TW202330574A - 包含有專一性表現於前列腺細胞的表現質體之類病毒顆粒及其用途 - Google Patents
包含有專一性表現於前列腺細胞的表現質體之類病毒顆粒及其用途 Download PDFInfo
- Publication number
- TW202330574A TW202330574A TW111104033A TW111104033A TW202330574A TW 202330574 A TW202330574 A TW 202330574A TW 111104033 A TW111104033 A TW 111104033A TW 111104033 A TW111104033 A TW 111104033A TW 202330574 A TW202330574 A TW 202330574A
- Authority
- TW
- Taiwan
- Prior art keywords
- virus
- prostate
- cells
- prostate cancer
- human
- Prior art date
Links
- 210000005267 prostate cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 29
- 239000002245 particle Substances 0.000 title claims abstract description 25
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 title claims abstract description 8
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 11
- 241000701460 JC polyomavirus Species 0.000 claims abstract description 8
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 58
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 47
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 47
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 29
- 210000002706 plastid Anatomy 0.000 claims description 29
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 23
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 23
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 claims description 22
- 108010072866 Prostate-Specific Antigen Proteins 0.000 claims description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 11
- 101710197658 Capsid protein VP1 Proteins 0.000 claims description 10
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 10
- 101710108545 Viral protein 1 Proteins 0.000 claims description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 6
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 3
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 claims description 3
- 101710118046 RNA-directed RNA polymerase Proteins 0.000 claims description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 3
- 102100038358 Prostate-specific antigen Human genes 0.000 claims 3
- 101710091439 Major capsid protein 1 Proteins 0.000 abstract description 2
- 101710169675 Major capsid protein VP1 Proteins 0.000 abstract description 2
- 108010080146 androgen receptors Proteins 0.000 description 20
- 102000001307 androgen receptors Human genes 0.000 description 20
- IRSCQMHQWWYFCW-UHFFFAOYSA-N ganciclovir Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2COC(CO)CO IRSCQMHQWWYFCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 229960002963 ganciclovir Drugs 0.000 description 18
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 16
- 102000007066 Prostate-Specific Antigen Human genes 0.000 description 13
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 8
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 6
- WXCXUHSOUPDCQV-UHFFFAOYSA-N enzalutamide Chemical compound C1=C(F)C(C(=O)NC)=CC=C1N1C(C)(C)C(=O)N(C=2C=C(C(C#N)=CC=2)C(F)(F)F)C1=S WXCXUHSOUPDCQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 6
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 6
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 5
- 229960004671 enzalutamide Drugs 0.000 description 5
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 5
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 4
- RGLRXNKKBLIBQS-XNHQSDQCSA-N leuprolide acetate Chemical compound CC(O)=O.CCNC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 RGLRXNKKBLIBQS-XNHQSDQCSA-N 0.000 description 4
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 3
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 3
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 3
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 3
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 229960004338 leuprorelin Drugs 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 206010027452 Metastases to bone Diseases 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 2
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 2
- 239000003098 androgen Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 2
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 2
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 2
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 2
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 2
- 108020001756 ligand binding domains Proteins 0.000 description 2
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 2
- 238000011472 radical prostatectomy Methods 0.000 description 2
- 230000008054 signal transmission Effects 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- RPROHCOBMVQVIV-UHFFFAOYSA-N 2,3,4,5-tetrahydro-1h-pyrido[4,3-b]indole Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1CCNC2 RPROHCOBMVQVIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091008721 AR-V7 Proteins 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 206010003497 Asphyxia Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 108010069236 Goserelin Proteins 0.000 description 1
- BLCLNMBMMGCOAS-URPVMXJPSA-N Goserelin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](COC(C)(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NNC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 BLCLNMBMMGCOAS-URPVMXJPSA-N 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 101000605534 Homo sapiens Prostate-specific antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000592517 Homo sapiens Puromycin-sensitive aminopeptidase Proteins 0.000 description 1
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 108091027981 Response element Proteins 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108700022368 Whn Proteins 0.000 description 1
- GZOSMCIZMLWJML-VJLLXTKPSA-N abiraterone Chemical compound C([C@H]1[C@H]2[C@@H]([C@]3(CC[C@H](O)CC3=CC2)C)CC[C@@]11C)C=C1C1=CC=CN=C1 GZOSMCIZMLWJML-VJLLXTKPSA-N 0.000 description 1
- 229960000853 abiraterone Drugs 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000012984 antibiotic solution Substances 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 230000005907 cancer growth Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 210000002745 epiphysis Anatomy 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- 229960002913 goserelin Drugs 0.000 description 1
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 1
- 238000001794 hormone therapy Methods 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000001338 self-assembly Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000012447 xenograft mouse model Methods 0.000 description 1
- 229940085728 xtandi Drugs 0.000 description 1
Abstract
一種人類JC病毒之類病毒顆粒，用於將異源核酸遞送至人體，包含：主要衣殼蛋白VP1（Viral protein 1, VP1），其胺基酸序列如SEQ ID NO：1所示；表現質體，帶有該異源核酸，該表現質體係由如SEQ ID NO：2所示之鹼基序列中的前列腺細胞專一性啟動子所驅動，其中，該前列腺細胞專一性啟動子係驅動該表現質體於前列腺細胞表現。
Description
本發明相關於一種包含有專一性表現於前列腺細胞的表現質體之類病毒顆粒。
前列腺癌為全世界男性最常見的惡性腫瘤之一。儘管被診斷出局部前列腺癌的大部分患者於根除性攝護腺切除手術（radical prostatectomy, RP）或是放射治療後得以痊癒，將近30%的患者仍將經歷生化復發。而縱使隨後施予荷爾蒙治療及／或化療，仍有將近40%的患者會發展為轉移性的去勢抗性前列腺癌（metastatic castration-resistant prostate cancer, mCRPC）。以目前技術而言，由於無法治癒mCRPC，使得mCRPC患者於癌細胞轉移至骨頭後的死亡率幾乎為100%。
前列腺係仰賴雄性素受體（androgen receptor, AR）訊息傳遞路徑的訊息傳遞以維持生長以及存活。睪固酮係為關鍵的AR配位體（androgen receptor ligand, AR ligand），而諸如leuprorelin acetate或是goserelin等一世代荷爾蒙製劑係藉由抑制睪丸分泌睪固酮而抑制AR訊息傳遞的活性。然而，由於10%的睪固酮係由腎上腺所產生，且由於AR結構的突變或放大，都將導致無法成功抑制AR活性，進而使癌細胞產生抗性。上述原因促進了諸如abiraterone以及enzalutamide等二世代荷爾蒙製劑的發展，其中enzalutamide的作用機轉係藉由完全地阻斷AR配位體的結合區域（ligand-binding domain, LBD）從而防止AR藉由與配位體結合而活化。因此，一世代荷爾蒙製劑以及二世代荷爾蒙製劑皆是藉由阻斷的方式調節AR訊息傳遞以抑制癌細胞的生長。
前列腺專一性抗原（prostate-specific antigen, PSA）為一種AR訊息傳遞的下游產物，係專一性地表現於前列腺細胞，PSA啟動子（PSA promoter）係包含了受AR訊息傳遞調控的雄性素反應因子（androgen response element, ARE）。在某些子集合的mCRPC患者中，其PSA表現量無法獲得控制，而這歸因於：具有治療抗性的前列腺癌細胞通常除了野生型AR的表現以外，更存在有AR變異體（例如：AR-V7，為一種不具有LBD、不需要AR配位體可持續性活化的AR）的過度表現。因此，這也導致習知技術的一世代荷爾蒙製劑以及二世代荷爾蒙製劑皆難以成功地抑制AR訊息傳遞。
綜上所述，對於前列腺癌患者、特別是mCRPC患者之治療模式的改良需要，係極為迫切且至關重要。
因此，本發明的目的即在提供一種包含有專一性表現於前列腺細胞的表現質體之類病毒顆粒，可有效延緩以及抑制轉移性的去勢抗性前列腺癌細胞之生長。
本發明為解決習知技術之問題所採用之技術手段係提供一種人類JC病毒之類病毒顆粒，用於將異源核酸遞送至人體，包含：主要衣殼蛋白VP1（Viral protein 1, VP1），其胺基酸序列如SEQ ID NO：1所示；表現質體，帶有該異源核酸，該表現質體係由如SEQ ID NO：2所示之鹼基序列中的前列腺細胞專一性啟動子所驅動，其中，該前列腺細胞專一性啟動子係驅動該表現質體於前列腺細胞表現。
在本發明的一實施例中係提供一種人類JC病毒之類病毒顆粒，該前列腺細胞專一性啟動子係為前列腺專一性抗原啟動子（prostate-specific antigen promoter, PSA promoter）。
在本發明的一實施例中係提供一種人類JC病毒之類病毒顆粒，該表現質體係用以表現自殺基因。
在本發明的一實施例中係提供一種人類JC病毒之類病毒顆粒，該前列腺細胞包括前列腺癌細胞及／或轉移性的去勢抗性前列腺癌細胞。
在本發明的一實施例中係提供一種人類JC病毒之類病毒顆粒用於製備抑制前列腺癌細胞及／或轉移性的去勢抗性前列腺癌細胞生長的醫藥組成物的用途。
經由本發明所採用之技術手段，本發明之該包含有專一性表現於前列腺細胞的表現質體之類病毒顆粒，可有效地遞送該表現質體至前列腺癌細胞、特別是轉移性的去勢抗性前列腺癌細胞，並且有效延緩以及抑制前列腺癌細胞、特別是轉移性的去勢抗性前列腺癌細胞之生長。
以下根據第1a圖至第3圖，而說明本發明的實施方式。該說明並非為限制本發明的實施方式，而為本發明之實施例的一種。
依據本發明的一實施例的一種人類JC病毒之類病毒顆粒，用於將異源核酸遞送至人體，包含：主要衣殼蛋白VP1（Viral protein 1, VP1），其胺基酸序列如SEQ ID NO：1所示；表現質體，帶有該異源核酸，該表現質體係由如SEQ ID NO：2所示之鹼基序列中的前列腺細胞專一性啟動子所驅動，其中，該前列腺細胞專一性啟動子係驅動該表現質體於前列腺細胞表現。
詳細而言，前列腺癌細胞於發展成為去勢抗性前列腺癌細胞後，該去勢抗性前列腺癌細胞轉移的可能性高（即，轉移性的去勢抗性前列腺癌細胞），且臨床常見的轉移標的器官係為骨頭。因此，本發明的包含有專一性表現於前列腺細胞的表現質體之類病毒顆粒的作用標的，係主要針對轉移性的去勢抗性前列腺癌細胞，並進一步在本發明的實施例中針對骨轉移性的去勢抗性前列腺癌細胞實施相關實驗。本發明的作用標的並不以骨轉移性的去勢抗性前列腺癌細胞為限，由於本發明之該表現質體所具有的該前列腺細胞專一性啟動子係為前列腺專一性抗原啟動子（prostate-specific antigen promoter，簡稱為PSA啟動子），因此，具有AR（簡稱為AR (+)）的其他前列腺癌細胞、去勢抗性前列腺癌細胞以及轉移性的去勢抗性前列腺癌細胞皆可作為本發明的作用標的。
詳細而言，本發明之人類JC病毒之類病毒顆粒係以由該主要衣殼蛋白VP1自行組裝並包裝該表現質體的方式所形成，包含有專一性表現於前列腺細胞的表現質體之類病毒顆粒的相關製備材料及試驗方法係如下所示。
構築包含有PSA啟動子之表現質體PSAtk：
使用引子5’-GTTAATTAATGTACACCTGCAGGCCTCTAG-3’以及引子5’-GGTGACGTCGACACAGCTCTCC-3’以pDRIVE-PSA-hPSA載體（InvivoGen, San Diego, CA）作為模板放大人類PSA強化子 (enhancer)/啟動子片段。PCR產物與pUMVC1-tk質體DNA（Aldevron）係一同經由BsrGI以及SalI (NEB)處理後使用T4 DNA連接酶連接並進行DNA定序確認。其中所使用的pUMVC1-tk質體係已藉由BsrGI以及SalI將其CMV啟動子移除。
製備包含有專一性表現於前列腺細胞的表現質體之類病毒顆粒（簡稱為PSAtk-VLP）：
JCPyV主要病毒蛋白表現質體ΔpFlag-VP1可於大腸桿菌中表現主要衣殼蛋白VP1，其胺基酸序列為SEQ ID NO：1所示之胺基酸序列，所表現之主要衣殼蛋白VP1能夠自行組裝成VLPs。經由主要衣殼蛋白VP1自行組裝而成的VLPs係用於包裝帶有異源核酸的表現質體。在本說明書之實施例中，該表現質體PSAtk係具有PSA啟動子且帶有人類第一型單純疱疹病毒胸腺嘧啶激酶基因（Human Herpes Simplex Virus type 1 thymidine kinase, HSV-tk），也就是自殺基因。當然，本案之該表現質體所表現之基因並不以此為限，該表現質體亦可用於表現小髮夾RNA或是其他用於作為腫瘤基因治療的相關異源核酸。其中ΔpFlag-VP1帶有ampicillin抗藥性，而PSAtk帶有kanamycin抗藥性。將ΔpFlag-VP1及PSAtk轉形至勝任細胞（JM109）中。值得注意的是，ΔpFlag-VP1所表現之主要衣殼蛋白VP1於自行組裝成VLPs的同時，會將同時存在於勝任細胞中的PSAtk包裝入VLPs當中。將ΔpFlag-VP1及PSAtk轉形至勝任細胞（JM109）後，添加抗生素ampicillin及kanamycin以進行篩選。而後進行PCR以確認兩種質體同時存在於勝任細胞中。之後，VLP的純化以及表現係如參考文獻（Lin, M.C., Wang, M., Fang, C.Y., Chen, P.L., Shen, C.H. and Chang, D. (2014) Antiviral Res. 103, 25–31）所述。簡言之，細菌受IPTG誘導而裂解，並通過離心收集包含有可溶性蛋白的上清液，而後，將含有包裝質體DNA的JCPyV VLPs （即，PSAtk-VLPs）通過10-30%蔗糖梯度進行純化，並藉由通過Centricon濃縮離心管（Millipore）中過濾進行濃縮。
依據本發明的實施例的一種人類JC病毒之類病毒顆粒，其中該表現質體係用以表現自殺基因。惡性腫瘤之自殺基因治療是一種被認為有潛力的癌症治療方法。它是先將治療基因（therapeutic genes）遞送到腫瘤細胞中，此基因隨後表現出對應序列之蛋白酵素，其可將外加之無毒性前驅化合物轉變成有毒的化合物，進而殺死或是抑制腫瘤細胞之生長。本說明書中所示之實施例係採用HSV-tk自殺基因，HSV-tk的表現讓腫瘤細胞對抗病毒藥物敏感，而ganciclovir（GCV）是其中一例，其為上述的其中一種前驅化合物，係為核苷酸類似物。
詳細而言，HSV-tk自殺基因所表現出之人類第一型單純疱疹病毒胸腺嘧啶激酶（HSV-TK）可以磷酸化前驅藥物GCV，被加上磷酸根的GCV，會在細胞複製時阻礙DNA合成的路徑，使細胞走向凋亡（apoptosis）。腫瘤細胞為複製生長快速的細胞，故此項策略可有效抑制腫瘤細胞生長，而較不影響處於休眠時期或正常生長的細胞。
建立穩定表現螢光素酶之CRPC細胞株（stable luciferase-expressing CRPC cell line，簡稱為22Rv1-Dual）：
將人類前列腺癌細胞株22Rv1 (ATCC, CRL-2505)培養於RPMI-1640培養基中，該培養基補充有10% 胎牛血清（fetal bovine serum, FBS）、L-谷胺酸、非必需胺基酸、HEPES以及penicillin/streptomycin抗生素溶液（Thermo Fisher Scientific, Cambridge, MA, USA）。穩定表現螢光素酶之22Rv1細胞係藉由感染慢病毒載體pLenti-II-CMV-Luc-IRES-GFP（Applied Biological Materials Inc., Canada）而建立。感染後三天，使用含有G418 (200 μg/ml)的培養基篩選細胞。隨後，於螢光顯微鏡下確認該細胞會表現GFP（藉由相同啟動子驅動表現螢光素酶）後，該細胞係被命名為22Rv1-Dual。
藉由異種移植小鼠模式以研究本發明抑制骨轉移性的去勢抗性前列腺癌細胞生長之結果：
五週齡雄性裸鼠（CAnN.Cg-
Foxn1 nu/CrlNarl）係購自國家實驗動物中心，並依據中山醫學大學動物實驗中心之The Institutional Animal Care and Use Committee所設立之準則執行小鼠模式之飼育。為了建立骨轉移性的人類前列腺癌之小鼠模式，係使用26號針將含有22Rv1-Dual細胞 (3
10
6)的20 μl PBS通過骨骺注射入小鼠模式之股骨。於植入細胞14天後，小鼠被隨機分為5個組別，每個組別各有3隻小鼠：
第1組：控制組，為無治療組，即該組之小鼠未接受任何治療。
第2組：每3天靜脈注射1次100 μg/100 μl PSAtk-VLPs，共注射15次。
第3組：每3天腹腔注射1次300 mg/kg GCV，共注射15次。
第4組：每2週皮下注射1次leuprorelin acetate (Leuplin Depot, 2 mg/kg)，共注射4次；同時，伴隨著每1週腹腔注射2次enzalutamide (Xtandi, 30 mg/kg)，共注射13次。
第5組：下述處理係歷經15次循環：經由尾靜脈施行靜脈注射100 μg/μl PSAtk-VLPs，隨後在隔天腹腔注射300 mg/kg GCV。
為了測量腫瘤之發光強度以作為治療前的參考點，於隨機化的一天使用非侵入式3D活體分子影像系統（IVIS Spectrum imaging system）進行腫瘤成像觀察。隨後，在治療過程中將所有腫瘤的變化與該參考點進行比較，並且每10天記錄一次。值得注意的是，於此期間測量出的發光強度係反映了腫瘤大小的變化。於成像前10分鐘，小鼠係接受腹腔注射150 mg/kg D-螢光素鉀鹽（Sigma Life Science, St. Louis, MO, USA）。使用2.5% 異氟醚（isoflurane）進行麻醉。為了評估股骨內腫瘤，係將腫瘤連同股骨作為一個整體而進行解剖。實驗結束時，小鼠於腔室內以CO
2窒息的方式犧牲，並將組織包埋於石蠟中分別以蘇木素-伊紅（H&E）以及AR抗體（anti-AR, 1:500, no. 5153, CST Biological Reagents）進行染色。
如第1a圖以及第1b圖所示，本實施例係分別藉由H&E染色以及IHC染色確定前列腺癌細胞於小鼠股骨中之生長位置。
如第2圖以及第3圖所示，無治療組的骨內前列腺癌細胞係隨著時間逐漸生長、腫瘤體積變大，而植入22Rv1-Dual細胞並接受PSAtk-VLPs伴隨GCV治療的組別（簡稱為PSAtk-VLPs + GCV）於64天後則呈現顯著的抑制骨內前列腺癌細胞生長的結果。
更進一步而言，如第2圖以及第3圖所示，PSAtk-VLPs + GCV組所呈現出之療效明顯優於接受目前臨床上所使用之荷爾蒙製劑（即，leuprorelin acetate + enzalutamide）之治療的組別。此外，euprorelin acetate + enzalutamide與PSAtk-VLPs + GCV相比，PSAtk-VLPs + GCV更能夠有效延緩腫瘤之生長。在治療過程中，PSAtk-VLPs + GCV不僅可以抑制腫瘤之生長，且接受PSAtk-VLPs + GCV治療後的組別之腫瘤體積，與接受治療前之腫瘤體積相比，接受PSAtk-VLPs + GCV治療後的腫瘤體積更小，顯示出PSAtk-VLPs + GCV具有完全消除腫瘤細胞的可能性。
依據本發明的實施例的一種人類JC病毒之類病毒顆粒用於製備抑制前列腺癌細胞及／或轉移性的去勢抗性前列腺癌細胞生長的醫藥組成物的用途。
本案之該包含有專一性表現於前列腺細胞的表現質體之類病毒顆粒，可隨著血液循環有效地遞送該表現質體至前列腺癌細胞、特別是轉移性的去勢抗性前列腺癌細胞，從而使該表現質體所帶有的異源核酸（例如：自殺基因）得以順利表現，進而有效延緩以及抑制前列腺癌細胞、特別是轉移性的去勢抗性前列腺癌細胞之生長。此外，如本案之實施例所示，該包含有專一性表現於前列腺細胞的表現質體之類病毒顆粒搭配GCV，對於前列腺癌細胞、特別是轉移性的去勢抗性前列腺癌細胞而言，比起目前臨床上所使用之荷爾蒙製劑更具有顯著之功效，顯示出本案之該包含有專一性表現於前列腺細胞的表現質體之類病毒顆粒於前列腺癌細胞、特別是轉移性的去勢抗性前列腺癌細胞的相關療法中的發展潛力。
以上之敘述以及說明僅為本發明之較佳實施例之說明，對於此項技術具有通常知識者當可依據以下所界定申請專利範圍以及上述之說明而作其他之修改，惟此些修改仍應是為本發明之發明精神而在本發明之權利範圍中。
第1a圖為顯示根據本發明的一實施例的骨轉移性的去勢抗性前列腺癌的小鼠模式的股骨組織切片蘇木素-伊紅染色（H&E stain）圖；
第1b圖為顯示根據本發明的實施例的骨轉移性的去勢抗性前列腺癌的小鼠模式的股骨組織切片免疫組織化學染色（immunohistochemistry stain, IHC stain）圖；
第2圖為顯示根據本發明的實施例的靜脈注射PSAtk-VLPs後再腹腔注射GCV（PSAtk-VLPs + GCV組）以及無治療組的骨轉移性的去勢抗性前列腺癌的小鼠模式的骨轉移性的去勢抗性前列腺癌細胞之非侵入式3D活體分子影像圖；
第3圖為顯示根據本發明的實施例的靜脈注射PSAtk-VLPs後再腹腔注射GCV（PSAtk-VLPs + GCV組）、無治療組以及其他不同條件之實驗組的骨轉移性的去勢抗性前列腺癌的小鼠模式的去勢抗性前列腺癌細胞之非侵入式3D活體分子影像之發光強度統計折線圖。
Claims (5)
- 一種人類JC病毒之類病毒顆粒，用於將異源核酸遞送至人體，包含： 主要衣殼蛋白VP1（Viral protein 1, VP1），其胺基酸序列如SEQ ID NO：1所示； 表現質體，帶有該異源核酸，該表現質體係由如SEQ ID NO：2所示之鹼基序列中的前列腺細胞專一性啟動子所驅動， 其中，該前列腺細胞專一性啟動子係驅動該表現質體於前列腺細胞表現。
- 如請求項1所述的人類JC病毒之類病毒顆粒，其中該前列腺細胞專一性啟動子係為前列腺專一性抗原啟動子（prostate-specific antigen promoter, PSA promoter）。
- 如請求項1所述的人類JC病毒之類病毒顆粒，其中該表現質體係用以表現自殺基因。
- 如請求項1所述的人類JC病毒之類病毒顆粒，其中該前列腺細胞包括前列腺癌細胞及／或轉移性的去勢抗性前列腺癌細胞。
- 一種如請求項1所述之人類JC病毒之類病毒顆粒用於製備抑制前列腺癌細胞及／或轉移性的去勢抗性前列腺癌細胞生長的醫藥組成物的用途。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| TW111104033A TW202330574A (zh) | 2022-01-28 | 2022-01-28 | 包含有專一性表現於前列腺細胞的表現質體之類病毒顆粒及其用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| TW111104033A TW202330574A (zh) | 2022-01-28 | 2022-01-28 | 包含有專一性表現於前列腺細胞的表現質體之類病毒顆粒及其用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TW202330574A true TW202330574A (zh) | 2023-08-01 |
Family
ID=88559254
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| TW111104033A TW202330574A (zh) | 2022-01-28 | 2022-01-28 | 包含有專一性表現於前列腺細胞的表現質體之類病毒顆粒及其用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| TW (1) | TW202330574A (zh) |
-
2022
- 2022-01-28 TW TW111104033A patent/TW202330574A/zh unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Liu et al. | Gene therapy in pancreatic cancer | |
| Gonzalez-Aseguinolaza et al. | Gene therapy of liver diseases: A 2011 perspective | |
| STEINER et al. | Gene therapy for prostate cancer: where are we now? | |
| JP2007020586A5 (zh) | ||
| CN108025054B (zh) | 用于治疗和/或预防肿瘤的沙粒病毒和用于制备具有（改善的）肿瘤消退性能的沙粒病毒的方法 | |
| RU2742726C2 (ru) | Противораковая композиция, содержащая рекомбинантный аденовирус, экспрессирующий разрушающий фактор для внеклеточного матрикса | |
| CN108342366B (zh) | 靶向癌症的重组溶瘤基因-腺病毒及其构建方法和应用 | |
| JP2007508036A (ja) | 肝細胞癌特異的プロモーターおよびその使用 | |
| US8614305B2 (en) | Nonviral gene delivery vector iopamidol, protamine, ethiodized oil reagent (VIPER) | |
| WO2003006640A1 (fr) | Virus a proliferation specifique dans les cellules tumorales, qui peut exprimer un antioncogene avec une grande efficacite, et utilisation de ce virus | |
| CN114846135A (zh) | 原发性和转移性癌症的治疗 | |
| Scholl et al. | Gene therapy applications to cancer treatment | |
| TW202330574A (zh) | 包含有專一性表現於前列腺細胞的表現質體之類病毒顆粒及其用途 | |
| Li et al. | Endostatin gene therapy enhances the efficacy of paclitaxel to suppress breast cancers and metastases in mice | |
| US7267978B1 (en) | Chimeric transcriptional regulatory element compositions and methods for increasing prostate-targeted gene expression | |
| Löhr et al. | Novel treatments and therapies in development for pancreatic cancer | |
| Hanyu et al. | Immunogene therapy by adenovirus vector expressing CD40 ligand for metastatic liver cancer in rats | |
| Wang et al. | Anticancer activity of oncolytic adenoviruses carrying p53 is augmented by 11R in gallbladder cancer cell lines in vitro and in vivo | |
| Culver et al. | Gene therapy for brain tumors | |
| US20230310653A1 (en) | THERAPEUTIC AGENT FOR EGFR GENE MUTATION-POSITIVE LUNG CANCER COMPRISING REIC/Dkk-3 GENE | |
| KR102471898B1 (ko) | 면역관문 억제제를 발현하는 암 특이적 트랜스-스플라이싱 리보자임 및 이의 용도 | |
| EP4286518A1 (en) | Cancer-specific trans-splicing ribozyme expressing immune checkpoint inhibitor, and use thereor | |
| WO2021020554A1 (ja) | ＲＥＩＣ／Ｄｋｋ－３遺伝子と抗腫瘍剤との併用による肝臓がんの治療方法 | |
| JP2003286198A (ja) | 増殖因子等を提示するタンパク質中空ナノ粒子を用いる治療薬剤 | |
| Farsaci et al. | Design, development, and translation of poxvirus-based vaccines for cancer |