CN108066343A

CN108066343A - 一种预防或治疗肾纤维化疾病的药物

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Publication number: CN108066343A
Application number: CN201711070161.8A
Authority: CN
Inventors: 姚宗仁; 郭树华; 张佳春
Original assignee: Rui Yang (suzhou) Biological Technology Co Ltd
Current assignee: Rui Yang (suzhou) Biological Technology Co Ltd
Priority date: 2016-11-08
Filing date: 2017-11-03
Publication date: 2018-05-25

Abstract

本发明涉及尼达尼布及其盐或溶剂合物在制备预防或治疗肾纤维化疾病的药物中的应用。本发明在实验研究中发现尼达尼布及其盐或溶剂合物，当口服使用剂量为0.08~32毫克/人/次时，对预防或治疗肾纤维化疾病具有显著的疗效。

Description

一种预防或治疗肾纤维化疾病的药物

技术领域

本发明涉及一种预防或治疗肾纤维化疾病的药物。

背景技术

尼达尼布，即3-Z-[1-(4-(N-((4-甲基-哌嗪-1-基)-甲基羰基)-N-甲基-氨基)-苯胺基)-1-苯基-亚甲基]-6-甲氧基羰基-2-二氢吲哚酮，分子式C₃₁H₃₃N₅O₄，化合物结构见式为：

尼达尼布是一种新型的血管生成抑制剂，可同时作用于血管生成过程中涉及的3种关键受体家族：血管内皮生长因子受体(VEGFR)、血小板源性生长因子受体(PDGFR)以及成纤维细胞生长因子受体(FGFR)。尼达尼布已被FDA和EMA批准上市，用于治疗特发性肺纤维化(IPF)，也被EMA批准联合多西他赛在一线化疗之后应用于组织学诊断为腺癌的、局部晚期或转移性或局部复发性非小细胞肺癌(NSCLC)成年患者。

纤维化的特征通常在于成纤维细胞和成肌纤维细胞增殖的异常增加，以及胶原和其他细胞外基质(ECM)成分的过量沉积。纤维化(fibrosis)可发生于多种器官，主要病理改变为器官组织内纤维结缔组织增多，实质细胞减少，持续进展可致器官结构破坏和功能减退，乃至衰竭，严重威胁人类健康和生命。

任何原因只要能引起组织细胞损伤，均可导致组织细胞发生变性、坏死和炎症反应，如果损伤很小，损伤细胞周边正常实质细胞将发生增生修复，这种修复可完全恢复正常的结构和功能。然而如果损伤较大或反复损伤超出了损伤周围实质细胞的再生能力时，间质纤维结缔组织将大量增生对缺损组织进行修复，即发生纤维化的病理改变。因此本质上纤维化是组织遭受损伤后的修复反应，以保护组织器官的相对完整性。增生的纤维结缔组织虽然修复了缺损，但却不具备原来器官实质细胞的结构和功能。如果这种修复反应过度、过强和失控时，就会引起器官的纤维化和导致器官的功能下降。

由此可见，纤维化是指由于炎症导致器官实质细胞发生坏死，组织内细胞外基质异常增多和过度沉积的病理过程。轻者成为纤维化，重者引起组织结构破坏而发生器官硬化。

在全世界范围内，组织纤维化是许多疾病致残、致死的主要原因，组织纤维化在人体各主要器官疾病的发生和发展过程中均起着重要作用。据美国有关统计资料证明，该国因各种疾病而致死的病人中，接近45％可以归于组织纤维增生疾病。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种对肾纤维化疾病具有显著的预防或治疗作用的药物。

为解决以上技术问题，本发明采取如下技术方案：

本发明的一个目的是提供尼达尼布及其盐或溶剂合物在制备预防或治疗肾纤维化疾病的药物中的应用。

具体地，所述的肾纤维化疾病为慢性肾盂肾炎，阻塞性肾病，遗传性肾病，糖尿病肾病，乙肝或艾滋病病毒及肾移植引起的肾纤维化，药物中毒引起的肾纤维化中的一种或几种。

本发明的另一个目的是提供一种预防或治疗肾纤维化疾病的药物，所述的药物中的活性成分为尼达尼布及其盐或溶剂合物。

优选地，所述的活性成分为乙磺酸尼达尼布。

优选地，所述的药物为口服制剂。

具体地，所述的药物的剂型为片剂，胶囊剂，颗粒剂，散剂或口服液体制剂。

上述药物剂型可以采用本领域技术人员所周知的方法进行制备。

具体地，所述的药物包括一个或多个单位的单位制剂，每个单位制剂含有的活性成分的重量为活性成分的有效治疗剂量的n倍，其中，n为0.1～10之间的数。

优选地，所述的n为0.1～1之间的数，更优选地，n为1。

优选地，所述的活性成分的有效治疗剂量为0.08～32毫克/人/次。

进一步优选地，所述的活性成分的有效治疗剂量为0.08～1.6毫克/人/次。

再进一步优选地，所述的活性成分的有效治疗剂量为0.08～1毫克/人/次。

更为优选地，所述的活性成分的有效治疗剂量为0.15～1毫克/人/次。

由于以上技术方案的实施，本发明与现有技术相比具有如下优点：

本发明在实验研究中发现尼达尼布及其盐或溶剂合物，当口服使用剂量为0.08～32毫克/人/次时，对预防或治疗肾纤维化疾病具有显著的疗效。

附图说明

附图1为实施例1的HE染色的假手术组Y16-283号动物肾脏组织病理图；

附图2为实施例1的Siruis Red染色的假手术组Y16-283号动物肾脏组织病理图；

附图3为实施例1的HE染色的模型对照组Y16-291号动物肾脏组织病理图；

附图4为实施例1的Siruis Red染色的模型对照组Y16-291号动物肾脏组织病理图；

附图5为实施例1的HE染色的供试品低剂量组Y16-304号动物肾脏组织病理图；

附图6为实施例1的Siruis Red染色的供试品低剂量组Y16-304号动物肾脏组织病理图；

附图7为实施例2的HE染色的假手术组动物肾脏组织病理图；

附图8为实施例2的HE染色的模型对照组动物肾脏组织病理图；

附图9为实施例2的HE染色的阳性对照组动物肾脏组织病理图；

附图10为实施例2的HE染色的供试品低剂量组动物肾脏组织病理图；

附图11为实施例2的HE染色的供试品中剂量组动物肾脏组织病理图；

附图12为实施例2的HE染色的供试品高剂量组动物肾脏组织病理图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的解释。

实施例1

乙磺酸尼达尼布灌胃14天对大鼠肾纤维化的抑制作用

50只雄性SD大鼠以体重相近原则随机分为5组，每组10只，分别为假手术组、模型对照组、供试品低剂量组、供试品中剂量组和供试品高剂量组。试验动物零天(D0)麻醉后正中开腹，分离左侧肾脏。于左肾下极处分离输尿管，行单侧输尿管结扎术(UUO)。假手术组仅进行开腹和分离左肾步骤。

术后次日(D1)开始给药，假手术组(组1)动物不作处理，模型对照组(组2)动物给予溶媒，供试品低剂量组给予供试品剂量为10mg/kg/次、供试品中剂量组给予供试品剂量为50mg/kg/次、供试品高剂量组给予供试品剂量为200mg/kg/次，试验动物灌胃给药，每日上午和下午各给药1次，连续给药14天。

所有试验动物药前、药后每周称重1次。D15收集24h尿液，测定尿量、肌酐(Crea)、尿素氮(BUN)、总蛋白(TP)、微量白蛋白(MALB)。D15取血分离血清测定肌酐(Crea)、尿素氮(BUN)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)。D15动物安乐死并进行大体解剖观察，取结扎侧肾脏进行HE染色和Sirius Red染色。

结果：

1)一般临床观察：供试品高剂量组一动物于D6被发现死亡。同组的另两只动物于D15解剖前被发现死亡。同组多只动物于实验后期发现有弓背、四肢和双耳苍白、肛周污秽等症状。

2)体重：供试品能剂量依赖性地抑制SD大鼠的体重增长。其中中剂量组和高剂量组的抑制作用均具有统计学差异(P＜0.001)。D11时供试品低、中、高剂量组的体重分别为311±22g、283±27g和249±21g，而模型对照组为325±19g，各组体重变化参见表1(g，Mean±SD)，注：＊＊＊：P＜0.001vs阴性对照组。

表1

3)血生化指标：相比假手术组，模型对照组血清Crea水平显著上升，且具有统计学差异(68±12vs 44±8，P＜0.01)。供试品各组中，低剂量组改善趋势最为明显(58±18)，但不具有统计学差异。

模型对照组血清BUN水平相比假手术组显著上升(10.2±1.0vs 5.3±0.4，P＜0.05)，供试品各组未见改善趋势。供试品高剂量组血清BUN相比模型对照组显著上升(18.9±6.2vs 10.2±1.0，P＜0.001)。

模型对照组相比假手术组血清TP和ALB未见明显变化。给予供试品能剂量依赖性地降低血清TP和ALB，且均具有统计学差异(P＜0.05～0.001)。

各组的血生化指标参见表2，Crea(μM，Mean±SD)；BUN(mM，Mean±SD)；TP(g/L，Mean±SD)；ALB(g/L，Mean±SD)，注：++：P＜0.01vs假手术组。＊、＊＊、＊＊＊：P＜0.05、0.01、0.001vs阴性对照组。

表2

4)尿生化指标：术后D15模型对照组的24h尿量相比假手术组有少量降低，但不具统计学差异(26.0±12.2vs 29.1±11.0，P＞0.05)。供试品能剂量依赖性地减少动物的24h尿量，其中供试品高剂量组具有统计学意义(5.4±4.3vs26.0±12.2，P＜0.001)。

术后D15模型对照组的24h尿Crea排泄量相比假手术组未见差异。供试品能剂量依赖性地减少动物的24h尿Crea排泄量，其中供试品高剂量组具有统计学意义(27.5±11.9vs84.7±11.7，P＜0.001)。

术后D15模型对照组的24h尿BUN排泄量相比假手术组有少量降低，但不具统计学差异(1.14±1.90vs 1.51±1.15，P＞0.05)。供试品能剂量依赖性地减少动物的24h尿BUN排泄量，其中供试品高剂量的24h尿BUN排泄量仅为0.02±0.04，但因标准差较大，未见统计学意义。

术后D15模型对照组的24h尿TP排泄量相比假手术组未见差异。供试品能降低动物的24h尿TP排泄量，其中供试品高剂量组具有统计学意义(5.6±4.7vs 14.6±6.8，P＜0.05)。

术后D15模型对照组的24h尿MALB排泄量相比假手术组有少量升高，但不具统计学差异(0.27±0.63vs 0.01±0.01，P＞0.05)。供试品低、高剂量具有减少动物的24h尿MALB排泄量的趋势，但未见统计学差异。供试品中剂量具有升高动物的24h尿MALB排泄量的趋势，同样未见统计学差异。

各组的尿生化指标参见表3，尿量(mL/24h，Mean±SD)；Crea(μmol/24h，Mean±SD)；BUN(mmol/24h，Mean±SD)；TP(mg/24h，Mean±SD)；MALB(mg/24h，Mean±SD)，注：＊、＊＊＊：P＜0.05、0.001vs阴性对照组。

表3

5)病理：显微镜下肾脏可见间质纤维化，与模型对照组比较，在给予供试品后备组的肾脏纤维化发病率略有降低，但未见统计学差异。

其中，图1、RB0007连续给予输尿管结扎的SD大鼠14天，D15天安乐死，假手术组Y16-283号动物肾脏组织未见明显异常改变，采用HE染色，进行100倍放大。

图2、RB0007连续给予输尿管结扎的SD大鼠14天，D15天安乐死，假手术组Y16-283号动物肾脏组织未见明显异常改变，采用Siruis Red染色，进行100倍放大。

图3、RB0007连续给予输尿管结扎的SD大鼠14天，D15天安乐死，模型对照组Y16-291号动物肾脏肾小管扩张，间质纤维化，采用HE染色，进行100倍放大。

图4、RB0007连续给予输尿管结扎的SD大鼠14天，D15天安乐死，模型对照组Y16-291号动物肾脏肾小管间的间质纤维化，病变程度轻微，采用Siruis Red染色，进行100倍放大。

图5、RB0007连续给予输尿管结扎的SD大鼠14天，D15天安乐死，供试品低剂量组Y16-304号动物肾脏肾小管扩张，间质纤维化，采用HE染色，进行100倍放大。

图6、RB0007连续给予输尿管结扎的SD大鼠14天，D15天安乐死，供试品低剂量组Y16-304号动物肾脏肾小管间的间质纤维化，病变程度轻微，采用Siruis Red染色，进行100倍放大。

本实验条件下，单侧输尿管结扎能导致SD大鼠轻度的肾间质纤维化和轻度的肾功能障碍。给予供试品每日两次，每次10mg/kg体重具有改善肾间质纤维化的倾向。供试品的无毒性剂量为小于每日两次，每次10mg/kg体重。致死剂量为小于每日两次，每次200mg/kg体重。供试品的毒性靶器官需要进一步的研究。

上述实验为动物实验，人和动物按体表面积折算的等效剂量比值(换算因子)为0.018；大鼠体重按0.2Kg计算；人体重按70Kg计算。

大鼠和人的有效治疗剂量换算符合下列公式：

大鼠剂量×大鼠体重＝人剂量×人体重×换算因子

人剂量＝大鼠剂量×大鼠体重/人体重×换算因子。

因此，在上述实验中，大鼠采用10mg/kg/次、50mg/kg/次、200mg/kg/次的剂量，对应于人的剂量分别为：

人剂量＝200mg/Kg×0.2Kg/70Kg×0.018＝32mg；

人剂量＝10mg/Kg×0.2Kg/70Kg×0.018＝1.6mg；

人剂量＝0.5mg/Kg×0.2Kg/70Kg×0.018＝0.08mg。

因此，乙磺酸尼达尼布用于人的有效治疗剂量范围为0.08～32毫克/人/次。

实施例2

乙磺酸尼达尼布连续灌胃给药8周对5/6肾切除诱导的大鼠慢性肾纤维化模型的预防效果。

102只雄性SD大鼠，麻醉后侧腹位入路，分离左肾和肾包膜，上下极各切除。约1/3的肾组织，同样方法切除全部右肾。另取8只雄性SD大鼠作为假手术组，仅作开腹和关腹处理。造模动物术后2周可确认血清肌酐(Crea)和尿素氮(BUN)明显上升，说明造模成功。以血清Crea水平为主要指标，造模动物挑选55只分为模型对照组、阳性对照组(5mg/kg)、供试品低(1mg/kg)、中(3mg/kg)、高(10mg/kg)剂量组，每组11只。假手术组8只动物保持不变。

分组后开始给药。假手术组动物实验全程不作处理，模型对照组动物给予灭菌注射用水，阳性对照组动物给予马来酸依那普利，供试品组动物给予不同剂量的乙磺酸尼达尼布。均为灌胃给药，阳性对照组动物每日给药1次，模型对照组和供试品各剂量组动物每日上午和下午各给药1次，连续给药59天(W1～W9；D1～D59)。

所有动物药前、药后每周称重1次。药前、药后每2周1次取血测定血清Crea和BUN水平。药前、药后每2周1次收集24h尿液，测定尿量、Crea、BUN、总蛋白(TP)、微量白蛋白(MALB)。药后W9(D60)动物安乐死，残肾脏进行HE染色和Sirius Red染色评价肾脏病变和间质纤维化程度。

结果：

1)一般临床观察：给药期间，模型对照组和阳性对照组各有1只动物死亡。供试品中剂量组有2只动物死亡，供试品高剂量组有7只动物死亡。动物死亡前的主要症状为体重明显下降、精神不振、竖毛和弓背。

2)体重：实验期间，假手术组动物的体重平稳增长(429±47～569±65g)。模型对照组动物因手术和慢性肾功能不全的缘故，体重均低于同时期的假手术组动物(400±36～507±80g)，其中W3～W6以及W9有统计学差异(P≤0.05，W7时P＝0.079、W8时P＝0.065)。

相比模型对照组，供试品低、中剂量组动物的体重未见明显变化。供试品高剂量组动物体重自W4起出现下降趋势，W5、W7、W8、W9有统计学差异(P≤0.01或0.001，W6时P＝0.088)。

表4体重统计数据，体重(g，Mean±SD)

注：+：P≤0.05vs假手术组。**：P≤0.01vs模型对照组。

3)血生化指标：相比假手术组，模型对照组血清Crea水平显著上升，各时间点均有统计学差异(P≤0.01、0.001)。相比模型对照组，阳性对照品能降低动物的血清Crea水平，其中W5时有统计学差异(79±20vs 103±38μM，P≤0.05)。供试品中、低剂量下能降低动物的血清Crea水平，其中W5时，供试品中剂量组有统计学差异(76±10vs 103±38μM，P≤0.05)，供试品低剂量组有改善的趋势(82±23vs 103±38μM，P＝0.062)。供试品高剂量组血清Crea水平则有明显升高，相比模型对照组W3、W7和W9时有统计学差异(P≤0.05)。

表5血生化统计数据-肌酐，Crea(μM，Mean±SD)

注：++、+++：P≤0.01、0.001vs假手术组。*：P≤0.05vs模型对照组。

相比假手术组，模型对照组血清BUN水平显著上升，各时间点均有统计学差异(P≤0.01、0.001)。相比模型对照组，阳性对照品和供试品低、中剂量下均可见对血清BUN水平的改善趋势。其中W5时，供试品中剂量组有统计学差异(13.7±3.4vs 20.0±8.9mM，P≤0.05)。供试品高剂量组血清BUN水平则有明显升高，相比模型对照组W3、W7和W9时有统计学差异(P≤0.05、0.01)。

表6血生化统计数据-尿素氮，BUN(mM，Mean±SD)

注：++、+++：P≤0.01、0.001vs假手术组。*、**：P≤0.05、0.01vs模型对照组。

4)尿量和尿生化指标：给药前，模型对照组动物的尿量少于假手术组(17.2±5.0vs 23.6±11.1mL，P＝0.051)，随着时间的推移，模型对照组动物的尿量逐渐增加，W5～W9期间均高于假手术组动物，其中W7有统计学差异(28.3±11.2vs 19.8±8.4mL，P≤0.05)。相比模型对照组，阳性对照品具有抑制动物尿量增加的趋势，但未见统计学差异。供试品低、高剂量组可抑制动物尿量的增加，其中W5(18.8±4.3、20.0±6.7vs 26.8±10.1mL)和W7(20.5±5.9、19.8±5.9vs 28.3±11.2mL)具有统计学差异(P≤0.05)。供试品中剂量组除W7之外也呈现出类似的倾向，但均未见统计学差异。

表7尿量统计数据，尿量(mL/24h，Mean±SD)

注：+：P≤0.05vs假手术组。*：P≤0.05vs模型对照组。

实验期间模型对照组的24h尿Crea排泄量始终低于假手术组。其中W3有统计学差异(109.1±23.2vs 131.7±18.6μmol/24h，P≤0.05)。阳性对照品和供试品低、中剂量下对尿Crea排泄的影响不明显。供试品高剂量下可明显抑制尿Crea的排泄，W7和W9时相比模型对照组有统计学差异(P≤0.01)。

表8尿生化统计数据-肌酐，肌酐(μmol/24h，Mean±SD)

注：+、+++：P≤0.05、0.001vs假手术组。*、**：P≤0.05、0.01vs模型对照组。

实验期间模型对照组的24h尿BUN排泄量始终低于假手术组，W5、W7和W9有统计学差异(P≤0.05)。阳性对照品和供试品各剂量下对尿BUN排泄的影响不明显。

表9尿生化统计数据-尿素氮，BUN(mmol/24h，Mean±SD)

注：+：P≤0.05vs假手术组。*：P≤0.05vs模型对照组。

W3～W9模型对照组的24h尿MALB排泄量始终高于假手术组。均有统计学差异(P≤0.05、0.001)。阳性对照品可明显降低尿MALB的排泄(W3时P＝0.057，W5～W9时P≤0.05、0.01)。供试品低、中剂量下有降低24h尿MALB排泄的趋势，但未见统计学差异。供试品高剂量下，动物尿MALB排泄量明显升高(W3～W9，P≤0.05)。

表10尿生化统计数据-微量白蛋白，MALB(mg/24h，Mean±SD)

各组动物24h尿TP排泄量同24h尿MALB排泄量的变化趋势相似。

表11尿生化统计数据-总蛋白，TP(mg/24h，Mean±SD)

5)病理：显微镜下肾脏可见肾小管损伤和间质纤维化。相比模型对照组，供试品各组的肾脏纤维化程度和发病率均降低，并且可见剂量关系。

病理图片参见附图7至12，其中，

图7为假手术组动物，肾脏组织未见明显异常改变，HE染色，100×。

图8为模型对照组动物，肾脏组织间质轻度纤维化，HE染色，100×。

图9为阳性对照组动物，肾脏组织间质轻度纤维化，HE染色，100×。

图10为供试品低剂量组动物，肾脏组织间质轻度纤维化，HE染色，100×。

图11为供试品中剂量组动物，肾脏组织间质轻微纤维化，HE染色，100×。

图12为供试品高剂量组动物，肾脏组织间质轻微纤维化，HE染色，100×。

结论：本实验条件下，5/6肾切除能诱导SD大鼠产生慢性肾功能不全和肾小管间质纤维化。每日1次灌胃给予马来酸依那普利5mg/kg或每日2次灌胃给予1～3mg/kg的供试品乙磺酸尼达尼布均可在一定程度上改善SD大鼠的肾功能。1～10mg/kg剂量范围内乙磺酸尼达尼布能明显减轻肾间质纤维化的程度，效果较马来酸依那普利为佳。

Claims

1.尼达尼布及其盐或溶剂合物在制备预防或治疗肾纤维化疾病的药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的肾纤维化疾病为慢性肾盂肾炎，阻塞性肾病，遗传性肾病，糖尿病肾病，乙肝或艾滋病病毒及肾移植引起的肾纤维化，药物中毒引起的肾纤维化中的一种或几种。

3.一种预防或治疗肾纤维化疾病的药物，其特征在于：所述的药物中的活性成分为尼达尼布及其盐或溶剂合物。

4.根据权利要求3所述的药物，其特征在于：所述的活性成分为乙磺酸尼达尼布。

5.根据权利要求3或4所述的药物，其特征在于：所述的药物为口服制剂。

6.根据权利要求5所述的药物，其特征在于：所述的药物的剂型为片剂，胶囊剂，颗粒剂，散剂或口服液体制剂。

7.根据权利要求5所述的药物，其特征在于：所述的药物包括一个或多个单位的单位制剂，每个单位制剂含有的活性成分的重量为活性成分的有效治疗剂量的n倍，其中，n为0.1~10之间的数。

8.根据权利要求7所述的药物，其特征在于：所述的n为0.1~1之间的数。

9.根据权利要求7所述的药物，其特征在于：所述的活性成分的有效治疗剂量为0.08~32毫克/人/次。

10.根据权利要求8所述的药物，其特征在于：所述的活性成分的有效治疗剂量为0.08~1.6毫克/人/次。