CN108027359A - 血液检查试剂盒、其部件及它们的制造方法 - Google Patents

Abstract

本发明的课题在于使用恒久性地存在于血液中的标准成分，以高精度进行包含于微量的血液样本中的对象成分的分析。本发明提供一种血液检查试剂盒，其包含：稀释液，用于稀释血液样本；及部件，选自包括容纳有所述稀释液的第一容纳器具、用于从以所述稀释液稀释后的血液样本中分离并回收血浆的分离器具、用于保持所述分离器具的保持器具、用于容纳所回收的血浆的第二容纳器具及用于将所容纳的血浆维持在第二容纳器具内的密封器具的组，所述血液检查试剂盒使用恒久性地存在于血液中的标准成分来分析血液样本中的对象成分的浓度，所述血液检查试剂盒的特征在于，规定了可包含于所述稀释液中的源于所述部件的所述标准成分的量。

Description

血液检查试剂盒、其部件及它们的制造方法

技术领域

本发明涉及一种用于分析微量的血液样本中的对象成分的血液检查试剂盒、用于在试剂盒中使用的部件及它们的制造方法。

背景技术

通常，采血中有：普通采血，医生等某些有资格人员使用注射器从静脉采集血液；及自行采血，检查对象将采血针刺入到自身的手指等来采集血液。

通过普通采血而采集的血液，以被密封在采集容器中的状态搬送到医疗机构或检查机构，在那里进行检查。在不分离出血球和血浆而搬送血液的情况下，在医疗机构或检查机构，通过离心分离机将血液分离成血球和血浆之后进行检查。并且，在检查对象进行的自行采血中，采集后的血液通过分离膜而分离成血球和血浆，以该分离的状态被输送到检查场所，在那里进行检查。

专利文献1中记载有通过自行采血而采集的血液样本的检查方法。具体而言，记载有包括如下工序的活体试样中的应定量成分的定量方法：1)制备包括含有未定量容量而采集的应定量成分的未知容量的活体试样和含有一定量的指示物的一定量的水性溶液的定量用试样的工序；2)由含有一定量的指示物的一定量的水性溶液中的指示物浓度(C₁)和定量用试样中的指示物的浓度(C₂)来求出活体试样的稀释倍率(a)的工序；3)求出定量用试样中的应定量成分的浓度(Y)的工序；及4)根据由上述2)求出的活体试样稀释倍率(a)和由上述3)求出的定量用试样中的应定量物质的浓度(Y)来确定活体试样中的应定量成分的工序。

在专利文献2中记载有如下定量分析法：测定样本中的分析对象成分量，进而，测定除此以外的原本恒久性地存在于样本中的标准成分的量，由该标准成分的量和样本中的标准成分的已知浓度来确定样本的量，由该样本量和分析对象成分量来确定样本中的分析对象成分的浓度。

并且，在专利文献3中记载有如下方法：使用血液稀释定量器具，从人和动物采集微量血液，将其原样或者在稀释之后将一定量供给到其他机器和容器，或者直接供给到试剂。而且，在专利文献4中记载有如下方法：利用稀释用水溶液中的指示物的吸光度来对生物学的试样中的应定量成分的浓度进行定量。

目前，在市售中的血液检查试剂盒中，采用的是使用如在专利文献1中记载的指示物，所谓的内部标准物质的方法。

以往技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2003-161729号公报

专利文献2：日本特开2001-330603号公报

专利文献3：日本特开2009-122082号公报

专利文献4：日本特开2009-109196号公报

发明内容

发明要解决的技术课题

在专利文献1中记载的方法中，血液样本为微量的情况下，需要提高对血液样本量的稀释液的比例。然而，该情况下，由于在稀释血液样本前后稀释液的体积变化率非常小，因此内部标准物质的浓度的变化率小，存在测定值的重复再现性降低的问题。

在专利文献2中，将健全者的总血量约100μL滴加于多孔质膜，分离出血球而展开了血清之后，添加150μL的生理等渗PBS(Phosphate-buffered saline(磷酸盐缓冲盐水)：pH7.4)，将所得到的液体进行离心分离而得到的上清液作为分析试样进行了分析，但关于小于100μL的采血却未记载。

在专利文献3的方法中，用微量吸移管准确地采集10μL的血液量进行了分析，但不习惯于采血的患者进行采集的情况下，难以准确地采集一定量，通过包括误差的采血而进行了检查的情况下，其结果，在测定值中包括误差。

专利文献4中所记载的测定方法是稀释倍率为10倍左右的测定，在进一步提高稀释倍率而充分地确保稀释血液量的情况下，与专利文献1同样，存在测定值的重复再现性降低的问题。

如上所述，关于使用微量的血液样本的情况，正在期待测定值的重复再现性高的血液分析方法。本发明人等认为，为了以高精度进行分析，若使用以往提出的内部标准物质则并不充分，并对使用外部标准物质的方法进行了研究。

本发明的目的在于提供一种血液检查试剂盒，其在作为用缓冲液来稀释微量血液并对成分进行定量分析的方法，即，在使用恒久性地存在于血液中的标准成分来分析血液样本中的对象成分的浓度的方法中，通过规定从血液检查试剂盒的部件溶出到缓冲液中的恒久性地存在于血液中的标准成分浓度，由此，例如以在专利文献1及专利文献2的现有技术中没有的精度来准确地求出稀释倍率，用于对成分进行定量分析。并且，还能够提供一种血液检查试剂盒，其通过并用使用内部标准来求出稀释倍率的方法而进一步提高精度。

用于解决技术课题的手段

本发明人等为了解决上述课题而经过深入研究的结果，发现在用稀释液来稀释所采集的血液样本，使用恒久性地存在于血液中的标准成分的标准值来确定稀释倍率，分析血液样本中的对象成分的浓度的血液分析方法中，通过将源于部件的上述标准成分的量抑制在一定量以下而能够解决上述课题，并完成了本发明。本发明提供以下内容。

[1]一种血液检查试剂盒，其包含：稀释液，用于稀释血液样本；及部件，选自包括容纳有上述稀释液的第一容纳器具、用于从通过上述稀释液而被稀释的血液样本中分离并回收血浆的分离器具、用于保持上述分离器具的保持器具、用于容纳所回收的血浆的第二容纳器具及用于将所容纳的血浆维持在第二容纳器具内的密封器具的组，所述血液检查试剂盒用于使用恒久性地存在于血液中的标准成分来分析血液样本中的对象成分的浓度，所述血液检查试剂盒的特征在于，

规定了可包含于上述稀释液中的源于上述部件的上述标准成分的量。

[2]根据1所述的血液检查试剂盒，其中，可包含于上述稀释液中的源于上述部件的上述标准成分的量为稀释液的量的0.5质量％以下。

[3]根据1或2所述的血液检查试剂盒，其中，上述稀释液的容量为血浆的容量的15倍以下。

[4]根据1至3中任一项所述的血液检查试剂盒，其中，恒久性地存在于血液中的上述标准成分是钠离子或氯离子。

[5]根据1至4中任一项所述的血液检查试剂盒，其中，恒久性地存在于血液中的上述标准成分是钠离子或氯离子和恒久性地存在于血液中的另一标准成分。

[6]根据5所述的血液检查试剂盒，其中，上述另一标准成分是总蛋白质或白蛋白。

[7]根据1至6中任一项所述的血液检查试剂盒，其中，使用恒久性地存在于血液中的另一标准成分，验证上述血液样本中的对象成分的浓度的分析。

[8]根据1至7中任一项所述的血液检查试剂盒，其中，上述血液检查试剂盒所具备的部件包括用于从通过上述稀释液而被稀释的血液样本中回收血浆的分离器具。

[9]根据1至8中任一项所述的血液检查试剂盒，其中，上述稀释液不包含恒久性地存在于血液中的标准成分。

[10]根据1至9中任一项所述的血液检查试剂盒，其中，上述稀释液包含：选自包括2-氨基-2-甲基-1-丙醇、2-乙基氨基乙醇、N-甲基-D-葡糖胺、二乙醇胺及三乙醇胺的组中的氨基醇化合物；及选自包括也称作HEPES的2-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基]乙烷磺酸、也称作TES的N-三(羟甲基)甲基-2-氨基乙烷磺酸，也称作MOPS的3-吗啉代丙磺酸及也称作BES的N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙烷磺酸的组中的缓冲剂。

[11]根据1至10中任一项所述的血液检查试剂盒，其中，上述稀释液还含有不存在于血液中的标准成分。

[12]根据11所述的血液检查试剂盒，其中，不存在于血液中的标准成分是锂离子或3-甘油磷酸。

[13]一种部件，其用于在1至12中任一项所述的血液检查试剂盒中使用。

[14]根据13所述的部件，其中，部件是选自包括容纳有上述稀释液的第一容纳器具、用于从以稀释液稀释后的血液样本中分离并回收血浆的分离器具、用于保持上述分离器具的保持器具、用于容纳所回收的血浆的第二容纳器具及用于将所容纳的血浆维持在第二容纳器具内的密封器具的组中的部件。

[15]一种制造方法，其为包括在有效地去除恒久性地存在于血液中的标准成分的条件下清洗部件的工序的、1至12中任一项所述的血液检查试剂盒的制造方法，或者13或14所述的部件的制造方法。

[16]根据15所述的制造方法，其中，上述条件是使用电导率为1μS/cm以下的水。发明效果

根据本发明的血液检查试剂盒及其部件，能够使用恒久性地存在于血液中的标准成分来以高精度进行血液样本中的对象成分的浓度的分析。

根据本发明的制造方法，能够提供一种能够以高精度进行上述分析的血液检查试剂盒及其部件。

附图说明

图1是本发明的实施方式所涉及的血液检查试剂盒的剖视图。

图2是算出对稀释液的钠离子容许溶出浓度(相对于稀释液的重量％)的结果的例子。

具体实施方式

以下，对本发明的实施方式进行说明。另外，用X～Y来表示的范围包括上限X和下限Y的值。有时将恒久性地存在于血液中的标准成分称作外部标准物质或外部标准。并且，有时将不存在于血液中的标准成分称作内部标准物质或内部标准。

作为采集微量的血液的方法，在日本特开平10-104226号公报中公开有使用滤纸来进行血液分析的方法。并且，在专利文献2中公开有使用血液保持性高的多孔质材料来代替滤纸的方法。这些方法中记载有：由于用缓冲液等来提取被原材料所吸收的血液成分并进行测定，因此将恒久性地存在于血液中的外部标准物质即钠离子、氯离子、钙离子及蛋白质等，作为估算将血液进行溶出并再溶解时的基于缓冲液的稀释率的基准物质而使用。然而，这些方法中，若血液的采集量为多种，且导致所采集的血液的稀释率变高，则之后的分析精度下降，结果产生波动，有可能未能充分保证为了暂且使血液凝聚并固化而成为分析对象的成分的稳定性。并且，从干燥的试样中提取活体成分的缓冲液，为了pH调整和活体成分稳定化而需要利用添加了NaOH和NaCl、HCl的缓冲液。因此存在的问题是，在将试样的成分中以比较高的浓度存在、具有恒定性、个体间差异少的钠离子和氯离子的浓度作为外部标准来补正被稀释的原来的其它活体成分浓度时无法利用。

另一方面，作为用含有内部标准的缓冲液来稀释所采集的微量血液，并由内部标准物质的稀释倍数对稀释血浆中所存在的未知量的成分量进行定量的方法，公开有在专利文献1中记载的方法。作为内部标准物质，利用N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠盐(HSDA)或者酸性蓝9(艳蓝FCF)，并使用用于稳定地保持血液的缓冲剂或防腐剂。这种配方实现了通过不使血液凝固而维持其成分的稳定性，但仍产生血液采集量的偏差，在采集量少的情况下，稀释后的内部标准物质的稀释率减小，以及血液成分量本身会降低，因此存在检查精度的可靠性降低的问题。并且，用缓冲液进行稀释的方法中，活体成分被保存在pH7.4的生理条件的缓冲液中，且输送中的稳定性也优异，但根据试样的内部标准对内部标准添加缓冲液的稀释率小，存在添加少量的试样就容易产生测定误差的问题。

而且，在这些现有技术的实施例中，在进行提取的缓冲液中，由于磷酸缓冲生理盐水稳定地保持活体成分的性能优异而被利用，但磷酸缓冲生理盐水中包含有钠离子和氯离子。因此，无法将钠离子和氯离子作为外部标准而利用，而利用钙离子、蛋白质等。从而，为了以高精度进行微量血液中的血液检查，如现有技术中所记载，使用补正稀释率的外部标准物质或者使用以往所提出的含有内部标准物质的缓冲液就无法充分确保检查精度。

并且，虽然是血液中的恒定性物质，但是例如在钠离子中具有正常值134～146mmol/L分布的宽度，因此需要算出更准确的稀释倍率。若稀释倍率的精度降低，则会对检查精度带来不良影响，导致损害检查可靠性的风险提高。尤其，在存在一些由从构成试剂盒的部件溶出到缓冲液中的外部标准物质引起的污染(所谓的污染物)的情况下，若血液采集量或多或少，则导致对计算污染物的稀释倍率带来的影响程度不同。在专利文献2中根本未提及到有关如下情况：使从构成这种试剂盒的部件溶出到缓冲液中的外部标准物质的污染物对稀释倍率计算所带来的影响程度恒定。

并且，在专利文献1中，虽然有关于内部标准的记载，却没有关于并用外部标准的记载。从而，没有关于外部标准的污染物的记载，根本未提及到用于防止污染物的具体的方式。

本发明的目的在于提供一种血液检查试剂盒，其为用于由缓冲液来稀释微量血液样本而分析对象成分的浓度的试剂盒，当使用恒久性地存在于血液中的外部标准来分析对照成分的分析时，能够以现有技术中没有的精度来求出稀释倍率。因此，作为解决方法，规定了可包含于稀释液中的源于上述部件的上述标准成分的量。并且，在优选方式中，不仅使用外部标准，而且还使用内部标准。

根据本发明，在测定血液中的分析对象成分的测定方法中，在患者亲自采集血液的情况下将微量的血液成分放入稀释液中进行了稀释时，通过事先清洗构成将合成树脂(另外，在本说明书中，将塑料以与合成树脂相同的含义而使用。)、玻璃或橡胶作为原材料的试剂盒的部件而尽量抑制从构成试剂盒的部件溶出的是有恒定性的标准成分，由此以非常高的精度来检测源于血液的具有恒定性的标准成分，因此可以实现能够以高精度对分析对象成分进行定量的测定方法、或者使用测定方法的血液检查系统。

并且，还提供一种血液检查试剂盒，其通过并用使用内部标准来求出稀释倍率的方法而可以进一步提高精度。

[1]血液检查试剂盒

本发明的血液检查试剂盒包含：

稀释液，用于稀释血液样本；及

部件，选自包括容纳有上述稀释液的第一容纳器具、用于从通过上述稀释液而被稀释的血液样本中分离并回收血浆的分离器具、用于保持分离器具的保持器具、用于容纳所回收的血浆的第二容纳器具及用于将所容纳的血浆维持在第二容纳器具内的密封器具的组，

用于使用恒久性地存在于血液中的标准成分来分析血液样本中的对象成分的浓度，所述血液检查试剂盒的特征在于，

规定了可包含于上述稀释液中的源于上述部件的上述标准成分的量。

分析血液样本中的对象成分的浓度包括确定对象成分的浓度(即，将对象成分进行定量)，或者确定对象成分的浓度是规定的基准值以上，还是规定的基准值以下，且分析的方式并无特别的限定。

〔采血方法和量〕

本发明的血液检查试剂盒为了采集血液样本而被使用。基于本发明的血液检查试剂盒的血液的采集，可以由对象者本身进行，也可以由医生等有资格人员进行。

作为优选方式，患者本人使用柳叶刀等带刀具的器具对指尖等制造伤口，在皮肤外部采集血液。为了减轻患者的负担，优选降低侵袭性而采集血液，期待在采集血液时能够以无疼痛或疼痛感非常少的状态进行采血，该情况下，优选伤口的深度及大小较小，能够采集的血液也非常少。从而，用本发明的血液检查试剂盒来采集的样本的容量(即，采血量)优选为100μL以下。即使是如此少的患者的采血量，在本发明中也由血液检查试剂盒的部件将可溶出到稀释液中的恒久性地存在于血液中的标准成分浓度规定为较低，并且，作为恒久性地存在于血液中的标准成分，例如，通过使用钠离子或氯离子而可以提供用于以较高的测定精度来测定分析对象物的方法。

〔恒久性地存在于血液中的标准成分〕

如上所述，关于血浆成分的稀释倍率高的稀释血浆的稀释后的对象成分，为了准确地分析在稀释前的血液的血浆中存在的浓度，在由预先存在于稀释液中的物质的浓度的变化率求出的方法中，因浓度变化的比例非常小而测定误差大，并且存在测定的再现性变差的弊端。从而，本发明的血液检查试剂盒是用于使用恒久性地存在于血液中的标准成分来分析血液样本中的对象成分的浓度的血液检查试剂盒。

在此，“使用”标准成分是指根据关于标准成分的标准值(恒定值)来确定用于分析对象成分浓度的稀释倍率。从而，使用恒久性地存在于血液中的标准成分来分析血液样本中的对象成分的浓度，也是根据恒久性地存在于血液中的标准成分的恒定值(标准值)来确定稀释倍率，并分析对象成分的浓度。

恒久性地存在于血液中的标准成分，例如，可以举出钠离子、氯离子、钾离子、镁离子、钙离子、总蛋白质及白蛋白等。血液样本的血清及血浆中所包含的这些标准成分的浓度为如下：钠离子浓度为134～146mmol/L(平均值：142mmol/L)、氯离子浓度为97～107mmol/L(平均值：102mmol/L)、钾离子浓度为3.2～4.8mmol/L(平均值：4.0mmol/L)、镁离子浓度为0.75～1.0mmol/L(平均值：0.9mmol/L)、钙离子浓度为4.2～5.1mmol/L(平均值：4.65mmol/L)、总蛋白质浓度为6.7～8.3g/100mL(平均值：7.5g/100mL)、白蛋白浓度为4.1～5.1g/100mL(平均值：4.6g/100mL)。在本发明中，用于使在为了缓解患者的疼痛感而采集的血液量非常少的情况下的对象成分的测定成为可能，在用稀释液来稀释微量的血液时，需要以高精度测定存在于稀释液中的“恒久性地存在于血液中的标准成分”的浓度。若稀释倍率变高，则原来血液中所存在的成分的稀释液中的浓度降低，根据稀释倍率，在测定浓度时有可能包括测定误差。从而，将微量的血液成分稀释成稀释倍率高时，为了以充分高的精度检测上述标准成分，优选测定在微量的血液中以高浓度存在的标准成分。在本发明中，恒久性地存在于血液样本中的成分中，优选使用以高浓度存在的钠离子(Na⁺)或氯离子(Cl^-)。而且，上述恒久性地存在于上述血液中的标准成分中，最优选测定存在于血液中的量最高的钠离子。钠离子的平均值表示标准值(基准范围的中央值)，该值为142mmol/L，占血浆中的总阳离子的90摩尔％以上。

受检者的血液中血浆成分的占有率以容积的比率计约为55％，但因受检者的盐分摄取量的变化等变动。因此，在使用本发明的试剂盒的情况下，使用恒久性地存在于血浆中的标准成分的标准值来确定血浆的稀释倍率，并使用所确定的稀释倍率来分析血液样本的血浆中的对象成分的浓度。作为确定稀释倍率的方法，由血浆的稀释液中的外部标准物质(例如钠离子等)的测定值(浓度X)和包含于血液样本的血浆中的上述外部标准物质(例如钠离子等)已知浓度值(浓度Y；钠离子的情况下为142mmol/L)来算出血液样本中的血浆成分的稀释倍率(Y/X)，从而能够求出稀释倍率。使用该稀释倍率来测定血浆的稀释液中的对象成分的测定值(浓度Z)，通过在该测定值上乘以稀释倍率而可以测定实质上包含于血液样本的血浆中的分析对象成分的浓度[Z×(Y/X)]。

钠离子浓度及氯离子浓度能够通过例如火焰光度法、玻璃电极法、滴定法、离子选择电极法及酶活性法等而测定。

在钠离子的测定中，半乳糖酶的酶活性因钠离子而被活性化，因此能够使用以几μL来测定通过缓冲液而被稀释的非常低浓度的钠离子(24mmol/L以下)试样的酶的测定方法。该方法能够适用于生物化学/免疫自动分析装置，在为了测定钠离子而不需要另一测定设备的方面效率高又经济。

并且，为了验证规定了源于部件的标准成分的量的血液检查试剂盒是否实际上被使用，而且，血液稀释和血浆回收的方法是否正常地进行，优选独立于血浆中的另一标准成分而另外求出稀释倍率，并确认该值是否与所求出的稀释倍率一致。一致是指在2个测定值(a，b)中，其差值相对于其平均值的比例即|a-b|/{(a+b)/2}×100为20％以下，优选为10％以下，更优选为5％以下。由此，可以验证血液样本中的对象成分的浓度的分析是否正常地进行。在此，作为除了钠离子及氯离子以外的恒久性地存在于血浆中的标准成分的例子，优选选自总蛋白质或白蛋白，更优选为总蛋白质。作为总蛋白质的测定方法，有双缩脲法、紫外吸收法、考马斯亮蓝法(Bradford法)、劳里法、二辛可宁酸法(Bicinchoninic Acid：BCA)法、荧光法等公知的方法，根据测定试样的特性和灵敏度、试样量等，能够适当地选择使用方法。

〔不存在于血液中的标准成分〕

作为优选方式之一，试剂盒用于使用恒久性地存在于血液中的标准成分和不存在于血液中的标准成分来分析血液样本中的对象成分的浓度。

不存在于血液中的标准成分能够添加到试剂盒中的稀释液(进行后述。)中而使用，以成为规定的浓度。作为不存在于血液中的标准成分，能够使用完全不包含于血液样本中的物质，或者即使包含也是极微量的物质。作为不存在于血液中的标准成分，优选使用对血液样本中的对象成分的测定不进行干渉的物质、不会受到血液样本中的活体酶的作用而分解的物质、在稀释中稳定的物质、不透过血球膜且不包含于血球中的物质、不吸附于缓冲液的保存容器上的物质、能够利用以高精度能够测定的检测系统的物质。

作为不存在于血液中的标准成分，优选即使在添加到稀释液的状态下长时间保管也稳定的物质。作为不存在于血液中的标准成分的例子，可以举出3-甘油磷酸，作为碱金属，可以举出Li、Rb、Cs或Fr，而且，作为碱土类金属，可以举出Sr、Ba或Ra，其中，优选Li及3-甘油磷酸。

这些不存在于血液中的标准成分在血液稀释后测定浓度时，通过添加第二试剂而显色，能够由该显色浓度来求出稀释血液中的浓度。例如，至于添加到稀释液中的锂离子的测定，能够利用螯合比色法(卤化卟啉螯合法：全氟-5,10,15,20-四苯基-21H,23H-卟啉)由生物化学自动分析装置以微量的试样容易测定大量的试样。

通过利用用于使用恒久性地存在于血液中的标准成分和不存在于血液中的标准成分来分析血液样本中的对象成分的浓度的血液检查试剂盒，即，通过并用2种标准成分而可以实现可靠性更高的分析。

在并用2种标准成分的方式中，作为恒久性地存在于血液中的标准成分而使用钠离子，作为不存在于血液中的标准成分而使用锂离子，通过利用β-半乳糖酶活性成比例关系的情况的酶活性法来进行钠离子的测定，在通过上述螯合比色法而测定锂离子的情况下，能够由下述式1至4中的任一个式算出血液样本的稀释倍率。

[数学式1]

式1：X＝(A+C)/(B+D)

式2：X＝{(A²+C²)^1/2}/{(B²+D²)^1/2}

式3：X＝a×(B+D)±b

(在此，a及b是系数，预先得到(B+D)和稀释倍率的数据，制作出式3中表示的标准曲线。)

式4：X＝A/B’

(在此，B’＝(A×D)/C。)

上述式中，如下定义A、B、C、D、B’及X。

A：使缓冲液显色时的吸光度

B：添加血浆后的吸光度变化量

C：血浆钠中央值142mmol/L的吸光度

D：稀释血浆后的钠离子浓度下的吸光度

B’：基于由血浆钠的吸光度算出的稀释倍率的、稀释血浆中的不存在于血液中的标准成分的吸光度的补正值

X：血浆稀释倍数

作为求出稀释率时的另一种计算方法也优选如下方式：由使用了均方根法的式5进行计算，在稀释液中的分析对象成分的浓度上乘以由式5算出的稀释率，并分析血液样本成分中的对象成分的浓度。

[数学式2]

式5：X＝[{(A/B)²+(C/D)²}/2]^1/2

血液样本的成分中的对象成分的浓度能够由稀释液中的对象成分的浓度根据上述稀释倍率而算出。

〔稀释液〕

本发明的血液检查试剂盒包含用于稀释所采集的血液样本的稀释液。用于稀释血液样本的稀释液是不含有为了求出稀释倍率而使用的恒久性地存在于血液中的标准成分的稀释液。在本说明书中“不含有”是指“实质上不含有”。在此，“实质上不含有”是指完全不含有求出稀释倍率时所使用的恒定性物质，或者即使含有，也以对稀释了血液样本之后的稀释液的恒定性物质的测定不造成影响的程度的极微量的浓度含有的情况。在作为恒久性地存在于血液中的标准成分而使用钠离子或氯离子的情况下，作为稀释液而使用实质上不含有钠离子或氯离子的稀释液。

在本发明中，在将患者所采集的血液样本进行稀释之后，能够输送到医疗机构或检查机构而分析对象成分的浓度。从采血到分析可能需要长时间，因此，该期间，优选在血液的稀释液中防止对象成分进行分解和改性。健全者的血液的pH通常以pH7.30～7.40程度保持为恒定。从而，为了防止对象成分进行分解和改性，稀释液优选为在pH6.5～pH8.0、优选在pH7.0～pH7.5、进一步优选在pH7.3～pH7.4的pH域具有缓冲作用的缓冲液，稀释液优选为含有抑制pH的变动的缓冲成分缓冲液。

作为缓冲液的种类，已知有乙酸缓冲液(Na)、磷酸缓冲液(Na)、柠檬酸缓冲液(Na)、硼酸缓冲液(Na)、酒石酸缓冲液(Na)、Tris(三(羟甲基)氨基乙烷)缓冲液(Cl)、HEPES([2-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基]乙烷磺酸])缓冲液、磷酸缓冲生理盐水(Na)等。其中，作为pH7.0～pH8.0附近的缓冲液，具代表性的有磷酸缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液。然而，磷酸缓冲液含有磷酸的钠盐，Tris缓冲液的解离pKa为8.08，因此为了使其在pH7.0～pH8.0附近具有缓冲能力，通常，与盐酸组合而进行使用，HEPES的磺酸的解离的pKa为7.55，但为了调整离子强度恒定的缓冲溶液，通常，使用氢氧化钠、氯化钠及HEPES的混合物，由此，它们作为具有将pH保持为恒定的作用的缓冲液是有用的，但在本发明中，由于含有优选作为外部标准物质而使用的物质即钠离子或氯离子，因此不优选适用于本发明。

作为包含于本发明的试剂盒中的稀释液，优选使用不含有钠离子或氯离子的缓冲液。在本发明中使用的稀释液，优选包含：选自包括2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMP)、2-乙基氨基乙醇、N-甲基-D-葡糖胺、二乙醇胺及三乙醇胺的组中的至少1种氨基醇化合物；及选自包括Good's缓冲液(Good's buffer)中pKa为7.4附近的缓冲剂即也称作HEPES的2-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基]乙烷磺酸(pKa＝7.55)、也称作TES的N-三(羟甲基)甲基-2-氨基乙烷磺酸(pKa＝7.50)、也称作MOPS的3-吗啉代丙磺酸(pKa＝7.20)及也称作BES的N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙烷磺酸(pKa＝7.15)的组中的缓冲剂。上述中优选2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMP)与HEPES、TES、MOPS或BES的组合，而且，最优选2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMP)与HEPES的组合。

为了制备上述缓冲液，将氨基醇和Good's缓冲液以1:2～2:1、优选以1:1.5～1.5:1、进一步优选以1:1的浓度比进行混合即可。缓冲液的浓度不受限定，但氨基醇或Good's缓冲液的浓度为0.1～1000mmol/L，优选为1～500mmol/L，进一步优选为10～100mmol/L。

在缓冲液中，以稳定地保持分析对象成分为目的可以含有螯合剂、表面活性剂、抗菌剂、防腐剂、辅酶、糖类等。作为螯合剂，可以举出乙二胺四乙酸(EDTA)盐、柠檬酸盐、草酸盐等。作为表面活性剂，可以举出例如阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、两性表面活性剂或非离子表面活性剂。作为防腐剂，例如可以举出叠氮化钠和抗生物质等。作为辅酶，可以举出磷酸吡哆醛、镁及锌等。作为红血球稳定剂的糖类，甘露糖醇、葡萄糖、低聚糖等。尤其，通过添加抗生物质，能够抑制手指采血时从手指表面混入的一部分细菌的増殖，并能够抑制因细菌而产生的活体成分的分解，从而实现活体成分的稳定化。

这些缓冲液不包含恒久性地存在于血液中的标准成分和内部标准物质，且对测定系统不进行干扰是至关重要的。并且，优选通过这些缓冲液而被稀释的成分在通过生物化学/免疫自动分析装置的各种测定方法中也不会干扰测定，而且，血球也不会溶血或者在37℃下也能够稳定地保存活体成分。

血液样本中使用全部血的情况下，需要用过滤器对稀释血液中的血球成分进行过滤，因此将缓冲液的渗透压设为与血液相等(285mOsm/kg(mOsm/kg为在溶液的水1kg所具有的渗透压，表示离子的毫摩尔数))或血液以上，由此能够防止血球的溶血。渗透压能够通过不影响对象成分的测定、及恒久性地存在于血液中的标准成分的测定的盐类、糖类或缓冲剂等而调整为等渗。

将通过缓冲液而被稀释的血浆钠离子作为恒久性地存在于血液中的标准成分而测定的方法中，有火焰光度法、原子吸光法及离子选择电极法。在本发明中，从手指采集微量的血液并用缓冲液来稀释的试样只有150μL左右，并测定10项以上的生物化学成分和免疫检查项目，因此优选能够以几μL的微量来测定恒久性地存在于血液中的标准成分。并且，由于需要分析大量的试样，因此优选能够适用于市售的生物化学/免疫自动分析装置。

〔稀释液的量、稀释倍率〕

作为血液检查，在检查肝功能、肾功能、新陈代谢等特定的器官、特定的疾病的情况下，获取器官和疾病特有的多个测定对象成分的信息，为了进行器官的状态、生活习惯的预测等，通常，同时进行多个对象成分的分析。例如，为了检查肝的状态，通常，测定ALT(丙氨酸氨基转移酶)、AST(门冬氨酸氨基转移酶)、γ-GTP(γ-谷氨酰转肽酶)、ALP(碱性磷酸酶)、总胆红素、总蛋白质、白蛋白等几种以上成分在血液中的浓度。如此，为了由一个血液样本测定多个对象成分，也考虑到再次测定的可能性而需要一定程度的量的被稀释的血液。从而，作为稀释所采集的血液的稀释液，确保一定程度的量是至关重要的。试剂盒中的稀释液的量优选为血浆的容量的20倍以下(即，稀释倍率为血浆的容量的20倍以下)，并且，更优选为15倍以下。例如，若将采血量设为50μL，则能够计算血浆的容量为28μL，若稀释液为360μL，则稀释倍率成为14倍。另外，若将血球/血浆比设为50/50，则通过将以血浆为基准的情况的稀释倍率设为50/(50+50)，能够概算以血液样本为基准的稀释倍率。试剂盒中的稀释液的量相对于血液样本的容量优选为10倍以下(即，稀释倍率为血液样本的容量的10倍以下)，并且，更优选为7.5倍以下。即，本发明作为实施方式之一而提供一种稀释液的容量为血液样本的容量的7.5倍以下的上述血液检查试剂盒。

〔用于从血液样本的稀释物中分离并回收血浆的分离器具〕

通过本发明的试剂盒而被采集的血液样本有可能以被稀释的状态要经过长时间，直至进行分析。在这期间，例如若引起红血球的溶血，则存在于血球内的物质和酶等在血浆或血清中溶出，有可能对检查结果造成影响，并通过溶出的血红蛋白所具有的吸收，在由分析对象成分的光学吸收等光信息来测定分析对象成分量的情况下有可能造成影响。从而，优选防止溶血。因此，优选将用于从血液样本的稀释物中分离并回收血浆的分离器具包括在试剂盒中的方式。分离器具的优选例为分离膜。分离膜例如能够如下使用：通过对血液样本的稀释液施加压力，由分离膜来捕获血球成分，并使血浆成分通过，从而分离血球并回收血浆成分。该情况下，优选使用抗凝血剂。并且，为了确保测定精度，优选使通过了分离膜的血浆不会向血球侧反流，为此，具体而言，能够将日本特开2003-270239号公报中记载的防反流构件作为试剂盒的构成要件。

〔部件及来自部件的溶出〕

本发明的试剂盒中，可包含于稀释液中的源于血液试剂盒的部件的恒久性地存在于血液中的标准成分的量被规定。可包含于稀释液中的量能够如下求出，即，将成为对象的部件在实际上适合的量的稀释液中暴露一定时间，并通过测定源于部件并包含在稀释液中的标准成分的量而求出。若源于该部件的标准成分的量为对血液样本的稀释率的测定不会造成较大的影响而能够以高精度进行对象成分浓度分析的量，则并无特别的限定。具体而言，恒久性地存在于血液中的标准成分的源于部件的量为稀释液的量的0.5质量％以下，优选为0.4重量％以下，更优选为0.3重量％以下。可包含于稀释液中的源于血液试剂盒的部件的恒久性地存在于血液中的标准成分的量优选为较少，且下限值并无特别的限定。

在血液检查试剂盒中，通常，采集血液的抽吸器中使用纤维棒，该纤维棒中，作为抗凝血剂而使用乙二胺四乙酸(EDTA)钠盐。并且，作为用于分离并回收血浆的器具而使用玻璃过滤器，其中包含有苏打玻璃、碳酸钠等的微量的钠离子。苏打玻璃通过将硅砂(SiO₂)、碳酸钠(Na₂CO₃)、碳酸钙(CaCO₃)进行混合并熔解而可以得到。用于保持玻璃过滤器的垫圈的原材料及用于将所容纳的血浆维持在第二容纳器具内的密封器具只要是橡胶制，则有时作为用于去除蛋白质的NaOH清洗及成型时所使用的脱模剂(硝酸钠、亚硝酸钠等混合物)等的残渣物而包含微量的钠离子。作为塑料(树脂)成型品的部件有时在表面包含微量的Na。这是因为在树脂成型时所使用的脱模剂中含有作为金属元素的锡、锌、钙等及钠。

可以假定这些作为源于试剂盒的钠离子而混入到稀释液中。根据本发明人等的研究，发现了通过使实际上可包含于稀释液中的源于试剂盒的恒久性地存在于血液中的标准成分(优选钠离子或氯离子)的量充分减少，具体而言，由此通过将稀释液中的浓度设为0.5重量％以下，在采血量50μL以上(可推定的稀释倍率为15倍以下)时可获得高精度的稀释倍率再现性。并且，此时，若在稀释液中溶出的钠离子量(并非源于血液的钠离子量，即污染物成分)相对于血浆中的钠离子量优选为±2％以下，则能够以高精度维持稀释倍率的计算。

本发明的血液检查试剂盒具有选自包括采集血液的血液采集器具、容纳有稀释液的第一容纳器具、用于从以稀释液稀释后的血液样本中分离并回收血浆的分离器具、用于保持分离器具的保持器具、用于容纳所回收的血浆的第二容纳器具及用于将所容纳的血浆维持在第二容纳器具内的密封器具的组中的部件的至少一种。作为本发明的血液检查试剂盒的一例，能够具备：用于稀释血液样本的成分的稀释液；容纳有稀释液的第一容纳器具；用于从以稀释液稀释后的血液样本中分离并回收血浆的分离器具；用于保持分离器具的保持器具；用于容纳已回收血浆的第二容纳器具；及用于使已容纳血浆维持在第二容纳器具内的密封器具；在皮肤上制造伤口以使血液渗出到皮肤外部的针或柳叶刀、贴在伤口上的创可贴或消毒部件(例如浸渍异丙醇(70％异丙醇等)或乙醇等的无纺布)、操作说明书等。作为用于从被稀释的血液样本中回收血浆成分的分离器具，优选为分离膜的方式，更优选具有可分离血球成分的细孔的过滤器。

第一容纳器具及第二容纳器具可以将1个器具兼用作第一容纳器具及第二容纳器具，也可以是具备不同的器具的方式。为了使患者或进行稀释倍率的测定和分析对象成分的分析的测定者，可以确认稀释了容纳器具内的血液的稀释液，第一容纳器具及第二容纳器具优选由透明的原材料来制成。

保持分离器具的保持器具，优选为垫圈的方式。并且，作为密封器具，在容纳器具为筒形状的器具等的情况下，能够使用可以盖住开口的顶盖、具有螺旋状槽的盖或者橡胶塞子等。

根据上述结构，对血液和稀释液的混合容器赋予通过稀释液而稀释血液之后立即分离血浆血球的功能，由此能够赋予血液成分的稳定性和排除来自血球细胞的基于溶血的成分的变动的影响且血液采集后的试样的稳定性。

本发明的试剂盒优选为如下试剂盒：即使为100μL以下的采血量，也可以实现能够以较高的测定精度来分析分析对象的方法，且包括记载有即使是100μL以下的较少的采血量，也可以对患者以高精度进行测定等信息的操作说明书。

〔试剂盒的具体例〕

在优选方式之一中，试剂盒包括稀释液、容纳有稀释液的第一容纳器具(也是用于容纳血液样本的稀释液的容纳器具。)、用于从用稀释液来稀释的血液样本中分离并回收血浆的分离器具、用于保持分离器具的保持器具、用于容纳已回收血浆的第二容纳器具及用于使已容纳血浆维持在第二容纳器具内的密封器具，作为具体的器具，能够使用例如日本专利第3597827号公报的图1至图13中所记载的器具。将日本专利第3597827号公报的图1作为本申请的图1而引用。

血液分离器具1具备采血容器2(有时也称作容纳有稀释液的容纳器具、第一容纳器具。也是用于容纳血液样本的稀释液的容纳器具。)、可嵌插于采血容器2中的筒体3(用于容纳已回收血浆的第二容纳器具)、可以盖装于筒体3上的顶盖活塞4、设置于顶盖活塞4的下端的密封盖5(密封器具)，使用之前，如图1所示，采血容器2的上端开口部通过顶盖6隔着密封件7而被封闭。本发明中的用于容纳被稀释的血液样本的容纳器具在图1的结构中对应于采血容器2和筒体3的组合。即，用于容纳被稀释的血液样本的容纳器具可以是1个，也可以是2个以上的组合。

采血容器2以透明的材质制成且呈圆筒状，其上端部在外表面形成有螺纹部8，内表面上突出设置有卡止部9。并且，在采血容器2的下端部形成有倒圆锥状底部10，在底部10的周围形成有圆筒状腿部11。腿部11具有与分析和检查血液时使用的样品杯相同的外径，优选在其下端的对置的位置分别沿铅垂方向形成有狭缝槽12。而且，如图1所示，在采血容器2内也可以预先放入有所需要量例如500mm³的稀释液13。

筒体3由透明的材质制成且呈圆筒状，其上端部上形成有扩径部14。扩径部14经由薄壁部15而与主体部16连接。筒体3的下端部形成有缩径部18，在缩径部18的内表面形成有卡止突起部19。而且，在缩径部18的下端部形成有外锷部20(保持器具)，外锷部20的下端开口部通过过滤膜21(分离器具)而被覆盖，过滤膜21容许血液中的血浆的通过，并阻止血球的通过。

缩径部18的外周装配有硅橡胶制罩22(图1)。

顶盖活塞4由大致呈圆筒状的握持部26、与握持部26为同心且向下方延伸的芯棒部27构成。在握持部26的内侧上端部形成有筒体3的扩径部14可以嵌合的圆筒状的空间28，并且，其下方被螺刻，可以与螺纹螺合。芯棒部27其下端部29形成为销状，在下端部29可装卸地设置有密封盖5(参考图1)。密封盖5为硅橡胶制密封盖。

来自血液样本的稀释物的血浆的分离回收操作，具体而言，如下进行。在容纳稀释液的采血容器2中放入所采集的血液之后，把持采血容器2的上部，一边注意避免产生气泡，一边将血液和稀释液充分地摇晃并混合。接着，将保持过滤膜21的筒体3(防止在血浆、血球分离时因环绕缸体侧面而产生的漏液)以过滤膜位于下方的方式插入到采血容器2中，并且缓慢地以一定的速度将过滤膜下压至采血容器2的底面。此时，血浆通过筒体3的过滤膜向上部上升，而血球残留在采血容器2的下部。之后，将顶盖活塞4缓慢地插入筒体3中，且由密封盖5来防止血浆和血球因反流的混合。

基于上述器具的血液分离方法的详细内容记载于日本专利第3597827号公报的0023～0026段落以及图12及图13中，该内容被引用于本说明书中。

本发明的血液检查试剂盒中所包含的各要件的个数并无特别的限定，可以为1个，也可以是2个以上的多个。

从不易破损、卫生方面及价格等观点，本发明的血液检查试剂盒中所包含的部件的材料优选为合成树脂。可以举出例如聚乙烯、聚丙烯、聚氯乙烯、聚偏氯乙烯、聚苯乙烯、聚乙酸乙烯酯、聚氨酯、聚乙烯对苯二甲酸酯、聚乳酸、丙烯腈丁二烯苯乙烯树脂(ABS树脂)、丙烯腈-苯乙烯树脂(AS树脂)、丙烯酸树脂(PMMA)、聚碳酸酯、硅酮树脂等。

本发明的血液检查试剂盒能够作为将各种部件全部收纳于收纳容器中的方式而提供。

[2]试剂盒及部件的制造方法

本发明还提供一种上述试剂盒及部件的制造方法。本发明的制造方法包括在有效地去除恒久性地存在于血液中的标准成分的条件下清洗部件的工序。

〔部件的清洗工序〕

在本发明的血液检查试剂盒中使用的部件将塑料、玻璃或橡胶作为原材料，但本发明人等发现在包括部件的制造工序的血液检查试剂盒的制造工序中，能够通过规定的方法而更有效地去除从这些部件溶出的恒久性地存在于血液中的标准成分。

有效地去除恒久性地存在于血液中的标准成分的条件，具体而言，是用电导率为1μS/cm以下的纯水来清洗对象部件的工序，优选为使电导率为1μS/cm以下的纯水以喷淋状喷射于对象部件的工序。本发明人等发现，通过这种工序而充分地进行清洗，从而能够使溶出浓度相对于稀释液降低为0.5重量％以下。

另外，从清洗部件的观点考虑，恒久性地存在于血液中的标准成分也优选为在微量的血液中以高浓度存在的钠离子或氯离子。例如，通过相对于钠离子以平均值计为15分之1的钙离子或者80分之1的镁离子来容易去除钠离子或氯离子，直至在分析上没有问题的水平。为了去除钙离子或镁离子，可以用高等级的纯水(例如0.1μS/cm以下)或超纯水(0.06μS/cm以下)来进行清洗，但在成本上不利。

[3]其它

本发明还提供一种使用了本说明书的上述[1]中已说明的结构的试剂盒的血液分析方法。血液分析方法包括：作为对人的医疗行为(医生进行的行为)的方式和不是对人的医疗行为的方式(例如，采血人员为患者自身，且分析人员为除了医生以外的人员的方式、针对非人类动物的方式等)。本发明的血液分析方法可以通过对象者本身采集血液的自行采血而实施，也可以在医生等有资格人员使用注射器来采集血液的普通采血中实施。作为优选的方式，患者本人使用柳叶刀等带刀具的器具对指尖等制造伤口，采集渗出到皮肤外部的血液。

使用了本发明的试剂盒的成为分析对象的活体试样是血液，血液是包括血清或血浆的概念。血液的来源并不限定于人，也可以是除了人以外的动物(非人类动物)即哺乳类、鸟类及鱼类等。作为除了人以外的动物，可以举出例如马、牛、猪、羊、山羊、狗、猫、老鼠、熊、熊猫等。优选活体试样的来源是人。

在使用本发明的试剂盒来进行分析的情况下，分析的对象成分并无限定，血液中所包含的所有物质成为对象。例如可以举出临床诊断中使用的血液中的生物化学检查项目、肿瘤标志和肝炎的标志等各种疾病的标志等，可以举出蛋白质、糖、脂质、低分子化合物等。并且，测定时不仅物质浓度成为对象，而且酶等具有活性的物质的活性也成为对象。各对象成分的分析能够通过公知的方法而进行。

实施例

以下，关于本发明的实施例及比较例进行说明。

若将恒久性地存在于血液中的标准成分即钠离子作为标准物质，将钠离子浓度的平均值设为142mmol/L，则用稀释液来稀释血液样本，能够算出存在于分离并回收的血浆中的钠离子的平均值。另一方面，若源于部件的稀释液中的钠离子量(不是源于血液的钠离子量，即污染物成分)为血浆中的钠离子量的±2％以下，则可知能够以高精度维持稀释倍率的计算，因此在将稀释液设为300μL、稀释倍率为3～25倍的范围内，算出对稀释液的钠离子容许溶出浓度(相对于稀释液的重量％)。将结果示于图2中。

例如，在稀释倍率5倍时，稀释液中的源于部件的钠离子的容许浓度为1.7质量％，即对稀释液360μL的钠离子容许溶出量为±6.1μg，并且，在稀释倍率20倍时，对稀释液的钠离子容许溶出浓度为0.35质量％，即相对于稀释液360μL的钠离子容许溶出量成为±1.3μg，可知随着稀释倍率升高，急剧溶出到稀释液中的钠离子的容许溶出量减少，并且更少的稀释液的溶出量作为污染物而导致稀释倍率的精度降低。

(参考例1)

1.部件的清洗和稀释液的制备

使用了DEMECAL血液检查试剂盒(Leisure,Inc.)。此时，将作为血液检查试剂盒的部件的瓶(用于容纳稀释液的第一容纳器具)、过滤器(用于从以稀释液稀释后的血液样本中分离并回收血浆的分离器具)、垫圈(用于保持分离器具的保持器具)，事先实施了无清洗、自来水清洗、蒸馏水清洗、纯水清洗(电导率1μS/cm)。而且，将如下制备的360μL稀释液-1放入瓶中，通过垫圈而被保持的过滤器被压入瓶中而过滤稀释液，测定出通过过滤器的液体的钠离子量。另外，通过使水以喷淋状喷射于部件而进行了清洗。

(稀释液组成)

按以下组成制备了稀释液。渗透压表示使用OSMOATAT OM-6040(ARKRAY,Inc.制造)而测定的值。渗透压的单位是溶液的水1kg所具有的渗透压，表示离子的毫摩尔数。

HEPES 50mmol/L

2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMP) 50mmol/L

D-甘露糖醇 284mmol/L

氯化锂 1mmol/L

EDTA-2K 0.8mmol/L

PALP(磷酸吡哆醛) 0.05mmol/L

噻苯达唑 0.0001质量％

阿米卡星硫酸盐 0.0003质量％

硫酸卡那霉素 0.0005质量％

美罗培南三水合物 0.0005质量％

渗透压 355mOsm/kg

pH 7.4

2.钠浓度的测定

关于1.中制备的各稀释液进行了钠浓度的测定。测定中通过利用β-半乳糖酶通过钠而进行活性化的情况，且利用各稀释液中的钠浓度与β-半乳糖酶活性成比例关系的情况的酶活性法而进行了测定。具体而言，用不含钠离子的纯净水，将血液的稀释液稀释成5倍之后秤量3μL，添加如下述制备的第一试剂52μL，在37℃下加热了5分钟，添加如下述制备的第二试剂26μL，通过用JCA-BM6050型生物化学自动分析装置(JEOL Co.,Ltd.制造)，在主波长410nm、副波长658nm下测定吸光度，由此求出了1分钟的吸光度的变化。由预先制成的校准曲线测定出钠浓度。

(钠测定试剂的制备)

制备出以下组成的钠测定试剂。

第一试剂

HEPES·LiOH(pH8.0) 100mmol/L

D-甘露糖醇 60mmol/L

N-乙酰半胱氨酸 30mmol/L

硫酸镁 1.52mmol/L

β-半乳糖酶 1.1kU/L

TritonX-100 0.05质量％

第二试剂

HEPES·LiOH(pH8.0) 100mmol/L

邻硝基苯基-β-D-吡喃半乳糖苷 15mmol/L

求出了已制成在各5份各种清洗中分离后的上清液的稀释液中所溶出的Na离子浓度的平均值、及作为偏差的尺度的变动系数即CV(coefficient of variation)(％)。将结果示于表1中。

[表1]

图2中用虚线来记载血液检查试剂盒的部件(瓶、垫圈、过滤器)的纯水清洗及自来水清洗中的溶出到稀释液中钠离子相对于稀释液的浓度等级。

由图2及表1的结果可知，在将存在于血液中的有恒定性的成分即钠离子使用于标准物质的情况下，通过事先对血液检查试剂盒的部件即瓶、垫圈、过滤器进行纯水清洗，从而能够使在稀释液中溶出的钠相对于稀释液的浓度以平均值计降低为0.14重量％左右，在直至较高的稀释倍率的宽范围内，能够充分地清除用于计算高精度的稀释倍率的对稀释液的钠离子容许溶出浓度。在实验中，通过将实质上不含钠离子的稀释液中所包含的锂离子作为标准物质而实施，但不管有无锂离子，只要实质上不含有钠离子，则可以得到相同的结论是不言而喻的。

(实施例1)

(稀释液中的锂离子的测定)

针对在参考例1中制备的各稀释液，如下测定出锂离子浓度。

添加到稀释液中的锂离子的测定是通过螯合比色法(卤化卟啉螯合法：全氟-5,10,15,20-四苯基-21H,23H-卟啉)而进行的。具体而言，用不含锂离子的纯净水，将血液的稀释液稀释成4.5倍之后秤量5μL，添加如下制备的第三试剂55μL，在37℃下加热了10分钟，通过使用JCA-BM6050型生物化学自动分析装置(JEOL Co.,Ltd.制造)，并在主波长545nm、副波长596nm下测定吸光度而求出。可以由预先制成的校准曲线测定出锂离子的浓度。

(锂离子用测定试剂的制备)

制备出以下组成的锂离子测定试剂。

第三试剂

全氟-5,10,15,20-四苯基-21H,23H-卟啉 0.05质量％

二甲基亚砜 5质量％

三乙醇胺 2质量％

聚乙二醇-叔辛基苯基醚 2质量％

十二烷基硫酸钠 2质量％

以下示出求出血液血浆的稀释倍率的方法和计算公式。

A：使缓冲液显色时的吸光度

B：血浆添加后的吸光度变化量

C：血浆钠中央值142mmol/L的吸光度

D：血浆稀释后的钠浓度下的吸光度

X：血浆稀释倍数

血浆的基于缓冲液的稀释倍数使用了下述(1)式的关系。

[数学式3]

X＝[{(A/B)²+(C/D)²}/2]^1/2 (1)

如上述(1)式，通过求出作为存在于稀释液中的内部标准物质的锂离子的稀释液的信息、及恒久性地存在于血液中的标准成分的钠离子的信息的平方之和的平方根，由此由内部标准物质和恒久性地存在于血液中的标准成分这两种信息可以求出稀释率，并且可知通过使用规定恒久性地存在于血液中的标准成分的溶出量的试剂盒而可以以高精度测定稀释率。

(实施例2)

由作为志愿者的患者进行知情同意之后，将利用注射器从静脉采集的10μL的血液量回收到海绵，与参考例1相同地，在使用试剂盒来准备的稀释液中混合回收到海绵的血液，并用过滤器分离出血球，所述试剂盒使用了事先实施了纯水清洗的瓶、过滤器、垫圈。对于如此得到的血球分离后的稀释血浆，以与参考例1相同的方式测定出钠离子的浓度。并且，对同样的稀释血浆，通过下述方法测定出总蛋白质的浓度。

(稀释血浆中的总蛋白质浓度的测定)

进行了将双缩脲法作为测定原理的测定。准备双缩脲试剂：3.0mmol/L、硫酸铜400μL、酒石酸钾钠21.3mmol/L、NaOH 0.75mmol/L，并与稀释血浆进行了混合。混合之后，在37℃下放置10分钟，一直等到在碱性条件下因血浆中的蛋白质和铜离子而呈540～560nm的青紫色的络合物，在545nm下测定吸光度，使用由标准溶液的吸光度得到的校准曲线，对血球分离后的稀释血浆中的总蛋白质浓度进行了定量。

由如上述测定的钠离子浓度、总蛋白质浓度的测定值、恒久性地存在于血浆中的钠离子浓度、总蛋白质浓度的标准成分的浓度算出各血浆的稀释倍率的结果，得到了一致的稀释倍率。从而，除了钠离子浓度以外，还通过使用与钠离子不同的至少1种恒定性物质来求出稀释倍率，由此得知规定了源于部件的标准成分的量的血液样本中的对象成分的浓度的分析在正常地进行，并且得知可以进行测定结果的验证。

符号说明

1-血液分离器具，2-采血容器，3-筒体，4-顶盖活塞，5-密封盖，6-顶盖，7-密封件，8-螺纹部，9-卡止部，10-底部，11-腿部，12-狭缝槽，13-稀释液，14-扩径部，15-薄壁部，16-主体部，18-缩径部，19-卡止突起部，20-外锷部，21-过滤膜，22-罩，26-握持部，27-芯棒部，28-空间，29-下端部，31-高低差部，33-上端部，34-顶部。

Claims (16)

1.一种血液检查试剂盒，其包括：

稀释液，用于稀释血液样本；及

部件，选自包括容纳有所述稀释液的第一容纳器具、用于从以所述稀释液稀释后的血液样本中分离并回收血浆的分离器具、用于保持所述分离器具的保持器具、用于容纳所回收的血浆的第二容纳器具及用于将所容纳的血浆维持在第二容纳器具内的密封器具的组，

所述血液检查试剂盒用于使用恒久性地存在于血液中的标准成分来分析血液样本中的对象成分的浓度，所述血液检查试剂盒的特征在于，

该血液检查试剂盒中规定了可包含于所述稀释液中的源于所述部件的所述标准成分的量。

2.根据权利要求1所述的血液检查试剂盒，其中，

可包含于所述稀释液中的源于所述部件的所述标准成分的量为稀释液的量的0.5质量％以下。

3.根据权利要求1或2所述的血液检查试剂盒，其中，

所述稀释液的容量为血浆的容量的15倍以下。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的血液检查试剂盒，其中，

恒久性地存在于血液中的所述标准成分是钠离子或氯离子。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的血液检查试剂盒，其中，

恒久性地存在于血液中的所述标准成分是钠离子或氯离子和恒久性地存在于血液中的另一标准成分。

6.根据权利要求5所述的血液检查试剂盒，其中，

所述另一标准成分是总蛋白质或白蛋白。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的血液检查试剂盒，其中，

使用恒久性地存在于血液中的另一标准成分，验证所述血液样本中的对象成分的浓度的分析。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的血液检查试剂盒，其中，

所述血液检查试剂盒所具备的部件包括用于从以所述稀释液稀释后的血液样本中回收血浆的分离器具。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的血液检查试剂盒，其中，

所述稀释液不包含恒久性地存在于血液中的标准成分。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的血液检查试剂盒，其中，

所述稀释液包含：

选自包括2-氨基-2-甲基-1-丙醇、2-乙基氨基乙醇、N-甲基-D-葡糖胺、二乙醇胺及三乙醇胺的组中的氨基醇化合物；及

选自包括也称作HEPES的2-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基]乙烷磺酸、也称作TES的N-三(羟甲基)甲基-2-氨基乙烷磺酸，也称作MOPS的3-吗啉代丙磺酸及也称作BES的N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙烷磺酸的组中的缓冲剂。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的血液检查试剂盒，其中，

所述稀释液还含有不存在于血液中的标准成分。

12.根据权利要求11所述的血液检查试剂盒，其中，

不存在于血液中的标准成分是锂离子或3-甘油磷酸。

13.一种部件，其在权利要求1至12中任一项所述的血液检查试剂盒中使用。

14.根据权利要求13所述的部件，其中，

部件是选自包括用于容纳稀释液的第一容纳器具、用于从以稀释液稀释后的血液样本中分离并回收血浆的分离器具、用于保持所述分离器具的保持器具、用于容纳所回收的血浆的第二容纳器具及用于将所容纳的血浆维持在第二容纳器具内的密封器具的组中的部件。

15.一种制造方法，其为包括在有效地去除恒久性地存在于血液中的标准成分的条件下清洗部件的工序的、权利要求1至10中任一项所述的血液检查试剂盒的制造方法，或者权利要求13或14所述的部件的制造方法。

16.根据权利要求15所述的制造方法，其中，

所述条件是使用电导率为1μS/cm以下的水。