而中药组与适温组差异不显著(P>0.05)；高温组能显著降低大鼠盲肠肠道菌群的丰度和多样性，中药组可以显著增加其丰度和多样性(P<0.05)；大鼠盲肠门和纲的丰度比例在热应激条件下与适温组有显著差异(P<0.05)，中药组能改善其变化。
与现有技术相比，本发明具有以下优点及有益效果：可通过影响热应激大鼠血液生化指标以及调整盲肠肠道菌群，缓解热应激给大鼠带来的损伤。
【附图说明】
图1为样品的稀释曲线图；
图2为Shannon曲线图；
图3为Alpha多样性指数图1；
图4为Alpha多样性指数图2；
图5为Alpha多样性指数图3；
图6为热应激对肠道菌群门(％)分类水平丰度比例的变化图1；
图7为热应激对肠道菌群门(％)分类水平丰度比例的变化图2；
图8为热应激对肠道菌群门(％)分类水平丰度比例的变化图3；
图9为热应激对肠道菌群门(％)分类水平丰度比例的变化图4；
图10为热应激对肠道菌群纲(％)分类水平丰度比例的变化1；
图11为热应激对肠道菌群纲(％)分类水平丰度比例的变化2；
图12为热应激对肠道菌群纲(％)分类水平丰度比例的变化3；
图13为热应激对肠道菌群纲(％)分类水平丰度比例的变化4。
【具体实施方式】
以下结合具体实施例对本发明进行详细的描述说明。以下实施例仅用于说明本发明，而不用于限定本发明的范围。
实施例1
一种调节热应激大鼠血生化和肠道菌群的中药组合物，其由包括以下重量份数组分制成的：紫锥菊21份、黄芩21份、藿香11份、香薷11份、石膏9份、陈皮9份、白术4份、甘草4份、淮山6份。
实施例2
一种调节热应激大鼠血生化和肠道菌群的中药组合物，其由包括以下重量份数组分制成的：紫锥菊59份、黄芩59份、藿香49份、香薷49份、石膏34份、陈皮34份、白术24份、甘草24份、淮山14份。
实施例3
一种调节热应激大鼠血生化和肠道菌群的中药组合物，其由包括以下重量份数组分制成的：紫锥菊30-50份、黄芩30-50份、藿香20-40份、香薷20-40份、石膏12-20份、陈皮12-20份、白术5-15份、甘草5-15份、淮山8-12份。
实施例4
一种调节热应激大鼠血生化和肠道菌群的中药组合物，其由包括以下重量份数组分制成的：紫锥菊35份、黄芩45份、藿香28份、香薷30份、石膏15份、陈皮15份、白术6份、甘草10份、淮山10份。
以上配方组成中，所述中药组合物的份数是以中药材生药重量计算，可以以g为单位。
上述调节热应激大鼠血生化和肠道菌群的中药组合物的制备方法，其包括的步骤如下：
(1)取香薷、藿香、陈皮浸泡于水中1h，直接加热蒸馏或通入水蒸汽蒸馏提取挥发油，蒸馏时间为8h；
(2)将步骤(1)得到的药渣加入锅中与紫锥菊、黄芩、石膏、白术、甘草、淮山用水煎煮，加水为药材重量的8倍，石膏先煮30min，再一起煎煮2h，重复煎煮三次。
(3)将步骤(2)所得的水煎液使用旋转蒸发仪浓缩至密度为1g/mL；
(4)将步骤(1)所得的挥发油用吐温-80溶解，然后和步骤3)所得的浓缩液混匀，加入0.3％的山梨酸钾，制得煎液。
实施例5
一种调节热应激大鼠血生化和肠道菌群的中药组合物，其由包括以下重量份数组分制成的：紫锥菊40g、黄芩40g、藿香30g、香薷30g、石膏20g、陈皮20g、白术10g、甘草10g、淮山10g。
其制备方法如下：香薷、藿香、陈皮浸泡1h，水蒸气蒸馏8h提取挥发油；所得药渣加入紫锥菊、黄芩、石膏、白术、甘草、淮山混合煎煮，加药材重量8倍的水，石膏先煮30min，再一起煎煮2h，煎煮三次；所得的水煎液使用旋转蒸发仪浓缩，最后浓缩为1.12g/mL；所得的挥发油用吐温-80以1:2溶解，和浓缩液混匀，加入0.3％的山梨酸钾，制得煎液。
效果验证实验
使用本发明的权利要求5得到中药组合物进行临床试验，试验选取健康成年SPF级Wistar雄性大鼠，体重为200±10g，购自广州市南方医科大学，批号：44002100005777。
中药紫锥菊、黄芪、藿香、香薷、石膏、陈皮、白术、甘草、淮山等所有中药均购自广州市利康堂药店；天根粪便基因组提取试剂盒，批号：DP328-021。
试验选取90只健康成年Wistar雄性大鼠，观察饲养7d后，随机均分为三个组，每组30只，试验1组为中药组，每天灌服7mg/kg·BW的中药，2组为高温组，每天灌服等量生理盐水，此两组温度维持在35～38℃，湿度50～60％；试验3组为适温组，同样灌服生理盐水，在24～26℃环境下饲养。试验各组每天自由饮水，早晚两次添喂基础日粮，室内保持通风，卫生整洁。
分别在试验的第3h、1d、3d和7d，每组随机取6只大鼠，腹主动脉采血3mL，析出血清，取0.4mL，采用全自动生化分析仪参照生化指标试剂盒说明测定各时间点大鼠血生化指标。并剖杀6只大鼠，取盲肠内容物约5g，置于-20℃冰箱保存，用于提取总DNA，进行16SrDNA测序。用DNA提取试剂盒提取盲肠内容物细菌的DNA，利用1％琼脂糖凝胶电泳检测抽取的基因组DNA，全部合格后，用16s rDNA V3～V4区进行扩增，Illumina Miseq测序仪测序，最后进行生物学信息分析。
采用稀释曲线对测序深度进行分析；利用PD-whole-tree、Chao1指数、Shannon指数，进行微生物菌群多样性评价；其余数据均以
表示，采用SPSS19.0统计软件进行差异性分析，P<0.05为差异显著。
结果见表1、表2所示示，给予高温条件3h时可以使AST、ALT、ALB发生显著性变化；当热应激7d时，高温组的AST、ALT、GLU与中药组、适温组相比显著升高，TP、ALB显著降低，中药组和给予适宜温度的适温组差异不显著。
表1大鼠热应激3h对血液生化指标的影响
同一行相比，肩标上小写字母不同为差异显著(P<0.05)，字母相同或没有字母的表示各组差异不显著(P>0.05)
表2大鼠热应激7d对血液生化指标的影响
同一行相比，肩标上小写字母不同为差异显著(P<0.05)，字母相同或没有字母的表示各组差异不显著(P>0.05)
结果见图1和图2所示，当测序深度较小时，OTU数目变化剧烈，OTU数目随着测序深度的增加而大幅增加，当测序深度达到450000reads数时，稀释曲线仍有上升趋势，表明大鼠内仍有新的细菌尚未被发现。当测序深度达50000reads时，Shannon曲线已达到饱和状态，说明即使加大测序浓度，也只能是物种丰度增加而多样性不会增加，即当前的测序量足够进行样品微生物多样性分析。
结果如图3-13显示，通过本试验可知大鼠盲肠微生物的丰度和多样性在热应激的条件下可以降低，通过中药复方的调节可以使大鼠盲肠微生物的丰度和多样性得到恢复，甚至高于适温组；厚壁菌门和拟杆菌门是大鼠盲肠中的主要微生物菌种，同时含有少量的变形菌门、蓝藻等，其中，中药复方降低厚壁菌门、蓝藻的含量，使拟杆菌门、变形菌门的比例有显著性增加；中药复方能够增加Coriobacteriia、拟杆菌纲、芽孢杆菌纲的含量，降低盲肠梭菌纲的含量，使其可以恢复到正常适温组水平。
本发明其他实施例也具类似实验效果。
围绕本发明中药组合物对热应激大鼠的血生化和肠道菌群进行了临床试验，结果表明，本发明中药组合物能缓解热应激造成的肝功能损伤，抑制蛋白水平的降低，调节血糖的浓度使其维持恒定，从而达到缓解热应激的效果；通过本发明中药组合物的调节可以使大鼠盲肠微生物的丰度和多样性得到恢复，甚至高于适温组，从而抵御热应激对肠道的损伤；热应激可以改变肠道菌群门水平的丰度比例，经过本发明中药组合物的治疗后可以调节肠道中门水平的比例，抵制热应激所造成的肠道菌群丰度比例的变化；热应激可以显著改变纲分类水平的变化，而由紫锥菊、黄芩、藿香等组成的本发明中药组合物煎液可以显著抑制这些变化，通过改善肠道菌群纲丰度比例的变化，缓解热应激带来的损伤。
以上详细描述了本发明的较佳具体实施例，应当理解，本领域的普通技术无需创造性劳动就可以根据本发明的构思做出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本发明构思在现有技术基础上通过逻辑分析、推理或者根据有限的实验可以得到的技术方案，均应该在由本权利要求书所确定的保护范围之中。
Claims (6)
1.一种调节热应激大鼠血生化和肠道菌群的中药组合物，其特征在于，由以下重量份数组分制成的：紫锥菊30-50份、黄芩30-50份、藿香20-40份、香薷20-40份、石膏12-20份、陈皮12-20份、白术5-15份、甘草5-15份、淮山8-12份。
2.根据权利要求1所述的调节热应激大鼠血生化和肠道菌群的中药组合物的制备方法，其特征在于，包括的步骤如下：
(1)取香薷、藿香、陈皮浸泡于水中，提取挥发油；
(2)将步骤(1)得到的药渣加入锅中与紫锥菊、黄芩、石膏、白术、甘草、淮山用水煎煮；
(3)将步骤(2)所得的水煎液浓缩至密度为0.5-1.5g/mL；
(4)将步骤(1)所得的挥发油用吐温-80溶解，然后和步骤(3)所得的浓缩液混匀。
3.根据权利要求2所述的调节热应激大鼠血生化和肠道菌群的中药组合物的制备方法，其特征在于，所述(1)步骤中，浸泡时间为1h，所述挥发油的提取使用水蒸气蒸馏法。
4.根据权利要求3所述的调节热应激大鼠血生化和肠道菌群的中药组合物的制备方法，其特征在于，所述水蒸气蒸馏提取挥发油的蒸馏时间为8h。
5.根据权利要求2所述的调节热应激大鼠血生化和肠道菌群的中药组合物的制备方法，其特征在于，所述(2)步骤中，加水为药材重量的5-12倍，石膏先煮30min，再一起煎煮1-3h，重复煎煮1-5次。
6.根据权利要求2所述的调节热应激大鼠血生化和肠道菌群的中药组合物的制备方法，其特征在于，所述(3)步骤中，将步骤(2)所得的水煎液使用旋转蒸发仪浓缩。
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