CN108072650A - 一种过氧化氢残留的检测试剂盒及其检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公布了一种过氧化氢残留的检测试剂盒及其检测方法。目的在于提高传统测定方法的灵敏度、样品的稳定性以及结果的准确性，方便携带，减少了实验过程中外界环境对实验结果的影响，减小人为因素影响。本发明所配备的试剂盒是采用衍生化法检测过氧化氢，其原理是利用4‑氨基安替比林与苯酚溶液在过氧化氢的催化下衍生化生成稳定的有色化合物。本发明提供的过氧化氢检测试剂盒操作极其简便；方便携带、运输以及贮藏；检测灵敏度高，水溶液中的过氧化氢的检测浓度可以达到0.1ppm。

Description

一种过氧化氢残留的检测试剂盒及其检测方法

一、技术领域：

本发明涉及医药和环境检测技术领域，特别是涉及一种检测试剂盒。本发明公布了一种检测样品中痕量过氧化氢残留的方法。

二、背景技术：

过氧化氢是一种强氧化剂，水溶液俗称双氧水，为无色透明液体。目前被广泛应用于人民的日常生活中。日常消毒的是医用双氧水，浓度等于或低于3％，用于擦拭到创伤面表面。医用双氧水可杀灭肠道致病菌、化脓性球菌，致病酵母菌，一般用于物体表面消毒。印染工业用作棉织物的漂白剂，也用于电镀液，可除去无机杂质，提高镀件质量。

但由于对细胞有一定的毒性，具有潜在的致癌性，过氧化氢在食品、药品中的残留越来越受到国内外的重视。中华人民共和国食品安全法已经规定一般的食品禁止在加工过程中使用过氧化氢。同时由于其对水生生物具有一定的毒性，在环境检测方面，过氧化氢也越来越受到重视。

现有的对过氧化氢的测定主要是用高锰酸钾溶液滴定来测定的化学滴定法。但是化学滴定法检测限较高，样品用量大，而且误差较高，操作繁琐，滴定终点不易把握。对于残留的痕量过氧化氢来说滴定法终点更不易掌握。在专利CN02158703.5采用的是HPLC紫外检测器直接检测法，但过氧化氢易分解，温度和光照都对其有影响，造成检测结果不准确，检出限较高。另外，在专利CN201310684303中使用了三苯基膦作为衍生化试剂，通过过氧化氢氧化三苯基磷生成氧化三苯基磷从而达到定量的目的。但是该方法的衍生化剂三苯基磷在溶液状态下不稳定，在空气中即可被氧化产生氧化三苯基磷，对实验结果的干扰很大，并且样品还需先预处理过阴离子交换柱，也会对样品造成二次污染。Joana P.N.等人以4-氨基安替比林和苯酚溶液在过氧化氢氧化下生成红色产物，用紫外可见光分光光度法进行吸光度值测定。

目前对过氧化氢的检测方法主要还是利用各种检测设备，以检测试剂盒作为在现场快速筛选检测的方法目前国内市场还没有成熟的产品，现在所用的少数产为是进口产品，价格昂贵，不适合推广使用。因此，能够自主研发生产一种可以快速、准确地检测过氧化氢的试剂盒，必定会有很大的市场前景和商业前景。

三、发明内容：

本发明的目的是提供一种检测试剂盒及其检测方法，该检测试剂盒能够有效的提高对过氧化氢的检测效率，减小人为因素影响并且提高检测的自动化程度，储存、使用方便。

为解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：

本发明采用的是4-氨基安替比林和苯酚溶液在过氧化氢氧化下生成稳定的红色化合物，再通过比色法进行检测。

该检测过氧化氢的试剂盒中含有显色剂A(磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、苯酚、4-氨基安替比林)、显色剂B(过氧化物酶)、过氧化氢标准液(0.05ug/ml)和10ml的试管。

显色剂A配料表：

按配料表精密称取经粉碎后过100目筛的各组分，后用80目筛按等量递增法将各组分混合均匀。每一个独立的显色剂A小包装中填装显色剂30mg，包装外表面刻有一个10ml的刻度线，且每个小包装充氮后密封，并置阴凉处保存；

显色剂B配制方法：取过氧化物酶20mg置100ml容量瓶中，加水稀释定容，每只1.0ml分装到西林瓶中，冻干，密封保存；

过氧化氢标准液：每只含有1.0ml过氧化氢标准液(0.1ug/ml)

测定方法：

对照品溶液配置：用少量水将B瓶中的酶溶解后完全转移至显色剂A瓶中，加入过氧化氢标准液，再加水定容置刻度线处，摇匀后放置30s；

供试品溶液配置：取一定量的待测样品加10ml水溶解(若不能完全溶解，可离心取上清液或过滤)，吸取澄清的样品溶液溶解并完全转移显色剂B至显色剂A瓶中，再将样品溶液完全转移至显色剂A瓶中(若未达10ml，加水定容至刻度线)，充分振摇，静置30s后再与对照品溶液进行比色测定。

本发明的优点：操作极其简便；方便携带、运输以及贮藏；检测灵敏度高，水溶液中的过氧化氢的浓度可以达到0.1ppm。

四、附图说明：

图：过氧化氢试剂盒示意图。

1、显色剂A

2、显色剂B

3、过氧化氢标准液

4、10ml试管

五、具体实施方式：

实施例一：低分子肝素类药物中过氧化氢残留的检测。

显色剂A配料表：

按配料表精密称取经粉碎后过100目筛的各组分，后用80目筛按等量递增法将各组分混合均匀。每一个独立的显色剂A小包装中填装显色剂30mg，包装外表面刻有一个10ml的刻度线，且每个小包装充氮后密封，并置阴凉处保存；

显色剂B配制方法：取过氧化物酶20mg置100ml容量瓶中，加水稀释定容，每只分装1.0ml，冻干，密封保存；

过氧化氢标准液：每只含有1.0ml过氧化氢标准液(0.1ug/ml)

测定方法：

对照品溶液配置：用少量水将B瓶中的酶溶解后完全转移至显色剂A瓶中，加入过氧化氢标准液，再加水定容置刻度线处，摇匀后放置30s；

供试品溶液配置：取2g低分子肝素钠加10ml水溶解，吸取样品溶液溶解并完全转移显色剂B至显色剂A瓶中，再将剩余样品溶液完全转移至显色剂A瓶中(若未达10ml，加水定容至刻度线)，充分振摇，静置30s后再与对照品溶液进行比色测定。

实施例二：食品白色牛百叶中过氧化氢残留的检测。

显色剂A配料表：

按配料表精密称取经粉碎后过100目筛的各组分，后用80目筛按等量递增法将各组分混合均匀。每一个独立的显色剂A小包装中填装显色剂30mg，包装外表面刻有一个10ml的刻度线，且每个小包装充氮后密封，并置阴凉处保存；

显色剂B配制方法：取过氧化物酶20mg置100ml容量瓶中，加水稀释定容，每只分装1.0ml，冻干，密封保存；

过氧化氢标准液：每只含有1.0ml过氧化氢标准液(0.1ug/ml)

测定方法：

对照品溶液配置：用少量水将B瓶中的酶溶解后完全转移至显色剂A瓶中，加入过氧化氢标准液，再加水定容置刻度线处，摇匀后放置30s；

供试品溶液配置：取2.0g的牛百叶加10ml水浸泡，吸取样品溶液上清液溶解并完全转移显色剂B至显色剂A瓶中，再将剩余澄清样品溶液完全转移至显色剂A瓶中(若未达10ml，加水定容至刻度线)，充分振摇，静置30s后再与对照品溶液进行比色测定。

Claims (4)

1.一种过氧化氢残留的检测试剂盒及其检测方法。其特征在于包括多个显色剂A(1)、显色剂B(2)、过氧化氢标准液(3)和10ml试管(4)，可以进行多批次的测定。

2.根据权利要求书1所述的试剂盒，由显色剂A(磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、苯酚和4-氨基安替比林组成的混合物)、显色剂B(过氧化物酶)、过氧化氢标准液和10ml试管组成。

显色剂A配料表：

显色剂A制备是按配料表精密称取经粉碎后过100目筛的各组分，后用80目筛按等量递增法将各组分混合均匀。

显色剂B配制方法：取过氧化物酶20mg置100ml容量瓶中，加水溶解定容，每只1.0ml分装到西林瓶中，冻干，密封保存。

3.根据权利要求书1所述的试剂盒，该试剂盒中包括多个独立的显色剂A、显色剂B和过氧化氢标准液。每一个独立显色剂A的包装中装有28～32mg的显色剂A，包装外表面刻有一个10ml的刻度线，且每个小包装充氮后密封，并置阴凉处保存。过氧化氢标准液：每只含有1.0ml过氧化氢标准液(0.1ug/ml)。

4.根据权利要求书1所述的试剂盒，测定方法：

对照品溶液配置：用少量水将B瓶中的酶溶解后完全转移至显色剂A瓶中，加入过氧化氢标准液，再加水定容置刻度线处，摇匀后放置30s；

供试品溶液配置：取一定量的待测样品加10ml水溶解(若不能完全溶解，可离心取上清液或过滤)，吸取澄清的样品溶液溶解并完全转移显色剂B至显色剂A瓶中，再将样品溶液完全转移至显色剂A瓶中(若未达10ml，加水定容至刻度线)，充分振摇，静置30s后再与对照品溶液进行比色测定。