CN108101877A - 一种连续色谱分离生育酚单体的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生育酚领域，公开了一种连续色谱分离生育酚单体的方法。所述连续色谱包括进料区以及包括多个洗脱单元的洗脱区，所述方法包括：将混合生育酚粗产品的原料液从进料区的入口注入连续色谱，并通过洗脱溶剂分别在所述多个洗脱单元进行洗脱，且每个洗脱单元仅针对一种生育酚单体进行洗脱。采用本发明的技术方案，能够利用连续色谱连续化分离得到高纯度、高回收率的α‑生育酚、β/γ‑生育酚和δ‑生育酚，产物品质稳定，溶剂消耗低、树脂利用率高，适用于工业化放大。

Description

一种连续色谱分离生育酚单体的方法

技术领域

本发明涉及生育酚领域，具体地，涉及一种连续色谱分离生育酚单体的方法。

背景技术

生育酚(Tocopherol)是一种人体必需的脂溶性维生素，属于维生素E家族的一大类。其化学结构为：一个6-色满醇(6-hydroxyl chroman)和在色满环2’位上被取代的一个饱和的C₁₆侧链。根据甲基在色满醇苯环上的位置和数量不同，生育酚可分为α-、β-、γ-和δ-生育酚。天然存在的生育酚一般为3-4种单体的混合物，β-生育酚和γ-生育酚具有物种依赖性，一般情况下不会同时存在于同一种作物或油料中。

生育酚具有较强的抗氧化性，能够提高动物生育能力，在预防癌症、防治心脑血管疾病、抗炎症等方面也有显著功效，因此广泛应用于食品、药品、保健品、饲料和化妆品行业。目前，市面上所售生育酚多为不同纯度的混合生育酚、α-生育酚及其酯类化合物(如α-生育酚醋酸酯、α-生育酚琥珀酸酯)。一般认为α-生育酚生理活性最强，其次是β/γ-生育酚，δ-生育酚活性最弱。但近些年来一些研究表明，γ-和δ-生育酚在某些领域具有优于α-生育酚和混合生育酚的功效。Smolarek等的研究表明，γ-和δ-生育酚在预防小鼠荷尔蒙依赖型的乳腺癌方面有积极作用，α-生育酚却没有此作用。李辉等综述了γ-生育酚的抗癌机理，它能够通过激活多条凋亡相关信号通路，促进肿瘤细胞凋亡和自噬；还能够通过抑制细胞相关蛋白，促使肿瘤细胞分裂周期阻滞，从而抑制肿瘤细胞增殖，在结直肠癌、乳腺癌和前列腺癌的防治方面具有显著功效。除了抗癌作用外，δ-生育酚在脂溶性体系中的抗氧化能力尤为突出，Wagner等的研究表明，γ-和δ-生育酚在一个水包油的乳化剂中具有显著延缓菜籽油脂肪氧化的作用，其中δ-生育酚作用最强。Braunrath等的研究表明，菜籽油中添加γ-和δ-生育酚能够显著降低油脂储存过程中过氧化物水平，α-生育酚作用不显著。基于生育酚单体在不同领域的不同功效，开发生育酚单体分离工艺，形成差异化的生育酚单体产品，具有重要的研究意义和经济效益。

目前，关于混合生育酚和高α-生育酚的分离技术已经非常成熟。天然混合生育酚多以油脂生产过程中的脱臭馏出物为原料，经酯化或皂化、水洗、结晶、分子蒸馏等工艺进行初步提纯，得到中等纯度的混合生育酚，再以中等纯度混合生育酚为原料，经萃取或色谱分离等工艺，得到高纯度混合生育酚。α-生育酚一般以混合生育酚为原料，经色谱、萃取等分离工艺制成，或通过甲基化反应工艺，把γ/β-、δ-生育酚转化为α-生育酚。关于生育酚单体的分离技术，自20世纪60年代以来就有诸多文献专利报道，但是适用于工业化大规模生产的成熟技术并不多，总体来说可分为以下几类：1)色谱分离法，是研究最多、应用最广的一种方法，包括单柱色谱分离、超临界流体色谱分离、模拟移动床(SMB)连续色谱分离几种；2)化学反应法；3)离子液体萃取法。CN101440081A公开了一种采用离子液体作为萃取剂，采用分馏萃取方式从混合生育酚中分离α-生育酚的方法，分离所得产物具有较高的纯度和收率，但离子液体成本较高，回收利用困难，不适宜工业化大规模生产。US0044548的专利公开了一种超临界流体色谱分离生育酚单体的方法，采用硅胶或C18反向硅胶作为填料，含有低级醇的CO2作为超临界解吸流体，分段收集解吸液，可得到纯度较高的几种单体。在色谱分离技术中，单柱色谱分离是目前研究报道最多、应用范围最广、工业化程度最高的一种分离手段。CN101220018采用了连续色谱分离的模式，该专利采用四区模拟移动床色谱系统，以50-100％的混合生育酚为原料，分离出纯度和收率均大于98％的四种生育酚单体，该方法克服了单柱色谱分离的众多弊端，生产连续，产品质量稳定，但也存在一些问题：1)采用硅胶、氧化铝或活性炭作为分离介质，普通硅胶、氧化铝、活性炭重复利用分离稳定性差，高性能的硅胶成本较高；2)四区模拟移动床多适用于双组分分离体系，本体系要实现杂质、α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚五种组分的分离，首先要把杂质作为组分1，其它四种单体作为组分2，一次操作实现杂质和四种单体的分离，再以四种单体的混合物作为进样原料，二次操作实现δ-生育酚与其它三种单体的分离，以此类推，总共需要进行四次分离操作，才能实现五种组分的分离，操作较为繁琐，且从溶剂消耗方面来看，并没有太大优势。

因此，开发一种溶剂消耗少且分离得到的生育酚单体纯度和收率高的方法是非常必要的。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术中无法使用连续色谱一次性得到不同种类的生育酚单体的缺陷，提供了一种连续色谱分离生育酚单体的方法，其中，所述连续色谱包括进料区以及包括多个洗脱单元的洗脱区，所述方法包括：将混合生育酚粗产品的原料液从进料区的入口注入连续色谱，并通过洗脱溶剂分别在所述多个洗脱单元进行洗脱，且每个洗脱单元仅针对一种生育酚单体进行洗脱。

采用本发明的技术方案，能够利用连续色谱连续化分离得到高纯度、高回收率的α-生育酚、β/γ-生育酚和δ-生育酚，产物品质稳定，溶剂消耗低、树脂利用率高，适用于工业化放大。具体表现为：

1)生育酚单体分离效果良好，可在90％以上的回收率下得到纯度均大于90％的α-生育酚、β/γ-生育酚、δ-生育酚，优于目前大多数的技术方案；

2)同单柱色谱分离技术相比，本技术方案采用连续化的操作模式，提高了树脂利用率、增加了单位时间产能，降低了溶剂消耗，且出料口α-生育酚、β/γ-生育酚、δ-生育酚几类产物纯度、收率稳定；

3)同四区二组分分离的模拟移动床连续色谱相比，本技术方案把连续色谱划分为最多6个区域，每个区域都有独立的进料出料口，在进料区域进料的同时，洗杂区、第一洗脱单元、第二洗脱单元、第三洗脱单元的出料口就能分别收集到杂质、α-生育酚、β/γ-生育酚、δ-生育酚，是完全连续的色谱分离操作，不需要把收集液返回进料口进行多次分离，溶剂消耗也更低；

4)本技术方案采用的分离介质强碱阴离子交换树脂性能稳定，能满足大批量连续生产的需求，工业化放大可行性高。

本发明的其它特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。

附图说明

附图是用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本发明，但并不构成对本发明的限制。在附图中：

图1是本发明的一种优选的转盘式连续色谱的结构示意图；

图2是实施例1中使用的转盘式连续色谱的结构示意图；

图3是实施例2中使用的转盘式连续色谱的结构示意图；

图4是实施例5中使用的转盘式连续色谱的结构示意图；

图5是实施例6中使用的转盘式连续色谱的结构示意图；

图6是实施例7中使用的转盘式连续色谱的结构示意图。

具体实施方式

以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。

在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。

本发明提供了一种连续色谱分离生育酚单体的方法，其中，所述连续色谱包括进料区以及包括多个洗脱单元的洗脱区，所述方法包括：将混合生育酚粗产品的原料液从进料区的入口注入连续色谱，并通过洗脱溶剂分别在多个洗脱单元进行洗脱，且每个洗脱单元仅针对一种生育酚单体进行洗脱。

在本发明中，所述混合生育酚粗产品的原料液的制备方法可以包括：将混合生育酚粗产品与溶剂I混合。

在本发明中，所述混合生育酚粗产品与溶剂I的比例没有特别的限定，可以为本领域的常规选择。例如，相对于1kg的混合生育酚，溶剂I的用量可以为0.5-10L，优选为0.8-5L。

在本发明中，所述溶剂I的种类可以为本领域的常规选择，例如，所述溶剂I可以为甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、丙烯醇、丙酮、己烷、乙酸乙酯和石油醚中的一种或多种，优选为甲醇、乙醇、乙酸乙酯和丙酮中的一种或多种。

在本发明中，所述混合生育酚粗产品的定义可以为本领域的常规理解。例如所述混合生育酚可以为天然混合生育酚，所述天然混合生育酚的制备方法包括：以植物油脱臭馏出物为原料，经甲酯化或皂化、水洗、结晶、分子蒸馏、萃取或色谱分离工艺进行提纯，得到天然混合生育酚。

在本发明中，所述混合生育酚粗产品中混合生育酚的含量为30重量％以上。所述混合生育酚含有α-生育酚、β/γ-生育酚和δ-生育酚三种单体中的至少两种。需要说明的是，由于β-生育酚和γ-生育酚具有物种依赖性，一般不会存在于同一种作物或油料中，或者在同一作物中一种生育酚单体含量高，另一种生育酚单体的含量极低。通常情况下可以不用分离。本发明并不对β-生育酚和γ-生育酚进行分离，所以本发明使用β/γ-生育酚的形式将β-生育酚和γ-生育酚归为一种生育酚单体。

在本发明中，所述混合生育酚粗产品的酸价的大小表示其中游离脂肪酸含量的高低。本发明对酸价没有特别的限定，例如，所述混合生育酚粗产品的酸价可以大于0小于5，优选为大于0小于3。

在本发明中，所述进料区的色谱柱的数量没有特别的限定，至少为1根，为了提高效率，所述进料区的色谱柱优选为1-3根(例如可以为1根、2根或3根)。所述进料区的色谱柱可以为串联或并联，优选为串联。

在本发明中，在所述进料区和所述洗脱区之间还可以设置有洗杂区，用于洗去混合生育酚粗产品中的杂质。所述杂质为除了生育酚单体之外的物质，各种溶剂除外。如果混合生育酚的纯度为99重量％以上，那么可以不设置洗杂区。

在本发明中，所述洗杂区的色谱柱的数量没有特别的限定，可以为本领域的常规选择。例如，如果设置有洗杂区，那么所述洗杂区的色谱柱的数量可以为1根以上，优选为1-4根(例如可以为1根、2根、3根或4根)。所述洗杂区的色谱柱可以为串联或并联，优选为串联。

在本发明中，所述方法还包括：将洗杂溶剂从洗杂区的入口注入连续色谱，对洗杂区进行洗脱。所述洗杂溶剂的种类没有特别的限定，优选地，所述洗杂溶剂与溶剂I的种类相同。即，使用制备所述混合生育酚粗产品原料液的溶剂I作洗杂溶剂。例如，当溶剂I为乙醇时，洗杂溶剂优选也为乙醇。

在本发明中，所述混合生育酚中可以含有两种生育酚单体，所述洗脱区包括与进料区出口依次连接的第一洗脱单元和第二洗脱单元，且在第一洗脱单元分离出一种生育酚单体，在第二洗脱单元分离出另一种生育酚单体；或者，所述混合生育酚含有三种生育酚单体，所述洗脱区包括与进料区出口依次连接的第一洗脱单元、第二洗脱单元和第三洗脱单元，且在第一洗脱单元分离出第一种生育酚单体，在第二洗脱单元分离出第二种生育酚单体，在第三洗脱单元分离出第三种生育酚单体。

需要说明的是，在本发明中，“所述混合生育酚中含有两种生育酚单体”中的“含有”指的是混合生育酚中生育酚单体的种类为两种，还可以含有杂质，而不含有第三种生育酚单体。

根据本发明，如果设置有洗杂区，所述混合生育酚含有两种生育酚单体，所述洗脱区包括与洗杂区出口依次连接的第一洗脱单元和第二洗脱单元，且在第一洗脱单元分离出一种生育酚单体，在第二洗脱单元分离出另一种生育酚单体；或者，所述混合生育酚含有三种生育酚单体，所述洗脱区包括与洗杂区出口依次连接的第一洗脱单元、第二洗脱单元和第三洗脱单元，且在第一洗脱单元分离出第一种生育酚单体，在第二洗脱单元分离出第二种生育酚单体，在第三洗脱单元分离出第三种生育酚单体。

根据一种具体的实施方式，所述混合生育酚中含有α-生育酚和β/γ-生育酚两种生育酚单体，在第一洗脱单元分离出α-生育酚，在第二洗脱单元分离出β/γ-生育酚。所述洗脱溶剂包括在第一洗脱单元使用的洗脱溶剂I和在第二洗脱单元使用的洗脱溶剂II。所述洗脱溶剂I可以为甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、丙烯醇和乙腈中的至少一种，洗脱溶剂II可以为洗脱溶剂I与酸按照100ml：0-10g的比例形成的混合物，优选为100ml：0-1g，更优选为100ml：0.01-1g。优选地，所述洗脱溶剂I与洗杂溶剂以及溶剂I的种类不同。所述第一洗脱单元和所述第二洗脱单元的色谱柱的数量没有特别的限定，可以各自为1根以上。为了达到更好的分离效果，优选地，所述第一洗脱单元包括1-10根色谱柱(例如可以为1根、2根、3根、4根、5根、6根、7根、8根、9根或10根)，所述第二洗脱单元包括1-15根色谱柱(例如可以为1根、2根、3根、4根、5根、6根、7根、8根、9根、10根、11根、12根、13根、14根或15根)。所述第一洗脱单元和第二洗脱单元的色谱柱各自独立地为串联或并联。

在本发明中，所述串联指的是一个操作单元内第一根色谱柱出口连接第二根色谱柱入口，第二根色谱柱出口连接第三根色谱柱入口，依此类推，物料或溶剂从第一根色谱柱入口注入，从最后一根色谱柱出口流出，所述并联指的是一个操作单元内每根色谱柱都有物料或溶剂注入和流出，各个色谱柱之间无管路直接相连。

在本发明中，洗脱溶剂中所使用的酸可以为有机酸和/或无机酸，优选为甲酸和/或乙酸。所述洗脱溶剂中使用酸的洗脱溶剂可以包括洗脱溶剂II、洗脱溶剂II’、洗脱溶剂II”、洗脱溶剂II”’和洗脱溶剂III”’。

根据另一种具体的实施方式，所述混合生育酚含有α-生育酚和δ-生育酚两种生育酚单体，在第一洗脱单元分离出α-生育酚，在第二洗脱单元分离出δ-生育酚。优选地，所述洗脱溶剂包括在第一洗脱单元使用的洗脱溶剂I’和在第二洗脱单元使用的洗脱溶剂II’，所述洗脱溶剂I’为甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、丙烯醇和乙腈中的至少一种，洗脱溶剂II’为洗脱溶剂I’与酸按照100ml：0.1-10g的比例形成的混合物，优选为100ml：1-10g。所述第一洗脱单元和所述第二洗脱单元的色谱柱的数量没有特别的限定，可以各自为1根以上。为了达到更好的分离效果，优选地，所述第一洗脱单元包括1-10根色谱柱(例如可以为1根、2根、3根、4根、5根、6根、7根、8根、9根或10根)，所述第二洗脱单元包括1-15根色谱柱(例如可以为1根、2根、3根、4根、5根、6根、7根、8根、9根、10根、11根、12根、13根、14根或15根)。所述第一洗脱单元和第二洗脱单元的色谱柱可以各自独立地为串联或并联。

根据另一种具体的实施方式，所述混合生育酚含有β/γ-生育酚和δ-生育酚两种生育酚单体，在第一洗脱单元分离出β/γ-生育酚，在第二洗脱单元分离出δ-生育酚。所述洗脱溶剂包括在第一洗脱单元使用的洗脱溶剂I”和在第二洗脱单元使用的洗脱溶剂II”，所述洗脱溶剂I”为甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、丙烯醇和乙腈中的至少一种与酸按照100ml：0-1g优选为100ml：0.01-1g的比例形成的混合物，洗脱溶剂II”为洗脱溶剂I”与酸按照100ml：1-10g优选为100ml：3-10g的比例形成的混合物。洗脱溶剂I”与洗脱溶剂II”可以相同或不同，为了更高效地起到分离效果，优选为不同。所述第一洗脱单元和所述第二洗脱单元的色谱柱的数量没有特别的限定，可以各自为1根以上。为了达到更好的分离效果，优选地，所述第一洗脱单元包括1-15根色谱柱(例如可以为1根、2根、3根、4根、5根、6根、7根、8根、9根、10根、11根、12根、13根、14根或15根)，所述第二洗脱单元包括1-15根色谱柱(例如可以为1根、2根、3根、4根、5根、6根、7根、8根、9根、10根、11根、12根、13根、14根或15根)。所述第一洗脱单元和第二洗脱单元的色谱柱可以各自独立地为串联或并联。

根据再一种优选的实施方式，所述混合生育酚含有α-生育酚、β/γ-生育酚和δ-生育酚三种生育酚单体，在第一洗脱单元分离出α-生育酚，在第二洗脱单元分离出β/γ-生育酚，在第三洗脱单元分离出δ-生育酚。所述洗脱溶剂包括在第一洗脱单元使用的洗脱溶剂I”’、在第二洗脱单元使用的洗脱溶剂II”’和在第三洗脱单元使用的洗脱溶剂III”’，所述洗脱溶剂I”’为甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、丙烯醇和乙腈中的至少一种，洗脱溶剂II”’为洗脱溶剂I”’与酸按照100ml：0-1g优选为100ml：0.01-1g的比例形成的混合物，洗脱溶剂III”’为洗脱溶剂I”’与酸按照100ml：1-10g优选为100ml：3-10g的比例形成的混合物。洗脱溶剂II”’与洗脱溶剂III”’可以相同或不同，优选为不同。所述第一洗脱单元、所述第二洗脱单元和所述第三洗脱单元的色谱柱的数量没有特别的限定，可以各自为1根以上。为了达到更好的分离效果，优选地，所述第一洗脱单元包括1-10根色谱柱(例如可以为1根、2根、3根、4根、5根、6根、7根、8根、9根或10根)，所述第二洗脱单元包括1-10根色谱柱(例如可以为1根、2根、3根、4根、5根、6根、7根、8根、9根或10根)，所述第三洗脱单元包括1-10根色谱柱(例如可以为1根、2根、3根、4根、5根、6根、7根、8根、9根或10根)。所述第一洗脱单元、第二洗脱单元和第三洗脱单元的色谱柱可以各自独立地为串联或并联。

在本发明中，所述连续色谱还可以包括再生区。所述再生区用于色谱柱的再生。所述再生去依次包括去酸单元、碱再生单元和去碱单元。

在本发明中，所述去酸单元、碱再生单元和去碱单元的色谱柱的数量没有特别的限定，各自独立地为1根以上。优选地，所述去酸单元包括1-3根色谱柱(例如可以为1根、2根或3根)，所述碱再生单元包括1-3根色谱柱(例如可以为1根、2根或3根)，所述去碱单元包括1-3根色谱柱(例如可以为1根、2根或3根)。所述去酸单元、碱再生单元和去碱单元的色谱柱的连接方式没有特别的限定，各自独立地为串联或并联。

在本发明中，所述去酸单元使用的去酸溶剂可以为去离子水或蒸馏水，所述碱再生单元使用的再生溶剂可以为1-5重量％的强碱水溶液或强碱醇溶液，所述去碱单元使用的去碱溶剂可以为溶剂I。所述溶剂I为甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、丙烯醇、丙酮、己烷、乙酸乙酯和石油醚中的一种或多种。所述强碱醇溶液中的醇可以为甲醇、乙醇和异丙醇中的一种或多种。所述强碱水溶液或强碱醇溶液中的强碱可以本领域的常规选择，例如可以为NaOH和/或KOH。

根据本发明一种优选的实施方式，所述方法还可以包括：将去酸溶剂、再生溶剂和去碱溶剂分别注入去酸单元、碱再生单元和去碱单元，使得从去酸单元的出口得到去酸废液，从碱再生单元的出口得到碱废液，从去碱单元的出口得到去碱废液。

在本发明中，所述连续色谱的色谱柱可以采用强碱阴离子交换树脂作为填料。所述强碱阴离子交换树脂的来源为本领域技术人员所熟知，例如可以通过商购获得。优选地，所述强碱阴离子交换树脂为I型强碱阴离子交换树脂和/或II型强碱阴离子交换树脂。优选地，所述强碱阴离子交换树脂为大孔型阴离子交换树脂和/或凝胶型阴离子交换树脂，更优选为大孔型阴离子交换树脂。根据一种优选的实施方式，所述强碱阴离子交换树脂为大孔型强碱阴离子，所述大孔型强碱阴离子交换树脂交换容量≥0.8mmol/mL，交联度为3-6，粒径分布为150mm-1200mm。

在本发明中，所述连续色谱优选为转盘式连续色谱。

在本发明中，所述连续色谱装置色谱柱切换时间可以为30-180min，每次切换一根色谱柱。

根据本发明，如果某一区的色谱柱数量为1根或1根以上，所述色谱柱的顺序按照以下规则编排：进料区、洗杂区、洗脱区、再生区的排列顺序与连续色谱的色谱柱切换的方向相同，色谱柱的编号与连续色谱的色谱柱切换的方向相反，每个区的色谱柱独立编号。以一种具体的连续色谱进行举例说明，如图2所示，连续色谱的色谱柱切换方向为顺时针，那么进料区、洗杂区、洗脱区、再生区按照顺时针排列，每一区的色谱柱从进料口到出料口的方向为逆时针。洗脱区中的洗脱单元的顺序与连续色谱的色谱柱的切换方向相同。

优选地，连续色谱包括进料区和洗脱区，色谱柱的切换方向为进料区的第1根色谱柱进入洗脱区的第一洗脱单元，第一洗脱单元的第1根色谱柱进入第二洗脱单元，第二洗脱单元的第1根色谱柱进入进料区；或者，进料区的第1根色谱柱进入洗脱区的第一洗脱单元，第一洗脱单元的第1根色谱柱进入第二洗脱单元，第二洗脱单元的第1根色谱柱进入第三洗脱单元，第三洗脱单元的第1根色谱柱进入进料区。

优选地，连续色谱包括进料区、洗杂区和洗脱区，切换方向为进料区第1根色谱柱进入洗杂区，洗杂区的第1根色谱柱进入洗脱区的第一洗脱单元，第一洗脱单元的第1根色谱柱进入第二洗脱单元，第二洗脱单元的第1根色谱柱进入进料区；或者，进料区的第1根色谱柱进入洗杂区，洗杂区的第1根色谱柱进入洗脱区的第一洗脱单元，第一洗脱单元的第1根色谱柱进入第二洗脱单元，第二洗脱单元的第1根色谱柱进入第三洗脱单元，第三洗脱单元的第1根色谱柱进入进料区。

优选地，连续色谱包括进料区、洗脱区和再生区，切换方向为进料区第1根色谱柱进入洗脱区的第一洗脱单元，第一洗脱单元的第1根色谱柱进入第二洗脱单元，第二洗脱单元的第1根色谱柱进入再生区的去酸单元，去酸单元的第1根色谱柱进入碱再生单元，碱再生单元的第1根色谱柱进入去碱单元，去碱单元的第1根色谱柱进入进料区；或者，切换方向为进料区第1根色谱柱进入洗脱区的第一洗脱单元，第一洗脱单元的第1根色谱柱进入第二洗脱单元，第二洗脱单元的第1根色谱柱进入第三洗脱单元，第三洗脱单元的第1根色谱柱进入再生区的去酸单元，去酸单元的第1根色谱柱进入碱再生单元，碱再生单元的第1根色谱柱进入去碱单元，去碱单元的第1根色谱柱进入进料区。

优选地，连续色谱包括进料区、洗杂区、洗脱区和再生区，切换方向为进料区第1根色谱柱进入洗杂区，洗杂区的第1根色谱柱进入洗脱区的第一洗脱单元，第一洗脱单元的第1根色谱柱进入第二洗脱单元，第二洗脱单元的第1根色谱柱进入再生区的去酸单元，去酸单元的第1根色谱柱进入碱再生单元，碱再生单元的第1根色谱柱进入去碱单元，去碱单元的第1根色谱柱进入进料区；或者，进料区第1根色谱柱进入洗杂区，洗杂区的第1根色谱柱进入洗脱区的第一洗脱单元，第一洗脱单元的第1根色谱柱进入第二洗脱单元，第二洗脱单元的第1根色谱柱进入第三洗脱单元，第三洗脱单元的第1根色谱柱进入再生区的去酸单元，去酸单元的第1根色谱柱进入碱再生单元，碱再生单元的第1根色谱柱进入去碱单元，去碱单元的第1根色谱柱进入进料区。

在本发明中，连续色谱中各区的流速可以在较大范围内变动。例如，进料区的原料液的流速可以为0.2-4柱体积/小时，洗杂区的溶剂Ⅰ的流速可以为0.2-4柱体积/小时，洗脱区的洗脱溶剂(包括所有洗脱区的各个洗脱单元使用的溶剂)的流速为0.2-4柱体积/小时。第一洗脱单元的洗脱溶剂I或洗脱溶剂I’或洗脱溶剂I”或洗脱溶剂I”’的流速可以为0.2-4柱体积/小时。第二洗脱单元的洗脱溶剂Ⅱ或洗脱溶剂II’或洗脱溶剂II”或洗脱溶剂II”’的流速可以为0.2-4柱体积/小时。第三洗脱单元的洗脱溶剂III”’的流速可以为0.2-4柱体积/小时。再生区的去酸单元的去酸溶剂的流速可以为0.2-4柱体积/小时，再生区的碱再生单元的再生溶剂的流速可以为0.8-2柱体积/小时，再生区的去碱单元的去碱溶剂的流速可以为0.2-4柱体积/小时。

在本发明中，洗脱得到的α-生育酚料液、β/γ-生育酚料液、δ-生育酚料液的后处理可以为本领域的常规选择，例如可以通过常规的各种手段出去溶剂，例如具体可以为薄膜蒸发除去溶剂。另外，也可以选择性的使用其它的纯化手段例如结晶、活性炭吸附、分子蒸馏等，具体的选择为本领域技术人员熟知，在此不再赘述。

以下根据图1-6描述本发明的优选的实施方式。

如图1所示，所述连续色谱包括进料区(1根色谱柱)、洗杂区(1根色谱柱)、第一洗脱单元(1根色谱柱)、第二洗脱单元(3根色谱柱，串联)、第三洗脱单元(1根色谱柱)和再生区，再生区包括去酸单元(1根色谱柱)、碱再生单元(1根色谱柱)和去碱单元(1根色谱柱)。原料液从进料区的色谱柱入口注入，从出口收集杂质料液。溶剂I从洗杂区的入口注入，从出口收集杂质料液。洗脱溶剂I”’从第一洗脱单元的入口注入，从出口收集α-生育酚料液。洗脱溶剂II”’从第二洗脱单元的第1根色谱柱入口注入，依次经过第1、2和3根色谱柱，从第3根色谱柱的出口收集β/γ-生育酚料液。洗脱溶剂III”’从第三洗脱单元的入口注入，从出口收集δ-生育酚料液。从去酸单元的入口注入去酸溶剂，从出口收集去酸废液。从碱再生单元入口注入再生溶剂，从出口收集碱废液。从去碱单元入口注入去碱溶剂，从出口收集去碱废液。上述注入和收集过程同步进行。一个周期后，进料区的色谱柱切换至洗杂区，洗杂区的色谱柱切换至第一洗脱单元，第一洗脱单元的色谱柱切换至第二洗脱单元，第二洗脱单元的第1根色谱柱切换至第三洗脱单元，第三洗脱单元的色谱柱切换至去酸单元，去酸单元的色谱柱切换至碱再生单元，碱再生单元的色谱柱切换至去碱单元，去碱单元的色谱柱切换至进料区。

如图2所示，所述连续色谱包括进料区(1根色谱柱)、洗杂区(1根色谱柱)、第一洗脱单元(1根色谱柱)、第二洗脱单元(3根色谱柱，串联)、第三洗脱单元(1根色谱柱)和再生区，再生区包括去酸单元(1根色谱柱)、碱再生单元(1根色谱柱)和去碱单元(1根色谱柱)。原料液从进料区的色谱柱入口注入，从出口收集杂质料液。乙醇从洗杂区的入口注入，从出口收集杂质料液。甲醇从第一洗脱单元的入口注入，从出口收集α-生育酚料液。甲醇从第二洗脱单元的第1根色谱柱入口注入，依次经过第1、2和3根色谱柱，从第3根色谱柱的出口收集β/γ-生育酚料液。含5重量％乙酸的甲醇从第三洗脱单元的入口注入，从出口收集δ-生育酚料液。从去酸单元的入口注入去离子水，从出口收集去酸废液。从碱再生单元入口注入4重量％氢氧化钠水溶液，从出口收集碱废液。从去碱单元入口注入乙醇，从出口收集去碱废液。上述注入和收集过程同步进行。一个周期后，进料区的色谱柱切换至洗杂区，洗杂区的色谱柱切换至第一洗脱单元，第一洗脱单元的色谱柱切换至第二洗脱单元，第二洗脱单元的第1根色谱柱切换至第三洗脱单元，第三洗脱单元的色谱柱切换至去酸单元，去酸单元的色谱柱切换至碱再生单元，碱再生单元的色谱柱切换至去碱单元，去碱单元的色谱柱切换至进料区。为方便描述该过程，将各种溶剂具体化，在实际应用过程中，可以根据上文溶剂种类的描述进行适当选择，具体不再赘述。图3-6遵循同样的原则。

如图3所示，所述连续色谱包括进料区(3根色谱柱，串联)、洗杂区(3根色谱柱，串联)、第一洗脱单元(2根色谱柱，串联)、第二洗脱单元(6根色谱柱，每3根色谱柱串联为一组，2组色谱柱并联)、第三洗脱单元(2根色谱柱，串联)和再生区，再生区包括去酸单元(2根色谱柱，串联)、碱再生单元(2根色谱柱，串联)和去碱单元(2根色谱柱，串联)。原料液从进料区的第1根色谱柱入口注入，依次经过第1、2和3根色谱柱，从第3根色谱柱的出口收集杂质料液。丙酮从洗杂区的第1根色谱柱入口注入，依次经过第1、2和3根色谱柱，从第3根色谱柱的出口收集杂质料液。乙醇从第一洗脱单元的入口注入，依次经过第1和2根色谱柱，从第2根色谱柱的出口收集α-生育酚料液。含0.5重量％甲酸的乙醇分别从第二洗脱单元两组的第1根色谱柱入口注入，依次经过第1和2和3根色谱柱，分别从两组的第3根色谱柱的出口收集β/γ-生育酚料液。含5重量％甲酸的乙醇从第三洗脱单元的第1根色谱柱入口注入，依次经过第1、2和3根色谱柱，从第3根色谱柱的出口收集δ-生育酚料液。从去酸单元的第1根色谱柱入口注入去离子水，依次经过第1和2根色谱柱，从第2根色谱柱的出口收集去酸废液。从碱再生单元的第1根色谱柱入口注入4重量％氢氧化钾水溶液，依次经过第1和2根色谱柱，从第2根色谱柱的出口收集碱废液。从去碱单元的第1根色谱柱的入口注入乙醇，依次经过第1和2根色谱柱，从第2根色谱柱的出口收集去碱废液。上述注入和收集过程同步进行。一个周期后，进料区的第1根色谱柱切换至洗杂区，洗杂区的第1根色谱柱切换至第一洗脱单元，第一洗脱单元的第1根色谱柱切换至第二洗脱单元，第二洗脱单元的第1根色谱柱(两组中的任意一组的第1根色谱柱，另外一组的第一根色谱柱还在第二洗脱单元)切换至第三洗脱单元，第三洗脱单元的第1根色谱柱切换至去酸单元，去酸单元的第1根色谱柱切换至碱再生单元，碱再生单元的第1根色谱柱切换至去碱单元，去碱单元的第1根色谱柱切换至进料区。

如图4所示，所述连续色谱包括进料区(1根色谱柱)、洗杂区(1根色谱柱)、第一洗脱单元(3根色谱柱，串联)、第二洗脱单元(2根色谱柱，串联)和再生区，再生区包括去酸单元(1根色谱柱)、碱再生单元(1根色谱柱)和去碱单元(1根色谱柱)。原料液从进料区的色谱柱入口注入，从出口收集杂质料液。乙醇从洗杂区的入口注入，从出口收集杂质料液。甲醇从第一洗脱单元的第1根色谱柱入口注入，依次经过第1、2和3根色谱柱，从第3根色谱柱出口收集α-生育酚料液。含1重量％甲酸的乙醇从第二洗脱单元的第1根色谱柱入口注入，依次经过第1和2根色谱柱，从第2根色谱柱的出口收集β/γ-生育酚料液。从去酸单元的入口注入去离子水，从出口收集去酸废液。从碱再生单元入口注入4重量％氢氧化钾水溶液，从出口收集碱废液。从去碱单元入口注入乙醇，从出口收集去碱废液。上述注入和收集过程同步进行。一个周期后，进料区的色谱柱切换至洗杂区，洗杂区的色谱柱切换至第一洗脱单元，第一洗脱单元的第1根色谱柱切换至第二洗脱单元，第二洗脱单元的第1根色谱柱切换至去酸单元，去酸单元的色谱柱切换至碱再生单元，碱再生单元的色谱柱切换至去碱单元，去碱单元的色谱柱切换至进料区。

如图5所示，所述连续色谱包括进料区(2根色谱柱，串联)、洗杂区(3根色谱柱，串联)、第一洗脱单元(2根色谱柱，并联)、第二洗脱单元(2根色谱柱，并联)和再生区，再生区包括去酸单元(1根色谱柱)、碱再生单元(1根色谱柱)和去碱单元(1根色谱柱)。原料液从进料区的第1根色谱柱入口注入，依次经过第1和2根色谱柱，从第2根色谱柱的出口收集杂质料液。乙酸乙酯从洗杂区的第1根色谱柱的入口注入，依次经过第1、2和3根色谱柱，从第3根色谱柱的出口收集杂质料液。丙烯醇分别从第一洗脱单元的第1根和第2根色谱柱的入口注入，分别从第1根和第2根色谱柱的出口收集α-生育酚料液。含1重量％乙酸的丙烯醇分别从第二洗脱单元的第1根和第2根色谱柱的入口注入，分别从第1根和第2根色谱柱的出口收集δ-生育酚料液。从去酸单元的入口注入去离子水，从出口收集去酸废液。从碱再生单元入口注入4重量％氢氧化钠水溶液，从出口收集碱废液。从去碱单元入口注入乙醇，从出口收集去碱废液。上述注入和收集过程同步进行。一个周期后，进料区的第1根色谱柱切换至洗杂区，洗杂区的第1根色谱柱切换至第一洗脱单元，第一洗脱单元的两根并联的色谱柱中的任意一根切换至第二洗脱单元(另一根还保留在第一洗脱单元，下一次切换的时候，本次切换过程中保留的这根色谱柱切换到第二洗脱单元，本次由洗杂区切换过来的色谱柱保留在第一洗脱单元，一根色谱柱不会一直停留在某一区不动，并联的情况均适用，下同)，第二洗脱单元的两根并联的色谱柱中的任意一根切换至去酸单元(另一根还保留在第二洗脱单元)，去酸单元的色谱柱切换至碱再生单元，碱再生单元的色谱柱切换至去碱单元，去碱单元的色谱柱切换至进料区。

如图6所示，所述连续色谱包括进料区(2根色谱柱，串联)、洗杂区(1根色谱柱)、第一洗脱单元(3根色谱柱，并联)、第二洗脱单元(2根色谱柱，串联)和再生区，再生区包括去酸单元(1根色谱柱)、碱再生单元(1根色谱柱)和去碱单元(1根色谱柱)。原料液从进料区的第1根色谱柱入口注入，依次经过第1和2根色谱柱，从第2根色谱柱的出口收集杂质料液。甲醇从洗杂区的色谱柱的入口注入，从色谱柱的出口收集杂质料液。含1重量％乙酸的甲醇和异丙醇混合溶液分别从第一洗脱单元的第1根、第2根和第3根色谱柱的入口注入，分别从第1根、第2根和第3根色谱柱的出口收集β/γ-生育酚料液。含4重量％乙酸的甲醇和异丙醇混合溶液从第二洗脱单元的第1根色谱柱的入口注入，依次经过第1和2根色谱柱，从第2根色谱柱的出口收集δ-生育酚料液。从去酸单元的入口注入去离子水，从出口收集去酸废液。从碱再生单元入口注入4重量％氢氧化钠水溶液，从出口收集碱废液。从去碱单元入口注入乙醇，从出口收集去碱废液。上述注入和收集过程同步进行。一个周期后，进料区的第1根色谱柱切换至洗杂区，洗杂区的色谱柱切换至第一洗脱单元，第一洗脱单元的三根并联的色谱柱中的一根切换至第二洗脱单元(并联的切换原则见图4中的解释)，第二洗脱单元的第1根色谱柱切换至去酸单元，去酸单元的色谱柱切换至碱再生单元，碱再生单元的色谱柱切换至去碱单元，去碱单元的色谱柱切换至进料区。

以下将通过实施例对本发明进行详细描述。

在实施例和对比例中，

所述I型大孔强碱阴离子交换树脂为商购获得，该树脂的粒径为150-450mm，交联度为3，交换容量≥0.8mmol/mL。

所述II型凝胶强碱阴离子交换树脂为商购获得，该树脂的粒径分布300-1200mm，交联度为6，交换容量≥0.8mmol/mL。

色谱柱的高径比为8，强碱阴离子交换树脂的装填率为75％，柱体积即强碱阴离子交换树脂的装填量为1BV＝18L。

生育酚含量＝(原料或产物中α-生育酚重量+β/γ-生育酚重量+δ-生育酚重量)/原料或产物重量×100％，收率＝(产物中α-生育酚重量+β/γ-生育酚重量+δ-生育酚重量)/(原料中α-生育酚重量+β/γ-生育酚重量+δ-生育酚重量)×100％。

实施例1

本实施例用于说明本发明提供的连续色谱分离生育酚单体的方法

本实施例采用图2所示的10柱6区(操作区域)的转盘式连续色谱分离装置，所述连续色谱包括进料区(1根色谱柱)、洗杂区(1根色谱柱)、第一洗脱单元(1根色谱柱)、第二洗脱单元(3根色谱柱，串联)、第三洗脱单元(1根色谱柱)和再生区，再生区包括去酸单元(1根色谱柱)、碱再生单元(1根色谱柱)和去碱单元(1根色谱柱)。使用I型大孔强碱阴离子交换树脂为分离介质；使用的混合生育酚粗产品是植物油脱臭馏出物经甲酯化、水洗、结晶、去溶剂、分子蒸馏、单柱色谱分离得到的混合生育酚的含量为86.13重量％的混合生育酚粗产品，该混合生育酚粗产品的酸价为3。

将4500g上述混合生育酚粗产品与22L乙醇混合，制备得到混合生育酚粗产品的原料液。

进料区用隔膜泵以0.75BV/h的流速把混合生育酚粗产品的原料液打入色谱柱，出料口收集杂质料液；洗杂区用乙醇以1.875BV/h的流速洗脱，出料口同为杂质料液；第一洗脱单元用甲醇以1.565BV/h的流速洗脱，出料口为α-生育酚料液；第二洗脱单元用甲醇以1.875BV/h的流速洗脱，出料口为β/γ-生育酚料液；第三洗脱单元用含5重量％乙酸的甲醇(甲醇：乙酸＝100ml：4.2g)以1.955BV/h的流速洗脱，出料口为δ-生育酚料液；再生区的去酸单元用去离子水以1.5BV/h的流速洗脱，出料口为去酸废液；再生区的碱再生单元用4重量％的NaOH水溶液以1.5BV/h的流速洗脱，出料口为碱废液；再生区的去碱单元用乙醇以1.5BV/h的流速进行洗脱，出料口为去碱废液；色谱柱的切换时间为120min，每次切换一根色谱柱，切换后进料区色谱柱进入洗杂区，洗杂区色谱柱进入第一洗脱单元，以此类推。

将得到的α-生育酚料液、β/γ-生育酚料液、δ-生育酚料液进行薄膜蒸发除去其中的有机溶剂，得到纯度较高的生育酚单体。

本实施例的混合生育酚粗产品的组成以及产物纯度和收率列于表1中。

表1

在本实施例中，色谱柱每切换一次即进料一次，溶剂消耗总量为337.72L，可得到如上表所示收率和纯度的单体，经计算，本实施例中每消耗1L有机溶剂可得到0.7g的α-生育酚，6.85g的β/γ-生育酚和3.07g的δ-生育酚(以纯单体质量计)。

对比例1

本对比例用于说明参比的混合生育酚的分离方法

采用CN101220018A中的混合生育酚依次按其中公开的实施例1、5、7来进行分离操作，可在98％以上的收率下得到纯度98％以上的α-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚，每生产1g的δ-生育酚需消耗0.25L有机溶剂，每生产1g的γ-生育酚需消耗0.26L有机溶剂，每生产1g的α-生育酚需消耗0.62L有机溶剂，即消耗1.13L有机溶剂可生产1g的δ-生育酚、1g的γ-生育酚、1g的α-生育酚。

从上述比较中可以看出，虽然本申请的有机溶剂的种类与CN101220018A不同，但是从有机溶剂消耗总量来看，本发明实施例1的有机溶剂消耗量要远远低于CN101220018A。

实施例2

本实施例用于说明本发明提供的连续色谱分离生育酚单体的方法

本实施例采用如图3所示的22柱8区(操作区域)转盘式连续色谱分离装置，所述连续色谱包括进料区(3根色谱柱，串联)、洗杂区(3根色谱柱，串联)、第一洗脱单元(2根色谱柱，串联)、第二洗脱单元(6根色谱柱，每3根色谱柱串联为一组，2组色谱柱并联)、第三洗脱单元(2根色谱柱，串联)和再生区，再生区包括去酸单元(2根色谱柱，串联)、碱再生单元(2根色谱柱，串联)和去碱单元(2根色谱柱，串联)。使用II型凝胶强碱阴离子交换树脂为分离介质。除第二洗脱单元外各区色谱柱间采用串联的连接方式，第二洗脱单元若6柱串联，会导致系统压力过大，所以采用了串联和并联相结合的方式。使用的混合生育酚粗产品为植物油脱臭馏出物经甲酯化、水洗、结晶、去溶剂、分子蒸馏分离得到的混合生育酚的含量为45.92重量％的混合生育酚粗产品，混合生育酚酸价为5。

将9600g上述混合生育酚粗产品溶于86.4L丙酮中，配制成约97L原料液；

进料区用隔膜泵以1.432BV/h的流速把混合生育酚粗产品的原料液打入色谱柱，出料口收集杂质料液；洗杂区用丙酮以1.735BV/h的流速洗脱，出料口同为杂质料液；第一洗脱单元用乙醇以0.875BV/h的流速洗脱，出料口为α-生育酚料液；第二洗脱单元用含0.5重量％甲酸的乙醇(乙醇：甲酸＝100ml：0.4g)以0.900BV/h的流速洗脱，出料口为β/γ-生育酚料液；第三洗脱单元用含5重量％甲酸的乙醇(乙醇：甲酸＝100ml：4.2g)以1.021BV/h的流速洗脱，出料口为δ-生育酚料液；再生区的去酸单元用去离子水以1BV/h的流速洗脱，出料口为去酸废液；再生区的碱再生单元用4重量％的KOH水溶液以1BV/h的流速洗脱，出料口为碱废液；再生区的去碱单元用乙醇以1BV/h的流速进行洗脱，出料口为去碱废液；色谱柱的切换时间为180min，每次切换一根色谱柱，切换后进料区色谱柱进入洗杂区，洗杂区色谱柱进入第一洗脱单元，以此类推。

将所得α-生育酚料液、β/γ-生育酚料液、δ-生育酚料液进行薄膜蒸发除去其中的有机溶剂，再经分子蒸馏，得到纯度较高的生育酚单体。

本实施例的混合生育酚粗产品的组成以及产物纯度和收率列于表2中。

表2

实施例3

本实施例用于说明本发明提供的连续色谱分离生育酚单体的方法

采用与实施例1相同的连续色谱装置和混合生育酚粗产品。不同的是，混合生育酚粗产品的原料液的配制和洗杂溶剂的种类均使用正己烷替换实施例1中的乙醇，第一洗脱单元采用异丙醇作为洗脱溶剂I”’，第二洗脱单元采用含0.1重量％甲酸的异丙醇作为洗脱溶剂II”’，第三洗脱单元采用含3重量％甲酸的异丙醇作为洗脱溶剂III”’，再生区的去碱单元采用乙醇作为去碱溶剂，其它条件不变，本实施例的混合生育酚粗产品的组成以及产物纯度和收率列于表3中。

表3

实施例4

本实施例用于说明本发明提供的连续色谱分离生育酚单体的方法

采用与实施例1相同的连续色谱装置和混合生育酚粗产品。不同的是，色谱柱各区域洗脱流速不同，切换时间不同。色谱柱具体操作方式为：进料区用隔膜泵以1.625BV/h的流速把生育酚粗产品的原料液打入色谱柱，出料口收集杂质料液；洗杂区用乙醇以3.750BV/h的流速洗脱，出料口同为杂质料液；第一洗脱单元用甲醇以3.325BV/h的流速洗脱，出料口为α-生育酚料液；第二洗脱单元用甲醇以3.750BV/h的流速洗脱，出料口为β/γ-生育酚料液；第三洗脱单元用含5重量％甲酸的乙醇以4.000BV/h的流速洗脱，出料口为δ-生育酚料液；再生区的去酸单元用去离子水以3BV/h的流速洗脱，出料口为去酸废液；再生区的碱再生单元用4重量％的KOH水溶液以3BV/h的流速洗脱，出料口为碱废液；再生区的去碱单元用乙醇以3BV/h的流速进行洗脱，出料口为去碱废液；色谱柱的切换时间为60min，每次切换一根色谱柱，切换后进料区色谱柱进入洗杂区，洗杂区色谱柱进入第一洗脱单元，以此类推。

本实施例的混合生育酚粗产品的组成以及产物纯度和收率列于表4中。

表4

实施例5

本实施例用于说明本发明提供的连续色谱分离生育酚单体的方法

本实施例采用图4所示的10柱5区的转盘式连续色谱分离装置，所述连续色谱包括进料区(1根色谱柱)、洗杂区(1根色谱柱)、第一洗脱单元(3根色谱柱，串联)、第二洗脱单元(2根色谱柱，串联)和再生区，再生区包括去酸单元(1根色谱柱)、碱再生单元(1根色谱柱)和去碱单元(1根色谱柱)。使用I型大孔强碱阴离子交换树脂为分离介质。使用的混合生育酚粗产品为半合成的混合生育酚，其中δ-生育酚含量极低，β/γ-生育酚和α-生育酚含量相对较高。其中混合生育酚的含量为92.13重量％，无酸价特征。

将4500g上述混合生育酚粗产品与3.6L乙醇混合，制备得到混合生育酚粗产品的原料液。

进料区用隔膜泵以0.75BV/h的流速把混合生育酚的原料液打入色谱柱，出料口收集杂质料液；洗杂区用乙醇以0.875BV/h的流速洗脱，出料口同为杂质料液；第一洗脱单元用甲醇以2.125BV/h的流速洗脱，出料口为α-生育酚料液；第二洗脱单元用含1重量％乙酸的甲醇(甲醇：乙酸＝100ml：0.8g)以1.875BV/h的流速洗脱，出料口为β/γ-生育酚料液(含微量δ-生育酚)；再生区的去酸单元用去离子水以1.5BV/h的流速洗脱，出料口为去酸废液；再生区的碱再生单元用4重量％的NaOH水溶液以1.5BV/h的流速洗脱，出料口为碱废液；再生区的去碱单元用乙醇以1.5BV/h的流速进行洗脱，出料口为去碱废液；色谱柱的切换时间为120min，每次切换一根色谱柱，切换后进料区色谱柱进入洗杂区，洗杂区色谱柱进入第一洗脱单元，以此类推。

α-生育酚料液、β/γ-生育酚料液、δ-生育酚料液进行薄膜蒸发除去其中的有机溶剂，得到纯度较高的生育酚单体。本实施例的混合生育酚粗产品的组成以及产物纯度和收率列于表5中。

表5

实施例6

本实施例用于说明本发明提供的连续色谱分离生育酚单体的方法

本实施例采用图5所示的12柱5区的转盘式连续色谱分离装置，所述连续色谱包括进料区(2根色谱柱，串联)、洗杂区(3根色谱柱，串联)、第一洗脱单元(2根色谱柱，并联)、第二洗脱单元(2根色谱柱，并联)和再生区，再生区包括去酸单元(1根色谱柱)、碱再生单元(1根色谱柱)和去碱单元(1根色谱柱)。使用I型大孔强碱阴离子交换树脂为分离介质。使用的混合生育酚粗产品为半合成的混合生育酚，其中β/γ-生育酚含量极低，δ-生育酚和α-生育酚含量相对较高。其中混合生育酚的含量为57.83重量％，无酸价特征。

将4500g上述混合生育酚粗产品与9L的乙酸乙酯混合，制备得到混合生育酚粗产品的原料液。

进料区用隔膜泵以0.75BV/h的流速把混合生育酚的原料液打入色谱柱，出料口收集杂质料液；洗杂区用乙酸乙酯以3.75BV/h的流速洗脱，出料口同为杂质料液；第一洗脱单元用丙烯醇以2.74BV/h的流速洗脱，出料口为α-生育酚料液；第二洗脱单元用含1.0重量％乙酸的丙烯醇以1.76BV/h的流速洗脱，出料口为δ-生育酚；再生区的去酸单元用去离子水以1.0BV/h的流速洗脱，出料口为去酸废液；再生区的碱再生单元用4重量％的NaOH水溶液以1.0BV/h的流速洗脱，出料口为碱废液；再生区的去碱单元用乙醇以1.0BV/h的流速进行洗脱，出料口为去碱废液；色谱柱的切换时间为180min，每次切换一根色谱柱，切换后进料区色谱柱进入洗杂区，洗杂区色谱柱进入第一洗脱单元，以此类推。

所得α-生育酚料液、δ-生育酚料液进行降膜蒸发除去其中的有机溶剂得到纯度较高的生育酚单体。本实施例的混合生育酚粗产品的组成以及产物纯度和收率列于表6中。

表6

实施例7

本实施例用于说明本发明提供的连续色谱分离生育酚单体的方法

本实施例采用图6所示的11柱5区的转盘式连续色谱分离装置，所述连续色谱包括进料区(2根色谱柱，串联)、洗杂区(1根色谱柱)、第一洗脱单元(3根色谱柱，并联)、第二洗脱单元(2根色谱柱，串联)和再生区，再生区包括去酸单元(1根色谱柱)、碱再生单元(1根色谱柱)和去碱单元(1根色谱柱)。使用I型大孔强碱阴离子交换树脂为分离介质。使用的混合生育酚粗产品为半合成的混合生育酚，其中α-生育酚含量极低，δ-生育酚和β/γ-生育酚含量相对较高。其中混合生育酚的含量为96.89重量％，无酸价特征。

将4500g上述混合生育酚粗产品与22L甲醇混合，制备得到混合生育酚粗产品的原料液。

进料区用隔膜泵以0.75BV/h的流速把混合生育酚的原料液打入色谱柱，出料口收集杂质料液；洗杂区用甲醇以0.2BV/h的流速洗脱，出料口同为杂质料液；第一洗脱单元用含1重量％乙酸的甲醇与异丙醇的混合溶液(甲醇与异丙醇体积比7:3)以3.75BV/h的流速洗脱，出料口为β/γ-生育酚料液；第二洗脱单元用含4重量％乙酸的甲醇与异丙醇的混合溶液(甲醇与异丙醇体积比7:3)以2.0BV/h的流速洗脱，出料口为δ-生育酚；再生区的去酸单元用去离子水以1.2BV/h的流速洗脱，出料口为去酸废液；再生区的碱再生单元用4重量％的NaOH水溶液以1.2BV/h的流速洗脱，出料口为碱废液；再生区的去碱单元用乙醇以1.2BV/h的流速进行洗脱，出料口为去碱废液；色谱柱的切换时间为150min，每次切换一根色谱柱，切换后进料区色谱柱进入洗杂区，洗杂区色谱柱进入第一洗脱单元，以此类推。

所得β/γ-生育酚料液、δ-生育酚料液进行薄膜蒸发除去其中的有机溶剂和有机酸，再经分子蒸馏，得到纯度较高的生育酚单体。本实施例的混合生育酚粗产品的组成以及产物纯度和收率列于表7中。

表7

实施例8

本实施例用于说明本发明提供的连续色谱分离生育酚单体的方法

按照实施例1的装置和方法进行，不同的是，使用硅胶代替I型大孔强碱阴离子交换树脂作为分离介质。

本实施例的混合生育酚粗产品的组成以及产物纯度和收率列于表8中。

表8

(注：“-”表示未检测到)

从表8的结果可以看出，采用硅胶作为色谱柱填料时，β/γ-生育酚和δ-生育酚的分离效果稍差一些。如果要求高，则需要进一步的进行分离。

实施例9

本实施例用于说明本发明提供的连续色谱分离生育酚单体的方法

按照实施例5的装置和方法进行，不同的是，使用活性氧化铝代替I型大孔强碱阴离子交换树脂作为分离介质。

本实施例的混合生育酚粗产品的组成以及产物纯度和收率列于表9中。

表9

从表9的结果可以看出，采用活性氧化铝作为色谱柱填料时，α-生育酚产物、β/γ-生育酚和δ-生育酚的分离效果稍差一些。如果要求高，则需要进一步的进行分离。

从实施例和对比例的结果可以看出，采用本发明提供的技术方案，能够将混合生育酚进行分离。尤其使用特定的色谱柱填料并配合溶剂，能够在节省溶剂且纯度高的前提下起到非常好的分离效果。

以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。

另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合。为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。

Claims (14)

1.一种连续色谱分离生育酚单体的方法，其特征在于，所述连续色谱包括进料区以及包括多个洗脱单元的洗脱区，所述方法包括：将混合生育酚粗产品的原料液从进料区的入口注入连续色谱，并通过洗脱溶剂分别在所述多个洗脱单元进行洗脱，且每个洗脱单元仅针对一种生育酚单体进行洗脱。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述混合生育酚粗产品的原料液的制备方法包括：将所述混合生育酚粗产品与溶剂I混合；

优选地，相对于1kg的混合生育酚，溶剂I的用量为0.5-10L，优选为0.8-5L；

优选地，所述溶剂I为甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、丙烯醇、丙酮、己烷、乙酸乙酯和石油醚中的一种或多种；

优选地，所述进料区包括1-3根色谱柱；

优选地，所述进料区的色谱柱为串联。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，在所述进料区和所述洗脱区之间设置有洗杂区；所述方法还包括：将洗杂溶剂从洗杂区的入口注入连续色谱，对洗杂区进行洗脱；

优选地，所述洗杂溶剂与溶剂I的种类相同；

优选地，所述洗杂区包括1-4根色谱柱；

优选地，所述洗杂区的色谱柱为串联。

4.根据权利要求1-3中任意一项所述的方法，其中，所述混合生育酚粗产品中的混合生育酚的含量为30重量％以上；

优选地，所述混合生育酚含有α-生育酚、β/γ-生育酚和δ-生育酚三种单体中的至少两种；

优选地，所述混合生育酚粗产品的酸价大于0小于5，更优选为大于0小于3。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述混合生育酚含有两种生育酚单体，所述洗脱区包括与进料区出口依次连接的第一洗脱单元和第二洗脱单元，且在第一洗脱单元分离出一种生育酚单体，在第二洗脱单元分离出另一种生育酚单体；

或者，所述混合生育酚含有三种生育酚单体，所述洗脱区包括与进料区出口依次连接的第一洗脱单元、第二洗脱单元和第三洗脱单元，且在第一洗脱单元分离出第一种生育酚单体，在第二洗脱单元分离出第二种生育酚单体，在第三洗脱单元分离出第三种生育酚单体。

6.根据权利要求4所述的方法，其中，所述混合生育酚含有两种生育酚单体，所述洗脱区包括与洗杂区出口依次连接的第一洗脱单元和第二洗脱单元，且在第一洗脱单元分离出一种生育酚单体，在第二洗脱单元分离出另一种生育酚单体；

或者，所述混合生育酚含有三种生育酚单体，所述洗脱区包括与洗杂区出口依次连接的第一洗脱单元、第二洗脱单元和第三洗脱单元，且在第一洗脱单元分离出第一种生育酚单体，在第二洗脱单元分离出第二种生育酚单体，在第三洗脱单元分离出第三种生育酚单体。

7.根据权利要求5或6所述的方法，其中，所述混合生育酚含有α-生育酚和β/γ-生育酚两种生育酚单体，在第一洗脱单元分离出α-生育酚，在第二洗脱单元分离出β/γ-生育酚；

优选地，洗脱溶剂包括在第一洗脱单元使用的洗脱溶剂I和在第二洗脱单元使用的洗脱溶剂II，所述洗脱溶剂I为甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、丙烯醇和乙腈中的至少一种，洗脱溶剂II为洗脱溶剂I与酸按照100ml：0-10g的比例形成的混合物；

优选地，所述酸为有机酸和/或无机酸，更优选为甲酸和/或乙酸；

优选地，所述第一洗脱单元包括1-10根色谱柱，所述第二洗脱单元包括1-15根色谱柱；

优选地，所述第一洗脱单元和第二洗脱单元的色谱柱各自独立地为串联或并联。

8.根据权利要求5或6所述的方法，所述混合生育酚含有α-生育酚和δ-生育酚两种生育酚单体，在第一洗脱单元分离出α-生育酚，在第二洗脱单元分离出δ-生育酚；

优选地，所述洗脱溶剂包括在第一洗脱单元使用的洗脱溶剂I’和在第二洗脱单元使用的洗脱溶剂II’，所述洗脱溶剂I’为甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、丙烯醇和乙腈中的至少一种，洗脱溶剂II’为洗脱溶剂I’与酸按照100ml：0.1-10g的比例形成的混合物；

优选地，所述酸为有机酸和/或无机酸，更优选为甲酸和/或乙酸；

优选地，所述第一洗脱单元包括1-10根色谱柱，所述第二洗脱单元包括1-15根色谱柱；

优选地，所述第一洗脱单元和第二洗脱单元各自独立地为串联或并联。

9.根据权利要求5或6所述的方法，所述混合生育酚含有β/γ-生育酚和δ-生育酚两种生育酚单体，在第一洗脱单元分离出β/γ-生育酚，在第二洗脱单元分离出δ-生育酚；

优选地，所述洗脱溶剂包括在第一洗脱单元使用的洗脱溶剂I”和在第二洗脱单元使用的洗脱溶剂II”，所述洗脱溶剂I”为甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、丙烯醇和乙腈中的至少一种与酸按照100ml：0-1g的比例形成的混合物，所述洗脱溶剂II”为洗脱溶剂I”与酸按照100ml：1-10g的比例形成的混合物；

优选地，所述酸为有机酸和/或无机酸，更优选为甲酸和/或乙酸；

优选地，所述第一洗脱单元包括1-15根色谱柱，所述第二洗脱单元包括1-15根色谱柱；

优选地，所述第一洗脱单元和第二洗脱单元各自独立地为串联或并联。

10.根据权利要求5或6所述的方法，所述混合生育酚含有α-生育酚、β/γ-生育酚和δ-生育酚三种生育酚单体，在第一洗脱单元分离出α-生育酚，在第二洗脱单元分离出β/γ-生育酚，在第三洗脱单元分离出δ-生育酚；

优选地，所述洗脱溶剂包括在第一洗脱单元使用的洗脱溶剂I”’、在第二洗脱单元使用的洗脱溶剂II”’和在第三洗脱单元使用的洗脱溶剂III”’，所述洗脱溶剂I”’为甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、丙烯醇和乙腈中的至少一种，洗脱溶剂II”’为洗脱溶剂I”’与酸按照100ml：0-1g的比例形成的混合物，洗脱溶剂III”’为洗脱溶剂I”’与酸按照100ml：1-10g的比例形成的混合物；

优选地，所述酸为有机酸和/或无机酸，更优选为甲酸和/或乙酸；

优选地，所述第一洗脱单元包括1-10根色谱柱，所述第二洗脱单元包括1-10根色谱柱，所述第三洗脱单元包括1-10根色谱柱；

优选地，所述第一洗脱单元、第二洗脱单元和第三洗脱单元的色谱柱各自独立地为串联或并联。

11.根据权利要求1-10中任意一项所述的方法，其中，所述连续色谱采用强碱阴离子交换树脂作为填料；

优选地，所述强碱阴离子交换树脂为I型强碱阴离子交换树脂和/或II型强碱阴离子交换树脂；

优选地，所述强碱阴离子交换树脂为大孔型阴离子交换树脂和/或凝胶型阴离子交换树脂，更优选为大孔型阴离子交换树脂。

12.根据权利要求1-11中任意一项所述的方法，其中，所述连续色谱还包括再生区，所述再生区依次包括去酸单元、碱再生单元和去碱单元；

优选地，所述去酸单元包括1-3根色谱柱，所述碱再生单元包括1-3根色谱柱，所述去碱单元包括1-3根色谱柱；

优选地，所述去酸单元、碱再生单元和去碱单元的色谱柱均为串联；

优选地，所述去酸单元使用的去酸溶剂为去离子水或蒸馏水，所述碱再生单元使用的再生溶剂为1-5重量％的强碱水溶液或强碱醇溶液，所述去碱单元使用的去碱溶剂为溶剂I；

优选地，所述强碱醇溶液中的醇为甲醇、乙醇和异丙醇中的一种或多种；

优选地，所述强碱水溶液或强碱醇溶液中的强碱为NaOH和/或KOH；

优选地，所述方法还包括：将去酸溶剂、再生溶剂和去碱溶剂分别注入去酸单元、碱再生单元和去碱单元，使得从去酸单元的出口得到去酸废液，从碱再生单元的出口得到碱废液，从去碱单元的出口得到去碱废液。

13.根据权利要求1-12中任意一项所述的方法，其中，所述连续色谱为转盘式连续色谱；

优选地，所述连续色谱的色谱柱切换时间为30-180min，每次切换1根色谱柱，

优选地，连续色谱包括进料区和洗脱区，切换方向为进料区的第1根色谱柱进入洗脱区的第一洗脱单元，第一洗脱单元的第1根色谱柱进入第二洗脱单元，第二洗脱单元的第1根色谱柱进入进料区；或者，进料区的第1根色谱柱进入洗脱区的第一洗脱单元，第一洗脱单元的第1根色谱柱进入第二洗脱单元，第二洗脱单元的第1根色谱柱进入第三洗脱单元，第三洗脱单元的第1根色谱柱进入进料区；

优选地，连续色谱包括进料区、洗杂区和洗脱区，切换方向为进料区第1根色谱柱进入洗杂区，洗杂区的第1根色谱柱进入洗脱区的第一洗脱单元，第一洗脱单元的第1根色谱柱进入第二洗脱单元，第二洗脱单元的第1根色谱柱进入进料区；或者，进料区的第1根色谱柱进入洗杂区，洗杂区的第1根色谱柱进入洗脱区的第一洗脱单元，第一洗脱单元的第1根色谱柱进入第二洗脱单元，第二洗脱单元的第1根色谱柱进入第三洗脱单元，第三洗脱单元的第1根色谱柱进入进料区；

优选地，连续色谱包括进料区、洗杂区、洗脱区和再生区，切换方向为进料区第1根色谱柱进入洗脱区的第一洗脱单元，第一洗脱单元的第1根色谱柱进入第二洗脱单元，第二洗脱单元的第1根色谱柱进入再生区的去酸单元，去酸单元的第1根色谱柱进入碱再生单元，碱再生单元的第1根色谱柱进入去碱单元，去碱单元的第1根色谱柱进入进料区；或者，切换方向为进料区第1根色谱柱进入洗脱区的第一洗脱单元，第一洗脱单元的第1根色谱柱进入第二洗脱单元，第二洗脱单元的第1根色谱柱进入第三洗脱单元，第三洗脱单元的第1根色谱柱进入再生区的去酸单元，去酸单元的第1根色谱柱进入碱再生单元，碱再生单元的第1根色谱柱进入去碱单元，去碱单元的第1根色谱柱进入进料区；

优选地，连续色谱包括进料区、洗杂区、洗脱区和再生区，切换方向为进料区第1根色谱柱进入洗杂区，洗杂区的第1根色谱柱进入洗脱区的第一洗脱单元，第一洗脱单元的第1根色谱柱进入第二洗脱单元，第二洗脱单元的第1根色谱柱进入再生区的去酸单元，去酸单元的第1根色谱柱进入碱再生单元，碱再生单元的第1根色谱柱进入去碱单元，去碱单元的第1根色谱柱进入进料区；或者，进料区第1根色谱柱进入洗杂区，洗杂区的第1根色谱柱进入洗脱区的第一洗脱单元，第一洗脱单元的第1根色谱柱进入第二洗脱单元，第二洗脱单元的第1根色谱柱进入第三洗脱单元，第三洗脱单元的第1根色谱柱进入再生区的去酸单元，去酸单元的第1根色谱柱进入碱再生单元，碱再生单元的第1根色谱柱进入去碱单元，去碱单元的第1根色谱柱进入进料区。

14.根据权利要求13所述的方法，其中，连续色谱中各区的流速为：进料区的原料液的流速为0.2-4柱体积/小时，洗杂区的溶剂Ⅰ的流速为0.2-4柱体积/小时，洗脱区的洗脱溶剂的流速为0.2-4柱体积/小时，再生区的去酸单元的去酸溶剂的流速为0.2-4柱体积/小时，再生区的碱再生单元的再生溶剂的流速为0.8-2柱体积/小时，再生区的去碱单元的去碱溶剂的流速为0.2-4柱体积/小时；

优选地，第一洗脱单元的洗脱溶剂I或洗脱溶剂I’或洗脱溶剂I”或洗脱溶剂I”’的流速为0.2-4柱体积/小时；

优选地，第二洗脱单元的洗脱溶剂Ⅱ或洗脱溶剂II’或洗脱溶剂II”或洗脱溶剂II”’的流速为0.2-4柱体积/小时；

优选地，第三洗脱单元的洗脱溶剂III”’的流速为0.2-4柱体积/小时。