CN108037290A - 一种呼吸道病原体抗原检测的试剂盒及其检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种呼吸道病原体抗原检测的试剂盒，所述试剂盒包括呼吸道病原体抗原检测膜条、生物素标记的混合单克隆抗体试剂、链霉亲和素、样本稀释液、显色底物、浓缩洗涤液和反应槽；所述呼吸道病原体抗原检测膜条设有检测区和质控区，所述检测区分别设有包被呼吸道合胞病毒、腺病毒、流感病毒A型、流感病毒B型、副流感病毒1型、副流感病毒2型、副流感病毒、肺炎支原体、肺炎衣原体、嗜肺军团菌和A群链球菌共11种病原体对应的单克隆抗体检测线。该试剂盒操作简单，可以同时检测11种呼吸道病原体。本发明还提供了该试剂盒的检测方法。

Description

一种呼吸道病原体抗原检测的试剂盒及其检测方法

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，特别涉及一种呼吸道病原体抗原检测的试剂盒及其检测方法。

背景技术

呼吸道病毒感染是临床最常见的疾病之一，因此了解呼吸道病毒检测手段和开展快速病毒检测已成为当务之急。目前国内外多采用病毒分离培养法、病毒快速检测法、分子生物学法等多种检测手段。

但上述检测方法需要专业人员进行操作，过程复杂，耗时长，不适于临床筛查和即时检测。因此，为解决上述问题，目前出现了较多的呼吸道病原体检测试剂盒，但目前市场上的用于呼吸道病原体检测的试剂盒都是针对其中的一两种呼吸道病原体进行检测，检测范围太小，只能进行单人单项目检测，也不能进行多人呼吸道病原体的同时检测。

目前需要一种快速、简单、高效的能够同时检测多种呼吸道病原体的试剂盒。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种呼吸道病原体抗原检测的试剂盒及其检测方法，包括了呼吸道病原体抗原检测膜条，所述呼吸道病原体抗原检测膜条上包被了11种呼吸道病原体的单克隆抗体的检测线，可以同时检测11种呼吸道病原体，检测全面，方法简单，易于操作，检测迅速，灵敏度高，具有广泛的应用前景。

第一方面，本发明提供了一种呼吸道病原体抗原检测的试剂盒，所述试剂盒包括呼吸道病原体抗原检测膜条、生物素标记的混合单克隆抗体试剂、链霉亲和素、样本稀释液、显色底物、浓缩洗涤液和反应槽；所述呼吸道病原体抗原检测膜条设有检测区和质控区，所述检测区分别设有包被呼吸道合胞病毒单克隆抗体的检测线、包被腺病毒单克隆抗体的检测线、包被流感病毒A型单克隆抗体的检测线、包被流感病毒B型单克隆抗体的检测线、包被副流感病毒1型单克隆抗体的检测线、包被副流感病毒2型单克隆抗体的检测线、包被副流感病毒3型单克隆抗体的检测线、包被肺炎支原体单克隆抗体的检测线、包被肺炎衣原体单克隆抗体的检测线、包被嗜肺军团菌单克隆抗体的检测线和包被A群链球菌单克隆抗体的检测线。

其中，所述生物素标记的混合单克隆抗体试剂包括生物素标记的呼吸道合胞病毒单克隆抗体、生物素标记的腺病毒单克隆抗体、生物素标记的流感病毒A型单克隆抗体、生物素标记的流感病毒B型单克隆抗体、生物素标记的副流感病毒1型单克隆抗体、生物素标记的副流感病毒2型单克隆抗体、生物素标记的副流感病毒3型单克隆抗体、生物素标记的肺炎支原体单克隆抗体、生物素标记的肺炎衣原体单克隆抗体、生物素标记的嗜肺军团菌单克隆抗体和生物素标记的A群链球菌单克隆抗体。

其中，所述质控区设有包被羊抗鼠IgG多克隆抗体的质控线。

其中，所述呼吸道病原体抗原检测膜条在沿长度方向依次设有包被羊抗鼠IgG多克隆抗体的质控线、包被呼吸道合胞病毒单克隆抗体的检测线、包被腺病毒单克隆抗体的检测线、包被流感病毒A型单克隆抗体的检测线、包被流感病毒B型单克隆抗体的检测线、包被副流感病毒1型单克隆抗体的检测线、包被副流感病毒2型单克隆抗体的检测线、包被副流感病毒3型单克隆抗体的检测线、包被肺炎支原体单克隆抗体的检测线、包被肺炎衣原体单克隆抗体的检测线、包被嗜肺军团菌单克隆抗体的检测线和包被A群链球菌单克隆抗体的检测线。

其中，所述各个检测线相互平行且相邻检测线之间间隔相等，所述质控线与所述各个检测线相互平行，所述质控线和所述包被呼吸道合胞病毒单克隆抗体的检测线之间的间隔与所述各个检测线之间的间隔相等。

其中，所述呼吸道病原体抗原检测膜条为孔径大小是0.22μm的多孔硝酸纤维素膜，所述呼吸道病原体抗原检测膜条的长度为70-90mm，宽度为2.0mm-5.0mm。

其中，所述链霉亲和素为碱性磷酸酶标记的链霉亲和素；所述样本稀释液含有三羟甲基氨基甲烷缓冲液；所述显色底物含有5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸盐与氯化硝基四氮唑蓝的混合物；所述浓缩洗涤液含有20倍浓缩的三羟甲基氨基甲烷缓冲液。

其中，所述反应槽呈凹槽状，用于放置所述呼吸道病原体抗原检测膜条。

其中，所述试剂盒在检测过程中的反应温度为37℃恒温。

第二方面，本发明提供了第一方面所述的呼吸道病原体抗原检测的试剂盒的检测方法，包括以下步骤：

(1)检测前准备：将用于呼吸道病原体抗原检测的试剂盒和待测样本平衡至室温，将所述已平衡至室温的待测样本按预设的比例用样本稀释液进行稀释，获得待测稀释样本；将呼吸道病原体抗原检测膜条放入反应槽中；将浓缩洗涤液按照预设的比例稀释，获得工作洗涤液；

(2)孵育待测稀释样本：将所述待测稀释样本加入到所述反应槽中，所述待测稀释样本与所述呼吸道病原体抗原检测膜条上包被的羊抗鼠IgG多克隆抗体、呼吸道合胞病毒单克隆抗体、腺病毒单克隆抗体、流感病毒A型单克隆抗体、流感病毒B型单克隆抗体、副流感病毒1型单克隆抗体、副流感病毒2型单克隆抗体、副流感病毒3型单克隆抗体、肺炎支原体单克隆抗体、肺炎衣原体单克隆抗体、嗜肺军团菌单克隆抗体和A群链球菌单克隆抗体于37℃恒温孵育进行反应，获得检测膜条A；

(3)洗涤检测膜条A：倒掉所述反应槽内的所述待测稀释样本，加入所述工作洗涤液洗涤检测膜条A1min，倒掉所述工作洗涤液，反复冲洗3次，获得检测膜条B；

(4)孵育检测膜条B：将生物素标记的混合单克隆抗体加入到所述反应槽中，所述生物素标记的混合单克隆抗体与所述检测膜条B于37℃恒温孵育进行反应，获得检测膜条C；

(5)洗涤检测膜条C：倒掉反应槽内的所述生物素标记的混合单克隆抗体，加入所述工作洗涤液洗涤检测膜条C 1min，倒掉所述工作洗涤液，反复冲洗3次，获得检测膜条D；

(6)链霉亲和素结合：将链霉亲和素加入到所述反应槽中，所述链霉亲和素与所述检测膜条D于37℃恒温孵育进行反应，获得检测膜条E；

(7)洗涤检测膜条E：倒掉反应槽内的所述链霉亲和素，加入所述工作洗涤液洗涤检测膜条E 1min，倒掉所述工作洗涤液，反复冲洗3次，获得检测膜条F；

(8)显色检测膜条F：将显色底物试剂加入到所述反应槽中，所述显色底物试剂与所述检测膜条F于37℃恒温孵育进行反应，获得检测膜条G；

(9)倒掉所述反应槽内所述显色底物试剂，加入蒸馏水洗涤检测膜条G，倒掉后获得检测膜条H。

本发明具有以下有益效果：

(1)本发明提供的呼吸道病原体抗原检测的试剂盒可以同时检测呼吸道合胞病毒、腺病毒、流感病毒A型、流感病毒B型、副流感病毒1型、2型和3型、肺炎支原体、肺炎衣原体、嗜肺军团菌和A群链球菌共11中呼吸道病原体，可以同时检测多种呼吸道病原体，检测全面。

(2)本发明提供的呼吸道病原体抗原检测的试剂盒的检测方法简单，易于操作，检测迅速，特异性强，利用待测样本中的抗原与检测试剂盒中的检测膜条上的抗体进行特异性结合形成抗原抗体复合物，并通过生物素标记的单克隆抗体与抗原抗体复合物结合，从而使检测信号放大，在经过与链霉亲和素和显色试剂的作用，提高了检测灵敏度。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

图1为本发明实施例中提供的一种呼吸道病原体抗原检测的试剂盒示意图。

图2为本发明实施例中提供的一种呼吸道病原体抗原检测膜条示意图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1一种呼吸道病原体抗原检测的试剂盒

本发明提供一种呼吸道病原体抗原检测的试剂盒，所述试剂盒包括呼吸道病原体抗原检测膜条、生物素标记的混合单克隆抗体试剂、链霉亲和素、样本稀释液、显色底物、浓缩洗涤液和反应槽，其中所述生物素标记的混合单克隆抗体试剂、链霉亲和素、样本稀释液、显色底物、浓缩洗涤液可以存储于容器中，并放置在所述试剂盒中，如图1所示，为本发明实施提供的一种呼吸道病原体抗原检测的试剂盒，所述试剂盒包括盒体10，所述盒体10内设有呼吸道病原体抗原检测膜条11、生物素标记的混合单克隆抗体试剂12、链霉亲和素13、样本稀释液14、显色底物15、浓缩洗涤液16和反应槽17；所述呼吸道病原体抗原检测膜条设有检测区和质控区，所述检测区分别设有包被呼吸道合胞病毒单克隆抗体的检测线、包被腺病毒单克隆抗体的检测线、包被流感病毒A型单克隆抗体的检测线、包被流感病毒B型单克隆抗体的检测线、包被副流感病毒1型单克隆抗体的检测线、包被副流感病毒2型单克隆抗体的检测线、包被副流感病毒3型单克隆抗体的检测线、包被肺炎支原体单克隆抗体的检测线、包被肺炎衣原体单克隆抗体的检测线、包被嗜肺军团菌单克隆抗体的检测线和包被A群链球菌单克隆抗体的检测线。

其中，试剂盒还包括盖合所述盒体的盒盖20，在本发明实施方式中，所述盒盖与所述盒体的连接方式不做限制，所述盒盖可以与所述盒体相连接，或所述盒盖也可以与所述盒体成单独部件，所述盒盖能够盖合所述盒体即可，在此不再赘述。

在本发明实施方式中，所述生物素标记的混合单克隆抗体试剂内含有生物素标记的呼吸道合胞病毒单克隆抗体、生物素标记的腺病毒单克隆抗体、生物素标记的流感病毒A型单克隆抗体、生物素标记的流感病毒B型单克隆抗体、生物素标记的副流感病毒1型单克隆抗体、生物素标记的副流感病毒2型单克隆抗体、生物素标记的副流感病毒3型单克隆抗体、生物素标记的肺炎支原体单克隆抗体、生物素标记的肺炎衣原体单克隆抗体、生物素标记的嗜肺军团菌单克隆抗体和生物素标记的A群链球菌单克隆抗体的混合物。所述生物素标记的混合单克隆抗体试剂中的11种生物素标记的单克隆抗体的浓度可以相同也可以不同，根据具体抗体滴定实验确定最合适的浓度。

在本发明实施例中，所述呼吸道病原体抗原检测膜条可以储存在一存储瓶中，所述呼吸道病原体抗原检测膜条以存储瓶的形式内设在所述试剂盒的盒体中。可选的，所述盒体内还设有用于固定所述试剂瓶、检查膜条和反应槽的固定件。所述固定件可以为纸板、塑料板或海绵，在此不再赘述。

在本发明实施方式中，所述质控区设有包被羊抗鼠IgG多克隆抗体的质控线。

在本发明实施方式中，如图2所示，可选的，所述呼吸道病原体抗原检测膜条在沿长度方向依次设有包被羊抗鼠IgG多克隆抗体的质控线、包被呼吸道合胞病毒单克隆抗体的检测线、包被腺病毒单克隆抗体的检测线、包被流感病毒A型单克隆抗体的检测线、包被流感病毒B型单克隆抗体的检测线、包被副流感病毒1型单克隆抗体的检测线、包被副流感病毒2型单克隆抗体的检测线、包被副流感病毒3型单克隆抗体的检测线、包被肺炎支原体单克隆抗体的检测线、包被肺炎衣原体单克隆抗体的检测线、包被嗜肺军团菌单克隆抗体的检测线和包被A群链球菌单克隆抗体的检测线，用图2中0-11依次表示。可选的，所述各个检测线相互平行且相邻检测线之间间隔相等，所述质控线与所述各个检测线相互平行。可选的，所述质控线和所述包被呼吸道合胞病毒单克隆抗体的检测线之间的间隔与所述各个检测线之间的间隔相等，也就是说所述质控线和所述包被呼吸道合胞病毒单克隆抗体的检测线之间的间隔与包被呼吸道合胞病毒单克隆抗体的检测线和所述包被腺病毒单克隆抗体的检测线之间的间隔相等；进一步可选的，所述质控线和所述包被呼吸道合胞病毒单克隆抗体的检测线之间的间隔为2.0mm，所述各个检测线之间的间隔为2.0mm；可选的，所述质控线与所述各检测线的宽度均为0.5mm-0.7mm，进一步可选的，所述质控线与所述各检测线的宽度均为0.6mm。可选地，所述呼吸道病原体抗原检测膜条沿其长度方向设有相对设置的第一端和第二端，且所述质控线和所述第一端的距离小于所述质控线和所述第二端的距离，可选的，所述质控线和所述第一端的距离为10mm-12mm。进一步可选地，所述质控线与所述第一端的距离为11mm。

在本发明实施方式中，所述呼吸道病原体抗原检测膜条为孔径大小是0.22μm的多孔硝酸纤维素膜，可选的所述呼吸道病原体抗原检测膜条的长度为70-90mm，宽度为2.0mm-5.0mm。进一步可选地，所述呼吸道病原体抗原检测膜条的长度为80mm，宽度为3.0mm。

在本发明实施方式中，所述链霉亲和素为碱性磷酸酶标记的链霉亲和素。所述链霉亲和素的浓度根据具体实验需要确定。

在本发明实施方式中，所述样本稀释液含有三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液。所述Tris缓冲液的配制可以为称取2.42gTris、8g氯化钠至100mL去离子水中溶解，用HCl调节pH至7.4，定容至1000mL。

在本发明实施方式中，所述显色底物含有5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸盐(BCIP)与氯化硝基四氮唑蓝(NBT)的混合物。所述BCIP与NBT的摩尔比为1:2，其中BCIP与NBT的浓度根据具体实验需要确定。

在本发明实施方式中，所述浓缩洗涤液含有20倍浓缩的三羟甲基氨基甲烷缓冲液。

在本发明实施方式中，所述反应槽呈凹槽状，用于放置所述呼吸道病原体抗原检测膜条。可选的，所述反应槽中设置有多个可以放置呼吸道病原体抗原检测膜条的凹槽，且所述凹槽的深度不做限定，所述反应槽可以进行多个不同样本的呼吸道病原体抗原检测膜条的反应，且不同凹槽内的液体不会相互污染和干扰。

在本发明实施方式中，所述试剂盒在检测过程中的反应温度为37℃恒温。发明所述试剂盒在检测过程中的反应温度为37℃恒温，可加速抗原抗体的结合反应，试剂盒的检测过程更加迅速。

本发明实施方式中，所述呼吸道病原体抗原检测膜条设有包被呼吸道合胞病毒单克隆抗体的检测线、包被腺病毒单克隆抗体的检测线、包被流感病毒A型单克隆抗体的检测线、包被流感病毒B型单克隆抗体的检测线、包被副流感病毒1型单克隆抗体的检测线、包被副流感病毒2型单克隆抗体的检测线、包被副流感病毒3型单克隆抗体的检测线、包被肺炎支原体单克隆抗体的检测线、包被肺炎衣原体单克隆抗体的检测线、包被嗜肺军团菌单克隆抗体的检测线和包被A群链球菌单克隆抗体的检测线共11中呼吸道病原体检测线，可以同时检测待测样本中的呼吸道合胞病毒、腺病毒、流感病毒A型、流感病毒B型、副流感病毒1型、2型和3型、肺炎支原体、肺炎衣原体、嗜肺军团菌和A群链球菌共11中呼吸道病原体，检测指标全面。

本发明试剂盒适用于人鼻试子、咽试子采集样本的检测，优选的，检测样本放置在2-6℃保藏，在进行检测之前，检测样本要平衡至室温(22-28℃)。其中鼻试子的采集方法可以为将拭子放入生理盐水中湿润，以拭子测量鼻孔到耳根的距离并以手指做标记。伸入的深度约为耳垂到鼻尖的二分之一处，取样前可事先大致测量一下。二岁以下的儿童，伸入深度约为拭子绒毛长度的二倍。将拭子以垂直鼻子(面部)方向插入鼻孔，直至手指触及鼻子，使拭子在鼻内停留约10秒钟，缓缓贴壁轻轻旋转3次。将拭子投入储存管(含生理盐水3ml)中，折断拭杆，使其完全置于管中。旋紧管盖，做好标记，放入塑料袋密封好。若需从两个鼻孔采集，应该分别使用一个拭子；咽拭子采集方法：先漱口，将拭子放入无菌生理盐水中湿润。用压舌板辅助，将咽拭子越过舌根，到达咽峡部病变处，反复涂抹数次，取出时避免接触舌及口腔黏膜等处。将拭子投入储存管(含生理盐水3ml)中，折断拭杆，使其完全置于管中。旋紧管盖，做好标记，放入塑料袋密封好。

本发明试剂盒中呼吸道病原体抗原检测膜条的制备方法为按照常规的制备膜条的方法进行制备，其中，配制点样溶液中是将本发明的11种呼吸道病原体的单克隆抗体配制成相应的包被浓度，然后将配制好的点样溶液以一定的排列次序固定在膜片上，形成独立的检测线，后续再进行干燥、贴膜、切膜、组装、切条等操作以制备得到呼吸道病原体抗原检测膜条。

本发明第二方面提供了一种呼吸道病原体抗原检测的试剂盒的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：

S10：检测前准备：将用于呼吸道病原体抗原检测的试剂盒和待测样本平衡至室温，将所述已平衡至室温的待测样本按预设的比例用样本稀释液进行稀释，获得待测稀释样本；将呼吸道病原体抗原检测膜条放入反应槽中；将浓缩洗涤液按照预设的比例稀释，获得工作洗涤液。

在步骤S10之前还包括对待测样本进行采集，所述待测样本为人鼻试子、咽试子采集样本。

在步骤S10中，待测样本采集之后将拭子在样本稀释液中反复旋转挤压，使得待测样本全部提取在溶液中，获得待测稀释样本；将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水，按1:20稀释成工作洗涤液。

S20：孵育待测稀释样本：取2mL待测稀释样本加入到反应槽中，待测稀释样本与所述呼吸道病原体抗原检测膜条上包被的羊抗鼠IgG多克隆抗体、呼吸道合胞病毒单克隆抗体、腺病毒单克隆抗体、流感病毒A型单克隆抗体、流感病毒B型单克隆抗体、副流感病毒1型单克隆抗体、副流感病毒2型单克隆抗体、副流感病毒3型单克隆抗体、肺炎支原体单克隆抗体、肺炎衣原体单克隆抗体、嗜肺军团菌单克隆抗体、A群链球菌单克隆抗体于37℃恒温孵育10min，获得检测膜条A。

在步骤S20中，若待测稀释样本中含有呼吸道合胞病毒、腺病毒、流感病毒A型、流感病毒B型、副流感病毒1型、副流感病毒2型、副流感病毒3型、肺炎支原体、肺炎衣原体、嗜肺军团菌和/或A群链球菌的病原体，则与检测膜条A上的相应病原体单克隆抗体结合形成抗原抗体结合物。

S30：洗涤检测膜条A：倒掉反应槽内的待测稀释样本，加入2mL工作洗涤液，洗涤检测膜条A1min，倒掉工作洗涤液，反复冲洗3次，获得检测膜条B。

S40：孵育检测膜条B：将生物素标记的混合单克隆抗体加入到反应槽中，所述生物素标记的混合单克隆抗体与所述检测膜条B于37℃恒温孵育10min，获得检测膜条C。

在步骤S40中，将1mL生物素标记的混合单克隆抗体加入到反应槽中，生物素标记的混合单克隆抗体包括生物素标记的呼吸道合胞病毒单克隆抗体、生物素标记的腺病毒单克隆抗体、生物素标记的流感病毒A型单克隆抗体、生物素标记的流感病毒B型单克隆抗体、生物素标记的副流感病毒1型单克隆抗体、生物素标记的副流感病毒2型单克隆抗体、生物素标记的副流感病毒3型单克隆抗体、生物素标记的肺炎支原体单克隆抗体、生物素标记的肺炎衣原体单克隆抗体、生物素标记的嗜肺军团菌单克隆抗体和生物素标记的A群链球菌单克隆抗体。生物素标记的混合单克隆抗体与相对应的抗原抗体结合物进行结合，形成生物素标记的抗原抗体结合物。

S50：洗涤检测膜条C：倒掉反应槽内的生物素标记的混合单克隆抗体，加入2mL工作洗涤液洗涤检测膜条C 1min，倒掉所述工作洗涤液，反复冲洗3次，获得检测膜条D。

S60：链霉亲和素结合：将1mL链霉亲和素加入到所述反应槽中，所述链霉亲和素与所述检测膜条D于37℃恒温孵育进行反应，获得检测膜条E。

在步骤S60中，所述链霉亲和素为碱性磷酸酶标记的链霉亲和素。

S70：洗涤检测膜条E：倒掉反应槽内的所述链霉亲和素，加入所述工作洗涤液洗涤检测膜条E 1min，倒掉所述工作洗涤液，反复冲洗3次，获得检测膜条F。

S80：显色检测膜条F：显色检测膜条D：将1mL显色底物试剂(5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸盐(BCIP)与氯化硝基四氮唑蓝(NBT)的混合物)加入到反应槽中，显色底物试剂与呼吸道病原体抗原检测膜条D于37℃恒温孵育10min，获得检测膜条E。

S90：倒掉所述反应槽内所述显色底物试剂，加入蒸馏水洗涤检测膜条G，倒掉后获得检测膜条H。

在本实施例中还可对检测膜条H进行判读，将干燥的检测膜条H放入免疫印迹分析仪膜条固定架中，借助免疫印迹分析仪对检测膜条F进行判读，结果可判断划分为阴性、临界值、临界值的2倍值、4倍值、8倍值5个等级，输出为量化的数值。可选的，利用所述呼吸道病原体抗原检测膜条分析大量正常人的样本的结果，将正常样本的分析强度平均值+3倍的相对偏差得到的数值设定为临界值。若临界值为A，临界值的2倍值、4倍值、8倍值分别为2A、4A、8A，当检测到的阳性结果分析的数值为X时，根据表1对阳性结果进行等级划分。

表1

其中，质控线均为阳性结果，保证试剂盒的有效性。

本发明提供的呼吸道病原体抗原检测的试剂盒经过统计实验发现所述试剂盒的灵敏度可达95％以上，特异性达到95％以上，具有良好的检测效果，可以用于呼吸道病原体抗原的检测。

本发明提供的呼吸道病原体抗原检测的试剂盒可以同时检测呼吸道合胞病毒、腺病毒、流感病毒A型、流感病毒B型、副流感病毒1型、2型和3型、肺炎支原体、肺炎衣原体、嗜肺军团菌和A群链球菌共11中呼吸道病原体，可以同时检测多种呼吸道病原体，检测全面，检测方法简单，易于操作，检测迅速，灵敏度高。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种呼吸道病原体抗原检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括呼吸道病原体抗原检测膜条、生物素标记的混合单克隆抗体试剂、链霉亲和素、样本稀释液、显色底物、浓缩洗涤液和反应槽；所述呼吸道病原体抗原检测膜条设有检测区和质控区，所述检测区分别设有包被呼吸道合胞病毒单克隆抗体的检测线、包被腺病毒单克隆抗体的检测线、包被流感病毒A型单克隆抗体的检测线、包被流感病毒B型单克隆抗体的检测线、包被副流感病毒1型单克隆抗体的检测线、包被副流感病毒2型单克隆抗体的检测线、包被副流感病毒3型单克隆抗体的检测线、包被肺炎支原体单克隆抗体的检测线、包被肺炎衣原体单克隆抗体的检测线、包被嗜肺军团菌单克隆抗体的检测线和包被A群链球菌单克隆抗体的检测线。

2.如权利要求1所述的呼吸道病原体抗原检测的试剂盒，其特征在于，所述生物素标记的混合单克隆抗体试剂包括生物素标记的呼吸道合胞病毒单克隆抗体、生物素标记的腺病毒单克隆抗体、生物素标记的流感病毒A型单克隆抗体、生物素标记的流感病毒B型单克隆抗体、生物素标记的副流感病毒1型单克隆抗体、生物素标记的副流感病毒2型单克隆抗体、生物素标记的副流感病毒3型单克隆抗体、生物素标记的肺炎支原体单克隆抗体、生物素标记的肺炎衣原体单克隆抗体、生物素标记的嗜肺军团菌单克隆抗体和生物素标记的A群链球菌单克隆抗体。

3.如权利要求1所述的呼吸道病原体抗原检测的试剂盒，其特征在于，所述质控区设有包被羊抗鼠IgG多克隆抗体的质控线。

4.如权利要求3所述的呼吸道病原体抗原检测的试剂盒，其特征在于，所述呼吸道病原体抗原检测膜条在沿长度方向依次设有包被羊抗鼠IgG多克隆抗体的质控线、包被呼吸道合胞病毒单克隆抗体的检测线、包被腺病毒单克隆抗体的检测线、包被流感病毒A型单克隆抗体的检测线、包被流感病毒B型单克隆抗体的检测线、包被副流感病毒1型单克隆抗体的检测线、包被副流感病毒2型单克隆抗体的检测线、包被副流感病毒3型单克隆抗体的检测线、包被肺炎支原体单克隆抗体的检测线、包被肺炎衣原体单克隆抗体的检测线、包被嗜肺军团菌单克隆抗体的检测线和包被A群链球菌单克隆抗体的检测线。

5.如权利要求4所述的呼吸道病原体抗原检测的试剂盒，其特征在于，所述各个检测线相互平行且相邻检测线之间间隔相等，所述质控线与所述各个检测线相互平行，所述质控线和所述包被呼吸道合胞病毒单克隆抗体的检测线之间的间隔与所述各个检测线之间的间隔相等。

6.如权利要求1所述的呼吸道病原体抗原检测的试剂盒，其特征在于，所述呼吸道病原体抗原检测膜条为孔径大小是0.22μm的多孔硝酸纤维素膜，所述呼吸道病原体抗原检测膜条的长度为70-90mm，宽度为2.0mm-5.0mm。

7.如权利要求1所述的呼吸道病原体抗原检测的试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素为碱性磷酸酶标记的链霉亲和素；所述样本稀释液含有三羟甲基氨基甲烷缓冲液；所述显色底物含有5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸盐与氯化硝基四氮唑蓝的混合物；所述浓缩洗涤液含有20倍浓缩的三羟甲基氨基甲烷缓冲液。

8.如权利要求1所述的呼吸道病原体抗原检测的试剂盒，其特征在于，所述反应槽呈凹槽状，用于检测时放置所述呼吸道病原体抗原检测膜条。

9.如权利要求1所述的呼吸道病原体抗原检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒在检测过程中的反应温度为37℃恒温。

10.如权利要求1-9任一项所述的呼吸道病原体抗原检测的试剂盒的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)检测前准备：将用于呼吸道病原体抗原检测的试剂盒和待测样本平衡至室温，将所述已平衡至室温的待测样本按预设的比例用样本稀释液进行稀释，获得待测稀释样本；将呼吸道病原体抗原检测膜条放入反应槽中；将浓缩洗涤液按照预设的比例稀释，获得工作洗涤液；

(2)孵育待测稀释样本：将所述待测稀释样本加入到所述反应槽中，所述待测稀释样本与所述呼吸道病原体抗原检测膜条上包被的羊抗鼠IgG多克隆抗体、呼吸道合胞病毒单克隆抗体、腺病毒单克隆抗体、流感病毒A型单克隆抗体、流感病毒B型单克隆抗体、副流感病毒1型单克隆抗体、副流感病毒2型单克隆抗体、副流感病毒3型单克隆抗体、肺炎支原体单克隆抗体、肺炎衣原体单克隆抗体、嗜肺军团菌单克隆抗体和A群链球菌单克隆抗体于37℃恒温孵育进行反应，获得检测膜条A；

(3)洗涤检测膜条A：倒掉所述反应槽内的所述待测稀释样本，加入所述工作洗涤液洗涤检测膜条A1min，倒掉所述工作洗涤液，反复冲洗3次，获得检测膜条B；

(4)孵育检测膜条B：将生物素标记的混合单克隆抗体加入到所述反应槽中，所述生物素标记的混合单克隆抗体与所述检测膜条B于37℃恒温孵育进行反应，获得检测膜条C；

(5)洗涤检测膜条C：倒掉反应槽内的所述生物素标记的混合单克隆抗体，加入所述工作洗涤液洗涤检测膜条C 1min，倒掉所述工作洗涤液，反复冲洗3次，获得检测膜条D；

(6)链霉亲和素结合：将链霉亲和素加入到所述反应槽中，所述链霉亲和素与所述检测膜条D于37℃恒温孵育进行反应，获得检测膜条E；

(7)洗涤检测膜条E：倒掉反应槽内的所述链霉亲和素，加入所述工作洗涤液洗涤检测膜条E 1min，倒掉所述工作洗涤液，反复冲洗3次，获得检测膜条F；

(8)显色检测膜条F：将显色底物试剂加入到所述反应槽中，所述显色底物试剂与所述检测膜条F于37℃恒温孵育进行反应，获得检测膜条G；

(9)倒掉所述反应槽内所述显色底物试剂，加入蒸馏水洗涤检测膜条G，倒掉后获得检测膜条H。