CN108025054B

CN108025054B - 用于治疗和/或预防肿瘤的沙粒病毒和用于制备具有（改善的）肿瘤消退性能的沙粒病毒的方法

Info

Publication number: CN108025054B
Application number: CN201680030624.5A
Authority: CN
Inventors: 卡尔·塞班斯坦·兰; H.卡尔卡万
Original assignee: Abalos Treatment Ltd
Current assignee: Vinolusence Biotechnology Co ltd
Priority date: 2015-04-17
Filing date: 2016-04-15
Publication date: 2022-12-23
Anticipated expiration: 2036-04-15
Also published as: US20190151436A1; HK1251168A1; US11801294B2; JP7273102B2; EP3283104A1; CA2982873A1; BR112017022022A8; US20180117137A1; JP7039037B2; BR112017022022A2; DE102015207036A1; WO2016166285A1; JP2021129589A; JP2018515130A; CN108025054A

Abstract

本发明涉及用于治疗和/或预防肿瘤的沙粒病毒以及用于制备具有（改善的）肿瘤消退性能的沙粒病毒的方法。

Description

用于治疗和/或预防肿瘤的沙粒病毒和用于制备具有（改善的）肿瘤消退性能的沙粒病毒的方法

应用领域和背景技术

沙粒病毒属于人病原性多形RNA病毒家族。由于它们在动物（主要是啮齿类动物）中的自然储宿（Reservoir），具有这些病毒的疾病属于人畜共患病。人畜共患病表示可以从动物传递给人类、反之亦然从人类传递给动物的疾病。

已知至少八种沙粒病毒，其在人类中造成疾病。典型的是无菌性脑膜炎和出血热。已知的可以在人类中引起疾病的病毒是淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒（LCMV）、瓜纳瑞托病毒（GTOV）、胡宁病毒（JUNV）、拉沙病毒（LASV）、Lujo病毒（LUJV）马丘波病毒（MACV）、沙比亚（Sabia）病毒（SABV）和白水河病毒（WWAV）。

沙粒病毒通常分成两组，即旧大陆沙粒病毒和新大陆沙粒病毒。这些组在地理上和在遗传上不同。已经在东半球的国家，诸如欧洲、亚洲和非洲国家发现了旧大陆沙粒病毒，诸如淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒。相反，已经在西半球的国家，诸如阿根廷、玻利维亚、委内瑞拉、巴西和美国发现了新大陆沙粒病毒。

该病毒家族的名称源自拉丁文arenosus（沙样）或arena（沙），以描述病毒粒子内的沙样核糖体结构。沙粒病毒的病毒粒子具有圆形至不规则形状，且根据物种和试验材料制品而具有50 nm至300 nm、经常110 nm至130 nm的直径。8 nm至10 nm长的棒形糖蛋白刺突嵌入在病毒包膜中。各个刺突由病毒包膜蛋白的四聚体组成。

病毒粒子还包含两个具有螺旋对称的闭环衣壳。衣壳的长度在450 nm至1300 nm之间变化。一个病毒RNA（核糖核酸）聚合酶（L-蛋白）分子附着于它们中的每一个。

每个衣壳包含一个具有混合（即双义，±）极性的单链RNA分子。两个单链RNA分子代表病毒基因组。它们被称作L（大）和S（小），且是约7.5 kb（千碱基）和3.5 kb（千碱基）大。尽管所述衣壳是闭环形状，这些RNA链是直链的且因而不是圆形的。在RNA的3’末端处的19-30碱基长序列存在于两条链上且在该病毒家族中也是保守的。

在形态学上非常罕见的是在病毒粒子内存在交替数目的细胞核糖体，这给病毒颗粒提供它们的“沙样”外观。同样地，在经纯化的病毒制品中，发现了许多不同的细胞RNA（也包括核糖体RNA）以及病毒RNA的复制形式、不同的病毒mRNA（与核糖体结合的信使核糖核酸）和病毒基因组的完全互补链。这些非基因组RNA以变化的量都位于上述衣壳外面。

沙粒病毒作为疫苗载体的应用是已知的。一个显著的例子是针对阿根廷出血热使用的疫苗病毒Candid #1。这是胡宁病毒的疫苗变体。

从WO 2009/083210 A1已知复制缺陷型（即遗传修饰的）沙粒病毒颗粒（病毒粒子）尤其用于治疗肿瘤疾病，例如黑素瘤、前列腺癌、乳腺癌和肺癌的用途。在出版物“Development of replication-defective lymphocytic choriomeningitis virusvectors for the induction of potent CD8⁺ T cell immunity”(Nature Medicine, 第16卷, 第3期, 2010年3月, 第339-345页; doi: 10.1038/Nm.2104)中，提及癌症免疫疗法作为这样的病毒颗粒的潜在应用领域。

此外，WO 2006/008074 A1公开了包装细胞（其产生用沙粒病毒糖蛋白假型化的逆转录病毒病毒粒子）用于实体瘤的基因治疗的用途。

在现有技术中描述的用于治疗肿瘤的方法是基于通过遗传工程非常复杂地产生的病毒颗粒的应用。此外在基因疗法的治疗方法的情况下，通常不可能实现经遗传工程制备的病毒粒子或产生病毒粒子的包装细胞对肿瘤组织的充分且在治疗上有效的转导。

目的和解决方案

因此，本发明是基于如下目的：提供与现有技术相比更简单、且特别是更有效的用于肿瘤、特别是癌和肉瘤的治疗方案。

该目的根据本发明通过根据独立权利要求1的沙粒病毒、根据权利要求14的药物以及根据独立权利要求15的体外方法实现。在从属权利要求中定义了优选的实施方案。所有权利要求的表述特此通过引用并入说明书的内容中。在说明书中公开了本发明的另一个主题，其实现本发明的目的。

根据第一方面，本发明涉及用于治疗和/或预防人类或动物中的肿瘤、优选恶性肿瘤的沙粒病毒。

所述沙粒病毒的特征优选地在于，它不含有基因组外来RNA，即它不包含基因组外来RNA。换而言之，该沙粒病毒的基因组（遗传物质）优选地不含外来RNA或优选地不包含外来RNA。

在本发明的上下文中，表述“基因组外来RNA”应被理解为是指这样的RNA（核糖核酸）或RNA序列：其不发生在或不存在于野生型沙粒病毒的基因组中或野生型沙粒病毒的突变体（突变的沙粒病毒）的基因组中，尤其是野生型沙粒病毒的天然突变体（天然地突变的沙粒病毒）的基因组中。外来RNA的例子是人工的或合成的RNA分子、生物体的RNA和其它病毒的RNA。

在本发明的上下文中（与本领域技术人员的理解相一致），表述“野生型沙粒病毒”应被理解为是指这样的沙粒病毒：其基因组是在自然界中存在的遗传上正常的形式。

在本发明的上下文中（与本领域技术人员的理解相一致），表述“野生型沙粒病毒的突变体”或“突变的沙粒病毒”应被理解为是指这样的沙粒病毒：其基因组与野生型基因组相比包含自发的，即天然地造成的或由诱变剂诱导的修饰。

因此，在本发明的上下文中（与本领域技术人员的理解相一致），表述“野生型沙粒病毒的天然突变体”或“天然地突变的沙粒病毒”应被理解为是指这样的沙粒病毒：其基因组与野生型基因组相比包含自发的，即天然地造成的修饰。天然地突变的沙粒病毒可以优选地通过传代、特别是连续传代制备，这将在下面更详细地讨论。

本发明是基于以下惊人发现：没有基因组外来RNA的沙粒病毒能够实现肿瘤消退。肿瘤消退是由于由沙粒病毒造成的先天性和适应性免疫细胞的活化或刺激。活化的免疫细胞分泌增加的抗肿瘤细胞因子，诸如干扰素-α和干扰素-γ，由此对抗或摆脱肿瘤。另一个惊人发现是，在肿瘤表现的情况下，沙粒病毒造成抗肿瘤细胞因子的分泌显著增加。没有基因组外来RNA的沙粒病毒因而适合用在肿瘤治疗中。这已经由申请人借助于动物实验成功地验证。为此目的，使用了尤其是小鼠，人肿瘤在其中的生长是可能的。

在另一个实施方案中，所述沙粒病毒也不含有非基因组外来RNA。在本发明的上下文中，表述“非基因组外来RNA”应被理解为是指这样的在沙粒病毒基因组外的RNA或RNA序列：其不发生在或不存在于野生型沙粒病毒或野生型沙粒病毒的突变体（突变的沙粒病毒）中，尤其是野生型沙粒病毒的天然突变体（天然地突变的沙粒病毒）中。换而言之，在该实施方案中，所述沙粒病毒在整体上不包含外来RNA，也就是说既不包含基因组外来RNA也不包含非基因组外来RNA。

在一个优选的实施方案中，所述沙粒病毒是野生型沙粒病毒。

在另一个实施方案中，所述沙粒病毒是野生型沙粒病毒的天然突变体，即天然地突变的沙粒病毒。

所述天然突变体或所述天然地突变的沙粒病毒优选地通过在宿主动物和/或宿主细胞中传代、尤其是多次传代制备。

所述天然突变体或所述天然地突变的沙粒病毒特别优选地通过在宿主动物和/或宿主细胞中连续传代制备。

根据本发明提供的沙粒病毒因而优选地是这样的沙粒病毒：其从它的野生型形式开始通过在宿主动物和/或宿主细胞中传代、优选地连续传代制备。

在上述段落中提及的宿主动物优选地是啮齿类动物，特别是小鼠。另一方面，在以前段落中提及的宿主细胞优选地是树突细胞或肿瘤细胞。

在本发明的上下文中，与本领域技术人员的理解相一致，术语“传代”应被理解为是指，沙粒病毒多次规则地引入宿主动物和/或宿主细胞中。在本发明的上下文中，与本领域技术人员的理解相一致，表述“连续传代”应被理解为是指，沙粒病毒多次规则地引入不同的宿主动物，优选相同类型的宿主动物和/或不同的细胞，优选相同类型的细胞中。由于环境（宿主动物和/或宿主细胞）的多次变化，沙粒病毒遭受增加的适应压力或突变压力，由此增加从肿瘤消退的角度看在沙粒病毒的基因组中发生有利突变的可能性。

在另一个实施方案中，所述肿瘤选自包含癌、黑素瘤、母细胞瘤、淋巴瘤和肉瘤或由它们组成的组。

在本发明的上下文中（与本领域技术人员的理解相一致），术语“癌”应被理解为是指上皮起源的恶性瘤形成。

在本发明的上下文中（与本领域技术人员的理解相一致），术语“肉瘤”应被理解为是指中胚层起源的恶性瘤形成。

在本发明的上下文中（与本领域技术人员的理解相一致），术语“黑素瘤”应被理解为是指黑素细胞起源的恶性瘤形成。

在本发明的上下文中（与本领域技术人员的理解相一致），术语“淋巴瘤”应被理解为是指淋巴细胞起源的恶性瘤形成。

在本发明的上下文中（与本领域技术人员的理解相一致），术语“母细胞瘤”应被理解为是指胚胎起源的恶性瘤形成。

在一个优选的实施方案中，所述癌选自包含肛门癌、支气管癌、肺癌、子宫内膜癌、胆囊癌、肝细胞癌、睾丸癌、结肠直肠癌、喉癌、食管癌、胃癌、乳腺癌、肾癌、卵巢癌、胰腺肿瘤、咽癌、前列腺癌、甲状腺癌和宫颈癌或由它们组成的组。

在一个优选的实施方案中，所述肉瘤选自包含血管肉瘤、软骨肉瘤、尤文肉瘤、纤维肉瘤、卡波西肉瘤、脂肪肉瘤、平滑肌肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、神经源性肉瘤、骨肉瘤和横纹肌肉瘤或由它们组成的组。

在另一个实施方案中，所述沙粒病毒是旧大陆沙粒病毒，其优选地选自包含伊派病毒（IP-PYV）、拉沙病毒（LASV）、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒（LCMV）、莫巴拉病毒（MOBV）和莫佩亚病毒（MOPV）或由它们组成的组。

在一个特别优选的实施方案中，所述沙粒病毒是淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒，优选是选自包含WE、Armstrong、Clone 13和Docile或由它们组成的组的毒株。

在另一个实施方案中，所述沙粒病毒是新大陆沙粒病毒，其优选地选自包含奥尔帕瓦约（Allpahuayo）病毒（ALLV）、阿马帕里（Amapari）病毒（AMAV）、熊峡谷病毒（BCNV）、Chapare病毒、库皮科斯（Cupixi）病毒（CPXV）、Flexal病毒（FLEV）、瓜纳瑞托病毒（GTOV）、胡宁病毒（JUNV）、拉蒂诺（Latino）病毒（LATV）、马丘波病毒（MACV）、Oliveros病毒（OLVV）、帕腊南（Parana）病毒（PARV）、伯钦特病毒（PICV）、Pirital病毒（PIRV）、沙比亚病毒（SABV）、塔卡里伯病毒（TCRV）、太米阿米病毒（TAMV）和白水河病毒（WWAV）或由它们组成的组。

在一个特别优选的实施方案中，所述沙粒病毒是胡宁病毒，尤其是毒株Candid #1（Candid No.1）。

在另一个实施方案中，所述胡宁病毒，尤其是毒株Candid #1（Candid No.1），具有根据SEQ ID No. 1（根据序列表）的核酸序列，尤其是S-核糖核酸序列或双义序列。

在另一个实施方案中，所述胡宁病毒，尤其是毒株Candid #1（Candid No.1），具有根据SEQ ID No. 2（根据序列表）的核酸序列，尤其是L-核糖核酸序列或双义序列。

在另一个实施方案中，所述胡宁病毒，尤其是毒株Candid #1（Candid No.1），具有根据SEQ ID No. 3（根据序列表）的核酸序列，尤其是S-核糖核酸序列或双义序列。

在另一个实施方案中，所述胡宁病毒，尤其是毒株Candid #1（Candid No.1），具有根据SEQ ID No. 4（根据序列表）的核酸序列，尤其是L-核糖核酸序列或双义序列。

在另一个实施方案中，上面提及的淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒（LCMV病毒）具有根据SEQ ID No. 5（根据序列表）的核酸序列，尤其是S-核糖核酸序列或双义序列。

在另一个实施方案中，上面提及的淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒（LCMV病毒）具有根据SEQ ID No. 6（根据序列表）的核酸序列，尤其是L-核糖核酸序列或双义序列。

在另一个实施方案中，所述沙粒病毒分离自肿瘤裂解物、器官裂解物、尿或血液。

在一个替代实施方案中，所述沙粒病毒分离自细胞培养基，尤其是人肿瘤细胞系。

在另一个实施方案中，所述沙粒病毒以位于细胞外的病毒粒子的形式，即以沙粒病毒颗粒的形式存在以用于施用。

在另一个实施方案中，提供、优选地制备所述沙粒病毒以用于局部、尤其是肌肉内、腹膜内或皮下施用。换而言之，所述沙粒病毒在另一个实施方案中用于局部、尤其是肌肉内、腹膜内或皮下施用。

优选的是，提供、优选地制备所述沙粒病毒以用于以1 PFU（噬斑形成单位）/kg体重至10¹² PFU/kg体重、特别是10² PFU/kg体重至10⁶ PFU/kg体重、优选地10³ PFU/kg体重至10⁵ PFU/kg体重的剂量局部施用。换而言之，所述沙粒病毒优选地用于以1 PFU（噬斑形成单位）/kg体重至10¹² PFU/kg体重、特别是10² PFU/kg体重至10⁶ PFU/kg体重、优选地10³PFU/kg体重至10⁵ PFU/kg体重的剂量局部施用。

在一个替代实施方案中，提供、优选地制备所述沙粒病毒以用于全身、尤其是静脉内施用。换而言之，在一个替代实施方案中，所述沙粒病毒用于全身、尤其是静脉内施用。

优选的是，提供、优选地制备所述沙粒病毒以用于以1 PFU/kg体重至10¹² PFU/kg体重、特别是10² PFU/kg体重至10⁶ PFU/kg体重、优选地10³ PFU/kg体重至10⁵ PFU/kg体重的剂量全身施用。换而言之，所述沙粒病毒优选地用于以1 PFU/kg体重至10¹² PFU/kg体重、特别是10² PFU/kg体重至10⁶ PFU/kg体重、优选地10³ PFU/kg体重至10⁵ PFU/kg体重的剂量全身施用。

根据第二方面，本发明涉及用于治疗和/或预防肿瘤、尤其是恶性肿瘤的药物。

所述药物的特征特别地在于：它具有根据本发明的第一方面的沙粒病毒。

所述药物优选地还包含药学上可接受的载体。所述载体特别地可以选自包含水、盐水溶液、缓冲溶液和细胞培养基或由它们组成的组。

在另一个实施方案中，所述药物也包含活性成分。所述活性成分特别地可以是细胞抑制剂、抗体和/或细胞因子。

关于所述药物、尤其是沙粒病毒的其它特征和优点以及肿瘤，完全参考目前为止的说明书以避免重复。

根据第三方面，本发明涉及用于制备具有肿瘤消退（即肿瘤摆脱/对抗）性能或改善的肿瘤消退性能的沙粒病毒的方法。

所述肿瘤优选地是恶性肿瘤，优选癌、黑素瘤、母细胞瘤、淋巴瘤或肉瘤。因此，所述方法优选地是用于制备具有（改善的）癌-、黑素瘤-、母细胞瘤-、淋巴瘤-或肉瘤-消退性能的沙粒病毒的方法。

所述方法包括下述步骤：

a）用沙粒病毒感染树突细胞或肿瘤细胞，

b）在受感染的树突细胞或受感染的肿瘤细胞中培养所述沙粒病毒，和

c）从受感染的树突细胞或受感染的肿瘤细胞分离所述培养的沙粒病毒或培养的沙粒病毒的一部分（Teilmenge）。

步骤次序a）至c）也可以被称作沙粒病毒在树突细胞或肿瘤细胞中的（单次）传代。

在一个优选的实施方案中，所述沙粒病毒是在进行步骤a）之前已经在宿主动物中进行连续传代的沙粒病毒。关于其它细节和优点，可以参考在本发明的第四方面的上下文中做出的对应阐述。

在另一个实施方案中，所述树突细胞或肿瘤细胞是呈细胞培养物（树突细胞培养物或肿瘤细胞培养物）的形式。

所述肿瘤细胞优选地是恶性肿瘤细胞，尤其是癌-、黑素瘤-、母细胞瘤-、淋巴瘤-或肉瘤细胞。

所述癌细胞可以选自包含肛门癌细胞、支气管癌细胞、肺癌细胞、子宫内膜癌细胞、胆囊癌细胞、肝细胞癌细胞、睾丸癌细胞、结肠直肠癌细胞、喉癌细胞、食管癌细胞、胃癌细胞、乳腺癌细胞、肾癌细胞、卵巢癌细胞、胰腺肿瘤细胞、咽癌细胞、前列腺癌细胞、甲状腺癌细胞和宫颈癌细胞或由它们组成的组。

所述肉瘤细胞可以选自包含血管肉瘤细胞、软骨肉瘤细胞、尤文肉瘤细胞、纤维肉瘤细胞、卡波西肉瘤细胞、脂肪肉瘤细胞、平滑肌肉瘤细胞、恶性纤维组织细胞瘤细胞、神经源性肉瘤细胞、骨肉瘤细胞和横纹肌肉瘤细胞或由它们组成的组。

在另一个实施方案中，所述肿瘤细胞是永生化的免疫细胞，尤其是永生化的巨噬细胞。

优选地通过将沙粒病毒加给所述细胞，根据步骤a）感染所述树突细胞或肿瘤细胞。

在一个优选的实施方案中，用新的、尤其是未感染的树突细胞，优选相同类型的那些，或用新的、尤其是未感染的肿瘤细胞，优选相同类型（相同肿瘤类型）的那些重复步骤次序a）至c）。

在一个特别优选的实施方案中，将步骤次序a）至c）重复多次。作为优选，为每次重复使用新的、尤其是未感染的树突细胞，优选相同类型的那些，或新的、尤其是未感染的肿瘤细胞，优选相同类型的那些。

优选地将步骤次序a）至c）重复1次至10000次，特别是10次至1000次，优选地30次至60次，其中优选地为每次重复使用新的、尤其是未感染的树突细胞，优选相同类型的那些，或新的、尤其是未感染的肿瘤细胞，优选相同类型的那些。

通过步骤次序a）至c）的多次重复，所述沙粒病毒持续地被迫适应新的环境，即新的树突细胞或肿瘤细胞。该持久的适应压力有利于突变的发生，由此可以产生或改善所述沙粒病毒的肿瘤消退性能。

在根据步骤b）的沙粒病毒培养过程中，在树突细胞或肿瘤细胞内发生沙粒病毒基因组的复制和沙粒病毒的繁殖。

优选地在标准细胞培养条件下根据步骤b）培养沙粒病毒。

优选地将沙粒病毒在树突细胞或肿瘤细胞中培养1分钟至1年、尤其是10小时至1个月、优选24小时至72小时的时间段。

优选地从细胞培养物上清液中根据步骤c）分离经培养的沙粒病毒。

优选地，在根据步骤c）的分离之前，将所述树突细胞或肿瘤细胞根据特定性能、优选地借助于细胞分选装置进行分选，并随后培养。优选地将经分选的细胞培养24小时的时间段。

在另一个实施方案中，所述方法还包括下述步骤：

d）克隆所述分离的沙粒病毒，和

e）将所述分离的沙粒病毒测序。

关于所述方法、尤其是沙粒病毒的其它特征和优点以及肿瘤，参考本说明书。

根据第四方面，本发明涉及用于制备具有肿瘤消退，即肿瘤摆脱/对抗性能或改善的肿瘤消退性能的沙粒病毒的方法。

所述肿瘤优选地是恶性肿瘤，优选地是癌、黑素瘤、母细胞瘤、淋巴瘤或肉瘤。因此，所述方法优选地是用于制备具有（改善的）癌-、黑素瘤-、母细胞瘤-、淋巴瘤-或肉瘤-消退性能的沙粒毒病的方法。

所述方法包括下述步骤：

a）用沙粒病毒感染具有肿瘤的宿主动物，

b）在受感染的宿主动物中培养所述沙粒病毒，和

c）从受感染的宿主动物分离所述培养的沙粒病毒或培养的沙粒病毒的一部分。

步骤次序a）至c）也可以被称作沙粒病毒在宿主动物中的（单次）传代。

在一个优选的实施方案中，在进行步骤a）之前将肿瘤组织移植至所述宿主动物。

在一个替代实施方案中，使用通过遗传工程修饰的宿主动物，其自发地发生肿瘤。

特别是啮齿类动物，优选地小鼠，可以用作宿主动物。例如，NOD SCID小鼠或LoxP-Tag小鼠可以用作宿主动物。在Nod SCID小鼠中，SCID突变（重症联合免疫缺陷）与NOD（非肥胖糖尿病）类型组合。在SCID突变纯合的小鼠中，没有形成功能性的T-细胞或B-细胞。借助于该免疫缺陷，这些动物特别适合于耐受异体细胞，例如移植的肿瘤。

可以例如通过沙粒病毒的全身，特别是静脉内，或局部，例如皮下的施用，根据步骤a）感染宿主动物。

特别地，可以通过将沙粒病毒施用，优选地注射进宿主动物的肿瘤中感染宿主动物。

在一个优选的实施方案中，用新的、尤其是未感染的宿主动物，优选相同类型的那些重复步骤次序a）至c）。

在一个特别优选的实施方案中，将步骤次序a）至c）重复多次。优选地为每次重复使用新的、尤其是未感染的宿主动物，优选相同类型那些。换而言之，如果对沙粒病毒进行在宿主动物，优选相同类型那些中的连续传代，根据本发明是优选的。

优选地将步骤次序a）至c）重复1次至1000次，特别是10次至100次，优选地30次至60次，其中为每次重复使用新的、尤其是未感染的宿主动物，优选相同类型的那些。

通过步骤次序a）至c）的多次重复，所述沙粒病毒持续地被迫适应新的环境，即新的宿主动物。该持久的适应压力有利于突变的发生，由此可以产生或改善所述沙粒病毒的肿瘤消退性能。

在根据步骤b）的沙粒病毒培养过程中，在宿主动物内发生沙粒病毒基因组的复制和沙粒病毒的繁殖。

优选地将沙粒病毒在宿主动物中培养1分钟至500天、尤其是10分钟至100天、优选1小时至30天的时间段。

在一个优选的实施方案中，所述沙粒病毒分离自宿主动物的尿、血液、肿瘤或器官裂解物。

在另一个实施方案中，所述方法还包括下述步骤：

d）用根据步骤c）分离的沙粒病毒感染树突细胞或肿瘤细胞，

e）在受感染的树突细胞或受感染的肿瘤细胞中培养所述沙粒病毒，和

f）从受感染的树突细胞或受感染的肿瘤细胞分离所述培养的沙粒病毒或培养的沙粒病毒的一部分。

步骤次序d）至f）也可以被称作沙粒病毒在树突细胞或肿瘤细胞中的（单次）传代。

优选地通过将沙粒病毒加给所述细胞，根据步骤d）感染树突细胞或肿瘤细胞。

在一个优选的实施方案中，用新的、尤其是未感染的树突细胞，优选相同类型的那些，或用新的、尤其是未感染的肿瘤细胞，优选相同类型（相同肿瘤类型）的那些重复步骤次序d）至f）。

在一个特别优选的实施方案中，将步骤次序d）至f）重复多次。作为优选，为每次重复使用新的、尤其是未感染的树突细胞，优选相同类型的那些，或新的、尤其是未感染的肿瘤细胞，优选相同类型的那些。换而言之，如果另外对沙粒病毒进行在树突细胞，优选相同类型的那些，或肿瘤细胞，优选相同类型的那些中的连续传代，根据本发明是特别优选的。

优选地将步骤次序d）至f）重复1次至1000次，特别是10次至100次，优选地30次至60次，其中优选地为每次重复使用新的、尤其是未感染的树突细胞，优选相同类型的那些，或新的、尤其是未感染的肿瘤细胞，优选相同类型的那些。

由于额外增加的适应压力或突变压力，沙粒病毒在宿主动物，优选相同类型的那些中的连续传代与沙粒病毒在树突细胞，优选相同类型的那些，或肿瘤细胞，优选相同类型的那些中的连续传代的组合特别地适合于制备具有（改善的）肿瘤消退性能的沙粒病毒。

优选地将沙粒病毒在树突细胞或肿瘤细胞中培养1分钟至500天、尤其是10分钟至100天、优选1小时至30天的时间段。

优选地，在根据步骤f）分离之前，将所述树突细胞或肿瘤细胞根据特定性能、优选地借助于细胞分选装置进行分选，并随后培养。优选地将经分选的细胞培养24小时的时间段。

在另一个实施方案中，所述方法还包括下述步骤：

g）克隆根据步骤f）分离的沙粒病毒，和

h）将分离的沙粒病毒测序。

替代地，根据本发明可以提供的是，将根据步骤c）分离的沙粒病毒克隆并随后测序。

关于所述方法、尤其是沙粒病毒的其它特征和优点、肿瘤以及树突细胞和肿瘤细胞，同样完全参考目前为止的说明书，以避免不必要的重复。

本发明的其它特征和优点从呈实施例、所属附图和权利要求形式的优选实施方案的以下描述显现。下述实施方案仅仅用于阐述和用于更好地理解本发明，并且决不应当理解为限制性的。

实验部分

1. 方法和材料

1.1小鼠

除非另外提及，否则使用的小鼠是来自C57BL/6背景。Map3k14 ^aly/aly小鼠缺乏NF-kB信号且因此是高度免疫抑制的。Irf3 x Ir7 ^-/-小鼠不能产生干扰素。NOD.SCID小鼠不具有适应性免疫系统。因此，可能在这些小鼠中生长人肿瘤。LoxP-Tag小鼠自发地发生肝肿瘤。

1.2细胞系和试剂

MOPC细胞是鼠口咽癌细胞。Mc38是鼠结肠癌细胞。Raw细胞是永生化的巨噬细胞。A431是人肺癌细胞；Sw40是人结肠癌细胞，Hela是人宫颈癌细胞。借助于M-CSF从骨髓前体细胞培养原代巨噬细胞。将细胞维持在含有10%胎牛血清（Sigma-Aldrich）、2 mmol/l L-谷氨酰胺和100 U/ml青霉素的Dulbecco氏改良的伊格尔培养基中。在5% CO₂中培养所有细胞。

1.3病毒

LCMV毒株WE得自Zinkernagel教授（实验免疫学, 苏黎士, 瑞士）的实验室，并在L929细胞中繁殖。Candid #1得自Paula Cannon教授（南加州大学）。

1.4肿瘤生长和治疗

将大约5 x 10⁵个肿瘤细胞（在100 μL中）皮下地注射进6-12周龄小鼠的右胁腹中。测量最长肿瘤直径。通过在肿瘤周围注射2 x 10⁴ PFU LCMV-WE或Candid #1（在100-200 μL中）来治疗小鼠。

1.5肿瘤血管的形态测定分析

用连续冷冻切片进行形态测定分析，其中将内皮细胞标志物CD31染色。使用三个肿瘤切片的平均值计算微血管密度（MVD）的定量。将MVD计算为每肿瘤面积的血管数目。

1.6低氧的检测

在将哌莫硝唑注射进移植肿瘤的动物中后，通过哌莫硝唑加合物的形成来检测低氧肿瘤区域30 min。使用Hypoxyprobe-1 Plus试剂盒根据生产商的说明书（PharmaciaNatur International, Inc.）将肿瘤切片染色。

1.7 IFN-αELISA

根据生产商的数据（Research Diagnostics RDI, Flanders, NJ）通过ELISA确定血清IFN-α水平。

1.8统计分析

使用不成对的Student两侧t-检验对比平均值。将数据显示为平均值±SEM。将统计显著性水平设定在p <0.05。

2. 研究

2.1 用LCMV（WE毒株）感染永生化的巨噬细胞（肿瘤细胞）和从原代骨髓产生的巨噬细胞（原代）。24小时以后测量复制（n = 3）。

可以证实，LCMV（WE毒株）在永生化的和健康的细胞中复制。得到的结果用图显示在图1中。

图1具有下述图例：

纵坐标：LCMV（log₁₀ PFU/ml）

横坐标：肿瘤细胞/健康的巨噬细胞（原代）。

2.2 用5 x 10⁵个MOPC细胞（第3天）治疗WT C57BL/6小鼠。另外用2 x 10⁴ PFULCMV（WE毒株）在肿瘤周围治疗一组小鼠（第0天）。观察肿瘤生长。

可以证实，用LCMV的治疗造成几乎完全肿瘤消退。得到的结果用图显示在图2中。

图2具有下述图例：

纵坐标：肿瘤直径（cm）

横坐标：时间（天）。

2.3 用5 x 10⁵个MC38细胞治疗WT C57BL/6小鼠（第3天）。另外用2 x 10⁴ PFULCMV（WE毒株）在肿瘤周围治疗一组小鼠（第0天）。观察肿瘤生长。

可以证实，用LCMV的治疗造成显著的肿瘤消退。得到的结果用图显示在图3中。

图3具有下述图例：

纵坐标：肿瘤直径（cm）

横坐标：时间（天）。

2.4 将具有自发地发生的肝癌的约9月龄LoxP-TAg小鼠用2 x 10⁶ PFU LCMV静脉内地感染或保持不治疗。在第6天（n = 3）和第20天（n = 4-5）通过肉眼定量肿瘤结（直径>=3 mm）。

可以证实，用LCMV的治疗显著地减少癌性肝结的数目。得到的结果用图显示在图4中。

图4具有下述图例：

纵坐标：肝结（数目）

横坐标：时间。

2.5 给WT C57BL/6小鼠（n = 4/组）皮下地注射5 x 10⁵个MOPC细胞（第-3天）、或2x 10⁴ PFU LCMV（WE毒株）（第0天）、或5 x 10⁵个MOPC细胞（第-3天）和2 x 10⁴ PFU LCMV（第0天）两者。在第3天收集血清样品并进行IFN-α-ELISA。

可以证实，所述LCMV在同时施用癌细胞的实验动物中造成急剧增加的干扰素-α分泌。得到的结果用图显示在图5中。

图5具有下述图例：

纵坐标：IFN-α（pg/ml）。

2.6 用5 x 10⁵个MOPC细胞治疗Map3k14 ^aly/aly小鼠和WT小鼠（第3天）。另外用2 x10⁴ PFU LCMV（WE毒株）在肿瘤周围治疗一组小鼠（第0天）。观察肿瘤生长。

可以证实，用LCMV的治疗造成肿瘤消退。得到的结果用图显示在图6中。

图6具有下述图例：

纵坐标：肿瘤直径（cm）

横坐标：时间（天）。

2.7 用5 x 10⁵个MOPC细胞治疗Irf3 x Ir7 ^-/-小鼠和WT小鼠（第3天）。另外用2 x10⁴ PFU LCMV（WE毒株）在肿瘤周围治疗一组小鼠（第0天）。观察肿瘤生长。

可以证实，用LCMV的治疗造成肿瘤消退。得到的结果用图显示在图7中。

图7具有下述图例：

纵坐标：肿瘤直径（cm）

横坐标：时间（天）。

2.8 用5 x 10⁵个MOPC细胞治疗WT小鼠（第3天）。另外用2 x 10⁴ PFU LCMV（WE毒株）在肿瘤周围治疗一组小鼠（第0天）。在肿瘤移植以后第9天，通过CD31染色在组织学上分析肿瘤。定量微血管密度（MDV）和血管-血管间距。

可以证实，用LCMV的治疗造成肿瘤血管密度的下降。得到的结果用图显示在图8A中。

图8A具有下述图例：

左侧: 右侧:

纵坐标：MVD [mm³] 纵坐标：血管-血管间距（μm）

横坐标：肿瘤/肿瘤LCMV 横坐标：肿瘤/肿瘤LCMV 。

2.9 用5 x 10⁵个MOPC细胞治疗WT小鼠（第3天）。另外用2 x 10⁴ PFU LCMV（WE毒株）在肿瘤周围治疗一组小鼠（第0天）。在第9天，给所述动物注射哌莫硝唑，然后针对低氧区域在组织学上分析肿瘤。

可以证实，用LCMV的治疗造成癌组织中的氧供应不足。得到的结果用图显示在图8B中。

图8B具有下述图例：

纵坐标：低氧区域/肿瘤（%）

横坐标：肿瘤/肿瘤LCMV。

2.10 给WT C57BL/6小鼠在右胁腹皮下地注射5 x 10⁵个MOPC细胞（第3天）。在第0天，在右胁腹（同侧的）、左胁腹（对侧的）或静脉内地用2 x 10⁴ PFU LCMV（WE毒株）治疗一组动物。观察肿瘤生长。

可以证实，在全身施用时，用LCMV的治疗也造成肿瘤消退。得到的结果用图显示在图9中。

图9具有下述图例：

纵坐标：肿瘤直径（cm）

横坐标：时间（天）。

2.11 给NOD.SCID小鼠皮下地注射5 x 10⁵个A431细胞（第-3天），并然后保持不治疗或用2 x 10⁴ PFU LCMV（WE毒株）治疗。在指定的天测量肿瘤大小（最长直径）。当肿瘤大小达到12 mm时，将小鼠处死。

可以证实，用LCMV的治疗增加了实验动物中的存活率。得到的结果用图显示在图10中。

图10具有下述图例：

纵坐标：存活率（%）

横坐标：时间（天）。

2.12 用5 x 10⁵个Sw40细胞治疗NOD.SCID小鼠（第0天）。另外用2 x 10⁴ PFU LCMV（WE毒株）在肿瘤周围或用2 x 10⁴ PFU Candid #1在肿瘤周围治疗一组小鼠（第0天）。观察肿瘤生长。

可以证实，用LCMV和Candid #1的治疗造成肿瘤消退。得到的结果用图显示在图11中。

图11具有下述图例：

纵坐标：肿瘤直径（cm）

横坐标：时间（天）。

2.13 用5 x 10⁵个Hela细胞治疗NOD.SCID小鼠（第0天）。另外用2 x 10⁴ PFU LCMV（WE毒株）在肿瘤周围治疗一组小鼠（第3天）。观察肿瘤生长。

可以证实，用LCMV的治疗造成肿瘤消退。得到的结果用图显示在图12中。

图12具有下述图例：

纵坐标：肿瘤直径（cm）

横坐标：时间（天）。

2.14 将NOD.SCID小鼠用5 x 10⁵个HepG2细胞治疗（第-10天），并然后另外用或不用2 x 10⁴ PFU Candid #1在肿瘤周围治疗（第0天）。观察肿瘤生长。

可以证实，用Candid #1的治疗在该肿瘤类型的情况下造成肿瘤消退。得到的结果用图显示在图13中。

图13具有下述图例：

纵坐标：肿瘤直径（cm）

横坐标：时间（天）。

2.15 用LCMV感染原代人细胞（肝细胞、结肠上皮细胞、黑素细胞）和来自相同组织来源的肿瘤细胞（MOI 1）。1、2和3天以后在上清液中测量病毒的量。

在该实验中，可以证实沙粒病毒与健康组织相比在肿瘤细胞中增多地复制。

图14具有下述图例：

纵坐标：在细胞培养物上清液中的传染性病毒（对数噬斑形成单位）

横坐标：时间（天）。

2.16 带有在肩部中的转移灶和在胁腹中的转移灶（MOPC细胞）的C57BL/6小鼠的肿瘤直径（A）和存活率（B），其保持不治疗或已经用2x10⁶ PFU LCMV静脉内地治疗。

在该实验中可以证实，LCMV的静脉内疗法非常有效地作用于两个局部转移灶并因而延长存活。

图15A具有下述图例：

纵坐标：两个转移灶的肿瘤直径（cm）

横坐标：时间（天）。

图15B具有下述图例：

纵坐标：存活率百分比

横坐标：时间（天）。

2.17 带有黑素瘤（B16F10细胞）的C57BL/6小鼠的肿瘤直径，其保持不治疗或用2x10⁴ PFU LCMV肿瘤内地治疗。

在该实验中可以证实，使用LCMV的局部疗法在黑素瘤的情况下是非常有效的。

图16具有下述图例：

纵坐标：黑素瘤的肿瘤直径（cm）

横坐标：时间（天）。

2.18 MT/ret小鼠的黑素瘤的数目（发生内源性黑素瘤），其保持不治疗或用2x10⁶PFU LCMV静脉内地治疗。

在该实验中可以证实，使用LCMV的全身疗法在黑素瘤的情况下是非常有效的。

图17具有下述图例：

纵坐标：黑素瘤的数目。

2.19 带有人纤维肉瘤（Sw872细胞）的NOD.SCID小鼠的肿瘤直径（A）和存活率（B），其保持不治疗或用2x10⁶ PFU Candid #1瘤内地治疗。

在该实验中可以证实，Candid #1在纤维肉瘤的情况下也非常有效地起作用并因而延长存活。

图18A具有下述图例：

纵坐标：肿瘤直径（cm）

横坐标：时间（天）。

图18B具有下述图例：

纵坐标：存活率百分比

横坐标：时间（天）。

2.20 带有人咽癌（FaDu细胞）的NOD.SCID小鼠的肿瘤直径（A）和存活率（B），其保持不治疗或用2x10⁶ PFU LCMV肿瘤内地治疗。

在该实验中可以证实，LCMV在人咽癌的情况下也非常有效地起作用并因而延长存活。

图19A具有下述图例：

纵坐标：肿瘤直径（cm）

横坐标：时间（天）。

图19B具有下述图例：

纵坐标：存活率百分比

横坐标：时间（天）。

2.21 在肿瘤特异性的T细胞上的受体（PD-1、IL2受体、IL7受体）的表达，其影响T细胞的功能。肿瘤特异性的T细胞源自具有B16F10肿瘤且另外在有或没有LCMV的情况下瘤内地治疗的小鼠的血液。

在该实验中可以证实，LCMV积极地影响肿瘤特异性的T细胞。

图20具有下述图例：

纵坐标：不同受体的表达的效能（Stärke）（平均荧光强度）。

2.22 带有鼠皮下淋巴瘤（EL4细胞）的C57BL/6小鼠的肿瘤直径（A）和存活率（B），其用或不用肿瘤特异性的T细胞（OT1细胞）治疗并另外用或不用LCMV（2x10⁶ PFU）瘤内地治疗。

在该实验中可以证实，LCMV与T细胞疗法协同地起作用。

图21A具有下述图例：

纵坐标：肿瘤直径（cm）

横坐标：时间（天）。

图21B具有下述图例：

纵坐标：存活率百分比

横坐标：时间（天）。

2.23 带有鼠咽癌（MOPC细胞）且用LCMV（2x10⁴ PFU）瘤内地治疗的C57BL/6小鼠和PD-1缺陷型小鼠（Pdcd1 ^-/-小鼠）的存活率。

在该实验中可以证实，LCMV与PD-1阻断协同地起作用。

图22具有下述图例：

纵坐标：存活率百分比

横坐标：时间（天）。

在一般描述中提及的核酸序列SEQ ID No. 1至SEQ ID No. 6对应于在下述序列表中公开的核酸序列。

序列表

（序列表）

<110> Lang Karl Sebastian

<120>用于治疗癌或肉瘤的沙粒病毒以及用于制备对癌和肉瘤具有改善的免疫治疗效果的沙粒病毒的方法

<130> P54975WO

<160> 6

<170> BiSSAP 1.3

<210> 1

<211> 3413

<212> RNA

<213> 胡宁病毒

<220>

<223> 胡宁病毒毒株Candid-1片段S - AY746353 - 病毒；ssrna负链病毒；沙粒病毒科；沙粒病毒；新大陆沙粒病毒

<400> 1

gtgcagtaag gggatcctag gcgattttgg ttacgctata attgtaactg ttttctgttt 60

ggacaacatc aaaaacatcc attgcacaat ggggcagttc attagcttca tgcaagaaat 120

accaaccttt ttgcaggagg ctctgaacat tgctcttgtt gcagtcagtc tcattgccat 180

cattaagggt atagtgaact tgtacaaaag tggtttattc caattctttg tattcctagc 240

gcttgcagga agatcctgca cagaagaagc tttcaaaatc ggactgcaca ctgagttcca 300

gactgtgtcc ttctcaatgg tgggtctctt ttccaacaat ccacatgacc tacctttgtt 360

gtgtacctta aacaagagcc atctttacat taaggggggc aatgcttcat ttcagatcag 420

ctttgatgat attgcagtat tgttgccaca gtatgatgtt ataatacaac atccagcaga 480

tatgagctgg tgttccaaaa gtgatgatca aatttggttg tctcagtggt tcatgaatgc 540

tgtggggcat gattggcatc tagacccacc atttctgtgt aggaaccgtg caaagacaga 600

aggcttcatc tttcaagtca acacctccaa gactggtgtc aatggaaatt atgctaagaa 660

gtttaagact ggcatgcatc atttatatag agaatatcct gacccttgct tgaatggcaa 720

actgtgctta atgaaggcac aacctaccag ttggcctctc caatgtccac tcgaccacgt 780

taacacatta cacttcctta caagaggtaa aaacattcaa cttccaagga ggtccttgaa 840

agcattcttc tcctggtctt tgacagactc atccggcaag gatacccctg gaggctattg 900

tctagaagag tggatgctcg tagcagccaa aatgaagtgt tttggcaata ctgctgtagc 960

aaaatgcaat ttgaatcatg actctgaatt ctgtgacatg ttgaggctct ttgattacaa 1020

caaaaatgct atcaaaaccc taaatgatga aactaagaaa caagtaaatc tgatggggca 1080

gacaatcaat gccctgatat ctgacaattt attgatgaaa aacaaaatta gggaactgat 1140

gagtgtccct tactgcaatt acacaaaatt ttggtatgtc aaccacacac tttcaggaca 1200

acactcatta ccaaggtgct ggttaataaa aaacaacagc tatttgaaca tctctgactt 1260

ccgtaatgac tggatattag aaagtgactt cttaatttct gaaatgctaa gcaaagagta 1320

ttcggacagg cagggtaaaa ctcctttgac tttagttgac atctgtattt ggagcacagt 1380

attcttcaca gcgtcactct tccttcactt ggtgggtata ccctcccaca gacacatcag 1440

gggcgaagca tgccctttgc cacacaggtt gaacagcttg ggtggttgca gatgtggtaa 1500

gtaccccaat ctaaagaaac caacagtttg gcgtagagga cactaagacc tcctgagggt 1560

ccccaccagc ccgggcactg cccgggctgg tgtggccccc cagtccgcgg cctggccgcg 1620

gactggggag gcactgctta cagtgcatag gctgccttcg ggaggaacag caagctcggt 1680

ggtaatagag gtgtaggttc ctcctcatag agcttcccat ctagcactga ctgaaacatt 1740

atgcagtcta gcagagcaca gtgtggttca ctggaggcca acttgaaggg agtatccttt 1800

tccctctttt tcttattgac aaccactcca ttgtgatatt tgcataagtg accatatttc 1860

tcccagacct gttgatcaaa ctgcctggct tgttcagatg tgagcttaac atcaaccagt 1920

ttaagatctc ttcttccatg gaggtcaaac aacttcctga tgtcatcgga tccttgagta 1980

gtcacaacca tgtctggagg cagcaagccg atcacgtaac taagaactcc tggcattgca 2040

tcttctatgt ccttcattaa gatgccgtga gagtgtctgc taccattttt aaaccctttc 2100

tcatcatgtg gttttctgaa gcagtgaatg tactgcttac ctgcaggttg gaataatgcc 2160

atctcaacag ggtcagtggc tggtccttca atgtcgagcc aaagggtgtt ggtggggtcg 2220

agtttcccca ctgcctctct gatgacagct tcttgtatct ctgtcaagtt agccaatctc 2280

aaattctgac cgtttttttc cggctgtcta ggaccagcaa ctggtttcct tgtcagatca 2340

atacttgtgt tgtcccatga cctgcctgtg atttgtgatc tagaaccaat ataaggccaa 2400

ccatcgccag aaagacaaag tttgtacaaa aggttttcat aaggatttct attgcctggt 2460

ttctcatcaa taaacatgcc ttctcttcgt ttaacctgaa tggttgattt tatgagggaa 2520

gagaagtttt ctggggtgac tctgattgtt tccaacatgt ttccaccatc aagaatagat 2580

gctccagcct ttactgcagc tgaaagactg aagttgtaac cagaaatatt gatggagctt 2640

tcatctttag tcacaatctg aaggcagtca tgttcctgag tcagtctgtc aaggtcactt 2700

aagtttggat acttcacagt gtatagaagc ccaagtgagg ttaaagcttg tatgacactg 2760

ttcattgtct cacctccttg aacagtcatg catgcaattg tcaatgcagg aacagagcca 2820

aactgattgt ttagctttga agggtcttta acatcccata tcctcaccac accatttccc 2880

ccagtccctt gctgttgaaa tcccagtgtt ctcaatatct ctgatctttt agcaagttgt 2940

gactgggaca agttacccat gtaaaccccc tgagagcctg tctctgctct tcttatcttg 3000

ttttttaatt tctcaaggtc agacgccaac tccatcagtt catccctccc cagatctccc 3060

accttgaaaa ctgtgtttcg ttgaacactc ctcatggaca tgagtctgtc aacctcttta 3120

ttcaggtccc tcaacttgtt gaggtcttct tccccctttt tagtctttct gagtgcccgc 3180

tgcacctgtg ccacttggtt gaagtcgatg ctgtcagcaa ttagcttggc gtccttcaaa 3240

acatctgact tgacagtctg agtgaattgg ctcaaacctc tccttaagga ctgagtccat 3300

ctaaagcttg gaacctcctt ggagtgtgcc atgccagaag ttctggtgat tttgatctag 3360

aatagagttg ctcagtgaaa gtgttagaca ctatgcctag gatccactgt gcg 3413

<210> 2

<211> 7114

<212> RNA

<213> 胡宁病毒

<220>

<223> 胡宁病毒毒株Candid #1片段L - AY819707 - 病毒；ssrna负链病毒；沙粒病毒科；沙粒病毒；新大陆沙粒病毒

<400> 2

cgcacagtgg atcctaggcg taacttcatc attaaaatct cagattctgc tctgagtgtg 60

acttactgcg aagaggcaga caaatgggca actgcaacgg ggcatccaag tctaaccagc 120

cagactcctc aagagccaca cagccagccg cagaatttag gagggtagct cacagcagtc 180

tatatggtag atataactgt aagtgctgct ggtttgctga taccaatttg ataacctgta 240

atgatcacta cctttgttta aggtgccatc agggtatgtt aaggaattca gatctctgca 300

atatctgctg gaagcccctg cccaccacaa tcacagtacc ggtggagcca acagcaccac 360

caccataggc agactgcaca gggtcagacc cgaccccccg gggggccccc atggggaccc 420

cccgtggggg aaccccgggg gtgatgcgcc attagtcaat gtctttgatc tcgactttgt 480

gcttcagtgg cctgcatgtc acccctttca atctgaactg cccttgggga tctgatatca 540

gcaggtcatt taaagatctg ctgaatgcca ccttgaaatt tgagaattcc aaccagtcac 600

caaatttatc aagtgaacgg atcaactgct ctttgtgtag atcataaacg aggacaaagt 660

cctcttgctg aaataatatt gtttgtgatg ttgtttttag ataaggccat agttggctta 720

ataaggtttc cacactatca atgtcctcta gtgctccaat tgccttgact atgacatccc 780

cagacaactc aactctatat gttgacaacc tttcattacc tctgtaaaag ataccctctt 840

tcaagacaag aggttctcct gggttatctg gcccaatgag gtcatatgca tacttgttac 900

ttagttcaga ataaaagtca ccaaagttga acttaacatg gctcagaata ttgtcatcat 960

ttgtcgcagc gtagcctgca tcaataaaca agccagctag gtcaaagctc tcatggcctg 1020

tgaacaatgg taggctagcg ataaccagtg caccatccaa caatgagtgg cttccctcag 1080

acccagaaac acattgactc attgcatcca cattcagctc taattcaggg gtaccgacat 1140

catccactcc tagtgaactg acaatggtgt aactgtacac catctttctt ctaagtttaa 1200

attttgtcga aactcgtgtg tgttctactt gaatgatcaa ttttagtttc acagcttctt 1260

ggcaagcaac attgcgcaac acagtgtgca ggtccatcat gtcttcctga ggcaacaagg 1320

agatgttgtc aacagagaca ccctcaagga aaaccttgat attatcaaag ctagaaacta 1380

cataacccat tgcaatgtct tcaacaaaca ttgctcttga tactttatta ttcctaactg 1440

acaaggtaaa atctgtgagt tcagctagat ctacttgact gtcatcttct agatctagaa 1500

cttcattgaa ccaaaagaag gatttgagac acgatgttga catgactagt gggtttatca 1560

tcgaagataa gacaacttgc accatgaagt tcctgcaaac ttgctgtggg ctgatgccaa 1620

cttcccaatt tgtatactct gactgtctaa catgggctga agcgcaatca ctctgtttca 1680

caatataaac attattatct cttactttca ataagtgact tataatccct aagttttcat 1740

tcatcatgtc tagagccaca cagacatcta gaaacttgag tcttccacta tccaaagatc 1800

tgttcacttg aagatcattc ataaagggtg ccaaatgttc ttcaaatagt ttggggtaat 1860

ttcttcgtat agaatgcaat acatggttca tgcctaattg gtcttctatc tgtcgtactg 1920

ctttgggttt aacagcccag aagaaattct tattacataa gaccagaggg gcctgtggac 1980

tcttaatagc aaaaaacacc cactccccta actcacaggc atttgtcagc accaaagaga 2040

agtaatccca caaaattggt ttagaaaatt ggttaacttc tttaagtgat ttttgacagt 2100

aaataacttt aggctttctc tcacaaattc cacaaagaca tggcattatt cgagtaaata 2160

tgtcctttat atacagaaat ccgcctttac catccctaac acacttactc cccatactct 2220

tacaaaaccc aatgaagcct gaggcaacag aagactgaaa tgcagatttg ttgattgact 2280

ctgccaagat cttcttcacg ccttttgtga aatttcttga cagcctggac tgtattgtcc 2340

ttatcaatgt tggcatctct tctttctcta acactcttcg acttgtcatg agtttggtcc 2400

tcaagaccaa cctcaagtcc ccaaagctcg ctaaattgac ccatctgtag tctagagttt 2460

gtctgatttc atcttcacta cacccggcat attgcaggaa tccggataaa gcctcatccc 2520

ctcccctgct tatcaagttg ataaggtttt cctcaaagat tttgcctctc ttaatgtcat 2580

tgaacacttt cctcgcgcag ttccttataa acattgtctc cttatcatca gaaaaaatag 2640

cttcaatttt cctctgtaga cggtaccctc tagacccatc aacccagtct ttgacatctt 2700

gttcttcaat agctccaaac ggagtctctc tgtatccaga gtatctaatc aattggttga 2760

ctctaatgga aatctttgac actatatgag tgctaacccc attagcaata cattgatcac 2820

aaattgtgtc tatggtctct gacagttgtg ttggagtttt acacttaacg ttgtgtagag 2880

cagcagacac aaacttggtg agtaaaggag tctcttcacc catgacaaaa aatcttgact 2940

taaactcagc aacaaaagtt cctatcacac tctttgggct gataaacttg tttaatttag 3000

aagataagaa ttcatggaag cacaccattt ccagcagttc tgtcctgtct tgaaactttt 3060

catcactaag gcaaggaatt tttataaggc taacctggtc atcgctggag gtataagtga 3120

caggtatcac atcatacaat aagtcaagtg cataacacag aaattgttca gtaattagcc 3180

catataaatc tgatgtgttg tgcaagattc cctggcccat gtccaagaca gacattatat 3240

ggctggggac ctggtccctt gactgcagat actggtgaaa aaactcttca ccaacactag 3300

tacagtcaca acccattaaa cctaaagatc tcttcaattt ccctacacag taggcttctg 3360

caacattaat tggaacttca acgaccttat gaagatgcca tttgagaatg ttcattactg 3420

gttcaagatt cacctttgtt ctatctctgg gattcttcaa ttctaatgtg tacaaaaaag 3480

aaaggaaaag tgctgggctc atagttggtc cccatttgga gtggtcatat gaacaggaca 3540

agtcaccatt gttaacagcc attttcatat cacagattgc acgttcgaat tccttttctg 3600

aattcaagca tgtgtatttc attgaactac ccacagcttc tgagaagtct tcaactaacc 3660

tggtcatcag cttagtgttg aggtctccca catacagttc tctatttgag ccaacctgct 3720

ccttataact tagtccaaat ttcaagttcc ctgtatttga gctgatgctt gtgaactctg 3780

taggagagtc gtctgaatag aaacataaat tccgtagggc tgcatttgta aaataacttt 3840

tgtctagctt atcagcaatg gcttcagaat tgctttccct ggtactaagc cgaacctcat 3900

cctttagtct cagaacttca ctggaaaagc ccaatctaga tctacttcta tgctcataac 3960

tacccaattt ctgatcataa tgtccttgaa ttaaaagata cttgaagcat tcaaagaatt 4020

catcttcttg gtaggctatt gttgtcaaat tttttaataa caaacccaaa gggcagatgt 4080

cctgcggtgc ttcaagaaaa taagtcaatt taaatggaga tagataaaca gcatcacata 4140

actctttata cacatcagac ctgagcacat ctggatcaaa atccttcacc tcatgcattg 4200

acacctctgc tttaatctct ctcaacactc caaaaggggc ccacaatgac tcaagagact 4260

ctcgctcatc aacagatgga ttttttgatt tcaacttggt gatctcaact tttgtcccct 4320

cactattagc catcttggct agtgtcattt gtacgtcatt tctaataccc tcaaaggccc 4380

ttacttgatc ctctgttaaa ctctcataca tcactgataa ttcttcttga ttggttctgg 4440

ttcttgaacc ggtgctcaca agacctgtta gattttttaa tattaagtag tccatggaat 4500

caggatcaag attatacctg ccttttgttt taaacctctc agccatagta gaaacgcatg 4560

ttgaaacaag tttctcctta tcataaacag aaagaatatt tccaagttcg tcgagcttgg 4620

ggattaccac acttttattg cttgacagat ccagagctgt gctagtgatg ttaggcctgt 4680

agggattgct tttcagttca cctgtaactt taagtcttcc tctattgaag agagaaatgc 4740

agaaggacaa aatctcttta cacactcctg gaatttgagt atctgaggaa gtcttagcct 4800

ctttggaaaa gaatctgtcc aatcctctta tcatggtgtc ctcttgttcc agtgttagac 4860

tcccacttag aggggggttt acaacaacac aatcaaactt gactttgggc tcaataaact 4920

tctcaaaaca cttgatttga tctgtcaggc gatcaggtgt ctctttggtt accaagtgac 4980

acagataact aacatttaat agatatttaa accttcttgc aaagtaaaga tctgcatctt 5040

ccccttcacc caaaattgtc tggaaaagtt ccacagccat cctctgaatc agcacctctg 5100

atccagacat gcagtcgacc cttaactttg acatcaaatc cacatgatgg atttgatttg 5160

catatgccat caagaaatat cttagacctt gtaaaaatgt ctggttcctt ttggaagggg 5220

aacagagtac agctaacact aacaatctta atattggcct tgtcattgtc atgagttcgt 5280

ggctaaaatc caaccagctg gtcatttcct cacacatttc aattaacaca tcctccgaaa 5340

atataggcag gaaaaatctc tttggatcac agtaaaaaga gccttgttct tccaataccc 5400

cattgatgga tagatagata gaatagcacc ttgacttctc acctgttttt tggtaaaaca 5460

agagaccaaa tgtattcttt gtcagatgaa atctttgtac ataacactct cttagtctaa 5520

cattcccaaa atatctagaa tactctcttt cattgattaa caatcgggag gaaaatgatg 5580

tcttcatcga gttgaccaat gcaagggaaa tggaggacaa aatcctaaat aatttcttct 5640

gctcaccttc cactaagctg ctgaatggct gatgtctaca gattttctca aattccttgt 5700

taatagtata tctcatcact ggtctgtcag aaacaagtgc ctgagctaaa atcatcaagc 5760

tatccatatc agggtgtttt attagttttt ccagctgtga ccagagatct tgatgagagt 5820

tcttcaatgt tctggaacac gcttgaaccc acttggggct ggtcatcaat ttcttcctta 5880

ttagtttaat cgcctccaga atatctagaa gtctgtcatt gactaacatt aacatttgtc 5940

caacaactat tcccgcattt cttaacctta caattgcatc atcatgcgtt ttgaaaagat 6000

cacaaagtaa attgagtaaa actaagtcca gaaacagtaa agtgtttctc ctggtgttga 6060

aaacttttag acctttcact ttgttacaca cggaaagggc ttgaagataa cacctctcta 6120

cagcatcaat agatatagaa ttctcatctg actggctttc catgttgact tcatctattg 6180

gatgcaatgc gatagagtag actacatcca tcaacttgtt tgcacaaaaa gggcagctgg 6240

gcacatcact gtctttgtgg cttcctaata agatcaagtc atttataagc ttagactttt 6300

gtgaaaattt gaatttcccc aactgcttgt caaaaatctc cttcttaaac caaaacctta 6360

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gggattcatt taacctctca tcataaccca aagaattctt tttcaagcat tcgatgtttt 6480

ctaatcccaa gctctggttt tttgtgttgg acaaactatg gatcaatcgc tggtattctt 6540

gttcttcaat attaatctct tgcataaatt ttgatttctt taggatgtcg atcagcaacc 6600

accgaactct ttcaacaacc caatcagcaa ggaatctatt gctgtagcta gatctgccat 6660

caaccacagg aaccaacgta atccctgccc ttagtaggtc ggactttagg tttaagagct 6720

ttgacatgtc actcttccat tttctctcaa actcatcagg attgacccta acaaaggttt 6780

ccaataggat gagtgttttc cctgtgagtt tgaagccatc cggaatgact tttggaaggg 6840

tgggacatag tatgccatag tcagacagga tcacatcaac aaacttctga tctgaattga 6900

tctgacaggc gtgtgcctca caggactcaa gctctactaa acttgacaga agtttgaacc 6960

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ccatgctcaa gtgccgccta ggatccactg tgcg 7114

<210> 3

<211> 3410

<212> RNA

<213> 胡宁哺乳动物沙粒病毒

<220>

<223> 胡宁病毒毒株Candid #1片段S，完整序列.-ACCESSION FJ969442-版本

FJ969442.1-GI:264665554 - 病毒; ssRNA病毒; ssRNA

负链病毒；沙粒病毒科; 哺乳动物沙粒病毒。

<400> 3

cgcacagtgg atcctaggcg attttggtta cgctataatt gtaactgttt tctgtttgga 60

caacatcaaa aacatccatt gcacaatggg gcagttcatt agcttcatgc aagaaatacc 120

aacctttttg caggaggctc tgaacattgc tcttgttgca gtcagtctca ttgccatcat 180

taagggtgta gtgaacctgt acaaaagtgg tttgttccaa ttctttgtat tcctagcact 240

cgcaggaaga tcctgcacag aagaagcttt taaaatcgga ctgcacacag agttccagac 300

tgtgtccttc tcaatggtgg gtctcttttc caacaatcca catgacctgc ctctgttgtg 360

taccttaaac aagagccatc tttacattaa ggggggcaat gcttcatttc agatcagctt 420

tgatgatatt gcagtattgt tgccacagta tgatgttata atacaacatc cagcagatat 480

gagctggtgt tccaaaagtg atgatcaaat ttggttgtct cagtggttca tgaatgctgt 540

gggacatgat tggcatctag acccaccatt tctgtgtagg aaccgtgcaa agacagaagg 600

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taagactggc atgcatcatt tatatagaga atatcctgac ccttgcttga atggcaaact 720

gtgcttaatg aaggcacaac ctaccagttg gcctctccaa tgtccactcg accacgttaa 780

cacattacac ttccttacaa gaggtaaaaa cattcaactt ccaaggaggt ccttgaaagc 840

attcttctcc tggtctttga cagactcatc cggcaaggat acccctggag gctattgtct 900

agaagagtgg atgctcgttg cagccaaaat gaagtgtttt ggcaatactg ctgtagcaaa 960

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aaatgctatc aaaaccttaa atgatgaaac taagaaacaa gtaaatctga tgggacagac 1080

aatcaatgcg ctgatatctg acaatttatt gatgaaaaac aaaattaggg aactgatgag 1140

tgtcccttac tgcaattaca caaaattttg gtatgtcaac cacacacttt caggacaaca 1200

ctcattacca aggtgctggt taataaaaaa caacagctat ttgaacatct ctgacttccg 1260

taatgactgg atattagaaa gtgacttctt aatttctgaa atgctaagca aagagtattc 1320

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cttcacagcg tcactcttcc ttcacttggt gggtataccc tcccacagac acatcagggg 1440

cgaagcatgc cctttgccac acaggttgaa cagcttgggt ggttgcagat gtggtaagta 1500

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caccagcccg ggcactgccc gggctggtgt ggccccccag tccgcggcct ggccgcggac 1620

tggggaggca ctgcttacag tgcataggct gccttcggga ggaacagcaa gctcggtggt 1680

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cagacctgtt gatcaaactg cctggcttgt tcagatgtga gcttaacatc aaccagttta 1920

agatctcttc ttccatggag gtcaaacaac ttcctgatgt catcggatcc ttgagtagtc 1980

acaaccatgt ctggaggcag caagccgatc acgtaactaa gaactcctgg cattgcatct 2040

tctatgtctt tcattaagat gccgtgagag tgtctgctac catttttaaa ccctttctca 2100

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attgtctcac ctccttgaac agtcatgcat gcaattgtca atgcaggaac agaaccaaac 2820

tgattgttaa gttttgaagg atctttaaca tcccataccc tcaccacacc atttccccca 2880

gttccttgct gttgaaatcc cagtgttctc aatatctctg atctcttggc cagttgtgat 2940

tgagacaagt tacccatgta aaccccttga gagcctgtct ctgctcttct aatcttgttt 3000

tttaatttct caaggtcaga cgccaactcc atcagttcat ccctccccag atctcccacc 3060

ttgaaaactg tgtttcgttg aacactcctc atggacatga gtctgtcaac ctctttattc 3120

aggtccctca acttattgag gtcttcttcc ccccttttag tctttctgag tgcccgctgc 3180

acctgtgcct cttggttgaa gtcaatgctg tcagcaatta gcttggcatc cttcagaaca 3240

tccgacttga cagtctgagt aaattgactc aaacctctcc ttaaggactg agtccatcta 3300

aagcttggaa cctctttgga gtgtgccatg ccagaagttc tggtgatttt gatctagaat 3360

agagttgctc agtgaaagtg ttagacacta tgcctaggat ccactgtgcg 3410

<210> 4

<211> 7114

<212> RNA

<213> 胡宁哺乳动物沙粒病毒

<220>

<223> 胡宁病毒毒株Candid #1片段L, 完整序列.-ACCESSION AY819707-版本

AY819707.2-GI:227957900-病毒; ssRNA病毒; ssRNA负链病毒；沙粒病毒科; 哺乳动物沙粒病毒。

<400> 4

cgcacagtgg atcctaggcg taacttcatc attaaaatct cagattctgc tctgagtgtg 60

acttactgcg aagaggcaga caaatgggca actgcaacgg ggcatccaag tctaaccagc 120

cagactcctc aagagccaca cagccagccg cagaatttag gagggtagct cacagcagtc 180

tatatggtag atataactgt aagtgctgct ggtttgctga taccaatttg ataacctgta 240

atgatcacta cctttgttta aggtgccatc agggtatgtt aaggaattca gatctctgca 300

atatctgctg gaagcccctg cccaccacaa tcacagtacc ggtggagcca acagcaccac 360

caccataggc agactgcaca gggtcagacc cgaccccccg gggggccccc atggggaccc 420

cccgtggggg aaccccgggg gtgatgcgcc attagtcaat gtctttgatc tcgactttgt 480

gcttcagtgg cctgcatgtc acccctttca atctgaactg cccttgggga tctgatatca 540

gcaggtcatt taaagatctg ctgaatgcca ccttgaaatt tgagaattcc aaccagtcac 600

caaatttatc aagtgaacgg atcaactgct ctttgtgtag atcataaacg aggacaaagt 660

cctcttgctg aaataatatt gtttgtgatg ttgtttttag ataaggccat agttggctta 720

ataaggtttc cacactatca atgtcctcta gtgctccaat tgccttgact atgacatccc 780

cagacaactc aactctatat gttgacaacc tttcattacc tctgtaaaag ataccctctt 840

tcaagacaag aggttctcct gggttatctg gcccaatgag gtcatatgca tacttgttac 900

ttagttcaga ataaaagtca ccaaagttga acttaacatg gctcagaata ttgtcatcat 960

ttgtcgcagc gtagcctgca tcaataaaca agccagctag gtcaaagctc tcatggcctg 1020

tgaacaatgg taggctagcg ataaccagtg caccatccaa caatgagtgg cttccctcag 1080

acccagaaac acattgactc attgcatcca cattcagctc taattcaggg gtaccgacat 1140

catccactcc tagtgaactg acaatggtgt aactgtacac catctttctt ctaagtttaa 1200

attttgtcga aactcgtgtg tgttctactt gaatgatcaa ttttagtttc acagcttctt 1260

ggcaagcaac attgcgcaac acagtgtgca ggtccatcat gtcttcctga ggcaacaagg 1320

agatgttgtc aacagagaca ccctcaagga aaaccttgat attatcaaag ctagaaacta 1380

cataacccat tgcaatgtct tcaacaaaca ttgctcttga tactttatta ttcctaactg 1440

acaaggtaaa atctgtgagt tcagctagat ctacttgact gtcatcttct agatctagaa 1500

cttcattgaa ccaaaagaag gatttgagac acgatgttga catgactagt gggtttatca 1560

tcgaagataa gacaacttgc accatgaagt tcctgcaaac ttgctgtggg ctgatgccaa 1620

cttcccaatt tgtatactct gactgtctaa catgggctga agcgcaatca ctctgtttca 1680

caatataaac attattatct cttactttca ataagtgact tataatccct aagttttcat 1740

tcatcatgtc tagagccaca cagacatcta gaaacttgag tcttccacta tccaaagatc 1800

tgttcacttg aagatcattc ataaagggtg ccaaatgttc ttcaaatagt ttggggtaat 1860

ttcttcgtat agaatgcaat acatggttca tgcctaattg gtcttctatc tgtcgtactg 1920

ctttgggttt aacagcccag aagaaattct tattacataa gaccagaggg gcctgtggac 1980

tcttaatagc aaaaaacacc cactccccta actcacaggc atttgtcagc accaaagaga 2040

agtaatccca caaaattggt ttagaaaatt ggttaacttc tttaagtgat ttttgacagt 2100

aaataacttt aggctttctc tcacaaattc cacaaagaca tggcattatt cgagtaaata 2160

tgtcctttat atacagaaat ccgcctttac catccctaac acacttactc cccatactct 2220

tacaaaaccc aatgaagcct gaggcaacag aagactgaaa tgcagatttg ttgattgact 2280

ctgccaagat cttcttcacg ccttttgtga aatttcttga cagcctggac tgtattgtcc 2340

ttatcaatgt tggcatctct tctttctcta acactcttcg acttgtcatg agtttggtcc 2400

tcaagaccaa cctcaagtcc ccaaagctcg ctaaattgac ccatctgtag tctagagttt 2460

gtctgatttc atcttcacta cacccggcat attgcaggaa tccggataaa gcctcatccc 2520

ctcccctgct tatcaagttg ataaggtttt cctcaaagat tttgcctctc ttaatgtcat 2580

tgaacacttt cctcgcgcag ttccttataa acattgtctc cttatcatca gaaaaaatag 2640

cttcaatttt cctctgtaga cggtaccctc tagacccatc aacccagtct ttgacatctt 2700

gttcttcaat agctccaaac ggagtctctc tgtatccaga gtatctaatc aattggttga 2760

ctctaatgga aatctttgac actatatgag tgctaacccc attagcaata cattgatcac 2820

aaattgtgtc tatggtctct gacagttgtg ttggagtttt acacttaacg ttgtgtagag 2880

cagcagacac aaacttggtg agtaaaggag tctcttcacc catgacaaaa aatcttgact 2940

taaactcagc aacaaaagtt cctatcacac tctttgggct gataaacttg tttaatttag 3000

aagataagaa ttcatggaag cacaccattt ccagcagttc tgtcctgtct tgaaactttt 3060

catcactaag gcaaggaatt tttataaggc taacctggtc atcgctggag gtataagtga 3120

caggtatcac atcatacaat aagtcaagtg cataacacag aaattgttca gtaattagcc 3180

catataaatc tgatgtgttg tgcaagattc cctggcccat gtccaagaca gacattatat 3240

ggctggggac ctggtccctt gactgcagat actggtgaaa aaactcttca ccaacactag 3300

tacagtcaca acccattaaa cctaaagatc tcttcaattt ccctacacag taggcttctg 3360

caacattaat tggaacttca acgaccttat gaagatgcca tttgagaatg ttcattactg 3420

gttcaagatt cacctttgtt ctatctctgg gattcttcaa ttctaatgtg tacaaaaaag 3480

aaaggaaaag tgctgggctc atagttggtc cccatttgga gtggtcatat gaacaggaca 3540

agtcaccatt gttaacagcc attttcatat cacagattgc acgttcgaat tccttttctg 3600

aattcaagca tgtgtatttc attgaactac ccacagcttc tgagaagtct tcaactaacc 3660

tggtcatcag cttagtgttg aggtctccca catacagttc tctatttgag ccaacctgct 3720

ccttataact tagtccaaat ttcaagttcc ctgtatttga gctgatgctt gtgaactctg 3780

taggagagtc gtctgaatag aaacataaat tccgtagggc tgcatttgta aaataacttt 3840

tgtctagctt atcagcaatg gcttcagaat tgctttccct ggtactaagc cgaacctcat 3900

cctttagtct cagaacttca ctggaaaagc ccaatctaga tctacttcta tgctcataac 3960

tacccaattt ctgatcataa tgtccttgaa ttaaaagata cttgaagcat tcaaagaatt 4020

catcttcttg gtaggctatt gttgtcaaat tttttaataa caaacccaaa gggcagatgt 4080

cctgcggtgc ttcaagaaaa taagtcaatt taaatggaga tagataaaca gcatcacata 4140

actctttata cacatcagac ctgagcacat ctggatcaaa atccttcacc tcatgcattg 4200

acacctctgc tttaatctct ctcaacactc caaaaggggc ccacaatgac tcaagagact 4260

ctcgctcatc aacagatgga ttttttgatt tcaacttggt gatctcaact tttgtcccct 4320

cactattagc catcttggct agtgtcattt gtacgtcatt tctaataccc tcaaaggccc 4380

ttacttgatc ctctgttaaa ctctcataca tcactgataa ttcttcttga ttggttctgg 4440

ttcttgaacc ggtgctcaca agacctgtta gattttttaa tattaagtag tccatggaat 4500

caggatcaag attatacctg ccttttgttt taaacctctc agccatagta gaaacgcatg 4560

ttgaaacaag tttctcctta tcataaacag aaagaatatt tccaagttcg tcgagcttgg 4620

ggattaccac acttttattg cttgacagat ccagagctgt gctagtgatg ttaggcctgt 4680

agggattgct tttcagttca cctgtaactt taagtcttcc tctattgaag agagaaatgc 4740

agaaggacaa aatctcttta cacactcctg gaatttgagt atctgaggaa gtcttagcct 4800

ctttggaaaa gaatctgtcc aatcctctta tcatggtgtc ctcttgttcc agtgttagac 4860

tcccacttag aggggggttt acaacaacac aatcaaactt gactttgggc tcaataaact 4920

tctcaaaaca cttgatttga tctgtcaggc gatcaggtgt ctctttggtt accaagtgac 4980

acagataact aacatttaat agatatttaa accttcttgc aaagtaaaga tctgcatctt 5040

ccccttcacc caaaattgtc tggaaaagtt ccacagccat cctctgaatc agcacctctg 5100

atccagacat gcagtcgacc cttaactttg acatcaaatc cacatgatgg atttgatttg 5160

catatgccat caagaaatat cttagacctt gtaaaaatgt ctggttcctt ttggaagggg 5220

aacagagtac agctaacact aacaatctta atattggcct tgtcattgtc atgagttcgt 5280

ggctaaaatc caaccagctg gtcatttcct cacacatttc aattaacaca tcctccgaaa 5340

atataggcag gaaaaatctc tttggatcac agtaaaaaga gccttgttct tccaataccc 5400

cattgatgga tagatagata gaatagcacc ttgacttctc acctgttttt tggtaaaaca 5460

agagaccaaa tgtattcttt gtcagatgaa atctttgtac ataacactct cttagtctaa 5520

cattcccaaa atatctagaa tactctcttt cattgattaa caatcgggag gaaaatgatg 5580

tcttcatcga gttgaccaat gcaagggaaa tggaggacaa aatcctaaat aatttcttct 5640

gctcaccttc cactaagctg ctgaatggct gatgtctaca gattttctca aattccttgt 5700

taatagtata tctcatcact ggtctgtcag aaacaagtgc ctgagctaaa atcatcaagc 5760

tatccatatc agggtgtttt attagttttt ccagctgtga ccagagatct tgatgagagt 5820

tcttcaatgt tctggaacac gcttgaaccc acttggggct ggtcatcaat ttcttcctta 5880

ttagtttaat cgcctccaga atatctagaa gtctgtcatt gactaacatt aacatttgtc 5940

caacaactat tcccgcattt cttaacctta caattgcatc atcatgcgtt ttgaaaagat 6000

cacaaagtaa attgagtaaa actaagtcca gaaacagtaa agtgtttctc ctggtgttga 6060

aaacttttag acctttcact ttgttacaca cggaaagggc ttgaagataa cacctctcta 6120

cagcatcaat agatatagaa ttctcatctg actggctttc catgttgact tcatctattg 6180

gatgcaatgc gatagagtag actacatcca tcaacttgtt tgcacaaaaa gggcagctgg 6240

gcacatcact gtctttgtgg cttcctaata agatcaagtc atttataagc ttagactttt 6300

gtgaaaattt gaatttcccc aactgcttgt caaaaatctc cttcttaaac caaaacctta 6360

actttatgag ttcttctctt atgacagatt ctctaatgtc tcctctaacc ccaacaaaga 6420

gggattcatt taacctctca tcataaccca aagaattctt tttcaagcat tcgatgtttt 6480

ctaatcccaa gctctggttt tttgtgttgg acaaactatg gatcaatcgc tggtattctt 6540

gttcttcaat attaatctct tgcataaatt ttgatttctt taggatgtcg atcagcaacc 6600

accgaactct ttcaacaacc caatcagcaa ggaatctatt gctgtagcta gatctgccat 6660

caaccacagg aaccaacgta atccctgccc ttagtaggtc ggactttagg tttaagagct 6720

ttgacatgtc actcttccat tttctctcaa actcatcagg attgacccta acaaaggttt 6780

ccaataggat gagtgttttc cctgtgagtt tgaagccatc cggaatgact tttggaaggg 6840

tgggacatag tatgccatag tcagacagga tcacatcaac aaacttctga tctgaattga 6900

tctgacaggc gtgtgcctca caggactcaa gctctactaa acttgacaga agtttgaacc 6960

cttccaacaa cagagagctg gggtgatgtt gagataaaaa gatgtccctt tggtatgcta 7020

gctcctgtct ttctggaaaa tgctttctaa taaggctttt tatttcattt actgattcct 7080

ccatgctcaa gtgccgccta ggatccactg tgcg 7114

<210> 5

<211> 3377

<212> RNA

<213> 淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒病毒（LCMV）

<220>

<223> 淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒Clone 13片段S, 完整序列.ACCESSION DQ361065-版本

DQ361065.2-GI:116563461.-ssRNA病毒; ssRNA负链病毒；沙粒病毒科; 哺乳动物沙粒病毒。

<400> 5

gcgcaccggg gatcctaggc tttttggatt gcgctttcct ctagatcaac tgggtgtcag 60

gccctatcct acagaaggat gggtcagatt gtgacaatgt ttgaggctct gcctcacatc 120

atcgatgagg tgatcaacat tgtcattatt gtgcttatcg tgatcacggg tatcaaggct 180

gtctacaatt ttgccacctg tgggatattc gcattgatca gtttcctact tctggctggc 240

aggtcctgtg gcatgtacgg tcttaaggga cccgacattt acaaaggagt ttaccaattt 300

aagtcagtgg agtttgatat gtcacatctg aacctgacca tgcccaacgc atgttcagcc 360

aacaactccc accattacat cagtatgggg acttctggac tagaattgac cttcaccaat 420

gattccatca tcagtcacaa cttttgcaat ctgacctctg ccttcaacaa aaagaccttt 480

gaccacacac tcatgagtat agtttcgagc ctacacctca gtatcagagg gaactccaac 540

tataaggcag tatcctgcga cttcaacaat ggcataacca tccaatacaa cttgacattc 600

tcagatgcac aaagtgctca gagccagtgt agaaccttca gaggtagagt cctagatatg 660

tttagaactg ccttcggggg gaaatacatg aggagtggct ggggctggac aggctcagat 720

ggcaagacca cctggtgtag ccagacgagt taccaatacc tgattataca aaatagaacc 780

tgggaaaacc actgcacata tgcaggtcct tttgggatgt ccaggattct cctttcccaa 840

gagaagacta agttcctcac taggagacta gcgggcacat tcacctggac tttgtcagac 900

tcttcagggg tggagaatcc aggtggttat tgcctgacca aatggatgat tcttgctgca 960

gagcttaagt gtttcgggaa cacagcagtt gcgaaatgca atgtaaatca tgatgaagaa 1020

ttctgtgaca tgctgcgact aattgactac aacaaggctg ctttgagtaa gttcaaagag 1080

gacgtagaat ctgccttgca cttattcaaa acaacagtga attctttgat ttcagatcaa 1140

ctactgatga ggaaccactt gagagatctg atgggggtgc catattgcaa ttactcaaag 1200

ttttggtacc tagaacatgc aaagaccggc gaaactagtg tccccaagtg ctggcttgtc 1260

accaatggtt cttacttaaa tgagacccac ttcagtgacc aaatcgaaca ggaagccgat 1320

aacatgatta cagagatgtt gaggaaggat tacataaaga ggcaggggag taccccccta 1380

gcattgatgg accttctgat gttttccaca tctgcatatc tagtcagcat cttcctgcac 1440

cttgtcaaaa taccaacaca caggcacata aaaggtggct catgtccaaa gccacaccga 1500

ttaaccaaca aaggaatttg tagttgtggt gcatttaagg tgcctggtgt aaaaaccgtc 1560

tggaaaagac gctgaagaac agcgcctccc tgactctcca cctcgaaaga ggtggagagt 1620

cagggaggcc cagagggtct tagagtgtca caacatttgg gcctctaaaa attaggtcat 1680

gtggcagaat gttgtgaaca gttttcagat ctgggagcct tgctttggag gcgctttcaa 1740

aaatgatgca gtccatgagt gcacagtgcg gggtgatctc tttcttcttt ttgtccctta 1800

ctattccagt atgcatctta cacaaccagc catatttgtc ccacactttg tcttcatact 1860

ccctcgaagc ttccctggtc atttcaacat cgataagctt aatgtccttc ctattctgtg 1920

agtccagaag ctttctgatg tcatcggagc cttgacagct tagaaccatc ccctgcggaa 1980

gagcacctat aactgacgag gtcaacccgg gttgcgcatt gaagaggtcg gcaagatcca 2040

tgccgtgtga gtacttggaa tcttgcttga attgtttttg atcaacgggt tccctgtaaa 2100

agtgtatgaa ctgcccgttc tgtggttgga aaattgctat ttccactgga tcattaaatc 2160

taccctcaat gtcaatccat gtaggagcgt tggggtcaat tcctcccatg aggtctttta 2220

aaagcattgt ctggctgtag cttaagccca cctgaggtgg acctgctgct ccaggcgctg 2280

gcctgggtga attgactgca ggtttctcgc ttgtgagatc aattgttgtg ttttcccatg 2340

ctctccccac aatcgatgtt ctacaagcta tgtatggcca tccttcacct gaaaggcaaa 2400

ctttatagag gatgttttca taagggttcc tgtccccaac ttggtctgaa acaaacatgt 2460

tgagttttct cttggccccg agaactgcct tcaagaggtc ctcgctgttg cttggcttga 2520

tcaaaattga ctctaacatg ttacccccat ccaacagggc tgcccctgcc ttcacggcag 2580

caccaagact aaagttatag ccagaaatgt tgatgctgga ctgctgttca gtgatgaccc 2640

ccagaactgg gtgcttgtct ttcagccttt caagatcatt aagatttgga tacttgactg 2700

tgtaaagcaa gccaaggtct gtgagcgctt gtacaacgtc attgagcgga gtctgtgact 2760

gtttggccat acaagccata gttagacttg gcattgtgcc aaattgattg ttcaaaagtg 2820

atgagtcttt cacatcccaa actcttacca caccacttgc accctgctga ggctttctca 2880

tcccaactat ctgtaggatc tgagatcttt ggtctagttg ctgtgttgtt aagttcccca 2940

tatatacccc tgaagcctgg ggcctttcag acctcatgat cttggccttc agcttctcaa 3000

ggtcagccgc aagagacatc agttcttctg cactgagcct ccccactttc aaaacattct 3060

tctttgatgt tgactttaaa tccacaagag aatgtacagt ctggttgaga cttctgagtc 3120

tctgtaggtc tttgtcatct ctcttttcct tcctcatgat cctctgaaca ttgctgacct 3180

cagagaagtc caacccattc agaaggttgg ttgcatcctt aatgacagca gccttcacat 3240

ctgatgtgaa gctctgcaat tctcttctca atgcttgcgt ccattggaag ctcttaactt 3300

ccttagacaa ggacatcttg ttgctcaatg gtttctcaag acaaatgcgc aatcaaatgc 3360

ctaggatcca ctgtgcg 3377

<210> 6

<211> 7229

<212> RNA

<213> 淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒病毒（LCMV）

<220>

<223> 淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒Clone 13片段L, 完整序列.-ACCESSION DQ361066-版本

DQ361066.1-GI:86440167.-ssRNA病毒; ssRNA负链病毒；沙粒病毒科; 哺乳动物沙粒病毒

<400> 6

gcgcaccggg gatcctaggc gtttagttgc gctgtttggt tgcacaactt tcttcgtgag 60

gctgtcagaa gtggacctgg ctgatagcga tgggtcaagg caagtccaga gaggagaaag 120

gcaccaatag tacaaacagg gccgaaatcc taccagatac cacctatctt ggccctttaa 180

gctgcaaatc ttgctggcag aaatttgaca gcttggtaag atgccatgac cactaccttt 240

gcaggcactg tttaaacctt ctgctgtcag tatccgacag gtgtcctctt tgtaaatatc 300

cattaccaac cagattgaag atatcaacag ccccaagctc tccacctccc tacgaagagt 360

aacaccgtcc ggccccggcc ccgacaaaca gcccagcaca agggaaccgc acgtcaccca 420

acgcacacag acacagcacc caacacagaa cacgcacaca cacacacaca cacacccaca 480

cgcacgcgcc cccaccaccg gggggcgccc ccccccgggg ggcggccccc cgggagcccg 540

ggcggagccc cacggagatg cccatcagtc gatgtcctcg gccaccgacc cgcccagcca 600

atcgtcgcag gacctcccct tgagtctaaa cctgcccccc actgtttcat acatcaaagt 660

gctcctagat ttgctaaaac aaagtctgca atccttaaag gcgaaccagt ctggcaaaag 720

cgacagtgga atcagcagaa tagatctgtc tatacatagt tcctggagga ttacacttat 780

ctctgaaccc aacaaatgtt caccagttct gaatcgatgc aggaagaggt tcccaaggac 840

atcactaatc ttttcatagc cctcaagtcc tgctagaaag actttcatgt ccttggtctc 900

cagcttcaca atgatatttt ggacaaggtt tcttccttca aaaagggcac ccatctttac 960

agtcagtggc acaggctccc actcaggtcc aactctctca aagtcaatag atctaatccc 1020

atccagtatt cttttggagc ccaacaactc aagctcaaga gaatcaccaa gtatcaaggg 1080

atcttccatg taatcctcaa actcttcaga tctgatatca aagacaccat cgttcacctt 1140

gaagacagag tctgtcctca gtaagtggag gcattcatcc aacattcttc tatctatctc 1200

acccttaaag aggtgagagc atgataaaag ttcagccaca cctggattct gtaattggca 1260

cctaaccaag aatatcaatg aaaatttcct taaacagtca gtattattct gattgtgcgt 1320

aaagtccact gaaattgaaa actccaatac cccttttgtg tagttgagca tgtagtccca 1380

cagatccttt aaggatttaa atgcctttgg gtttgtcagg ccctgcctaa tcaacatggc 1440

agcattacac acaacatctc ccattcggta agagaaccac ccaaaaccaa actgcaaatc 1500

attcctaaac ataggcctct ccacattttt gttcaccacc tttgagacaa atgattgaaa 1560

ggggcccagt gcctcagcac catcttcaga tggcatcatt tctttatgag ggaaccatga 1620

aaaattgcct aatgtcctgg ttgttgcaac aaattctcga acaaatgatt caaaatacac 1680

ctgttttaag aagttcttgc agacatccct cgtgctaaca acaaattcat caaccagact 1740

ggagtcagat cgctgatgag aattggcaag gtcagaaaac agaacagtgt aatgttcatc 1800

ccttttccac ttaacaacat gagaaatgag tgacaaggat tctgagttaa tatcaattaa 1860

aacacagagg tcaaggaatt taattctggg actccacctc atgttttttg agctcatgtc 1920

agacataaat ggaagaagct gatcctcaaa gatcttggga tatagccgcc tcacagattg 1980

aatcacttgg ttcaaattca ctttgtcctc cagtagcctt gagctctcag gctttcttgc 2040

tacataatca catgggttta agtgcttaag agttaggttc tcactgttat tcttcccttt 2100

ggtcggttct gctaggaccc aaacacccaa ctcaaaagag ttgctcaatg aaatacaaat 2160

gtagtcccaa agaagaggcc ttaaaaggca tatatgatca cggtgggctt ctggatgaga 2220

ctgtttgtca caaatgtaca gcgttatacc atcccgattg caaactcttg tcacatgatc 2280

atctgtggtt agatcctcaa gcagcttttt gatatacaga ttttccctat ttttgtttct 2340

cacacacctg cttcctagag ttttgcaaag gcctataaag ccagatgaga tacaactctg 2400

gaaagctgac ttgttgattg cttctgacag cagcttctgt gcaccccttg tgaatttact 2460

acaaagtttg ttctggagtg tcttgatcaa tgatgggatt ctttcctctt ggaaagtcat 2520

cactgatgga taaaccacct tttgtcttaa aaccatcctt aatgggaaca tttcattcaa 2580

attcaaccag ttaacatctg ctaactgatt cagatcttct tcaagaccga ggaggtctcc 2640

caattgaaga atggcctcct ttttatctct gttaaatagg tctaagaaaa attcttcatt 2700

aaattcacca tttttgagct tatgatgcag tttccttaca agctttctta caacctttgt 2760

ttcattagga cacagttcct caatgagtct ttgtattctg taacctctag aaccatccag 2820

ccaatctttc acatcagtgt tggtattcag tagaaatgga tccaaaggga aattggcata 2880

ctttaggagg tccagtgttc tcctttggat actattaact agggagactg ggacgccatt 2940

tgcgatggct tgatctgcaa ttgtatctat tgtttcacaa agttgatgtg gctctttaca 3000

cttgacattg tgtagcgctg cagatacaaa ctttgtgaga agagggactt cctcccccca 3060

tacatagaat ctagatttaa attctgcagc gaacctccca gccacacttt ttgggctgat 3120

aaatttgttt aacaagccgc tcagatgaga ttggaattcc aacaggacaa ggacttcctc 3180

cggatcactt acaaccaggt cactcagcct cctatcaaat aaagtgatct gatcatcact 3240

tgatgtgtaa gcctctggtc tttcgccaaa gataacacca atgcagtagt tgatgaacct 3300

ctcgctaagc aaaccataga agtcagaagc attatgcaag attccctgcc ccatatcaat 3360

aaggctggat atatgggatg gcactatccc catttcaaaa tattgtctga aaattctctc 3420

agtaacagtt gtttctgaac ccctgagaag ttttagcttc gacttgacat atgatttcat 3480

cattgcattc acaacaggaa aggggacctc gacaagctta tgcatgtgcc aagttaacaa 3540

agtgctaaca tgatctttcc cggaacgcac atactggtca tcacctagtt tgagattttg 3600

tagaaacatt aagaacaaaa atgggcacat cattggtccc catttgctgt gatccatact 3660

atagtttaag aacccttccc gcacattgat agtcattgac aagattgcat tttcaaattc 3720

cttatcattg tttaaacagg agcctgaaaa gaaacttgaa aaagactcaa aataatcttc 3780

tattaacctt gtgaacattt ttgtcctcaa atctccaata tagagttctc tatttccccc 3840

aacctgctct ttataagata gtgcaaattt cagccttcca gagtcaggac ctactgaggt 3900

gtatgatgtt ggtgattctt ctgagtagaa gcacagattt ttcaaagcag cactcataca 3960

ttgtgtcaac gacagagctt tactaaggga ctcagaatta ctttccctct cactgattct 4020

cacgtcttct tccagtttgt cccagtcaaa tttgaaattc aagccttgcc tttgcatatg 4080

cctgtatttc cctgagtacg catttgcatt catttgcaac agaatcatct tcatgcaaga 4140

aaaccaatca ttctcagaaa agaactttct acaaaggttt tttgccatct catcgaggcc 4200

acactgatct ttaatgactg aggtgaaata caaaggtgac agctctgtgg aaccctcaac 4260

agcctcacag ataaatttca tgtcatcatt ggttagacat gatgggtcaa agtcttctac 4320

taaatggaaa gatatttctg acaagataac ttttcttaag tgagccatct tccctgttag 4380

aataagctgt aaatgatgta gtccttttgt atttgtaagt ttttctccat ctcctttgtc 4440

attggccctc ctacctcttc tgtaccgtgc tattgtggtg ttgacctttt cttcgagact 4500

tttgaagaag cttgtctctt cttctccatc aaaacatatt tctgccaggt tgtcttccga 4560

tctccctgtc tcttctccct tggaaccgat gaccaatcta gagactaact tggaaacttt 4620

atattcatag tctgagtggc tcaacttata cttttgtttt cttacgaaac tctccgtaat 4680

ttgactcaca gcactaacaa gcaatttgtt aaagtcatat tccagaagtc gttctccatt 4740

tagatgctta ttaaccacca cacttttgtt actagcaaga tctaatgctg tcgcacatcc 4800

agagttagtc atgggatcta ggctgtttag cttcttctct cctttgaaaa ttaaagtgcc 4860

gttgttaaat gaagacacca ttaggctaaa ggcttccaga ttaacacctg gagttgtatg 4920

ctgacagtca atttctttac tagtgaatct cttcatttgc tcatagaaca cacattcttc 4980

ctcaggagtg attgcttcct tggggttgac aaaaaaacca aattgacttt tgggctcaaa 5040

gaacttttca aaacatttta tctgatctgt tagcctgtca ggggtctcct ttgtgatcaa 5100

atgacacagg tatgacacat tcaacataaa tttaaatttt gcactcaaca acaccttctc 5160

accagtacca aaaatagttt ttattaggaa tctaagcagc ttatacacca ccttctcagc 5220

aggtgtgatc agatcctccc tcaacttatc cattaatgat gtagatgaaa aatctgacac 5280

tattgccatc accaaatatc tgacactctg tacctgcttt tgatttctct ttgttgggtt 5340

ggtgagcatt agcaacaata gggtcctcag tgcaacctca atgtcggtga gacagtcttt 5400

caaatcagga catgatctaa tccatgaaat catgatgtct atcatattgt ataagacctc 5460

atctgaaaaa attggtaaaa agaacctttt aggatctgca tagaaggaaa ttaaatgacc 5520

atccgggcct tgtatggagt agcaccttga agattctcca gtcttctggt ataataggtg 5580

gtattcttca gagtccagtt ttattacttg gcaaaacact tctttgcatt ctaccacttg 5640

atatctcaca gaccctattt gattttgcct tagtctagca actgagctag ttttcatact 5700

gtttgttaag gccagacaaa cagatgataa tcttctcagg ctctgtatgt tcttcagctg 5760

ctctgtgctg ggttggaaat tgtaatcttc aaacttcgta taatacatta tcgggtgagc 5820

tccaattttc ataaagttct caaattcagt gaatggtatg tggcattctt gctcaaggtg 5880

ttcagacagt ccgtaatgct cgaaactcag tcccaccact aacaggcatt tttgaatttt 5940

tgcaatgaac tcactaatag atgccctaaa caattcctca aaagacacct ttctaaacac 6000

ctttgacttt tttctattcc tcaaaagtct aatgaactcc tctttagtgc tgtgaaagct 6060

taccagccta tcattcacac tactatagca acaacccacc cagtgtttat cattttttaa 6120

ccctttgaat ttcgactgtt ttatcaatga ggaaagacac aaaacatcca gatttaacaa 6180

ctgtctcctt ctagtattca acagtttcaa actcttgact ttgtttaaca tagagaggag 6240

cctctcatat tcagtgctag tctcacttcc cctttcgtgc ccatgggtct ctgcagttat 6300

gaatctcatc aaaggacagg attcgactgc ctccctgctt aatgttaaga tatcatcact 6360

atcagcaagg ttttcataga gctcagagaa ttccttgatc aagccttcag ggtttacttt 6420

ctgaaagttt ctctttaatt tcccactttc taaatctctt ctaaacctgc tgaaaagaga 6480

gtttattcca aaaaccacat catcacagct catgttgggg ttgatgcctt cgtggcacat 6540

cctcataatt tcatcattgt gagttgacct cgcatctttc agaattttca tagagtccat 6600

accggagcgc ttgtcgatag tagtcttcag ggactcacag agtctaaaat attcagactc 6660

ttcaaagact ttctcatttt ggttagaata ctccaaaagt ttgaataaaa ggtctctaaa 6720

tttgaagttt gcccactctg gcataaaact attatcataa tcacaacgac catctactat 6780

tggaactaat gtgacacccg caacagcaag gtcttccctg atgcatgcca atttgttagt 6840

gtcctctata aatttcttct caaaactggc tggagtgctc ctaacaaaac actcaagaag 6900

aatgagagaa ttgtctatca gcttgtaacc atcaggaatg ataagtggta gtcctgggca 6960

tacaattcca gactccacca aaattgtttc cacagactta tcgtcgtggt tgtgtgtgca 7020

gccactcttg tctgcactgt ctatttcaat gcagcgtgac agcaacttga gtccctcaat 7080

cagaaccatt ctgggttccc tttgtcccag aaagttgagt ttctgccttg acaacctctc 7140

atcctgttct atatagttta aacataactc tctcaattct gagatgattt catccattgc 7200

gcatcaaaaa gcctaggatc ctcggtgcg 7229。

Claims

1.能够活化先天性免疫细胞并从而实现肿瘤消退的沙粒病毒在制备用于治疗和/或预防癌症的药物中的用途，其中所述沙粒病毒能够通过活化所述免疫细胞引起干扰素-α分泌增加，其中所述沙粒病毒是胡宁病毒株Candid #1或其中所述沙粒病毒是淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒LCMV，其中LCMV的L-和S-核糖核酸序列选自由WE、Armstrong、Clone 13和Docile L-和S-核糖核酸序列组成的组。

2.根据权利要求1中所述的用途，其中对癌症的治疗实现肿瘤消退。

3.根据权利要求1中所述的用途，其中所述沙粒病毒不含有基因组外来RNA。

4.根据权利要求1所述的用途，其中，所述肿瘤选自包含癌或肉瘤或由它们组成的组。

5.根据权利要求4中所述的用途，其中，所述癌选自包含肛门癌、支气管癌、肺癌、子宫内膜癌、胆囊癌、肝细胞癌、睾丸癌、结肠直肠癌、喉癌、食管癌、胃癌、乳腺癌、肾癌、卵巢癌、胰腺肿瘤、咽癌、前列腺癌、甲状腺癌和宫颈癌或由它们组成的组。

6.根据权利要求4中所述的用途，其中，所述肉瘤选自包含血管肉瘤、软骨肉瘤、尤文肉瘤、纤维肉瘤、卡波西肉瘤、脂肪肉瘤、平滑肌肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、神经源性肉瘤、骨肉瘤和横纹肌肉瘤或由它们组成的组。

7.根据权利要求1中所述的用途，其中，所述肿瘤是黑素瘤。

8.根据权利要求1中所述的用途，其中，所述肿瘤是母细胞瘤。

9.根据权利要求1中所述的用途，其中，所述肿瘤是淋巴瘤。

10.根据权利要求1所述的用途，其中所述沙粒病毒包含根据SEQ ID No: 5的S-核糖核酸序列或其双义序列的核酸序列，并包含根据SEQ ID No: 6的L-核糖核酸序列或其双义序列的核酸序列。

11.根据权利要求1所述的用途，其中所述淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒是淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒WE株。

12.根据权利要求1所述的用途，其中，所述胡宁病毒具有根据SEQ ID NO: 1的S-核糖核酸序列或双义序列，和根据SEQ ID NO: 2的L-核糖核酸序列或双义序列。

13.根据权利要求1所述的用途，其中，所述胡宁病毒具有根据SEQ ID NO: 3的S-核糖核酸序列或双义序列，和根据SEQ ID NO: 4的L-核糖核酸序列或双义序列。

14.根据权利要求1-13中任一项所述的用途，其中药物是用在人类中癌症的治疗和/或预防中。