CN108070028A - 一种提高植物耐盐性的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种提高植物耐盐性的方法。本发明提供的提高植物耐盐性的方法是将细胞膜Na⁺/H⁺逆转运蛋白基因SpSOS1和H⁺‑ATPase基因SpAHA1共转化到植物中，提高受体植物中SpSOS1蛋白和SpAHA1蛋白的表达量和/或活性。通过实验证明：SpSOS1蛋白和SpAHA1蛋白可以提高植物耐盐性，具体体现在提高植物的鲜重、根长、侧根数、H⁺离子流速、Na⁺离子流速、K⁺含量，降低Na⁺含量和丙二醛含量。本发明首次将细胞膜Na⁺/H⁺逆转运蛋白基因SpSOS1和H⁺‑ATPase基因SpAHA1共转化到植物证明耐盐性，直接证明H⁺‑ATPase可为Na⁺/H⁺逆转运系统提供能量。

Description

一种提高植物耐盐性的方法

技术领域

本发明涉及植物转基因育种领域，具体涉及一种提高植物耐盐性的方法。

背景技术

按照植物耐盐性的不同，可将植物分为盐生植物和淡土植物，盐生植物在高盐环境(含盐量超过1％)中能正常生长并完成生活史。因此，研究盐生植物的耐盐机理，不仅能充分利用各种盐渍化土地，还能为提高淡土植物的耐盐性提供理论指导。海马齿(Sesuviumportulacastrum L.)是一种生长在滨海的盐生植物，在中等含盐量的环境中，Na⁺可以促进海马齿叶片的肉质化以及幼苗的发育。因此，海马齿是一种非常好的研究植物耐盐机理的材料。

盐胁迫下细胞膜上的Na⁺/H⁺逆转运蛋白SOS1(salt overly sensitive 1)可以将细胞质内过多的Na⁺排到细胞外而起到耐盐作用。植物细胞外排Na⁺是一个主动运输过程，需要细胞内的化学反应释放能量。质膜上的H⁺-ATPase水解ATP，产生跨膜电化学梯度，驱动细胞膜上的Na⁺/H⁺逆向运输系统，将Na⁺排出细胞。植物耐盐性是一个数量性状，由多基因控制，但目前提高植物耐盐性仅限于对单个基因的研究。

发明内容

本发明要解决的技术问题是如何提高植物耐逆性。

为了解决上述技术问题，本发明提供了SpSOS1蛋白和/或SpAHA1蛋白的新用途。

本发明提供了SpSOS1蛋白和/或SpAHA1蛋白在调控植物耐逆性中的应用。

上述应用中，所述SpSOS1蛋白是如下a)或b)或c)或d)的蛋白质：a)氨基酸序列是序列2所示的蛋白质；b)在序列2所示的蛋白质的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质；c)将序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质；d)与序列2所示的氨基酸序列具有75％或75％以上的同源性且具有相同功能的蛋白质；

所述SpAHA1蛋白是如下e)或f)或g)或h)的蛋白质：e)氨基酸序列是序列4所示的蛋白质；f)在序列4所示的蛋白质的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质；g)将序列4所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质；h)与序列4所示的氨基酸序列具有75％或75％以上的同源性且具有相同功能的蛋白质。

为了解决上述技术问题，本发明还提供了与SpSOS1蛋白和/或SpAHA1蛋白相关的生物材料的新用途。

本发明提供了与SpSOS1蛋白和/或SpAHA1蛋白相关的生物材料在调控植物耐逆性中的应用。

本发明还提供了与SpSOS1蛋白和/或SpAHA1蛋白相关的生物材料在培育耐逆性提高的转基因植物中的应用。

本发明还提供了与SpSOS1蛋白和/或SpAHA1蛋白相关的生物材料在植物育种中的应用。

上述应用中，所述与SpSOS1蛋白和/或SpAHA1蛋白相关的生物材料为下述A1)至A12)中的任一种：

A1)编码SpSOS1蛋白和/或SpAHA1蛋白的核酸分子；

A2)含有A1)所述核酸分子的表达盒；

A3)含有A1)所述核酸分子的重组载体；

A4)含有A2)所述表达盒的重组载体；

A5)含有A1)所述核酸分子的重组微生物；

A6)含有A2)所述表达盒的重组微生物；

A7)含有A3)所述重组载体的重组微生物；

A8)含有A4)所述重组载体的重组微生物；

A9)含有A1)所述核酸分子的转基因植物细胞系；

A10)含有A2)所述表达盒的转基因植物细胞系；

A11)含有A3)所述重组载体的转基因植物细胞系；

A12)含有A4)所述重组载体的转基因植物细胞系。

上述应用中，A1)所述核酸分子为如下1)或2)或3)所示的基因：

1)其编码序列是序列1或序列3所示的cDNA分子或基因组DNA分子；

2)与1)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码SpSOS1蛋白和/或SpAHA1蛋白的cDNA分子或基因组DNA分子；

3)在严格条件下与1)或2)限定的核苷酸序列杂交，且编码SpSOS1蛋白和/或SpAHA1蛋白的cDNA分子或基因组DNA分子。

上述应用中，所述耐逆性为耐盐性。所述调控植物耐逆性为提高植物耐逆性，具体体现在如下m1)-m4)中任一种：m1)在盐胁迫下提高植物鲜重、根长和侧根数；m2)在盐胁迫下提高植物外排的H⁺离子流速和/或Na⁺离子流速；m3)降低植物Na⁺离子含量和/或提高植物K⁺离子含量；m4)降低植物丙二醛含量。所述盐胁迫具体为NaCl胁迫，所述NaCl浓度具体为50mM、75mM、100mM或200mM。

为了解决上述技术问题，本发明最后还提供了一种培育耐逆性提高的转基因植物的方法。

本发明提供的培育耐逆性提高的转基因植物的方法包括如下步骤：提高受体植物中SpSOS1蛋白和/或SpAHA1蛋白的表达量和/或活性，得到转基因植物的步骤；所述转基因植物的耐逆性高于所述受体植物。

上述方法中，所述耐逆性为耐盐性；所述转基因植物的耐逆性高于所述受体植物体现在如下(1)-(8)中任一种：(1)转基因植物的鲜重高于受体植物；(2)转基因植物的根长长于受体植物；(3)转基因植物的侧根数多于受体植物；(4)转基因植物的H⁺离子流速高于受体植物；(5)转基因植物的Na⁺离子流速高于受体植物；(6)转基因植物的Na⁺含量低于受体植物；(7)转基因植物的K⁺含量高于受体植物；(8)转基因植物的丙二醛含量低于受体植物。

上述方法中，所述提高受体植物中SpSOS1蛋白和/或SpAHA1蛋白的表达量和/或活性的方法为在受体植物中过表达SpSOS1蛋白和/或SpAHA1蛋白；所述过表达的方法为将SpSOS1蛋白和/或SpAHA1蛋白的编码基因导入受体植物。在本发明中，SpSOS1蛋白和SpAHA1蛋白的编码基因通过载体1304-SpSOS1-SpAHA1导入受体植物，SpSOS1蛋白的编码基因通过载体1304-SpSOS1导入受体植物，SpAHA1蛋白的编码基因通过载体1304-SpAHA1导入受体植物。

上述方法中，所述SpSOS1蛋白的编码基因为序列1；所述SpAHA1蛋白的编码基因为序列3。

上述方法中，所述受体植物为单子叶植物或双子叶植物，所述双子叶植物可为拟南芥。在本发明中，所述受体植物为野生型拟南芥(哥伦比亚生态型col-0)。

本发明的有益效果如下：(1)与传统转单个基因相比，转化两个基因的植株耐盐性得到明显提高；(2)首次将细胞膜Na⁺/H⁺逆转运蛋白基因SpSOS1和H⁺-ATPase基因SpAHA1共转化到植物提高耐盐性，直接证明H⁺-ATPase可为Na⁺/H⁺逆转运系统提供能量。

本发明提供了一种提高植物耐盐性的方法。本发明提供的提高植物耐盐性的方法是将SpSOS1基因和SpAHA1基因共转化到植物中，提高受体植物中SpSOS1蛋白和SpAHA1蛋白的表达量和/或活性。通过实验证明：SpSOS1蛋白和SpAHA1蛋白可以提高植物耐盐性，具体体现在提高植物的鲜重、根长、侧根数、H⁺离子流速、Na⁺离子流速、K⁺含量，降低Na⁺含量和丙二醛含量。

附图说明

图1为载体的结构图。图1a为载体1304-SpSOS1-SpAHA1的结构图；图1b为载体1304-SpSOS1的结构图；图1c为载体1304-SpAHA1的结构图。

图2为转基因拟南芥分子鉴定。图2a为转SpSOS1基因拟南芥的分子鉴定。图2a上图为SpSOS1基因的PCR检测，图2a下图为潮霉素标记基因hygB的PCR检测，泳道1-12为转基因拟南芥，泳道13为野生型的未转基因拟南芥。图2b为转SpAHA1基因拟南芥的分子鉴定。图2b上图为SpAHA1基因的PCR检测，图2b下图为潮霉素标记基因hygB的PCR检测，泳道1-11为转基因拟南芥，泳道12为野生型的未转基因拟南芥。图1c为共转SpSOS1和SpAHA1基因拟南芥的分子鉴定。图2c上图为SpSOS1基因的PCR检测，图2c中图为SpAHA1基因的PCR检测，图2c下图为潮霉素标记基因hygB的PCR检测，泳道1-10为转基因拟南芥，泳道11为野生型的未转基因拟南芥。

图3为转基因拟南芥在MS培养基中的耐盐性分析。

图4为转基因拟南芥在土壤中的耐盐性分析。

图5为盐胁迫下转基因拟南芥叶片中的H⁺流速测定。

图6为盐胁迫下转基因拟南芥叶片中的Na⁺流速测定。

图7为盐胁迫下转基因拟南芥叶片中的Na⁺和K⁺含量测定。

图8为盐胁迫下转基因拟南芥叶片中的丙二醛含量测定。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

下述实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

实施例1、转基因拟南芥的获得及其耐盐性分析

一、转基因拟南芥的获得

1、载体的构建

(1)双基因植物表达载体

克隆海马齿细胞膜Na⁺/H⁺逆转运蛋白基因SpSOS1和细胞膜H⁺-ATPase基因SpAHA1，并将其构建到同一个植物表达载体pCAMBIA1304中。具体操作如下：首先克隆SpSOS1基因(序列1)，并将其插入到pCAMBIA1300载体(Cambia，Australia)的Sal I和Kpn I位点之间，得到起始质粒pCAMBIA1300-SpSOS1；其次用Pst I和EcoR I双酶切质粒pCAMBIA1300-SpSOS1，将酶切下的片段(其中包含有35S启动子、SpSOS1基因和NOS终止子)插入到pCAMBIA1304载体(Cambia，Australia)中，得到中间质粒pCAMBIA1304-SpSOS1；最后克隆SpAHA1基因(序列3)，并将其插入到pCAMBIA1304-SpSOS1载体的Spe I和Eco72I位点之间，最终得到目的质粒1304-SpSOS1-SpAHA1(1304-SpSOS1-SpAHA1的结构图如图1a所示)，目的质粒中的SpSOS1基因和SpAHA1基因前后均分别包含有一个35S启动子和一个NOS终止子，能够保证基因正常翻译成蛋白质。载体1304-SpSOS1-SpAHA1表达SpSOS1蛋白和SpAHA1蛋白。SpSOS1蛋白的氨基酸序列如序列2所示，SpAHA1蛋白的氨基酸序列如序列4所示。

对载体1304-SpSOS1-SpAHA1进行测序验证，结果表明：SpSOS1基因和SpAHA1基因均成功构建到了pCAMBIA1304载体中，并且具有独立的35S启动子和NOS终止子。载体1304-SpSOS1-SpAHA1为将SpSOS1基因插入pCAMBIA1304载体的Sal I和Kpn I位点之间，且将SpAHA1基因插入pCAMBIA1304载体的Spe I和Eco72I位点之间，且保持pCAMBIA1304载体的其他序列不变后得到的载体。

(2)单基因植物表达载体

将SpSOS1基因插入pCAMBIA1304载体的Sal I和Kpn I位点之间，得到载体1304-SpSOS1。载体1304-SpSOS1的结构图如图1b所示。

将SpAHA1基因插入pCAMBIA1304载体的Spe I和Eco72I位点之间，得到载体1304-SpAHA1。载体1304-SpAHA1的结构图如图1c所示。

以单基因植物表达载体1304-SpSOS1和1304-SpAHA1作为对照载体。

2、农杆菌介导的拟南芥转化

采用热击法分别将含有目的基因的载体(载体1304-SpSOS1-SpAHA1、1304-SpSOS1和1304-SpAHA1)转化到农杆菌菌株GV3101(北京全式金生物技术有限公司，CH5012A)中，用真空渗入法将目的基因转化到野生型拟南芥(哥伦比亚生态型col-0)中，得到T₀转基因拟南芥。收获T₁代转基因拟南芥种子并于含50mg/L Hygromycin B的MS培养基上筛选，对筛选得到的幼苗产生的下一代再进行潮霉素筛选，如此重复，最终获得T₃代转基因拟南芥株系。

3、转基因拟南芥分子鉴定

采用PCR方法分别对T₃代转基因拟南芥株系的基因组DNA进行扩增，鉴定阳性转基因株系。分子鉴定引物为SpSOS1基因和SpAHA1基因的检测引物，以及筛选标记基因潮霉素引物(SpSOS1基因检测引物为SpSOS1-TF：ATGAAGGGAGGATAACACAAAC和SpSOS1-TR：CTTCTCGAAATACTGAGGAAG，目的片段为980bp；SpAHA1基因检测引物为SpAHA1-TF：CCAGAACACAAGTACGAAATTG和SpAHA1-TR：TCCTCTTTACCGTAATCCTTCT，目的片段为916bp；潮霉素基因hygB检测引物为HygB-TF：TAGGAGGGCGTGGATATGTC和HygB-TR：TAGGAGGGCGTGGATATGTC，目的片段为750bp)。鉴定结果如图2所示。

二、转基因拟南芥的耐盐性分析

分别对步骤一获得的阳性T₃代转SpSOS1-SpAHA1拟南芥株系、T₃代转SpSOS1拟南芥株系和T₃代转SpAHA1拟南芥株系及野生型拟南芥的耐盐性进行分析。实验重复三次，每种处理各株系采用5个植株。

1、盐胁迫下形态指标检测

取转基因拟南芥幼苗和野生型拟南芥幼苗分别在MS培养基和土壤中进行盐胁迫处理，测定盐胁迫下拟南芥的形态指标；形态学指标包括鲜重、根长和侧根数。在MS培养基中盐胁迫处理的方法如下：将幼苗分别转移至含0mM、50mM、75mM和100mM NaCl的MS培养基(PhytoTechnology Laboratories，M519)中，在光照培养箱中培养(光周期：16h光照/8h黑暗，温度：23℃/21℃，光照强度：100μmol m^-2s^-1)。在土壤中盐胁迫处理的方法如下：将幼苗分别转移至含0mM和200mM NaCl的土壤(营养土:蛭石＝1:1(v/v))中培养，培养条件如下：光周期：16h光照/8h黑暗，温度：23℃/21℃，光照强度：150μmol m^-2s^-1。

在MS培养基中盐胁迫处理后的形态指标检测结果如图3所示。从图中可以看出：T₃代转SpSOS1-SpAHA1拟南芥株系、T₃代转SpSOS1拟南芥株系和T₃代转SpAHA1拟南芥株系的鲜重、根长和侧根数均大于野生型拟南芥。转SpSOS1-SpAHA1拟南芥株系的鲜重和侧根数均显著高于T₃代转SpSOS1拟南芥株系和T₃代转SpAHA1拟南芥株系。

在土壤中盐胁迫处理后的形态指标检测结果如图4所示。从图中可以看出：T₃代转SpSOS1-SpAHA1拟南芥株系、T₃代转SpSOS1拟南芥株系和T₃代转SpAHA1拟南芥株系的鲜重均大于野生型拟南芥。T₃代转SpSOS1-SpAHA1拟南芥株系的鲜重大于T₃代转SpSOS1拟南芥株系和T₃代转SpAHA1拟南芥株系。盐胁迫下，转SpSOS1-SpAHA1拟南芥幼苗鲜重的降低值最小，野生型拟南芥降低值最大。

2、盐胁迫下离子流速检测

取转基因拟南芥幼苗和野生型拟南芥幼苗在MS培养基中进行100mM NaCl盐胁迫处理，利用非损伤微测技术测定盐胁迫下拟南芥的离子流速；离子流速包括H⁺和Na⁺流速。具体步骤如下：将幼苗种植在MS培养基中生长7天后，转移到含有100mM NaCl的MS培养基中进行盐胁迫处理，生长3天后，测定拟南芥根系的H⁺和Na⁺离子流速。离子流速的测定方法参照旭月(北京)科技有限公司的非损伤微测技术。

H⁺离子流速检测结果如图5所示。从图中可以看出：T₃代转SpSOS1-SpAHA1拟南芥株系、T₃代转SpSOS1拟南芥株系和T₃代转SpAHA1拟南芥株系的外排H⁺流速均大于野生型拟南芥。转SpSOS1-SpAHA1拟南芥株系的外排H⁺流速显著大于转SpSOS1拟南芥株系和转SpAHA1拟南芥株系的H⁺离子流速。

Na⁺离子流速检测结果如图6所示。从图中可以看出：T₃代转SpSOS1-SpAHA1拟南芥株系、T₃代转SpSOS1拟南芥株系和T₃代转SpAHA1拟南芥株系的外排Na⁺流速均大于野生型拟南芥。转SpSOS1-SpAHA1拟南芥株系的外排Na⁺流速显著大于转SpSOS1拟南芥株系和转SpAHA1拟南芥株系的Na⁺离子流速。

3、盐胁迫下离子含量检测

取转基因拟南芥幼苗和野生型拟南芥幼苗转移到土壤中，进行200mM NaCl盐胁迫处理，测定拟南芥叶片中的离子含量；离子含量包括Na⁺和K⁺含量。具体步骤如下：收集正常和盐胁迫下各种类型的拟南芥叶片用去离子水清洗；85℃烘干48h后称干重；510℃灰化2h；冷却至室温后称取50mg用浓HNO₃和H₂O₂消化，得到消化液；用原子吸收分光光度计测定消化液中的Na⁺和K⁺离子含量。盐胁迫下Na⁺含量较低的植物为耐盐性较强的转基因植物；盐胁迫下K⁺含量较高的植物为耐盐性较强的转基因植物。

结果如图7所示。从图中可以看出：盐胁迫下，T₃代转SpSOS1-SpAHA1拟南芥株系、T₃代转SpSOS1拟南芥株系和T₃代转SpAHA1拟南芥株系中的Na⁺含量均小于野生型拟南芥，共转SpSOS1和SpAHA1基因的转SpSOS1-SpAHA1拟南芥株系中Na⁺含量最低；盐胁迫下，K⁺含量趋势正好相反，共转SpSOS1和SpAHA1基因的转SpSOS1-SpAHA1拟南芥株系中K⁺含量最高，而野生型拟南芥在盐胁迫下的K⁺含量最低。

4、盐胁迫下丙二醛含量检测

取转基因拟南芥幼苗和野生型拟南芥幼苗转移到土壤中，进行200mM NaCl盐胁迫处理，测定拟南芥叶片中的丙二醛含量。丙二醛含量的具体测定方法如下：收集正常和盐胁迫下各种类型的拟南芥叶片用去离子水清洗；称取1g叶片，加2mL的10％TCA(三氯乙酸)于研钵中研磨；再加入8mL TCA继续研磨，在4000r/min离心10min进行匀浆，收集上清液即为MDA粗液；取离心的上清夜2mL(以2mL蒸馏水作为对照)，加入2mL 0.6％TBA(硫代巴比妥酸)，混合后于沸水反应15min；取上清液在紫外分光光度计测定450nm、532nm及600nm处的吸光度；按照如下公式计算MDA浓度；C_MDA(μmol/L)＝6.45×(D₅₃₂-D₆₀₀)-0.56×D₄₅₀。盐胁迫下丙二醛含量较低的植物为耐盐性较强的转基因植物。

结果如图8所示。从图中可以看出：盐胁迫下，T₃代转SpSOS1-SpAHA1拟南芥株系、T₃代转SpSOS1拟南芥株系和T₃代转SpAHA1拟南芥株系叶片中的丙二醛含量均小于野生型拟南芥。转SpSOS1-SpAHA1拟南芥叶片中的丙二醛含量低于转SpSOS1拟南芥株系和转SpAHA1拟南芥株系，而野生型拟南芥叶片中的丙二醛含量最高。

上述结果表明共表达SpSOS1和SpAHA1基因显著提高了植物的耐盐性。

序列表

<110>海南大学

<120>一种提高植物耐盐性的方法

<160>4

<170>PatentIn version 3.5

<210>1

<211>3468

<212>DNA

<213>人工序列(Artificial Sequence)

<400>1

atggcggcgt tgactgattt gccgtttccg ttccgattaa cggagctcga gagcacttct 60

aacagtactt ctacagttgt agcggaagaa tcgtcgtcca atccaactga cgccgttatt 120

ttcgtcggag tgagtctcgt tctcggaatc gcttgccgcc attttcttcg aggcactcgt 180

gttccttaca ctgtcgctct tctcatcatt ggcattggcc ttggttcctt agaatatggt 240

acaaaacacg gtttgggaaa atttggaaat ggcattcgcc tttgggaaca tattgatcct 300

gatctccttt tggctgtatt tcttcctgcc cttctatttg agagttcatt ttcaatggaa 360

attcaccaaa ttaagagatg cattgtacaa atgtttctgc ttgctggacc aggtgtgctg 420

atatcaactt tctgccttgg agcagctctg aagtactcat ttccttatga ctggaactgg 480

aagacatcat tattgctcgg agggcttcta agtgcaactg atcctgttgc tgtagtagct 540

cttttgaaag aacttggtgc tagcaaaaaa ttgagtacaa ttattgaggg ggagtcattg 600

atgaatgatg ggactgctat tgtggtatat acactctttt accaaatggt ctttggacgg 660

agctttaatt ggggagaaat tgtgaagtat ttgctgcaag cctcacttgg agctgttgga 720

atcggccttg catttggagt agtgtccgta ctgtggcttg gatttatttt caatgacact 780

gtgatagaaa tttcgttgac acttgctgtg agctatgttg cgttttactc tgctcaagag 840

gcagctgagg tgtctggtgt tctggcagta atgaccttgg ggatgttttt tgcagcagct 900

gctaggacag cgttcaaagg tgaaagtcaa gaaagtttgc ataacttctg ggagatggtg 960

gcatacatag ctaatacgct aatctttatt ttgagtggtg ctgtcatagc tgaaggtgtc 1020

ttaaacagcg gcaacatttt tgaaaaccat ggtatagcat ggggctatct cgtccttctc 1080

tatgcatatg tcctagcttc tcggacagtg gttgttacag tgttgttccc atttctacga 1140

tattttggct atggcttgga atggaaagaa gcttgtatcc tgacatgggc aggcttgcga 1200

ggagctgtag cactggctct ttctttgtct gttaagcgtt ctagtggtga cccagctcat 1260

ctgacttcac ggactggaac actgtttgtt ttcttcacag gtggaattgt gttcttgacg 1320

ctaattgtaa atggatcaac cacacaattt gtcttacatt ttctgggaat gagcaagtta 1380

tcagctgcaa agaggcgcat tctggaatac acaaaatttg agatgcaaaa gagggcacta 1440

gaggcgtttg gtgatctcgg cgaggatgaa gaactaggac ctgctgactg gcccactgtc 1500

aaaagatata ttaaatgctt aaacaatgta gatggagagc aaatccatcc acatgatggc 1560

tctgtagacg ggggtgatct tgatcccatg agcttgagag atatccgtgt gcgcctattg 1620

aatggtgttc aagctgctta ctgggtgatg cttgatgaag ggaggataac acaaaccact 1680

gcaaatatat taatgcagtc agttgatgaa gcacttgatt cagtgtccca tgaaccgtta 1740

tgtgattgga aaggtttaaa acgtaacgtt cattttccaa gttactaccg gtttctccag 1800

ggtagcatgt ggccacgaaa gctggttaca ttttttacag ttgagagatt ggaatctgga 1860

tgttacatat gtgctgcatt tctccgggcc catagaattg ctcgtcgtca gctgtatgac 1920

ttcattggtg agagtgacat cgcttctgct gtcataagtg aaagcgagac agaaggagag 1980

gaagcaagaa agtttctgga agatgttcgc attactttcc ctgaggtttt gcgggttgta 2040

aaaacaaggc aagttaccca ttcagttctt caacatctta ttgattacat tcacagtcta 2100

gagaaggccg ggttactgga ggagaaagag attcatcatc ttcatgatgc agtgcagact 2160

gatttaaaaa gagttctgcg caatcctcct ttagtaaaga ttcccaaggt caaagatcta 2220

atcaccactc atcctctatt gggagccctc cctgtcacag ctcgtgatgt tcttgttggt 2280

tcaacaaaag aacttgtcaa agtacgtggt tcaacactat acaaggaagg ttcacggcca 2340

aatggaattt ggctcatttc aaatggggtg gtgaagtggg atagcaaaac cagaagaagc 2400

aagcatgcct tccatcctac ttttactcat ggaagtactt tggggctgta tgaagtgttg 2460

attggaaaac cctatctttg tgatatgatc acagattcag tagtagtttg cttctttatt 2520

gatgctgata agatactttc agtgcttgga tccgatcatg atatggaaac tttcttgtgg 2580

aaggaaagtg tcattgcgct tgccaaaatc ctccttcctc agtatttcga gaagatgtcc 2640

atgcaagatc tgagagtgct cattgcagag aggtcatcaa tgaatatata cctgagcggt 2700

gaaactgtag aagtcccacc acaatcgatt gggtttttgt tagaagggta tttaaaaacg 2760

cactctctta ctgaggaatt aattatgcca ccagcagcat tatggcctgc gcaaggaaat 2820

tcgagcttcc tcagccaaga tggatctgcg tataagtcgg caagctttta ttataatcat 2880

caaggatgtt cttattatgt tgagacaaga gctagagtca ttgtatttga catagctgca 2940

taccacgctg ataaaagtca caagactctt ctcagacgca aatcatcctt actattacat 3000

gatcagtcca ctatgtctct gactcgagaa catggtggtc ttgtgagttg gcccgagaac 3060

gcccagtcag agcagcacca gcaagacgaa gaagatccag atgaagatga acacaactta 3120

tcagcgaaag caatgcagct gagcatcttt ggcagcacgg tgaagcaacc cttatacaaa 3180

gcagcaagtt ttcaagatat cgggcagaac aagggtgcgc atagcctttc ttatcctaaa 3240

atccccgaaa ctcagggacg tactcttaca tcagtaaaat cagaaggatc tacgacagta 3300

aggaagagac ttgcagagga attagcaggg aaactaccgc ctccttctca tagtcggaag 3360

caaagtcgcg cccaagaaga gtcgagtgac gaatcaggtg gtgaagatga ccttatagtg 3420

agaattgatt caccaagtgg gctaactttc ccccgccctg caccatga 3468

<210>2

<211>1155

<212>PRT

<213>人工序列(Artificial Sequence)

<400>2

Met Ala Ala Leu Thr Asp Leu Pro Phe Pro Phe Arg Leu Thr Glu Leu

1 5 10 15

Glu Ser Thr Ser Asn Ser Thr Ser Thr Val Val Ala Glu Glu Ser Ser

20 25 30

Ser Asn Pro Thr Asp Ala Val Ile Phe Val Gly Val Ser Leu Val Leu

35 40 45

Gly Ile Ala Cys Arg His Phe Leu Arg Gly Thr Arg Val Pro Tyr Thr

50 55 60

Val Ala Leu Leu Ile Ile Gly Ile Gly Leu Gly Ser Leu Glu Tyr Gly

65 70 75 80

Thr Lys His Gly Leu Gly Lys Phe Gly Asn Gly Ile Arg Leu Trp Glu

85 90 95

His Ile Asp Pro Asp Leu Leu Leu Ala Val Phe Leu Pro Ala Leu Leu

100 105 110

Phe Glu Ser Ser Phe Ser Met Glu Ile His Gln Ile Lys Arg Cys Ile

115 120 125

Val Gln Met Phe Leu Leu Ala Gly Pro Gly Val Leu Ile Ser Thr Phe

130 135 140

Cys Leu Gly Ala Ala Leu Lys Tyr Ser Phe Pro Tyr Asp Trp Asn Trp

145 150 155 160

Lys Thr Ser Leu Leu Leu Gly Gly Leu Leu Ser Ala Thr Asp Pro Val

165 170 175

Ala Val Val Ala Leu Leu Lys Glu Leu Gly Ala Ser Lys Lys Leu Ser

180 185 190

Thr Ile Ile Glu Gly Glu Ser Leu Met Asn Asp Gly Thr Ala Ile Val

195 200 205

Val Tyr Thr Leu Phe Tyr Gln Met Val Phe Gly Arg Ser Phe Asn Trp

210 215 220

Gly Glu Ile Val Lys Tyr Leu Leu Gln Ala Ser Leu Gly Ala Val Gly

225 230 235 240

Ile Gly Leu Ala Phe Gly Val Val Ser Val Leu Trp Leu Gly Phe Ile

245 250 255

Phe Asn Asp Thr Val Ile Glu Ile Ser Leu Thr Leu Ala Val Ser Tyr

260 265 270

Val Ala Phe Tyr Ser Ala Gln Glu Ala Ala Glu Val Ser Gly Val Leu

275 280 285

Ala Val Met Thr Leu Gly Met Phe Phe Ala Ala Ala Ala Arg Thr Ala

290 295 300

Phe Lys Gly Glu Ser Gln Glu Ser Leu His Asn Phe Trp Glu Met Val

305 310 315 320

Ala Tyr Ile Ala Asn Thr Leu Ile Phe Ile Leu Ser Gly Ala Val Ile

325 330 335

Ala Glu Gly Val Leu Asn Ser Gly Asn Ile Phe Glu Asn His Gly Ile

340 345 350

Ala Trp Gly Tyr Leu Val Leu Leu Tyr Ala Tyr Val Leu Ala Ser Arg

355 360 365

Thr Val Val Val Thr Val Leu Phe Pro Phe Leu Arg Tyr Phe Gly Tyr

370 375 380

Gly Leu Glu Trp Lys Glu Ala Cys Ile Leu Thr Trp Ala Gly Leu Arg

385 390 395 400

Gly Ala Val Ala Leu Ala Leu Ser Leu Ser Val Lys Arg Ser Ser Gly

405 410 415

Asp Pro Ala His Leu Thr Ser Arg Thr Gly Thr Leu Phe Val Phe Phe

420 425 430

Thr Gly Gly Ile Val Phe Leu Thr Leu Ile Val Asn Gly Ser Thr Thr

435 440 445

Gln Phe Val Leu His Phe Leu Gly Met Ser Lys Leu Ser Ala Ala Lys

450 455 460

Arg Arg Ile Leu Glu Tyr Thr Lys Phe Glu Met Gln Lys Arg Ala Leu

465 470 475 480

Glu Ala Phe Gly Asp Leu Gly Glu Asp Glu Glu Leu Gly Pro Ala Asp

485 490 495

Trp Pro Thr Val Lys Arg Tyr Ile Lys Cys Leu Asn Asn Val Asp Gly

500 505 510

Glu Gln Ile His Pro His Asp Gly Ser Val Asp Gly Gly Asp Leu Asp

515 520 525

Pro Met Ser Leu Arg Asp Ile Arg Val Arg Leu Leu Asn Gly Val Gln

530 535 540

Ala Ala Tyr Trp Val Met Leu Asp Glu Gly Arg Ile Thr Gln Thr Thr

545 550 555 560

Ala Asn Ile Leu Met Gln Ser Val Asp Glu Ala Leu Asp Ser Val Ser

565 570 575

His Glu Pro Leu Cys Asp Trp Lys Gly Leu Lys Arg Asn Val His Phe

580 585 590

Pro Ser Tyr Tyr Arg Phe Leu Gln Gly Ser Met Trp Pro Arg Lys Leu

595 600 605

Val Thr Phe Phe Thr Val Glu Arg Leu Glu Ser Gly Cys Tyr Ile Cys

610 615 620

Ala Ala Phe Leu Arg Ala His Arg Ile Ala Arg Arg Gln Leu Tyr Asp

625 630 635 640

Phe Ile Gly Glu Ser Asp Ile Ala Ser Ala Val Ile Ser Glu Ser Glu

645 650 655

Thr Glu Gly Glu Glu Ala Arg Lys Phe Leu Glu Asp Val Arg Ile Thr

660 665 670

Phe Pro Glu Val Leu Arg Val Val Lys Thr Arg Gln Val Thr His Ser

675 680 685

Val Leu Gln His Leu Ile Asp Tyr Ile His Ser Leu Glu Lys Ala Gly

690 695 700

Leu Leu Glu Glu Lys Glu Ile His His Leu His Asp Ala Val Gln Thr

705 710 715 720

Asp Leu Lys Arg Val Leu Arg Asn Pro Pro Leu Val Lys Ile Pro Lys

725 730 735

Val Lys Asp Leu Ile Thr Thr His Pro Leu Leu Gly Ala Leu Pro Val

740 745 750

Thr Ala Arg Asp Val Leu Val Gly Ser Thr Lys Glu Leu Val Lys Val

755 760 765

Arg Gly Ser Thr Leu Tyr Lys Glu Gly Ser Arg Pro Asn Gly Ile Trp

770 775 780

Leu Ile Ser Asn Gly Val Val Lys Trp Asp Ser Lys Thr Arg Arg Ser

785 790 795 800

Lys His Ala Phe His Pro Thr Phe Thr His Gly Ser Thr Leu Gly Leu

805 810 815

Tyr Glu Val Leu Ile Gly Lys Pro Tyr Leu Cys Asp Met Ile Thr Asp

820 825 830

Ser Val Val Val Cys Phe Phe Ile Asp Ala Asp Lys Ile Leu Ser Val

835 840 845

Leu Gly Ser Asp His Asp Met Glu Thr Phe Leu Trp Lys Glu Ser Val

850 855 860

Ile Ala Leu Ala Lys Ile Leu Leu Pro Gln Tyr Phe Glu Lys Met Ser

865 870 875 880

Met Gln Asp Leu Arg Val Leu Ile Ala Glu Arg Ser Ser Met Asn Ile

885 890 895

Tyr Leu Ser Gly Glu Thr Val Glu Val Pro Pro Gln Ser Ile Gly Phe

900 905 910

Leu Leu Glu Gly Tyr Leu Lys Thr His Ser Leu Thr Glu Glu Leu Ile

915 920 925

Met Pro Pro Ala Ala Leu Trp Pro Ala Gln Gly Asn Ser Ser Phe Leu

930 935 940

Ser Gln Asp Gly Ser Ala Tyr Lys Ser Ala Ser Phe Tyr Tyr Asn His

945 950 955 960

Gln Gly Cys Ser Tyr Tyr Val Glu Thr Arg Ala Arg Val Ile Val Phe

965 970 975

Asp Ile Ala Ala Tyr His Ala Asp Lys Ser His Lys Thr Leu Leu Arg

980 985 990

Arg Lys Ser Ser Leu Leu Leu His Asp Gln Ser Thr Met Ser Leu Thr

995 1000 1005

Arg Glu His Gly Gly Leu Val Ser Trp Pro Glu Asn Ala Gln Ser

1010 1015 1020

Glu Gln His Gln Gln Asp Glu Glu Asp Pro Asp Glu Asp Glu His

1025 1030 1035

Asn Leu Ser Ala Lys Ala Met Gln Leu Ser Ile Phe Gly Ser Thr

1040 1045 1050

Val Lys Gln Pro Leu Tyr Lys Ala Ala Ser Phe Gln Asp Ile Gly

1055 1060 1065

Gln Asn Lys Gly Ala His Ser Leu Ser Tyr Pro Lys Ile Pro Glu

1070 1075 1080

Thr Gln Gly Arg Thr Leu Thr Ser Val Lys Ser Glu Gly Ser Thr

1085 1090 1095

Thr Val Arg Lys Arg Leu Ala Glu Glu Leu Ala Gly Lys Leu Pro

1100 1105 1110

Pro Pro Ser His Ser Arg Lys Gln Ser Arg Ala Gln Glu Glu Ser

1115 1120 1125

Ser Asp Glu Ser Gly Gly Glu Asp Asp Leu Ile Val Arg Ile Asp

1130 1135 1140

Ser Pro Ser Gly Leu Thr Phe Pro Arg Pro Ala Pro

1145 1150 1155

<210>3

<211>2862

<212>DNA

<213>人工序列(Artificial Sequence)

<400>3

atggccaagg ccatcaatct cgaagacatt aaaaatgaag ctgttgatct ggaaaacatt 60

ccaattgagg aagtgtttga gcagttgaaa tgctcaagaa aaggtctgac ctccgacgaa 120

ggagccaaca ggctcaattt atttggaccc aacaagctcg aggagaaaaa ggaaagcaaa 180

ttcctcaagt ttttgggttt tatgtggaac cccttatcat gggtcatgga agctgctgct 240

atcatggcaa ttgcacttgc caatggaggt gggaagcccc cagattggca agactttgtc 300

ggtattgcct gtttgttggt cataaactcg acaatcagtt tcatcgaaga gaacaatgct 360

ggtaatgctg ctgctgccct catggcaaat cttgccccca aatgtaaggt ccttagggat 420

ggccgatggg gtgaacaaga agccgcaatt ttagtcccag gagacatcat tagtatcaaa 480

ttgggagaca tcatccctgc tgatgctcgt cttcttgaag gtgatccttt aaaggttgac 540

cagtctgctc ttacaggaga atcactccct gtcaccaaga gtcctgggga tgaggttttc 600

tctggttcca cttgtaaaca aggtgagatt gaggccattg tgattgccac tggtgtgcac 660

actttcttcg gaaaggcagc tcaccttgtc gatagcacaa accaagttgg tcacttccag 720

aaggttctta cagccattgg aaacttctgt attgtgtcta tcgctgtggg tatggtgatt 780

gagatcattg tgatgtaccc tattcaacgt cgtgcctaca ggagtggtat caacaatctc 840

ttggtcctct tgattggagg tatcccaatt gccatgccta cagtgttgtc tgtcactatg 900

gctattgggt cccacaagtt gtcgactcaa ggagctatca caaagaggat gactgctatt 960

gaggaaatgg caggtatgga tgtgctttgc agtgacaaga ctggaacctt gactctcaac 1020

aagttgagtg tcgacaagaa cttgattgag gtcttttgca agggcgtgga caaggaacat 1080

gtccttctac tcgctgctag agcctctcgt gttgagaacc aagatgctat tgatacttgt 1140

atggttggaa tgctttctga tcctaaggag gcaagagccg gaatcagaga ggtacatttt 1200

cttccattca accctgttga caagagaact gctttgacct acattgatgc cagtggcaac 1260

tggcacaggg tcagcaaagg tgcacccgag cagatcctcg accttgcaaa ctgcagagaa 1320

gatgtgagga aaaaggttca tgctgtgatt gagaagtttg ctgagcgtgg tctccggtct 1380

ttgggtgttg caagacagga agtgccagaa aagaacaagg actctcctgg tgctccatgg 1440

caatttgttg gtttgttgcc actcttcgac cctccaaggc atgacagtgc tgacaccatc 1500

aggaaggctc tcaaccttgg tgtcaatgtc aagatgatta ctggtgacca acttgccatc 1560

ggcaaggaaa ccggtagaag acttggtatg ggaacaaaca tgtacccctc tgctgctttg 1620

ctcggacaag acaaagacca atccattggt gccctccctg ttgatgaact tatcgagaaa 1680

gctgatggtt ttgctggagt tttcccagaa cacaagtacg aaattgtcaa gaaattgcaa 1740

gagaagaagc acattgtcgg tatgactgga gatggtgtga atgacgcgcc tgcattgaag 1800

aaggcagaca tcggtattgc tgttgatgac gccactgatg ctgcaagaag tgcatctgac 1860

attgttctca ctgagcctgg tcttagtgtt atcatcagtg cagtgcttac cagtagggct 1920

attttccaaa ggatgaagga ttacaccatc tatgccgtct ctattaccat tcgtattgtg 1980

ctcggattta tgctcatcgc cttgatctgg aagtttgact tctctccctt catggttctg 2040

atcattgcca tccttaatga tggaactatc atgacgattt caaaggatag agtcaagcca 2100

tctccgcttc cagacagctg gaagttgaag gaaatcttcg ctactggaat tgttctcgga 2160

ggttacttgg gtatcatgac tgtgatcttc ttctgggcaa tgcacaagac tgacttcttc 2220

tcggacaaat ttggagtcag atccttgaga ggaagcccca atgaagagat ggctgctttg 2280

tacctacaag tcagtattgt gagtcaagca ctcatctttg tcaccaggtc tcgcagctgg 2340

tcatacattg aacgccctgg tgctctgctt ttcactgctt tcttgattgc tcaactggtt 2400

gctactctta tcgccgtgta tgccaactgg ggctttgctg acattaaagg gtgtggatgg 2460

ggatgggctg gtgtcgtttg gctctacaac attgtgttct atgtgccact cgacattctc 2520

aaatttgcca tccgttacat cttgagtggc aaggcatggc tcaacttgtt tgagagcaag 2580

actgccttca ccaccaagaa ggattacggt aaagaggaga gggaagctca atgggctcat 2640

gctcagagga ctcttcacgg actccaagca cccgagcctt caaaccctct gttcaatgag 2700

aagaacagct acagggagct atctgagatc gctgagcaag ccaaaagacg agctgaggtt 2760

gcaaggctcc gagagttgca caccctcaag ggtcatgttg agtccgtggt taagctcaag 2820

ggtctcgaca ttgacaccat ccaacagaac tacaccgtct aa 2862

<210>4

<211>953

<212>PRT

<213>人工序列(Artificial Sequence)

<400>4

Met Ala Lys Ala Ile Asn Leu Glu Asp Ile Lys Asn Glu Ala Val Asp

1 5 10 15

Leu Glu Asn Ile Pro Ile Glu Glu Val Phe Glu Gln Leu Lys Cys Ser

20 25 30

Arg Lys Gly Leu Thr Ser Asp Glu Gly Ala Asn Arg Leu Asn Leu Phe

35 40 45

Gly Pro Asn Lys Leu Glu Glu Lys Lys Glu Ser Lys Phe Leu Lys Phe

50 55 60

Leu Gly Phe Met Trp Asn Pro Leu Ser Trp Val Met Glu Ala Ala Ala

65 70 75 80

Ile Met Ala Ile Ala Leu Ala Asn Gly Gly Gly Lys Pro Pro Asp Trp

85 90 95

Gln Asp Phe Val Gly Ile Ala Cys Leu Leu Val Ile Asn Ser Thr Ile

100 105 110

Ser Phe Ile Glu Glu Asn Asn Ala Gly Asn Ala Ala Ala Ala Leu Met

115 120 125

Ala Asn Leu Ala Pro Lys Cys Lys Val Leu Arg Asp Gly Arg Trp Gly

130 135 140

Glu Gln Glu Ala Ala Ile Leu Val Pro Gly Asp Ile Ile Ser Ile Lys

145 150 155 160

Leu Gly Asp Ile Ile Pro Ala Asp Ala Arg Leu Leu Glu Gly Asp Pro

165 170 175

Leu Lys Val Asp Gln Ser Ala Leu Thr Gly Glu Ser Leu Pro Val Thr

180 185 190

Lys Ser Pro Gly Asp Glu Val Phe Ser Gly Ser Thr Cys Lys Gln Gly

195 200 205

Glu Ile Glu Ala Ile Val Ile Ala Thr Gly Val His Thr Phe Phe Gly

210 215 220

Lys Ala Ala His Leu Val Asp Ser Thr Asn Gln Val Gly His Phe Gln

225 230 235 240

Lys Val Leu Thr Ala Ile Gly Asn Phe Cys Ile Val Ser Ile Ala Val

245 250 255

Gly Met Val Ile Glu Ile Ile Val Met Tyr Pro Ile Gln Arg Arg Ala

260 265 270

Tyr Arg Ser Gly Ile Asn Asn Leu Leu Val Leu Leu Ile Gly Gly Ile

275 280 285

Pro Ile Ala Met Pro Thr Val Leu Ser Val Thr Met Ala Ile Gly Ser

290 295 300

His Lys Leu Ser Thr Gln Gly Ala Ile Thr Lys Arg Met Thr Ala Ile

305 310 315 320

Glu Glu Met Ala Gly Met Asp Val Leu Cys Ser Asp Lys Thr Gly Thr

325 330 335

Leu Thr Leu Asn Lys Leu Ser Val Asp Lys Asn Leu Ile Glu Val Phe

340 345 350

Cys Lys Gly Val Asp Lys Glu His Val Leu Leu Leu Ala Ala Arg Ala

355 360 365

Ser Arg Val Glu Asn Gln Asp Ala Ile Asp Thr Cys Met Val Gly Met

370 375 380

Leu Ser Asp Pro Lys Glu Ala Arg Ala Gly Ile Arg Glu Val His Phe

385 390 395 400

Leu Pro Phe Asn Pro Val Asp Lys Arg Thr Ala Leu Thr Tyr Ile Asp

405 410 415

Ala Ser Gly Asn Trp His Arg Val Ser Lys Gly Ala Pro Glu Gln Ile

420 425 430

Leu Asp Leu Ala Asn Cys Arg Glu Asp Val Arg Lys Lys Val His Ala

435 440 445

Val Ile Glu Lys Phe Ala Glu Arg Gly Leu Arg Ser Leu Gly Val Ala

450 455 460

Arg Gln Glu Val Pro Glu Lys Asn Lys Asp Ser Pro Gly Ala Pro Trp

465 470 475 480

Gln Phe Val Gly Leu Leu Pro Leu Phe Asp Pro Pro Arg His Asp Ser

485 490 495

Ala Asp Thr Ile Arg Lys Ala Leu Asn Leu Gly Val Asn Val Lys Met

500 505 510

Ile Thr Gly Asp Gln Leu Ala Ile Gly Lys Glu Thr Gly Arg Arg Leu

515 520 525

Gly Met Gly Thr Asn Met Tyr Pro Ser Ala Ala Leu Leu Gly Gln Asp

530 535 540

Lys Asp Gln Ser Ile Gly Ala Leu Pro Val Asp Glu Leu Ile Glu Lys

545 550 555 560

Ala Asp Gly Phe Ala Gly Val Phe Pro Glu His Lys Tyr Glu Ile Val

565 570 575

Lys Lys Leu Gln Glu Lys Lys His Ile Val Gly Met Thr Gly Asp Gly

580 585 590

Val Asn Asp Ala Pro Ala Leu Lys Lys Ala Asp Ile Gly Ile Ala Val

595 600 605

Asp Asp Ala Thr Asp Ala Ala Arg Ser Ala Ser Asp Ile Val Leu Thr

610 615 620

Glu Pro Gly Leu Ser Val Ile Ile Ser Ala Val Leu Thr Ser Arg Ala

625 630 635 640

Ile Phe Gln Arg Met Lys Asp Tyr Thr Ile Tyr Ala Val Ser Ile Thr

645 650 655

Ile Arg Ile Val Leu Gly Phe Met Leu Ile Ala Leu Ile Trp Lys Phe

660 665 670

Asp Phe Ser Pro Phe Met Val Leu Ile Ile Ala Ile Leu Asn Asp Gly

675 680 685

Thr Ile Met Thr Ile Ser Lys Asp Arg Val Lys Pro Ser Pro Leu Pro

690 695 700

Asp Ser Trp Lys Leu Lys Glu Ile Phe Ala Thr Gly Ile Val Leu Gly

705 710 715 720

Gly Tyr Leu Gly Ile Met Thr Val Ile Phe Phe Trp Ala Met His Lys

725 730 735

Thr Asp Phe Phe Ser Asp Lys Phe Gly Val Arg Ser Leu Arg Gly Ser

740 745 750

Pro Asn Glu Glu Met Ala Ala Leu Tyr Leu Gln Val Ser Ile Val Ser

755 760 765

Gln Ala Leu Ile Phe Val Thr Arg Ser Arg Ser Trp Ser Tyr Ile Glu

770 775 780

Arg Pro Gly Ala Leu Leu Phe Thr Ala Phe Leu Ile Ala Gln Leu Val

785 790 795 800

Ala Thr Leu Ile Ala Val Tyr Ala Asn Trp Gly Phe Ala Asp Ile Lys

805 810 815

Gly Cys Gly Trp Gly Trp Ala Gly Val Val Trp Leu Tyr Asn Ile Val

820 825 830

Phe Tyr Val Pro Leu Asp Ile Leu Lys Phe Ala Ile Arg Tyr Ile Leu

835 840 845

Ser Gly Lys Ala Trp Leu Asn Leu Phe Glu Ser Lys Thr Ala Phe Thr

850 855 860

Thr Lys Lys Asp Tyr Gly Lys Glu Glu Arg Glu Ala Gln Trp Ala His

865 870 875 880

Ala Gln Arg Thr Leu His Gly Leu Gln Ala Pro Glu Pro Ser Asn Pro

885 890 895

Leu Phe Asn Glu Lys Asn Ser Tyr Arg Glu Leu Ser Glu Ile Ala Glu

900 905 910

Gln Ala Lys Arg Arg Ala Glu Val Ala Arg Leu Arg Glu Leu His Thr

915 920 925

Leu Lys Gly His Val Glu Ser Val Val Lys Leu Lys Gly Leu Asp Ile

930 935 940

Asp Thr Ile Gln Gln Asn Tyr Thr Val

945 950

Claims (10)

1.SpSOS1蛋白和/或SpAHA1蛋白在调控植物耐逆性中的应用。

2.与SpSOS1蛋白和/或SpAHA1蛋白相关的生物材料在调控植物耐逆性中的应用；

或，与SpSOS1蛋白和/或SpAHA1蛋白相关的生物材料在培育耐逆性提高的转基因植物中的应用；

或，与SpSOS1蛋白和/或SpAHA1蛋白相关的生物材料在植物育种中的应用；

所述与SpSOS1蛋白和/或SpAHA1蛋白相关的生物材料为下述A1)至A12)中的任一种：

A1)编码SpSOS1蛋白和/或SpAHA1蛋白的核酸分子；

A2)含有A1)所述核酸分子的表达盒；

A3)含有A1)所述核酸分子的重组载体；

A4)含有A2)所述表达盒的重组载体；

A5)含有A1)所述核酸分子的重组微生物；

A6)含有A2)所述表达盒的重组微生物；

A7)含有A3)所述重组载体的重组微生物；

A8)含有A4)所述重组载体的重组微生物；

A9)含有A1)所述核酸分子的转基因植物细胞系；

A10)含有A2)所述表达盒的转基因植物细胞系；

A11)含有A3)所述重组载体的转基因植物细胞系；

A12)含有A4)所述重组载体的转基因植物细胞系。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：A1)所述核酸分子为如下1)或2)或3)所示的基因：

1)其编码序列是序列1或序列3所示的cDNA分子或基因组DNA分子；

2)与1)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码SpSOS1蛋白和/或SpAHA1蛋白的cDNA分子或基因组DNA分子；

3)在严格条件下与1)或2)限定的核苷酸序列杂交，且编码SpSOS1蛋白和/或SpAHA1蛋白的cDNA分子或基因组DNA分子。

4.根据权利要求1-3任一所述的应用，其特征在于：所述耐逆性为耐盐性。

5.根据权利要求1-4任一所述的应用，其特征在于：所述调控为提高。

6.一种培育耐逆性提高的转基因植物的方法，包括如下步骤：提高受体植物中SpSOS1蛋白和/或SpAHA1蛋白的表达量和/或活性，得到转基因植物的步骤；所述转基因植物的耐逆性高于所述受体植物。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述耐逆性为耐盐性。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于：所述转基因植物的耐逆性高于所述受体植物体现在如下(1)-(8)中任一种：

(1)转基因植物的鲜重高于受体植物；

(2)转基因植物的根长长于受体植物；

(3)转基因植物的侧根数多于受体植物；

(4)转基因植物的H⁺离子流速高于受体植物；

(5)转基因植物的Na⁺离子流速高于受体植物；

(6)转基因植物的Na⁺含量低于受体植物；

(7)转基因植物的K⁺含量高于受体植物；

(8)转基因植物的丙二醛含量低于受体植物。

9.根据权利要求6-8中任一所述的方法，其特征在于：所述提高受体植物中SpSOS1蛋白和/或SpAHA1蛋白的表达量和/或活性的方法为在受体植物中过表达SpSOS1蛋白和/或SpAHA1蛋白；

或，所述过表达的方法为将SpSOS1蛋白和/或SpAHA1蛋白的编码基因导入受体植物；

或，所述SpSOS1蛋白的编码基因为序列1；

或，所述SpAHA1蛋白的编码基因为序列3。

10.根据权利要求6-9中任一所述的方法，其特征在于：所述受体植物为单子叶植物或双子叶植物。