CN108047315B - 一类多肽药物Athycaltide及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物药品研发领域，具体涉及多肽药物Athycaltide及其用途。该多肽药物Athycaltide的氨基酸序列如SEQ ID No.1，SEQ ID No.2，SEQ ID No.3所示。该多肽药物能够抑制Ca²⁺/CaM/CaMKII信号转导通路，而且能够发挥预防、延缓、治疗心肌肥厚发生、发展的作用，为病理性心肌肥厚的治疗提供新的思路。

Description

一类多肽药物Athycaltide及其用途

技术领域

本发明属于生物药品研发领域，具体涉及一类多肽药物及其在治疗心机肥厚中的用途。

背景技术

心肌肥厚（cardiac hypertrophy， CH）是心脏对各种心血管刺激如血流动力学负荷、血管紧张素、肾上腺素、生长因子等的适应性代偿性反应，早期能维持心排血量，但是，长期应激导致的病理性心肌肥厚可发展为心脏扩大、心力衰竭和猝死。临床上病理性心肌肥厚可以由高血压、心脏瓣膜病、心肌梗死或缺血及遗传或糖尿病的冠状动脉血管病变等多种疾病所导致，是心血管疾病的独立危险因素。疾病引起的心肌肥厚与高负荷运动或妊娠时发生的可逆性生理性心肌肥厚不同，具有持续性进展、难以逆转的特点。目前主要采用降压药物进行治疗，但是效果非常有限。高血压伴左心室肥厚的患者在长期服用降压药物血压得到较好控制后，心肌肥厚仍得不到有效缓解。病理性心肌肥厚是独立于心梗和心律失常而导致心衰的因素，尸检报告显示病理性心肌肥厚是导致心脏病患者猝死的主要病因。因此探究心肌肥厚的发病机制对新一代药物的研发和疾病的治疗有重要意义。

钙离子（Ca²⁺）作为第二信使等起到了关键性的作用。心脏的跳动与Ca²⁺进入心肌细胞密切相关，Ca²⁺是调节心脏收缩功能和心脏增长的核心因素。Ca²⁺的功能包括兴奋-收缩耦联（excitation-contraction coupling，ECC）、兴奋-转录耦联(excitation-transcription coupling，ETC)、调节初始起搏点的活动、动作电位的形成、细胞间信号转导等功能。目前已知心肌细胞内Ca²⁺的变化是触发心肌肥大相关信号转导的始动因素。细胞内Ca²⁺主要来自L-型钙离子通道（L-type calcium channel，LTCC）， 我们研究发现钙调蛋白激酶II（calmodulin-dependent protein kinase II， CaMKII）对心肌细胞膜上的Cav1.2通道（L-型Ca²⁺通道的孔道蛋白α_1c亚单位）具有磷酸化调节作用。CaMKII由催化域、调节域和结合域三部分组成。基础状态下CaMKII的催化域被调节域所抑制，处于失活状态；心脏收缩期时Ca²⁺浓度增加，形成 Ca²⁺/CaM 复合物结合到CaMKII调节域上，引起 CaMKII构象改变，消除自我抑制，CaMKⅡ被激活。如果Ca²⁺/CaM的浓度持续升高，将会引起CaMKII自抑区苏氨酸Thr287位点发生自身磷酸化激活，这会使CaMKII在Ca²⁺浓度下降及缺乏CaM结合时仍能维持催化活力。CaMKII蛋白表达水平与心肌肥厚的程度呈正相关。特别是，即使在刺激因素撤除后CaMKII仍然保持着高水平的表达。CaMKII的这一特征使其在神经系统记忆功能中扮演了非常重要的角色，甚至被认为是一种记忆分子。尽管心脏没有记忆功能，但是，从生物学及化学的角度讲CaMKII的自身磷酸化作用使其能够将其被激活时的细胞内Ca²⁺浓度情况以自身构象变化的方式存储“记忆”起来。在生理条件下，CaMKII的这一特性有助保持心脏跳动节律的稳定性；而病理性心肌肥厚时，细胞内Ca²⁺浓度持续升高，我们推测CaMKII的自身磷酸化变构记忆可能会导致心肌细胞对细胞内Ca²⁺浓度升高等病理状态形成“记忆”而造成心肌肥厚的持续发展及不易从病理状态恢复。这种情况很类似于糖尿病持续发展过程中血糖降低后仍存在的高糖“代谢记忆”现象。为验证上述推测，我们在前期研究中观察了ISO心肌肥厚模型在撤除ISO之后的变化，结果发现心肌肥厚会继续发展，而且同时伴随着CaMKII表达水平的持续升高，提示了CaMKII持续磷酸化的存在。

我们以往研究也在Cav1.2上发现了一个CaMKII磷酸化位点，该位点被模拟磷酸化后，Cav1.2对CaM调节的敏感性增强，时间依赖性消失，Ca²⁺电流增加。因此，我们提出CaMKII介导的Cav1.2通道持续磷酸化可能是心肌肥厚持续发展及逆转困难的病理基础的新观点，通过抑制CaMKII与Cav1.2的结合（而非抑制CaMKII的活性）、终止持续磷酸化从而逆转心肌肥厚的新思路。

人体内存在着许多天然多肽，它们参与调控各种生理功能 ， 因而在临床应用上具有非常重要的开发价值。近年来，多肽药物的开发越来越受到重视，目前全球药物市场上有 60-70个多肽药物，更多的多肽药物处在各级临床试验、临床前试验和实验室研究阶段。多肽一般没有副作用或者副作用很小，主要是小分子多肽降解后的产物为氨基酸，一般不会在特定器官组织中累积，容易通过肝和肾从体内很快被清除掉，因而，几乎没有异物代谢引起的毒理学问题。如，多肽通过调控生长素分泌来调控细胞的分泌，通过调控各种信号路径来调控细胞的生长、分化和凋亡等各种细胞功能。多肽作为药物主要用于治疗癌症、代谢紊乱（metabolic disorders）、心血管等重大疾病。抑制Cav1.2通道的磷酸化可能抑制病理性心肌肥厚的发展，那么如果药物能够与Cav1.2通道竞争CaMKII和CaM结合就有可能抑制病理性心肌肥厚的发展。申请者已成功制备了CaMKII和CaM在Cav1.2通道C末端的结合位点多肽药物，并进行了大鼠体内实验。申请者发现以Cav1.2多肽片段为结构基础设计出的多肽药物能够降低ISO诱导的病理性心肌肥厚大鼠心肌组织中CaMKII和p-CaMKII蛋白的表达，同时能够减轻病理性心肌的肥厚程度。因此，具有抑制CaMKII表达作用的多肽药物可能成为治疗病理性心肌肥厚的新型药物。

发明内容

本发明的目的在于提供一类多肽药物Athycaltide其用途，该多肽药物能够抑制Ca²⁺/CaM/CaMKII信号转导通路，发挥预防、延缓、治疗心肌肥厚的作用。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

1.Athycaltide-1特征在于结构与Cav1.2通道蛋白结构具有相似性，结构中

包含CaMKII的结合域（TVGKF）和CaM的结合域（IQ）两部分。药物进入体内后能够与CaM、CaMKII结合发挥作用，该多肽药物的氨基酸序列为：GRKKRRQRRRGGDDEVTVGKFYATFLIQEYFRKFKKRKEQGL（SEQ ID No.1）。

2.Athycaltide-4特征在于其结构与Cav1.2通道蛋白结构具有相似性，结构

中包括CaMKII的结合域（TVGKF）。药物进入体内后能够与CaMKII结合发挥作用，该多肽药物的氨基酸序列为：GRKKRRQRRRGGDDEVTVGKFYATFL（SEQ ID No.2）。

3.Athycaltide-5特征在于与Cav1.2通道蛋白结构具有相似性，结构中包括

了CaM的结合域（IQ）。药物进入体内后能够与CaM结合发挥作用，该多肽药物的氨基酸序列为：GRKKRRQRRRGYATFLIQEYFRKFKKRKEQGL（SEQ ID No.3）。

该多肽药物为任何药物治疗学上可接受的的剂量、剂型（注射制剂）。

多肽药物Athycaltide为制备用于预防和治疗心肌肥厚药物中的用途。

与现有技术相比，本发明具有如下技术效果：

目前应用于临床治疗心肌肥厚的药物主要是血管紧张素抑制剂、β受体阻

断剂、钙离子通道阻断剂、利尿剂。但这些药物都不能有效抑制心肌肥厚的发展，临床上心衰终点事件频频发生，究其原因是没能有效抑制CaMKII蛋白的表达。诸多研究表明抑制CaMKII蛋白的表达能够有效抑制心肌肥厚的发展，但目前这类药物的研制还处于发展阶段。

本发明研制了一类多肽药物，其结构与Cav1.2通道蛋白相似，在体内能够模拟Cav1.2通道蛋白的结构与CaMKII和CaM结合。其中Athycaltide-1能够较好的治疗心肌肥厚，大鼠体内注射该药物后心肌细胞横截面积明显减小，心肌线粒体的数量减少，肌丝宽度恢复正常。最重要的是心肌组织中CaMKII蛋白表达下降。但Athycaltide-4、Athycaltide-5较Athycaltide-1治疗效果差。

多肽治疗组给予多肽干预探讨通过抑制结合降低CaMKII活性的可能机制：1）检测CaMKII在包膜胞浆成分中的分布变化，确认CaMKII从Cav1.2上的解离情况；2）检测CaMKII的半衰期，并观察蛋白酶体抑制剂的作用。（目前的CaMKII抑制剂主要调控CaMKII的催化区，例如KN-93封锁了Ca²⁺/CaM移动和呈递Thr287变成磷酸化激活状态的能力，AIP（autocamtide-2-related inhibitory Athycaltide）模拟CaMKII的假底物；由于CaMKII存在的广泛性，这类药物选择性差，毒性高。本研究通过抑制CaMKII与Cav1.2结合，从源头上解除了CaMKII对Cav1.2的磷酸化。本项目设计的多肽并不直接抑制CaMKII的活性，但是在预实验中已经观察到p-CaMKII的降低，提示CaMKII自身磷酸化水平及活性的下降。推测CaMKII从底物Cav1.2通道解离后，可能通过例如泛素蛋白酶体途径被降解，使检测到的CaMKII活性降低）。

附图说明

图1各组大鼠心脏组织表型。A：大鼠心肌组织HE染色结果；B：大鼠心脏重量/体重比；C：大鼠心肌细胞横截面积。

图2 各组大鼠心脏组织中Ca²⁺/CaM/CaMKII信号转导通路蛋白及Cav1.2通道蛋白表达情况。A：心肌组织中CaMKII蛋白表达情况；B：心肌组织中p-CaMKII蛋白表达情况；C：心肌组织中CaM蛋白表达情况；D：心肌组织中Cav1.2通道蛋白表达情况。

图3 CaMKII活化体p-CaMKII与Cav1.2蛋白结合情况。A：正常组（Control组）p-CaMKII与Cav1.2蛋白结合情况；B：心肌肥厚组（ISO24h组）p-CaMKII与Cav1.2蛋白结合情况；C：心肌肥厚组（ISO48h组）p-CaMKII与Cav1.2蛋白结合情况。

图4 CaM(1μM)与模拟的Cav1.2通道蛋白结合情况。随Athycaltide-1浓度变化而变化的情况（2mM Ca²⁺）。A：未做处理时CaM(1μM)与模拟的Cav1.2通道蛋白结合情况；B：去磷酸化时CaM(1μM)与模拟的Cav1.2通道蛋白结合情况；C：磷酸化时CaM(1μM)与模拟的Cav1.2通道蛋白结合情况；D：A、B、C拟合的结果图。

图5 Athycaltide-1，4，5体内有效性筛选。A：大鼠心脏组织；B：大鼠心脏重量/体重比；C：大鼠心脏HE染色结果；D：大鼠心肌细胞横截面积。

图6 不同浓度Athycaltide-1治疗病理性心肌肥厚的作用。A：大鼠心脏HE染色结果；B：大鼠心脏重量/体重比；C：大鼠心肌细胞横截面积。D.大鼠心肌组织电镜下线粒体、肌丝情况。

图7 Athycaltide-1对Ca²⁺/CaM/CaMKII信号转导通路及Cav1.2通道蛋白表达的影响。A：心肌组织中CaMKII蛋白表达情况；B：心肌组织中p-CaMKII蛋白表达情况；C：心肌组织中CaM蛋白表达情况；D：心肌组织中Cav1.2通道蛋白表达情况。

图8 Athycaltide-1对心肌细胞毒性试验结果。

具体实施方式

一、本发明首先证明心肌肥厚过程中Ca²⁺/CaM/CaMKII对Cav1.2通道蛋白的磷酸化起到了关键作用：

1.采用大鼠皮下注射ISO法制备病理性心肌肥厚的细胞和整体动物模型。（1）观察各模型不同时间点心脏的形态学。（2）检测心肌组织中Cav1.2通道、CaM、CaMKII及p-CaMKII的蛋白表达水平，确定各蛋白本身的量的变化。

2.采用ISO刺激乳鼠原代心肌细胞制备心肌肥厚细胞模型，应用激光共聚焦实验观察肥厚心肌细胞中p-CaMKII与Cav1.2通道的共定位情况。

通过上述研究，探讨病理性心肌肥厚发生发展过程中CaMKII对Cav1.2的磷酸化状态、p-CaMKII与Cav1.2的结合情况、Cav1.2蛋白变化与心肌肥厚病理程度的关系，阐明在病理性心肌肥厚时Ca²⁺/CaM/CaMKII/ Cav1.2信号环路中CaMKII 对Cav1.2磷酸化所起的中心作用。

具体实验如下：

1.将220g-250g SD雄性大鼠随机分为2周对照组和3周对照组（Control 2w组和Control 3w组）、异丙肾上腺素2周组和3w组（ISO2w组和ISO 3w组）。Control 2w组和Control 3w组：皮下注射0.9%NaCL2周和3周；ISO2w组和3w组：分别皮下注射ISO2周和3周。采用注射异丙肾上腺素（isopropyrenin，ISO）5mg/kg体重皮下注射2周（ISO2w）和3周（ISO3w）制备病理性心肌肥厚动物模型，每日一次。

模型制备成功后测量体重（BW），10%水合氯醛4mL/kg体重麻醉，灌流，取出心脏，称量心脏重量（HW），并计算心脏重量指数（HW/BW）。Western Blot实验测定心肌组织中CaM、CaMKII、p-CaMKII、Cav1.2蛋白的表达。检测结果如下：

（1）研究结果表明模型组心脏重量、心重/体重(HW/BW)增加，心肌细胞体积增大。如图1A所示，与正常对照组相比，ISO2w组（P<0.05）和ISO3w组（P<0.001）心肌细胞横截面积增大。ISO2w组与ISO3w组相比，ISO3w组细胞面积大于ISO2w组（P<0.001），如图1B所示，与正常对照组相比，ISO2w组和ISO3w组HW/BW比值增高（P<0.001）。但ISO2w组和ISO3w组之间心肌细胞横截面积和HW/BW比值均没有统计学差异。

（2）病理性心肌肥厚大鼠心肌组织中CaM、CaMKII、p-CaMKII、Cav1.2蛋白的表达情况。如图2A所示，与正常组相比，ISO2w组和ISO3w组心肌组织中CaMKII（P<0.01）和p-CaMKII表达增高（P<0.05）；ISO2w组和ISO3w组之间没有统计学差异（P>0.05）。如图2C所示，与正常组相比，ISO2w组和ISO3w组心肌组织中CaM蛋白表达减少（P<0.001）；ISO2w组和ISO3w组之间没有统计学差异（P>0.05）。图2D所示，与正常组相比，ISO2w组和ISO3w组心肌组织中Cav1.2蛋白的表达没有变化（P>0.05）。

2.心肌肥厚细胞模型的实验

培养SD大鼠乳鼠原代心肌细胞，分为正常对照组、异丙肾上腺素24小时（ISO 24h组）、异丙肾上腺素48小时（ISO 48h组）。取1-3d龄 SD 大鼠，无菌取出心脏，胰酶分次消化分离心肌单细胞，90 min后，差速贴壁分离法纯化心肌细胞，接种于共聚焦培养皿中， 24小时后换液。ISO组加入10nMISO，培养24h和48h。造模成功后进行免疫共定位测定心肌细胞p-CaMKII与Cav1.2的共定位情况。如附图3所示，共聚焦结果显示给予10nMISO刺激24h和48h后，细胞体积增大，p-CaMKII与Cav1.2蛋白结合增多。

二、根据CaMKII和CaM在Cav1.2通道蛋白上的磷酸化位点设计、合成多肽药物：

1.多肽药物结构设计：以CaM、CaMKII与Cav1.2结合部位的氨基酸序列为基础，设计、合成3条多肽。其中Athycaltide-1序列中含有能够与CaMKII和CaM相结合的位点；Athycaltide-4序列中含有能够与CaMKII相结合的位点；Athycaltide-5序列中含有能够与CaM相结合的位点，序列如下：

Athycaltide-1:GRKKRRQRRRGGDDEVTVGKFYATFLIQEYFRKFKKRKEQGL

Athycaltide-4:GRKKRRQRRRGGDDEVTVGKFYATFL

Athycaltide-5: GRKKRRQRRRGYATFLIQEYFRKFKKRKEQGL

2.多肽药物合成：药物采用固相合成的方法，应用LC-MS法检测药物的结构、纯度（≥95%）。

三、体外实验检测多肽药物Athycaltide-1与CaMKII蛋白结合能力。

采用Pull-Down实验观察CaMKII及CaM与PreIQ-IQ蛋白片段（Cav1.2通道C末端片段，含有CaMKII和CaM结合位点，结合情况，观察多肽对此结合的影响。采用Pull-Downassay法观察CaM、CaMKII (1.0 μmol/L) 与PreIQ-IQ蛋白片段的结合情况；加入多肽共同作用，观察多肽对其结合的影响。将Cav1.2通道GST-PreIQ-IQ融合蛋白片段固化于Glutathione-Sepha rose 4B后，进行去磷酸化和CaMKⅡ磷酸化处理后，加入CaM或CaMKII、加入Ca²⁺（终浓度为≈free，2 mM），加入Athycaltide（0、10^-8、10^-7、10^-6、10^-5Mmol/L），最后加入Tris-Buffer 补足反应体系至300μL。将反应体系在4℃旋转孵育4 h，结合后的固相再用含相应[Ca²⁺]的Tris-Buffer清洗2次，SDS样品缓冲液洗脱，SDS-PAGE电泳进行分离和确认。电泳条带扫描数字化，以CS Analyzer 3.0计算条带的密度。曲线拟合：横坐标为多肽浓度或对数浓度，纵坐标为各观察指标值或最大效应百分数。量效关系曲线用Hill方程拟合：E=E_max/[1+（EC₅₀/C）H]，用Origin610（Origin-Lab Corporation，USA）作图，并拟合求得半最大效应浓度（EC₅₀）和最大效应E_max。

1）Cav1.2通道状态实验：对PreIQ-IQ蛋白片段进行去磷酸化、CaMKII磷酸化处理，以未处理的PreIQ-IQ为对照，观察CaM（1.0 μM）或CaMKII（1.0 μM）与PreIQ-IQ蛋白片段结合的影响。

2）多肽浓度依赖性实验：Athycaltide-1，2，3，4，5的终浓度分别为0、0.7、1.4、2.1、3.5和7.0μM，根据竞争结合量制作量效曲线。

3）Ca²⁺浓度依赖性实验： Ca²⁺浓度：Ca²⁺ free（EGTA螯合）和2 mM。观察各多肽（设5个浓度组）浓度对CaMKII及CaM与PreIQ-IQ结合的影响。

筛选出能有效抑制CaMKII及CaM与CaMKII结合，并影响CaMKII、CaM的Cav1.2调节功能的多肽，用于进行进一步的生物学作用观察。

结果如图8所示，PreIQ-IQ分别进行磷酸化，去磷酸化处理。磷酸化后，CaM与PreIQ-IQ的结合量增加，而去磷酸化后，结合量减少，但是随着Athycaltide-1浓度的增加，CaM与PreIQ-IQ的结合量均呈现逐渐减少的趋势。研究结果表明CaM与PreIQ-IQ结合随Athycaltide-1浓度变化而变化。

四、体内多肽药物Athycaltide-1,4,5筛选实验

选取雄性SD大鼠220g-250g，随机分为对照组（Control组）、心肌肥厚组（ISO组）和心肌肥厚治疗组（ISO+Athycaltide-1,4,5）。对照组皮下和腹腔分别注射同体积的0.9%NaCL。心肌肥厚组采用皮下注射ISO法制备心肌肥厚大鼠动物模型，5mg/kg体重，注射2周，每日一次。多肽治疗组给予ISO的同时，腹腔注射15mg/kg体重的Athycaltide-1，4，5多肽进行干预，注射2周。模型制备成功后测量体重（BW），10%水合氯醛4mL/kg体重麻醉，灌流，取出心脏，称量心脏重量（HW），并计算心脏重量指数（HW/BW）。Western Blot实验测定心肌组织中CaM、CaMKII、p-CaMKII、Cav1.2蛋白的表达。检测结果如下：

（1）研究结果表明给予多肽药物后大鼠心重/体重比(HW/BW)，心肌细胞体积均发生了变化。结果如图5所示。A：各组大鼠心脏组织大小。与Control组相比，ISO组心脏体积增大。给予Athycaltide-1后心脏体积减小，给予Athycaltide-4，5心脏体积没有变化；B：各组大鼠HW/BW。与Control组相比，ISO组心脏HW/BW增大。给予Athycaltide-1后HW/BW减小，给予Athycaltide-4，5心脏体积没有变化（P>0.05）；C. 各组HE染色结果。D.心肌组织面积。与Control组相比，ISO组心肌细胞横截面积增大（P<0.001）；给予Athycaltide-1干预后，心肌细胞横截面积显著减小（P<0.001）。而给予Athycaltide-4，与ISO组相比心肌细胞横截面积反而增大（P<0.01）。给予Athycaltide-5之后，与ISO组相比心肌细胞横截面积没有统计学差异（P>0.05）。

体内实验验证多肽治疗心肌肥厚的作用和细胞毒性实验：

1.体内实验验证多肽治疗心肌肥厚的作用选取雄性SD大鼠220g-250g，随机分为对照组（Control）、心肌肥厚组（ISO）、心肌肥厚治疗低剂量组（ISO+Athycaltide-1）和心肌肥厚治疗高剂量组（ISO+Athycaltide-1）。对照组皮下和腹腔分别注射同体积的0.9%NaCL。心肌肥厚组采用皮下注射ISO法制备心肌肥厚大鼠动物模型，5mg/kg体重，注射2周，每日一次。多肽治疗低剂量组给予ISO的同时，腹腔注射5mg/kg体重的Athycaltide-1多肽进行干预，注射2周。多肽治疗高剂量组给予ISO的同时，腹腔注射15mg/kg体重的Athycaltide-1多肽进行干预，注射2周。模型制备成功后测量体重（BW），10%水合氯醛4mL/kg体重麻醉，灌流，取出心脏，称量心脏重量（HW），并计算心脏重量指数（HW/BW）。电镜检测心肌线粒体、肌丝变化情况。Western Blot实验测定心肌组织中CaM、CaMKII、p-CaMKII、Cav1.2蛋白的表达。检测结果如下：

（1）不同浓度Athycaltide-1对心脏重量、心肌细胞体积、线粒体及肌丝的作用。结果如图6所示。A.各组心肌组织HE染色结果。B.HW/BW。给予5mg/kg体重和15mg/kg体重Athycaltide-1之后，发现与ISO2w组相比，5mg/kg体重组HW/BW没有统计学差异（P>0.05）。15mg/kg体重组HW/BW明显下降（P<0.05）。 C.心肌细胞横截面积的测量。与ISO2w组和5mg/kg体重组相比，15mg/kg体重组心肌细胞横截面积明显减小（P<0.001）。D.电镜。与对照组相比，ISO2w组心肌细胞内线粒体增多，肌丝增粗；给予Athycaltide-1后，线粒体变小，肌丝变细。

（2）Athycaltide-1对Ca²⁺/CaM/CaMKII信号转导通路的作用机制。A图、B图.Athycaltide-1能够降低病理性心肌肥厚大鼠CaMKII和p-CaMKII蛋白的表达。与ISO组相比，Athycaltide-1组CaMKII与 p-CaMKII蛋白的表达下降（P<0.01）；与Control组相比，Athycaltide-1组CaMKII蛋白表达没有统计学差异（P>0.05）。与ISO组相比，Athycaltide-1组CaM表达增高（P<0.01）；与Control组相比，Athycaltide-1组CaMKII蛋白表达没有统计学差异（P>0.05）。Cav1.2蛋白表达在Control组、ISO组、Athycaltide-1组之间没有统计学意义（P>0.05）。

2.细胞毒性试验。原代培养心肌细胞，分别给予10^-4、10^-5、10^-6、10^-7、10^-85个剂量梯度，CCK-8结果显示5个浓度梯度下细胞OD₄₅₀值之间没有统计学差异，与Control组相比亦没有统计学差异。结果表明Athycaltide-1对细胞几乎没有毒性。

SEQUENCE LISTING

<110> 中国医科大学

<120> 一类多肽药物Athycaltide及其用途

<130> 3

<160> 3

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 42

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 1

Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Gly Gly Asp Asp Glu Val

1 5 10 15

Thr Val Gly Lys Phe Tyr Ala Thr Phe Leu Ile Gln Glu Tyr Phe Arg

20 25 30

Lys Phe Lys Lys Arg Lys Glu Gln Gly Leu

35 40

<210> 2

<211> 26

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 2

Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Gly Gly Asp Asp Glu Val

1 5 10 15

Thr Val Gly Lys Phe Tyr Ala Thr Phe Leu

20 25

<210> 3

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 3

Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Gly Tyr Ala Thr Phe Leu

1 5 10 15

Ile Gln Glu Tyr Phe Arg Lys Phe Lys Lys Arg Lys Glu Gln Gly Leu

20 25 30

Claims (2)

1.一类多肽药物Athycaltide，其特征在于，该多肽药物Athycaltide的氨基酸序列为

GRKKRRQRRRGGDDEVTVGKFYATFLIQEYFRKFKKRKEQGL（SEQ ID No.1）。

2.一种如权利要求1所述的多肽药物Athycaltide作为制备用于预防和治疗心肌肥厚药物的用途。

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