CN108047020A

CN108047020A - 丹参新酮衍生物及其药物组合物与其在制药中的应用

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Publication number: CN108047020A
Application number: CN201810006632.7A
Authority: CN
Inventors: 许刚; 秦红波; 夏凡; 李成季
Original assignee: Kunming Institute of Botany of CAS
Current assignee: Kunming Institute of Botany of CAS
Priority date: 2018-01-04
Filing date: 2018-01-04
Publication date: 2018-05-18

Abstract

丹参新酮衍生物2,3二氢‑1‑氧丹参新酮，其药物组合物，其制备方法和在制药中的应用，以及sanigerone II在制备抗肿瘤药物中的应用。

Description

丹参新酮衍生物及其药物组合物与其在制药中的应用

技术领域

本发明属于药物技术领域，涉及丹参新酮衍生物2,3二氢-1-氧丹参新酮，其药物组合物，其制备方法和在制药中的应用，以及sanigerone II在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

丹参是传统中药，为唇形科植物，主要功效与作用包括，1)心血管系统的作用：加强心肌收缩力、改善心脏功能，不增加心肌耗氧量；对血管作用，扩张冠脉，增加心肌血流量；扩张外周血管，血流增加；脑血流量下降；2)促进组织的修复与再生作用3)保肝，改善肝微循环；4)抗菌。丹参酮类化合物被认为是其主要活性成分。隐丹参酮、二氢丹参酮，对体外的葡萄球菌、大肠杆菌、变性杆菌有抑制作用。由于抗菌与抗肿瘤的关系密切，近年丹参酮二萜的抗肿瘤活性得到了广泛的关注。

1-氧丹参新酮有一定的抗肿瘤活性，具体数据如下，人肺癌细胞A549(24.89uM),人前列腺癌细胞PC-3(18.97uM),急性粒细胞白血病细胞HL-60(23.27uM),人胰腺癌细胞PANC-1(32.15uM),人胰腺癌细胞BxPC-3(20.54uM),人胚胎成纤维细胞MRC-5(20.39uM)(Bioorg.Med.Chem.Lett.2013,23,6682-6687)。在本发明对丹参酮二萜的抗肿瘤活性的研究过程中，对1-氧丹参新酮进行结构修饰，发现了一个新化合物2,3-二氢丹参新酮有显著的抗肿瘤活性，另外，在首次全合成另外一个具有迈克尔受体官能团的Sanigerone II后，经测试，其抗肿瘤活性更加显著。现有技术中未见Sanigerone II的抗肿瘤活性报道。

发明内容

本发明的目的在于提供两种有抗肿瘤活性的丹参酮类化合物，它们的制备方法，以它们为活性成分的药物组合物，及其在制备抗肿瘤药物中的应用，

本发明的上述目的是由以下的技术方案得以实现的：

具有下述结构式的丹参酮类化合物2,3-二氢-1-氧丹参新酮，

药物组合物，含有治疗有效量的所述的丹参酮类化合物2,3-二氢-1-氧丹参新酮和可药用载体。

所述的丹参酮类化合物2,3-二氢-1-氧丹参新酮在制备抗肿瘤药物中的应用。

根据所述的2,3-二氢-1-氧丹参新酮在制备抗肿瘤药物中的应用，其中所述的肿瘤是肝癌、乳腺癌、肺癌。

丹参酮类化合物2,3-二氢-1-氧丹参新酮的制备方法，以1-氧丹参新酮为原料，在有机溶剂中，在一定温度下，通过氧化剂氧化得到2,3-二氢-1-氧丹参新酮；所述的有机溶剂为苯，苯的一个至三个碳的直链或侧链衍生物，卤代苯，二甲基亚砜，N，N-二甲基甲酰胺，N,N-二甲基乙酰胺；所述的温度为零℃至零上150℃，所述的氧化剂为二氯二氰基苯醌，四甲基哌啶氮氧化物，过硫酸氢钾，高碘酸钠，二氧化硒，三氧化铬，氯铬酸吡啶。

药物组合物，含有如下结构式所示的治疗有效量的化合物Sanigerone II，及可药用载体。

化合物Sanigerone II在制备抗肿瘤药物中的应用。

根据所述的化合物Sanigerone II在制备抗肿瘤药物中的应用，其中所述的肿瘤为肝癌、乳腺癌、肺癌。

化合物Sanigerone II的制备方法，以去氢丹参新酮位原料，在有机溶剂中，在一定温度下，通过氧化剂氧化得到Sanigerone II，所述有机溶剂为甲苯，14二氧六环，叔丁醇，二甲基亚砜，N，N-二甲基甲酰胺；所述的温度为零上25℃至零上180℃，所述的氧化剂为二氯二氰基苯醌，过硫酸氢钾，高碘酸钠，高碘酸钾，二氧化硒，三氧化铬，氯铬酸吡啶。

以MTT法进行抗肿瘤作用的筛选，结果显示对人肝癌细胞(HpeG2)、乳腺癌细胞(MCF-7)、人肺癌细胞(A549)有显著抑制作用。

附图说明

图1为本发明化合物的制备路线图。

具体实施方式

下面结合附图，通过实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此来限定本发明。

实施例1

2,3-二氢-1-氧丹参新酮的合成：

将50毫克1-氧丹参新酮溶于3.5毫升甲苯，加入77毫克二氯二氰基苯醌(DDQ)，于110℃加热回流搅拌24小时至反应完全。冷却至室温，用水洗涤(5毫升×6)除去DDQ，乙酸乙酯(5毫升×6)萃取，合并有机相并用无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩得粗品。经柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝8/1)得目标产物2,3-二氢1-氧丹参新酮13毫克，收率40％。

¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.67(d,J＝8.2Hz,1H),7.42(d,J＝8.2Hz,1H),7.08(s,1H),6.80(d,J＝10.2Hz,1H),6.45(d,J＝10.2Hz,1H),3.02(td,J＝13.5,6.8Hz,1H),1.48(s,6H),1.18(d,J＝6.9Hz,6H).

¹³C NMR(400MHz,CDCl3)δ185.63,185.57,183.45,154.64,151.66,146.70,137.76,136.14,134.85,134.82,131.86,131.80,127.48,38.16,29.43,26.97,21.55.

实施例2：

Sanigerone II的合成：

反应管中称取30毫克去氢丹参新酮溶于1.2毫升1,4-二氧六环，加入60毫克二氧化硒SeO2，在125℃加热搅拌4小时；反应结束后冷却至室温，硅胶柱过滤除二氧化硒及其还原产物，并用乙酸乙酯洗脱后浓缩得粗品，经硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)，得22毫克红棕色晶体，确认为Sanigerone II，收率为70％。

¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.99(d,J＝10.5Hz,1H),7.67(d,J＝8.0Hz,1H),7.36(d,J＝8.0Hz,1H),7.14(s,1H),6.41(d,J＝10.5Hz,1H),3.05(dt,J＝13.6,6.8Hz,1H),1.49(s,6H),1.19(d,J＝6.9Hz,6H).

¹³C NMR(400MHz,CDCl3)δ202.04,182.99,181.10,150.31,146.24,139.53,139.05,135.41,132.51,132.16,131.10,128.77,127.00,47.81,27.54,27.13,21.46.

实施例3：

1.实验方法

(1)细胞&培养：人肝癌细胞(HpeG2)、乳腺癌细胞(MCF-7)和人肺癌细胞(A549)用含10％FBS的RP1640培养基培养。所有细胞置于37℃、饱和湿度、含5％CO2的孵育箱中生长。

(2)各样品对肿瘤细胞的增殖抑制作用评价：

样品对HpeG2，A549细胞的增殖抑制实验(CCK-8法)：胰酶消化收集生长良好的细胞，用新鲜培养液配成5×104个/mL的单细胞悬液，按每孔100μL接种于96孔板中，置于孵育箱中培养24h使细胞贴壁。将样品用细胞培养液稀释至需要的百分浓度，按每孔100μL替换原有的细胞培养液，每个浓度设3个复孔。实验设置不含药物的阴性对照，并对每个药物作用浓度设置不含细胞的药物空白对照。将细胞板置于孵育箱孵育72小时后取出，加入10μL/孔的CCK-8，再置于孵育箱孵育1.5小时。取出细胞培养板，于450nm检测每孔吸收值A。按下式计算不同稀释浓度的样品对肿瘤细胞增殖的抑制率，并求得其对细胞增殖的半数抑制浓度IC50，即细胞增殖抑制率为50％时的作用浓度。

样品对MCF-7细胞的增殖抑制实验(SRB法)：胰酶消化收集生长良好的细胞，用新鲜培养液配成5×104个/mL的单细胞悬液，按每孔100μL接种于96孔板中，置于孵育箱中培养24h使细胞贴壁。将样品用细胞培养液稀释至需要的百分浓度，按每孔100μL替换原有的细胞培养液，每个浓度为3个复孔。实验中设置不含药物的细胞对照和不含细胞的培养液空白对照。药物作用72小时。细胞经PBS洗涤、15％的TCA固定(4℃，1小时)、0.4％的SRB(1％冰醋酸配制)染色(室温，10分钟)。1％冰醋酸洗掉多余SRB后，附着于细胞的SRB用Tris溶液溶解(10mM，100μL/孔)，并于515nm检测吸收值A。按下式计算不同稀释浓度的样品对肿瘤细胞增殖的抑制率，并求得其对细胞增殖的半数抑制浓度IC50。

(2)实验结果

将稀释的样品1和2作用于细胞72小时后检测细胞活力，并与对照肿瘤细胞的活力进行比较，得出样品在不同浓度对肿瘤细胞增殖的抑制率。所有实验重复三次，结果表示为三次实验结果的平均值±标准差(n＝3)。化合物1和2对人肝癌细胞(HpeG2)、乳腺癌细胞(MCF-7)和人肺癌细胞(A549)具有显著的增殖抑制作用，具体数据见表1(^aSTS为阳性对照药)：

表1本发明化合物与对照对肿瘤细胞增殖的抑制率

实施例4：

按实施例1、2的方法先制得化合物2,3-二氢-1-氧丹参新酮和Sanigerone II，按常规加注射用水，精滤，灌封灭菌制成注射液。

实施例5：

按实施例1、2的方法先制得化合物2,3-二氢-1-氧丹参新酮和Sanigerone II，将其溶于无菌注射用水中，搅拌使溶，用无菌抽滤漏斗过滤，再无菌精滤，分装于2安瓿中，低温冷冻干燥后无菌熔封得粉针剂。

实施例6：

按实施例1、2的方法先制得化合物2,3-二氢-1-氧丹参新酮和Sanigerone II，，与赋形剂重量比为9:1的比例加入赋形剂，制成粉剂。

实施例7：

按实施例1、2的方法先制得化合物2,3-二氢-1-氧丹参新酮和Sanigerone II，，按其与赋形剂重量比为1:5–1:10的比例加入赋形剂，制粒压片。

实施例8：

按实施例1、2的方法先制得化合物2,3-二氢-1-氧丹参新酮和Sanigerone II，，按常规口服液制法制成口服液。

实施例9：

按实施例1、2的方法先制得化合物2,3-二氢-1-氧丹参新酮和Sanigerone II，，按其与赋形剂重量比为3:1的比例加入赋形剂，制成胶囊或颗粒剂或冲剂。

Claims

1.具有下述结构式的丹参酮类化合物2,3-二氢-1-氧丹参新酮，

2.药物组合物，含有治疗有效量的权利要求1所述的丹参酮类化合物2,3-二氢-1-氧丹参新酮和可药用载体。

3.权利要求1所述的丹参酮类化合物2,3-二氢-1-氧丹参新酮在制备抗肿瘤药物中的应用。

4.根据权利要求3所述的2,3-二氢-1-氧丹参新酮在制备抗肿瘤药物中的应用，其中所述的肿瘤是肝癌、乳腺癌、肺癌。

5.权利要求1所述丹参酮类化合物2,3-二氢-1-氧丹参新酮的制备方法，以1-氧丹参新酮为原料，在有机溶剂中，在一定温度下，通过氧化剂氧化得到2,3-二氢-1-氧丹参新酮；所述的有机溶剂为苯，苯的一个至三个碳的直链或侧链衍生物，卤代苯，二甲基亚砜，N，N-二甲基甲酰胺，N,N-二甲基乙酰胺；所述的温度为零℃至零上150℃，所述的氧化剂为二氯二氰基苯醌，四甲基哌啶氮氧化物，过硫酸氢钾，高碘酸钠，二氧化硒，三氧化铬，氯铬酸吡啶。

6.药物组合物，含有如下结构式所示的治疗有效量的化合物Sanigerone II，及可药用载体，

7.化合物Sanigerone II在制备抗肿瘤药物中的应用。

8.根据权利要求7所述的化合物Sanigerone II在制备抗肿瘤药物中的应用，其中所述的肿瘤为肝癌、乳腺癌、肺癌。

9.化合物Sanigerone II的制备方法，以去氢丹参新酮位原料，在有机溶剂中，在一定温度下，通过氧化剂氧化得到Sanigerone II，所述有机溶剂为甲苯，14二氧六环，叔丁醇，二甲基亚砜，N，N-二甲基甲酰胺；所述的温度为零上25℃至零上180℃，所述的氧化剂为二氯二氰基苯醌，过硫酸氢钾，高碘酸钠，高碘酸钾，二氧化硒，三氧化铬，氯铬酸吡啶。