CN108034634A - 一种从经血中分离宫内膜间充质干细胞的方法 - Google Patents
一种从经血中分离宫内膜间充质干细胞的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108034634A CN108034634A CN201711371272.2A CN201711371272A CN108034634A CN 108034634 A CN108034634 A CN 108034634A CN 201711371272 A CN201711371272 A CN 201711371272A CN 108034634 A CN108034634 A CN 108034634A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- cell
- precipitation
- enmscs
- mescenchymal stem
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 33
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 15
- 210000004696 endometrium Anatomy 0.000 title claims abstract description 12
- 210000004914 menses Anatomy 0.000 title claims description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 33
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims abstract description 27
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 14
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 13
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 13
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims abstract description 6
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 28
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 28
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 14
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 8
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 7
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 7
- 239000012930 cell culture fluid Substances 0.000 claims description 7
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000005906 menstruation Effects 0.000 claims 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 abstract description 12
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 12
- 230000002175 menstrual effect Effects 0.000 abstract description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 4
- 206010021703 Indifference Diseases 0.000 abstract description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 abstract description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 abstract 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 4
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000004271 bone marrow stromal cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 210000003716 mesoderm Anatomy 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 206010019668 Hepatic fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 229920001612 Hydroxyethyl starch Polymers 0.000 description 1
- 206010069351 acute lung injury Diseases 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 239000002458 cell surface marker Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 230000004217 heart function Effects 0.000 description 1
- 229940050526 hydroxyethylstarch Drugs 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 230000036560 skin regeneration Effects 0.000 description 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0662—Stem cells
- C12N5/0668—Mesenchymal stem cells from other natural sources
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2509/00—Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明提供了一种从月经血中快速高效分离宫内膜间充质干细胞的方法，所述方法为：收集月经血离心除去上层血浆，沉淀a中加入溶液Ⅰ，迅速混匀后，静置1～3分钟，而后加入溶液Ⅱ，混匀后离心，去上清液，获得的沉淀b用培养液悬浮，接种至细胞培养瓶中，48h后换液，除去未贴壁细胞，而后每2～3天换液，长至90％汇合时，消化传代，收集P3代细胞，即为纯化的EnMSCs。利用本发明方法所得EnMSCs在纯度方面与传统方法相比无差异，但本发明所述方法制备时间更短，分离过程耗时不超过15min，本方法所用分离试剂成分简单可控，操作方便，在降低制备成本的同时也提高了安全性。
Description
(一)技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种从月经血中快速高效分离宫内膜间充质干细胞的方法。
(二)背景技术
干细胞是一类具有自我更新与增殖分化能力的细胞，在细胞和组织修复，以及作为基因治疗的载体等方面有巨大的应用价值。间充质干细胞(Mesenchymal stem cells，MSCs)来源广泛、可塑性强，同时拥有易于分离培养、多种因子分泌功能以及免疫调节功能等诸多优点，是目前干细胞领域的研究热点。诸多研究表明MSCs在组织损伤修复和各种疾病治疗方面有良好的应用前景，包括参与骨、软骨和肌腱等组织缺损修复、改善心肌梗死模型的心脏功能、降低急性肺损伤程度、促进糖尿病模型中的葡萄糖调节恢复、降低药物诱导的肝纤维化水平、以及促进神经元再生、皮肤再生和伤口愈合等。
研究发现除了骨髓、脐带、脂肪等组织，月经血中也存在丰富的宫内膜来源间充质干细胞(EnMSCs)，由于其体外增殖能力强(可增殖390次，传代50次)，分化潜能大，免疫原性低，生长因子分泌速率高等优点而受到再生医学研究领域的关注。目前EnMSCs分离主要利用淋巴细胞分离液、羟乙基淀粉等除去经血中红细胞，获得有核细胞，并进一步通过贴壁培养方法获得，分离过程耗时较长，所用试剂成分复杂。因此，进一步研究和开发高效的EnMSCs分离技术，缩短分离时间、减少外源引入试剂成分、降低分离成本，对于促进EnMSCs制备的产业化和提高EnMSCs应用安全性具有重要意义。
(三)发明内容
本发明目的是提供一种从月经血中快速高效分离EnMSCs的方法。
本发明采用的技术方案为：
本发明提供一种从经血中快速高效分离宫内膜间充质干细胞的方法，所述方法为：收集月经血，离心(优选1000rpm离心3min)除去上层血浆，获得沉淀a；向沉淀a中加入溶液Ⅰ，迅速混匀后，静置1-3min，而后加入溶液Ⅱ，混匀后，离心(优选1000rpm离心5min)去上清液，获得沉淀b；将沉淀b用细胞培养液悬浮，于37℃，含5％CO2培养箱中培养，48h后倾倒除去未贴壁细胞，换新鲜细胞培养液，而后每2～3天换液，待细胞长至90％汇合时，消化传代，收集第3代细胞，即为宫内膜间充质干细胞(EnMSCs)；所述溶液Ⅰ为(1～3)g/L的NaCl水溶液；所述溶液Ⅱ为(15～17)g/L的NaCl水溶液；所述细胞培养液组成为：含体积浓度2％的血清替代物(购自PALL公司)的MEM alpha基础培养液(购自Invitrogen公司)。
进一步，所述溶液Ⅰ与溶液Ⅱ体积比为1:1。
进一步，所述沉淀b用细胞培养液悬浮后，以2×105/cm2密度接种至25cm2塑料细胞培养瓶中。
进一步，所述溶液Ⅰ与沉淀a的体积比为3～5：1，优选4：1。
进一步，所述溶液Ⅰ为2g/L的NaCl水溶液，去离子水配制，高压灭菌，NaCl粉剂可由市购获得。
进一步，所述溶液Ⅱ为16g/L的NaCl水溶液，去离子水配制，高压灭菌，NaCl粉剂可由市购获得。
本发明所述沉淀a和沉淀b均为沉淀，为了区分不同步骤获得的沉淀不同而命名，字母本身没有含义。
本发明NaCl粉剂可由市购获得。
本发明所述方法按如下步骤进行：将月经血1000rpm离心3min，去除上层血浆后，获得沉淀a；向沉淀a中加入溶液Ⅰ，充分混匀后，静置1～3min，加入溶液Ⅱ，迅速混匀，而后1000rpm离心5min，去上清液，获得沉淀b；将沉淀b用细胞培养液悬浮，以2*105/cm2密度接种至25cm2塑料细胞培养瓶中，置于37℃、含5％CO2培养箱中培养，48h后倾倒除去未贴壁细胞，换新鲜培养液，而后每2～3天换液，待细胞长至90％汇合时，消化传代，收集P3代细胞，即为宫内膜间充质干细胞。
本发明EnMSCs通过形态学拍照和流式细胞术进行检测。
与现有技术相比，本发明的有益效果主要体现在：本发明所述方法采用成分简单明确的NaCl溶液快速有效去除月经血中红细胞，获得有核细胞，经传代培养后获得纯化的EnMSCs。利用本发明所述方法所得EnMSCs在纯度方面与传统方法相比无差异，但本发明所述方法制备时间更短，分离过程耗时不超过15min，传统方法耗时在30min以上，因而本方法所得细胞活性保持较好，相同代次所得细胞量均明显高于传统方法所得，此外本方法所用分离试剂为NaCl溶液，成分简单可控，操作方便，大大降低了制备成本，并提高了安全性。
(四)附图说明
图1本发明分离获得的EnMSCs形态图。
图2传统方法分离获得的EnMSCs形态图。
(五)具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
实施例1：本发明方法分离EnMSCs，包括以下步骤
a、试剂配制：
溶液Ⅰ：NaCl粉剂可由市购获得，采用去离子水将其溶解，使得浓度为0.2g/100ml，再行高压灭菌。冷却至室温方可使用；
溶液Ⅱ：NaCl粉剂可由市购获得，采用去离子水将其溶解，使得浓度为1.6g/100ml，再行高压灭菌。冷却至室温方可使用；
b、将20ml月经血1000rpm离心3min，去除上层血浆后，获得细胞沉淀a；向5ml细胞沉淀a中加入20ml溶液Ⅰ，充分混匀后，静置1～3min，加入20ml溶液Ⅱ，迅速混匀，而后1000rpm离心5min，去上清液，获得细胞沉淀b。
c、细胞沉淀b用含2％体积浓度血清替代物(购自PALL公司)的MEM-alpha培养基(购自Invitrogen公司)悬浮，同时取少量悬液通过全自动血液分析仪进行计数，最后将有核细胞调整密度后以2*105/cm2密度接种至25cm2塑料细胞培养瓶中，置于37℃、饱和湿度、含5％CO2培养箱中培养，48h后倾倒除去未贴壁细胞，换新鲜培养液，而后每2～3天换液，待细胞长至90％汇合时，消化传代，P3代细胞收集鉴定，即为宫内膜间充质干细胞(EnMSCs)。细胞培养情况见表1。
实施例2：传统方法分离EnMSCs，包括以下步骤
a、20ml经血1000rpm离心3min，去除上层血浆后，获得细胞沉淀a；向5ml细胞沉淀a中加入10ml生理盐水并充分混匀，获得稀释血样；
b、取干净离心管，转移15ml人淋巴细胞分离液(购自达科为生物技术公司)至50ml离心管中；
c、铺层加样：将15ml步骤a中的稀释血样加至步骤b中人淋巴细胞分离液的液面上，600g离心20min；提取单个核细胞：离心完毕后，离心管内出现明显的分层，由下到上依次为红细胞粒细胞层、分离液层、单个核细胞层和血浆层；
d、小心吸取步骤c中得到的雾状单个核细胞层，并加入生理盐水以1000rpm离心5min，弃上清，获得细胞沉淀。
e、步骤d获得的细胞沉淀用含2％体积浓度血清替代物(购自PALL公司)的MEM-alpha培养基(购自Invitrogen公司)悬浮，同时取少量悬液通过全自动血液分析仪进行计数，最后将有核细胞调整密度后以2*105/cm2密度接种至25cm2塑料细胞培养瓶中，置于37℃、饱和湿度、含5％CO2培养箱中培养，48h后倾倒除去未贴壁细胞，换新鲜培养液，而后每2～3天换液，待细胞长至90％汇合时，消化传代，P3代细胞收集鉴定，即为宫内膜间充质干细胞(EnMSCs)。细胞培养情况见表1。
表1本发明和传统方法所得细胞培养情况
实施例3：两种方法所得EnMSCs的流式鉴定
取实施例2传统方法和实施例1方法获得的第3代EnMSCs各1.0×106，分别均匀分装成9管，离心后用PBS重悬至200μl，洗涤2次。离心后留1管做空白，表型标记按每管一个标记进行添加(抗体分别为小鼠抗人CD14-FITC、CD19-PE、CD34-PE、CD45-PE、HLA-DR-FITC、CD73-PE、CD90-PE和CD105-PE)。暗室孵育30min，离心后洗涤2次，然后离心后加200μl PBS重悬，流式细胞仪测定。
表3两种方法所得EnMSCs的流式鉴定结果比较
综上结果表明，本发明方法与传统方法相比较：(1)利用本方法所得EnMSCs的纯度与传统方法所得基本一致，皆符合间充质干细胞表面标志物鉴定标准(DB33/T 2030-2017)；(2)本方法中细胞原代制备所需时间更短，分离过程耗时不超过15min，传统方法分离耗时30min以上；(3)本发明方法所得细胞活性保持较好，扩增不同代次所得细胞数量均明显高于传统方法所得。
最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。
Claims (6)
1.一种从经血中分离宫内膜间充质干细胞的方法，其特征在于所述方法为：收集月经血，离心除去上层血浆，获得沉淀a；向沉淀a中加入溶液Ⅰ，迅速混匀后，静置1-3min，而后加入溶液Ⅱ，混匀后，离心去上清液，获得沉淀b；将沉淀b用细胞培养液悬浮，于37℃，含5％CO2培养箱中培养，48h后倾倒除去未贴壁细胞，换新鲜细胞培养液，而后每2～3天换液，待细胞长至90％汇合时，消化传代，收集第3代细胞，即为宫内膜间充质干细胞；所述溶液Ⅰ为1～3g/L的NaCl水溶液；所述溶液Ⅱ为15～17g/L的NaCl水溶液；所述细胞培养液组成为：添加体积浓度2％血清替代物的a-MEM基础培养基。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于溶液Ⅰ与溶液Ⅱ体积比为1:1。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于沉淀b用细胞培养液悬浮后，以2×105/cm2密度接种至25cm2塑料细胞培养瓶中。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述溶液Ⅰ与沉淀a的体积比为3～5：1。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于溶液Ⅰ为2g/L的NaCl水溶液。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于溶液Ⅱ为16g/L的NaCl水溶液。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201711371272.2A CN108034634B (zh) | 2017-12-19 | 2017-12-19 | 一种从经血中分离宫内膜间充质干细胞的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201711371272.2A CN108034634B (zh) | 2017-12-19 | 2017-12-19 | 一种从经血中分离宫内膜间充质干细胞的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108034634A true CN108034634A (zh) | 2018-05-15 |
| CN108034634B CN108034634B (zh) | 2021-01-12 |
Family
ID=62099788
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201711371272.2A Active CN108034634B (zh) | 2017-12-19 | 2017-12-19 | 一种从经血中分离宫内膜间充质干细胞的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN108034634B (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109182263A (zh) * | 2018-09-20 | 2019-01-11 | 浙江卫未生物医药科技有限公司 | 一种用茶皂素溶解月经血红细胞分离宫膜间充质干细胞的方法 |
| WO2021197459A1 (zh) * | 2020-04-03 | 2021-10-07 | 上海我武干细胞科技有限公司 | 从人经血中获得宫内膜间充质干细胞的方法 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102154203B (zh) * | 2010-04-13 | 2013-05-08 | 杭州易文赛生物技术有限公司 | 宫内膜干细胞定向诱导胰岛素分泌细胞的方法 |
| CN103966162B (zh) * | 2014-05-29 | 2016-07-06 | 成都清科生物科技有限公司 | 一种经血来源间充质干细胞分离方法 |
-
2017
- 2017-12-19 CN CN201711371272.2A patent/CN108034634B/zh active Active
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109182263A (zh) * | 2018-09-20 | 2019-01-11 | 浙江卫未生物医药科技有限公司 | 一种用茶皂素溶解月经血红细胞分离宫膜间充质干细胞的方法 |
| WO2021197459A1 (zh) * | 2020-04-03 | 2021-10-07 | 上海我武干细胞科技有限公司 | 从人经血中获得宫内膜间充质干细胞的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN108034634B (zh) | 2021-01-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105861430B (zh) | 一种外泌体、外泌体的制备方法及其在制备治疗脓毒症药物或者制剂中的应用 | |
| CN101638637B (zh) | 人类骨髓、脐带血、外周血干细胞分离试剂盒及干细胞分离方法 | |
| CN104630144B (zh) | 一种脐血间充质干细胞的分离及培养方法 | |
| CN109880797A (zh) | 一种制备人脐带间充质干细胞外泌体的方法 | |
| CN107475190B (zh) | 一种脂肪svf细胞临床级高效制备和冻存的方法及其用途 | |
| CN103330720B (zh) | 一种混合干细胞注射剂及其制备方法 | |
| CN104450611B (zh) | 一种人羊膜间充质干细胞原代分离及培养方法 | |
| CN109251889A (zh) | 一种移植用牙髓间充质干细胞微球的制备体系 | |
| CN104762257B (zh) | 一种从脐带制备间充质干细胞的方法 | |
| CN106754668A (zh) | 一种干细胞培养液及注射液 | |
| CN108300690A (zh) | 一种脂肪间充质干细胞的分离培养方法和无血清培养基 | |
| CN109893541B (zh) | 经血干细胞来源的外泌体在制备治疗宫腔粘连的药物中的应用 | |
| CN105532647A (zh) | 经血保存液及其应用、经血源宫内膜干细胞的分离培养方法 | |
| CN110564675A (zh) | 一种毛囊干细胞的分离提取方法 | |
| CN101831403B (zh) | 体外扩增人脐带胎盘间充质干细胞的方法 | |
| CN105624099A (zh) | 经血源宫内膜干细胞的分离培养方法 | |
| CN108034634A (zh) | 一种从经血中分离宫内膜间充质干细胞的方法 | |
| CN109182263A (zh) | 一种用茶皂素溶解月经血红细胞分离宫膜间充质干细胞的方法 | |
| CN104726401A (zh) | 一种利用胎盘间充质干细胞提高脐血间充质干细胞培养成功率的方法 | |
| CN116474000B (zh) | 脐带间充质干细胞制剂、制备方法及其在治疗膝骨关节炎中的应用 | |
| CN1746297A (zh) | 胎盘来源间充质干细胞及其制备 | |
| CN102250839A (zh) | 一种通用型细胞处理试剂盒及其应用方法 | |
| CN104630135A (zh) | 大规模制备肝干细胞的方法与用途 | |
| CN104099296B (zh) | 一种兔脐带间充质干细胞的制备方法 | |
| CN105670991A (zh) | 人类骨髓细胞处理试剂盒及细胞处理方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: A method for isolating endometrial mesenchymal stem cells from menstrual blood Effective date of registration: 20231115 Granted publication date: 20210112 Pledgee: Hangzhou branch of Bank of Nanjing Co.,Ltd. Pledgor: HANGZHOU S-EVANS BIOSCIENCES, Ltd. Registration number: Y2023980065713 |
|
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |