JP7039037B2 - 腫瘍の治療および/または阻止において使用するためのアレナウイルス(arenaviruses)、および、(改善された)腫瘍退縮特性(tumor-regression properties)を有するアレナウイルス(arenaviruses)を産生するための方法 - Google Patents
腫瘍の治療および/または阻止において使用するためのアレナウイルス(arenaviruses)、および、(改善された)腫瘍退縮特性(tumor-regression properties)を有するアレナウイルス(arenaviruses)を産生するための方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7039037B2 JP7039037B2 JP2018505536A JP2018505536A JP7039037B2 JP 7039037 B2 JP7039037 B2 JP 7039037B2 JP 2018505536 A JP2018505536 A JP 2018505536A JP 2018505536 A JP2018505536 A JP 2018505536A JP 7039037 B2 JP7039037 B2 JP 7039037B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- tumor
- cells
- arenavirus
- arenaviruses
- virus
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
- A61K35/768—Oncolytic viruses not provided for in groups A61K35/761 - A61K35/766
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/58—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation
- A61K2039/585—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation wherein the target is cancer
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/10011—Arenaviridae
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/10011—Arenaviridae
- C12N2760/10021—Viruses as such, e.g. new isolates, mutants or their genomic sequences
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/10011—Arenaviridae
- C12N2760/10032—Use of virus as therapeutic agent, other than vaccine, e.g. as cytolytic agent
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/10011—Arenaviridae
- C12N2760/10033—Use of viral protein as therapeutic agent other than vaccine, e.g. apoptosis inducing or anti-inflammatory
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
本発明は、腫瘍の治療および/または阻止において使用するためのアレナウイルス(arenaviruses)、および、また、(改善された)腫瘍退縮特性(tumor-regression properties)を有するアレナウイルス(arenaviruses)を産生するための方法に関する。
アレナウイルスは、ヒトの病原性、多形性(pleomorphic)RNAウイルスのファミリーに属する。これらのウイルスを伴う疾患は、動物、主に、げっ歯類、における、それらの天然のリザーバーである故、人畜共通感染症に属する。人畜共通感染症(ZOONOSES)は、動物からヒトに,および,その逆に,ヒトから動物に感染することができる疾患を指す。
多様なウイルスのmRNA(リボソームに結合したメッセンジャーリボ核酸)およびウイルスのゲノムの完全な相補鎖のように、いくつかの異なる細胞RNA(リボソームRNAも含む)および、またウイルスRNAの複製形態も見出された。これらの非ゲノムRNAは、上述のカプシド(capsids)の全て外側で、様々な量で見出される。
さらに、WO2006/008074 A1は、固形腫瘍の遺伝子治療のための、アレナウイルス(arenaviruses)糖タンパク質で偽型化された(pseudotyped)された、レトロウイルスのウィルス粒子(virion)を産生する、パッケージング細胞(packaging cells)の使用を開示する。
遺伝子療法の治療方法の場合には、遺伝子操作されたウィルス粒子(virion)またはウィルス粒子(virion)を産生するパッケージング細胞で、腫瘍組織の治療的に有効な形質導入(transduction)を適切に達成することは、しばしば可能ではない。
したがって、本発明は、先行技術と比較して、腫瘍、特に、癌腫および肉腫のための、より単純で、そして、特に、より効率的な治療の解決策を提供するという目的に基づく。
この目的は、独立請求項1に記載のアレナウイルス(arenaviruses)、請求項14に記載の薬剤によって、および、また、独立請求項15に記載のインビトロ方法により、本発明に従って達成される。好ましい実施形態は、従属請求項に定義されている。全ての特許請求の範囲の文言は、本明細書において、明細書の記載内容に参照として組み込まれる。本発明の目的を達成する、本発明の追加の主題は、明細書に開示されている。
[本発明1001]
アレナウイルス(arenaviruses)が、ゲノムの外来RNA(genomic foreign RNA)を含まないことを特徴とする、腫瘍の治療および/または阻止における使用のための、アレナウイルス(arenaviruses)。
[本発明1002]
アレナウイルス(arenaviruses)が、野生型のアレナウイルス(arenaviruses)であることを特徴とする、本発明1001のアレナウイルス(arenaviruses)。
[本発明1003]
アレナウイルス(arenaviruses)が、自然変異体であることを特徴とする、本発明1001のアレナウイルス(arenaviruses)。
[本発明1004]
その野生型形態から出発して、宿主動物および/または宿主細胞中で連続継代(serial passage)することによって、製造されることを特徴とする、本発明1001乃至1003のいずれかのアレナウイルス(arenaviruses)。
[本発明1005]
腫瘍が、癌腫、黒色腫、細胞腫、リンパ腫または肉腫を含むかまたは、からなる群から選択されることを特徴とする、本発明1001乃至1004のいずれかのアレナウイルス(arenaviruses)。
[本発明1006]
癌腫が、肛門癌、気管支癌、肺癌、子宮体癌(endometrial carcinoma)、胆嚢癌(gallbladder carcinoma)、肝細胞癌(hepatocellular carcinoma)、精巣癌、結腸直腸癌(colorectal carcinoma)、喉頭癌、食道癌(oesophogeal cancer)、胃癌、乳癌、腎臓癌、卵巣癌、膵臓腫瘍、咽頭癌、前立腺癌、甲状腺癌、黒色腫および子宮頸癌、を含む、または、からなる群から選択されることを特徴とする、本発明1005のアレナウイルス(arenaviruses)。
[本発明1007]
肉腫が、血管肉腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、線維肉腫、カポジ肉腫、脂肪肉腫、平滑筋肉腫、悪性線維性組織球腫(malignant fibrous histiocytoma)、神経原性肉腫、骨肉腫および横紋筋肉腫(rhabdomyosarcoma)、を含むまたは、からなる群から選択されることを特徴とする、本発明1005のアレナウイルス(arenaviruses)。
[本発明1008]
アレナウイルス(arenaviruses)が、旧世界アレナウイルス(arenaviruses)、好ましくは、Ippyウイルス、ラッサウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、MobalaウイルスおよびMopeiaウイルス、を含むまたは、からなる群から選択されることを特徴とする、本発明1001乃至1007のいずれかのアレナウイルス(arenaviruses)。
[本発明1009]
アレナウイルス(arenaviruses)が、リンパ球性脈絡髄膜炎であることを特徴とする、本発明1001乃至1008のいずれかのアレナウイルス(arenaviruses)。
[本発明1010]
アレナウイルス(arenaviruses)が、新世界アレナウイルス(arenaviruses)、好ましくは、Allpahuayoウイルス(Allpahuayo virus)、アマパリウイルス(Amapari virus)、ベアキャニオンウイルス(Bear Canyon virus)、Chapareウイルス(Chapare virus)、Cupixiウイルス(Cupixi virus)、Flexalウイルス(Flexal virus)、グアナリトウイルス(Guanarito virus)、フニンウイルス(Junin virus)、Candid#1(Candid No.1)、ラテンウイルス(Latino virus)、マチュポウイルス(Machupo virus)、オリベロスウイルス(Oliveros virus)、パラナウイルス(Parana virus)、Pichindeウイルス(Pichinde virus)、Piritalウイルス(Pirital virus)、サビアウイルス(, Sabia virus)、タカリベウイルス(Tacaribe virus,)、タミアミウイルス(Tamiami virus)およびホワイトウォーターアロヨウイルス(Whitewater Arroyo virus)、を含むまたは、からなる群から選択される、ことを特徴とする、本発明1001乃至1007のいずれかのアレナウイルス(arenaviruses)。
[本発明1011]
アレナウイルス(arenaviruses)が、フニンウイルス、特に、Candid#1株、であることを特徴とする、本発明1001乃至1007および1010のいずれかのアレナウイルス(arenaviruses)。
[本発明1012]
フニンウイルス、特に、Candid#1株が、核酸配列、特に、配列番号1の配列のS-リボ核酸配列またはアンビセンスの配列、および、核酸配列、特に、配列番号2のL-リボ核酸配列またはアンビセンスの配列、を有することを特徴とする、本発明1010または1011のアレナウイルス(arenaviruses)。
[本発明1013]
フニンウイルス、特に、Candid#1株は、核酸配列、特に、配列番号3の配列のS-リボ核酸配列またはアンビセンスの配列、および、核酸配列、特に、配列番号4のL-リボ核酸配列またはアンビセンスの配列、を有することを特徴とする、本発明1010または1011のアレナウイルス(arenaviruses)。
[本発明1014]
薬物が、本発明1001乃至1013のいずれかのアレナウイルス(arenaviruses)および、好ましくは薬学的に許容される担体を含むことを特徴とする、腫瘍の治療および/または阻止に使用するための薬剤。
[本発明1015]
腫瘍退行または改善された腫瘍退行特性を有するアレナウイルス(arenaviruses)、特に、本発明1001乃至1013のいずれかのアレナウイルス(arenaviruses)、を調製するためのインビトロ方法であって、以下の工程を含む方法。
a)樹状細胞(dendritic cells)または腫瘍細胞を、アレナウイルス(arenaviruses)で感染させる工程、
b)感染させた樹状細胞(dendritic cells)または感染させた腫瘍細胞において、アレナウイルス(arenaviruses)を培養する工程、および
c)感染した樹状細胞(dendritic cells)または感染した腫瘍細胞から、培養したアレナウイルス(arenaviruses)または培養したサブセットを単離する工程。
[本発明1016]
工程a)を実施する前に、アレナウイルス(arenaviruses)が、宿主動物中で連続継代(serial passage)に付された、アレナウイルス(arenaviruses)であることを特徴とする、本発明1015のインビトロの方法。
[本発明1017]
a)乃至c)の工程の配列を、1回乃至1000回、特に10回乃至100回、好ましくは30回乃至60回、繰り返されることを特徴とする、本発明1015または1016のインビトロ方法であって、新たな腫瘍細胞、好ましくは、同じタイプ、が各繰り返しのために使用される方法。
アレナウイルス(arenaviruses)は、好ましくは、ゲノムの外来RNAを含まない、すなわち、任意のゲノムの外来RNAを含まない、ことを特徴とする。換言すれば、アレナウイルス(arenaviruses)のゲノムは、外来RNAを含まないことが好ましいか、好ましくは外来RNAを含まない。
(当業者の理解に従って)、本発明の文脈において、表現「野生型アレナウイルス(arenaviruses)の変異体」または「変異されたアレナウイルス(arenaviruses)」は、野生型ゲノムと比較して、そのゲノムが、自発の、すなわち、天然に誘導された、改変または変異原によって誘導された改変を含む、アレナウイルス(arenaviruses)を意味すると理解される。
したがって、(当業者の理解に従って)、本発明の文脈において、表現「野生型アレナウイルス(arenaviruses)の天然変異体」または「天然に変異されたアレナウイルス(arenaviruses)」は、野生型ゲノムと比較して、そのゲノムが、自発の、すなわち、天然に誘導された、改変を含む、アレナウイルス(arenaviruses)を意味すると理解される。
本発明は、ゲノムの外来RNAのないアレナウイルス(arenaviruses)が、腫瘍退縮を達成することが可能である、という驚くべき発見に基づいている。腫瘍退縮は、アレナウイルス(arenaviruses)によって引き起こされる、先天性および適応性免疫細胞の活性化または刺激に起因する。活性化された免疫細胞は、それによって、腫瘍に対抗または撃退する、インターフェロン-αおよびインターフェロン-γのような抗腫瘍性サイトカインを増加分泌する。さらなる驚くべき発見は、アレナウイルス(arenaviruses)は、腫瘍の発現(manifestation)の場合に、抗腫瘍性サイトカインの有意に増加した分泌を引き起こすという認識である。ゲノムの外来RNAのないアレナウイルス(arenaviruses)は、したがって、腫瘍治療における使用に適している。これは、動物実験によって、本出願人によって首尾よく確認された。この目的のために、とりわけ、ヒト腫瘍の増殖が可能なマウスを使用した。
さらなる実施形態では、アレナウイルス(arenaviruses)は、野生型アレナウイルス(arenaviruses)の天然の変異体、すなわち、自然変異アレナウイルス(arenaviruses)である。
天然の変異体または自然変異のアレナウイルス(arenaviruses)は、特に好ましくは、宿主動物および/または宿主細胞中で連続継代することにより製造される。
本発明に従って提供されるアレナウイルス(arenaviruses)は、従って、好ましくは、宿主動物および/または宿主細胞中で、その野生型から出発して、継代によって、好ましくは、連続継代によって製造されるアレナウイルス(arenaviruses)である。
本発明の文脈において、当業者の理解に従って、用語「継代」は、宿主動物および/または宿主細胞へ、アレナウイルス(arenaviruses)の複数の通常の導入を意味すると理解される。本発明の文脈において、当業者の理解に従って、表現「連続継代」は、異なる宿主動物、好ましくは、同じタイプの、および/または異なる細胞、好ましくは同じタイプの細胞へのアレナウイルス(arenaviruses)の複数の通常の導入を意味すると理解される。環境の複数の変更(宿主動物および/または宿主細胞)のせいで、アレナウイルス(arenaviruses)は、それによって、腫瘍退縮の観点から、アレナウイルス(arenaviruses)のゲノムにおいて生じる有利な突然変異の可能性を増加させる、増加した適応圧力(adaptation pressure)または突然変異偏向(mutational pressure)に付される。
本発明の文脈においては、(当業者の理解に従って)、用語「癌腫」は、上皮起源の悪性腫瘍を意味することを意図する。
本発明の文脈においては、(当業者の理解に従って)、用語「肉腫」は、中胚葉起源(mesodermal origin)の悪性腫瘍を意味することを意図する。
本発明の文脈においては、(当業者の理解に従って)、用語「黒色腫」は、メラニン細胞起源の悪性腫瘍を意味することを意図する。
本発明の文脈においては、(当業者の理解に従って)、用語「リンパ腫」は、リンパ起源の悪性腫瘍を意味することを意図する。
本発明の文脈においては、(当業者の理解に従って)、用語「芽細胞腫」は、胚起源の悪性腫瘍を意味することを意図する。
好ましい実施形態において、「肉腫」は、血管肉腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、線維肉腫、カポジ肉腫、脂肪肉腫、平滑筋肉腫、悪性線維性組織球腫、神経原性肉腫、骨肉腫および横紋筋肉腫を含む、または、からなる群から選択される。
さらなる実施形態で、アレナウイルス(arenaviruses)は、好ましくは、Ippyウイルス(IP-PYV)、ラッサウイルス(LASV)、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス(LCMV)、Mobalaウイルス(MOBV)およびMopeiaウイルス(MOPV)を含むか、または、からなる群から選択される、旧世界アレナウイルス(arenaviruses)である。
さらなる実施形態では、アレナウイルス(arenaviruses)は、好ましくは、Allpahuayoウイルス(ALLV)、Amapari(アマパリ)ウイルス(AMAV)、Bear Canyon(ベアー・キャニオン)ウイルス(BCNV)、Chapareウイルス、Cupixiウイルス(CPXV)、Flexalウイルス(FLEV)、Guanarito(グアナリト)ウイルス(GTOV)、Junin(フニン)ウイルス(JUNV)、Latino(ラテン)ウイルス(LATV)、Machupo(マチュポ)ウイルス(MACV)、Oliveros(オリベ)ウイルス(OLVV)、Parana(パラナ)ウイルス(PARV)、Pichindeウイルス(PICV)、Piritalウイルス(PIRV)、Sabia(サビア)ウイルス(SABV)、Tacaribe(タカリベ)ウイルス(TCRV)、Tamiami(タミアミ)ウイルス(TAMV)およびWhitewater Arroyo(ホワイトウォーターアロヨ)ウイルス(WWAV)を含むか、または、からなる群から選択される、新世界アレナウイルス(arenaviruses)である。
さらなる実施形態では、フニンウイルス、特にCandid#1(Candid No.1)株は、塩基配列、特に、(配列リストの)配列番号1の、S-リボ核酸配列またはアンビセンス配列を有する。
さらなる実施形態では、フニンウイルス、特に、Candid#1(Candid No.1)株は、塩基配列、特に、(配列リストの)配列番号2の、L-リボ核酸配列またはアンビセンス配列を有する。
さらなる実施形態では、フニンウイルス、特に、Candid#1(Candid No.1)株は、塩基配列、特に、(配列リストの)配列番号4の、L-リボ核酸配列またはアンビセンス配列を有する。
さらなる実施形態では、上述した、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス(LCMVウイルス)は、塩基配列、特に、(配列リストの)配列番号5の、S-リボ核酸配列またはアンビセンス配列を有する。
さらなる実施形態では、上述した、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス(LCMVウイルス)は、塩基配列、特に、(配列リストの)配列番号6の、L-リボ核酸配列またはアンビセンス配列を有する。
さらなる実施形態では、アレナウイルス(arenaviruses)は、腫瘍溶解物、器官溶解物、尿または血液から単離される。
さらなる実施形態では、アレナウイルス(arenaviruses)は、ウィルス粒子(virion)の形態、すなわち、細胞外にあるアレナウイルス(arenaviruses)粒子の形態で投与されるためである。
さらなる実施形態では、アレナウイルス(arenaviruses)は、局所、特に、筋肉内、腹腔内または皮下投与のために、提供、好ましくは調製される。換言すれば、アレナウイルス(arenaviruses)は、局所、特に、筋肉内、腹腔内または皮下投与のための、さらに実施形態において使用される。
好ましくは、全身投与のために、アレナウイルス(arenaviruses)は、1PFU/kg体重~1012PFU/kg体重、特に、102PFU/kg体重~106PFU/kg体重、好ましくは、103PFU/kg体重~105PFU/kg体重の用量で、提供され、好ましくは調製される。換言すれば、アレナウイルス(arenaviruses)は、1PFU/kg体重~1012PFU/kg体重、特に、102PFU/kg体重~106PFU/kg体重、好ましくは、103PFU/kg体重~105PFU/kg体重の用量で、好ましくは全身投与のために、使用される。
薬剤は、本発明の第一の態様により、アレナウイルス(arenaviruses)を有するという事実によって、特に、特徴付けられる。
医薬は、好ましくは、薬学的に許容される担体をさらに含む。担体は、特に、水、生理食塩水、緩衝液および細胞培養培地を含む、または、からなる群から選択することができる。
さらなる実施形態では、薬剤は、また、活性成分をも含む。活性成分は、特に、細胞増殖抑制剤、抗体および/またはサイトカインであり得る。
薬剤、特に、アレナウイルス(arenaviruses)および、また腫瘍、のさらなる特徴および利点に関しては、繰り返しを避けるために、完全に本明細書の開示を参照する。
腫瘍は、好ましくは、悪性腫瘍、好ましくは、癌腫、黒色腫、芽細胞腫、リンパ腫または肉腫である。したがって、本方法は、好ましくは、(改良された)癌腫-、黒色腫-、芽細胞腫-、リンパ腫-または肉腫-退行(regressive)特性を有する、アレナウイルス(arenaviruses)を製造する方法である。
この方法は、以下のステップを含む。
a)樹状細胞または腫瘍細胞を、アレナウイルス(arenaviruses)で感染すること、
b)感染した樹状細胞または感染した腫瘍細胞のアレナウイルス(arenaviruses)を培養すること、および
c)感染した樹状細胞または感染した腫瘍細胞から、培養されたアレナウイルス(arenaviruses)、または、培養されたアレナウイルス(arenaviruses)の部分(subset)を単離すること。
a)乃至c)のステップの手順(sequence)はまた、樹状細胞または腫瘍細胞における、アレナウイルス(arenaviruses)の(単一の)継代(passage)と呼ぶことができる。
好ましい実施形態では、アレナウイルス(arenaviruses)は、工程a)を実施する前に、宿主動物中で連続継代に付されたアレナウイルス(arenaviruses)である。
さらなる実施形態において、樹状細胞または腫瘍細胞は、細胞培養物(樹状細胞培養物または腫瘍細胞培養物)の形態である。
腫瘍細胞は、好ましくは、悪性腫瘍細胞、特に、癌腫、黒色腫、芽細胞腫、リンパ腫または肉腫細胞である。
さらなる実施形態では、腫瘍細胞は、不死化された免疫細胞、特に、不死化したマクロファージである。
好ましい実施形態において、工程a)乃至c)の手順は、新たな、特に、非感染の樹状細胞、好ましくは同じ型のもの、または新規な、特に、非感染の腫瘍細胞、好ましくは、同じタイプ(同じ腫瘍タイプ)を用いて繰り返された。
特に好ましい実施形態では、工程a)乃至c)の手順が何度も繰り返される。好ましい方法によって、新規の、特に、非感染の樹状細胞、好ましくは同じ型、または、新規の、特に、非感染の腫瘍細胞、好ましくは、同じ型が、各繰り返しに使用される。
工程a)乃至c)の手順の複数の繰り返しをすることで、アレナウイルス(arenaviruses)は、絶えず、新しい環境、すなわち、新たな樹状細胞または腫瘍細胞に適応することを余儀なくされる。この永久的な適応圧力(adaptation pressure)は、アレナウイルス(arenaviruses)の腫瘍退行特性を製造または改善することができる突然変異の発生に有利に働く。
工程b)に従って、アレナウイルス(arenaviruses)の培養中、アレナウイルス(arenaviruses)ゲノムの複製およびアレナウイルス(arenaviruses)の増殖(propagation)が、樹状細胞または腫瘍細胞内で起こる。
工程b)に従って、アレナウイルス(arenaviruses))は、好ましくは、標準的な細胞培養条件下で培養される。
工程c)に従って、培養されたアレナウイルス(arenaviruses)は、好ましくは細胞培養上清から単離される。
好ましくは、工程c)に従って単離する前に、樹状細胞または腫瘍細胞は、特定の特性に従って、好ましくは細胞選別装置によって選別され、そして、引き続き培養される。選別された細胞は、好ましくは24時間にわたって培養される。
さらなる実施形態では、この方法は、以下のステップをさらに含む:
d)単離されたアレナウイルス(arenaviruses)のクローニング、および
e)単離されたアレナウイルス(arenaviruses)のシークエンシング。
本方法、特に、アレナウイルス(arenaviruses)および、また腫瘍、のさらなる特徴および利点に関しては、本明細書を参照する。
腫瘍は、好ましくは、悪性腫瘍、好ましくは、癌腫、黒色腫、芽細胞腫、リンパ腫または肉腫である。したがって、この方法は、好ましくは、(改良された)癌腫-、黒色腫-、芽細胞腫-、リンパ腫-または肉腫-退行特性を有する、アレナウイルス(arenaviruses)を産生するための方法である。
a)腫瘍を有する宿主動物を、アレナウイルス(arenaviruses)で、感染する工程
b)感染した宿主動物において、アレナウイルス(arenaviruses)を培養する工程、および
c)感染した宿主動物からの、培養されたアレナウイルス(arenaviruses)または培養されたアレナウイルス(arenaviruses)の部分を単離する工程。
工程a)乃至c)の手順はまた、宿主動物におけるアレナウイルス(arenaviruses)の(単一の)継代として言及することができる。
代替的な実施形態では、腫瘍を自発的に発生する、遺伝的に改変された宿主動物が使用される。
げっ歯類、特に、好ましくはマウスは、宿主動物として使用することができる。例えば、NOD SCIDマウスまたはLoxP-Tagマウスを、宿主動物として使用することができる。Nod SCIDマウスでは、SCID(重症複合免疫不全)突然変異が、NOD(非肥満糖尿病)タイプと組み合わされる。SCID突然変異についてホモ接合性であるマウスでは、機能的T細胞またはB細胞は形成されない。この免疫不全により、これらの動物は、異種体細胞、例えば移植された腫瘍に耐性を示す(tolerating)のに非常に適している。
具体的には、宿主動物は、宿主動物の腫瘍へのアレナウイルス(arenaviruses)の投与、好ましくは注射によって感染させることができる。
好ましい実施形態において、工程a)乃至c)の手順は、新規の、特に、感染していない宿主動物、好ましくは同じ型の宿主動物を用いて繰り返される。
特に好ましい実施形態では、工程a)乃至c)の手順が何度も繰り返される。新規な、特に、非感染宿主動物、好ましくは同じ型のものが、好ましくは各反復のために使用される。換言すると、アレナウイルス(arenaviruses)は、宿主動物、好ましくは、同じタイプ、の中で、連続継代に付される場合、本発明によれば好ましい。
工程a)乃至c)の手順の複数の繰り返しをすることで、アレナウイルス(arenaviruses)は、絶えず、新たな環境、すなわち、新しい宿主動物に適応することを余儀なくされる。この永久的な適応圧力は、アレナウイルス(arenaviruses)の腫瘍退行特性を、製造または改善することができる突然変異の発生に有利に働く。
アレナウイルス(arenaviruses)は、宿主動物において、1分乃至500日の期間、特に、10分乃至100日、好ましくは、1時間乃至30日間、好ましくは培養される。
好ましい実施形態では、アレナウイルス(arenaviruses)は、宿主動物の、尿、血液、腫瘍、または器官溶解物から単離される。
さらなる実施形態では、この方法は、以下の工程をさらに含む:
d)工程c)に従って単離した、アレナウイルス(arenaviruses)で、樹状細胞または腫瘍細胞を感染する工程、
e)感染した樹状細胞または感染した腫瘍細胞において、アレナウイルス(arenaviruses)の培養工程、および
f)感染した樹状細胞または感染した腫瘍細胞から、培養したアレナウイルス(arenaviruses)または培養したアレナウイルス(arenaviruses)の部分(subset)を単離する工程。
樹状細胞または腫瘍細胞は、工程d)、好ましくは、細胞に、アレナウイルス(arenaviruses)を添加することによって、感染される。
好ましい実施形態において、工程d)乃至f)の手順は、新たな、特に、非感染の樹状細胞、好ましくは同じ型のもの、または、新規な、特に、非感染の腫瘍細胞、好ましくは同じタイプ(同じ腫瘍タイプ)を用いて繰り返すことができる。
特に、好ましい実施形態では、工程d)乃至f)の手順が何度も繰り返される。好ましくは、新規の、特に、非感染の樹状細胞、好ましくは同じタイプ、または、新規の、特に、非感染腫瘍細胞、好ましくは同じ型、が各繰り返しに使用される。換言すれば、もし、アレナウイルス(arenaviruses)が、さらに、樹状細胞、好ましくは同じタイプ、または、腫瘍細胞、好ましくは同じタイプにおいて、連続継代に付される場合、本発明によれば、特に好ましい。
宿主動物、好ましくは、同じタイプ、における、アレナウイルス(arenaviruses)の連続継代と、樹状細胞、好ましくは、同じタイプ、腫瘍細胞、好ましくは、同じタイプ、における、アレナウイルス(arenaviruses)の連続継代との組み合わせは、(改善された)腫瘍退行特性を有するアレナウイルス(arenaviruses)を製造するため、特定の方法において、さらに増加した適応圧力または突然変異の偏向(adaptation pressure or mutation pressure)のせいで、好ましい。
アレナウイルス(arenaviruses)は、樹状細胞または腫瘍細胞において、好ましくは、1分乃至500日の期間にわたって、特に、10分乃至100日、好ましくは1時間乃至30日培養される。
好ましくは、樹状細胞または腫瘍細胞を、好ましくは細胞選別装置を用いて、特定の特性に従って選別し、そして、続いて、工程f)に従って単離する前に培養する。選別された細胞は、好ましくは24時間にわたって培養される。
g)工程f)に従って、単離されたアレナウイルス(arenaviruses)をクローニングする工程、および、
h)単離されたアレナウイルス(arenaviruses)を配列決定する。
あるいは、工程c)に従って単離されたアレナウイルス(arenaviruses)は、クローニングされ、そして、続いて配列決定されることを、本発明に従って提供することができる。
本方法の他の特徴および利点に関して、特に、アレナウイルス(arenaviruses)、腫瘍およびまた、樹状細胞および腫瘍細胞に関しては、また不必要な繰り返しを避けるために、上記の記述全体に対して、参照される。
1.方法および材料
1.1 マウス
他に言及しない限り、使用したマウスは、C57BL/6バックグラウンド由来(from a C57BL/6 background)であった。Map3k14aly/aly マウスは、NF-κBシグナルを欠き、そして、したがって、非常に免疫抑制(immunosuppressed)されている。Irf3 x Ir7-/-マウスは、インターフェロンを何ら産生しない。NOD.SCIDマウスには適応免疫系がない。したがって、これらのマウスにおいて、ヒト腫瘍を増殖させることが可能である。LoxP-Tagマウスは、自然発生的に肝腫瘍を発症する。
MOPC細胞は、マウスの咽頭癌細胞(oropharynx carcinoma cells)である。Mc38はマウス結腸癌細胞である。Raw細胞(Raw cells)は、不死化(immortalized)マクロファージである。A431は、ヒト肺癌細胞である。Sw40は、ヒト結腸癌細胞であり、ヒーラは、ヒト子宮頸癌細胞である。初代マクロファージは、M-CSFによって、骨髄前駆細胞から培養した。細胞を、10%ウシ胎児血清(Sigma-Aldrich社)、2ミリモル/LのL-グルタミンおよび100U/ミリリットルのペニシリンを含む、ダルベッコ改変イーグル培地中で維持した。すべての細胞は、5%のCO2で培養した。
LCMV株WEは、Zinkernagel教授(実験免疫学、チューリッヒ、スイス)の研究室から入手し、そして、L929細胞で増殖させた(propagated)。アルゼンチン出血熱の弱毒生ワクチン#1(Candid#1)は、Paula Cannon教授(南カリフォルニア大学)から入手した。
約5×105腫瘍細胞(100マイクロリットル中)を、6~12週齢のマウスの右脇腹(right flank)に皮下注射した。最長の腫瘍径を、測定した。マウスは、2×104のPFU LCMV-WEまたはアルゼンチン出血熱の弱毒生ワクチン#1(Candid#1)(100-200マイクロリットル中)の腫瘍周囲への注射によって処置された。
形態計測分析(Morphometric analysis)は、内皮細胞マーカーCD31を染色した、連続凍結切片(successive frozen sections)を用いて行った。微小血管の密度(MVD)の定量は、3つの腫瘍切片の平均値を用いて計算した。MVDは、腫瘍面積あたりの血管数として算出された。
低酸素腫瘍領域(Hypoxic tumor regions)は、腫瘍移植動物に、ピモニダゾールを、30分間、注射後、ピモニダゾール付加物の形成によって検出された。腫瘍切片を、製造業者の説明書(ファルマシア ナチュール インターナショナル社(Pharmacia Natur International,Inc.))に従って、Hypoxyprobe-1 plusキットを用いて染色した。
血清IFN-αレベルを、製造業者のデータ(リサーチ・ダイアグノスティック RDI(Research Diagnostics RDI)、フランダース、ニュージャージー州)に従って、ELISAにより決定した。
平均値は、不対両側スチューデントt検定(unpaired two-sided student t-test)を用いて比較した。データは、平均±SEMとして示される。統計学的有意性のレベルは、p<0.05に設定した。
2.1
不死化マクロファージ(腫瘍細胞)および、一次骨髄(primary bone marrow)から生成されたマクロファージ()を、LCMV(WE株)に感染させた。複製は、24時間後に測定した(n=3)。
LCMV(WE株)は、不死化した細胞、および健康な細胞の両方で複製することを示すことができた。得られた結果を、図1に、グラフで示す。
図1は、以下の凡例(legend)を有する。
縦軸:LCMV(log10PFU/ミリリットル)
横軸:腫瘍細胞/健康マクロファージ(初代(primary))
WT C57BL/6マウスを、5×105MOPC細胞(3日目)で処置した。マウスの一群は、さらに、腫瘍周囲(peritumorally)を、2×104PFU LCMV(WE株)で処理した(0日目)。腫瘍の成長を観察した。
LCMVによる処理は、ほぼ完全な腫瘍退縮を引き起こしたことを示すことができた。得られた結果を、図2に、グラフで示す。
図2は、以下の凡例(legend)を有する。
縦軸:腫瘍径(センチメートル)
横軸:時間(日)
WT C57BL/6マウスを、5×105 MC38細胞(3日目)で処置した。マウスの一群は、さらに、腫瘍周囲(peritumorally)を、2×104 PFU LCMV(WE株)で処理した(0日目)。腫瘍の成長を観察した。
LCMVによる処理が、顕著な腫瘍退縮を引き起こしたことを示すことができた。得られた結果を、図3に、グラフで示す。
図3は、以下の凡例を有する。
縦軸:腫瘍径(センチメートル)
横軸:時間(日)
自然に(spontaneously)発症した肝癌を有する、約9ヶ月齢のLoxP-TAgマウス(nine month old LoxP-TAg mice)を、2×106 PFU LCMVで静脈内感染または未処理のままにした。腫瘍結節(tumor nodes)(直径>=3mm)を、6日目(n=3)および20日目(n=4~5)に、肉眼で定量した。
LCMVによる処理が、有意に癌性肝臓結節(carcinomatous liver nodes)の数を減少させたことを示すことができた。得られた結果を、図4に、グラフで示す。
図4は、以下の凡例を有する。
縦軸:肝臓結節(数)
横軸:時間
WT C57BL/6マウス(n=4/群)に、5×105 MOPC細胞(3日目)またはLCMV(WE株)2×104 PFU(0日目)または、両方、5×105 MOPC細胞(3日目)および2x104 PFU LCMV(0日目)を皮下注射した。
血清試料は、3日目に回収し、そして、IFN-α-ELISAを行った。
LCMVは、同時に癌細胞を投与した実験動物において、インターフェロン-αの分泌の劇的増加を引き起こしたことを示すことができた。得られた結果を図5に、グラフで示す。
図5は、以下の凡例を有する。
縦軸:IFN-α(pg/ミリリットル)
Map3k14aly/alyマウスおよびWTマウスを、5×105 MOPC細胞で処置した(3日目)。マウスの一群は、さらに、腫瘍周囲(peritumorally)を、2×104 PFU LCMV(WE株)で処理した(0日目)。腫瘍の成長を観察した。
LCMVによる治療は、腫瘍退縮を引き起こすことを示すことができた。得られた結果を、図6に、グラフで示す。
図6は、次の凡例を有する。
縦軸:腫瘍径(センチメートル)
横軸:時間(日)
Irf3×Ir7-/-マウスおよびWTマウスを、5×105 MOPC細胞で処置した(3日目)。マウスの一群は、さらに、腫瘍周囲(peritumorally)を、2×104 PFU LCMV(WE株)で処理した(0日目)。腫瘍の成長を観察した。
LCMVによる処理は、腫瘍退縮を引き起こすことを示すことができた。得られた結果を、図7に、グラフで示す。
図7は、次の凡例を有する。
縦軸:腫瘍径(センチメートル)
横軸:時間(日)
WTマウスを、5×105 MOPC細胞で処置した(3日目)。マウスの一群は、さらに、腫瘍周囲(peritumorally)を、2×104 PFU LCMV(WE株)で処理した(0日目)。腫瘍移植後9日目に、腫瘍は、CD31染色で、組織学的(histologically)に分析した。微小血管密度(MDV)および血管-血管間隔を定量した。
LCMVでの処置は、腫瘍血管密度の減少を引き起こしたことを示すことができた。得られた結果を、図8Aに、グラフで示した。
図8Aは、以下の凡例を有する。
WTマウスを、5×105 MOPC細胞で処置した(3日目)。マウスの一群は、さらに、腫瘍周囲(peritumorally)を、2×104 PFU LCMV(WE株)で処理した(0日目)。9日目に、動物に、ピモニダゾールを注射し、そして、腫瘍は、その後、低酸素領域(hypoxic regions)について組織学的に(histologically)分析した。
LCMVによる処理は、癌組織中の酸素欠乏を引き起こすことを示すことができた。得られた結果を、図8Bに、グラフで示す。
図8Bは、次の凡例を有する。
縦軸:低酸素領域/腫瘍(%)
横軸:腫瘍/腫瘍LCMV
WT C57BL/6マウスの右脇腹(right flank)に、5×105 MOPC細胞を、皮下注射した(3日目)。0日目に、動物の1群を、右脇腹(同側(ipsilateral))、左脇腹(対側(contralateral))または、静脈内に、2×104 PFU LCMV(WE株)で処理した。腫瘍の成長を観察した。
LCMVによる処理は、全身投与でさえも、腫瘍退縮を引き起こしたことを示すことができた。得られた結果を、図9に、グラフで示す。
図9は、以下の凡例を有する。
縦軸:腫瘍径(センチメートル)
横軸:時間(日)
NOD.SCIDマウスは、5×105 A431細胞を皮下注射し(3日目)、そして、その後、未処理のまま、または2×104 PFU LCMV(WE株)で処理した。腫瘍の大きさ(最長径)は、指定日に測定した。腫瘍の大きさが12ミリメートルに達したとき、マウスを屠殺した。
LCMVによる処理は、実験動物の生存率を増加させたことを示すことができた。得られた結果を、図10に、グラフで示す。
図10は、以下の凡例を有する。
縦軸:生存(%)
横軸:時間(日)
NOD.SCIDマウスを、5×105 Sw40細胞で処置した(0日目)。マウスの1群は、さらに、腫瘍周囲(peritumorally)を、2×104 PFU LCMV(WE株)または2×104 PFU アルゼンチン出血熱の弱毒生ワクチン#1(Candid#1)で処理した(0日目)。腫瘍の成長を観察した。
LCMVとアルゼンチン出血熱の弱毒生ワクチン#1(Candid#1)を用いた処置は、腫瘍退縮を引き起こしたことを示すことができた。得られた結果を、図11に、グラフで示す。
図11は、以下の凡例を有する。
縦軸:腫瘍径(センチメートル)
横軸:時間(日)
NOD.SCIDマウスを、5×105のHela細胞で処理した(0日目)。マウスの1群は、さらに、腫瘍周囲を(peritumorally)、2×104 PFU LCMV(WE株)で処理した(3日目)。腫瘍の成長を観察した。
LCMVによる処理は、腫瘍退縮を引き起こすことを示すことができた。得られた結果を、図12に、グラフで示す。
図12は、以下の凡例を有する。
縦軸:腫瘍径(センチメートル)
横軸:時間(日)
NOD.SCIDマウスを、5×105 HepG2細胞で処理し(10日目)、そして、次いで、さらに、腫瘍周囲を(peritumorally)、2×104PFU Candid#1または、なし、で処理した(0日目)。腫瘍の成長を観察した。
Candid#1での処理は、この腫瘍タイプで腫瘍退縮を引き起こすことを示すことができた。得られた結果を、図13に、グラフで示す。
図13は、以下の凡例を有する。
縦軸:腫瘍径(センチメートル)
横軸:時間(日)
初代ヒト細胞(Primary human cells)(肝細胞、結腸上皮細胞、メラニン細胞)と、同じ組織源からの腫瘍細胞を、LCMV(MOI 1)で感染させた。ウイルスの量は、1、2および3日後に、上清で測定された。
この実験では、アレナウイルス(arenaviruses)は、健康な組織に比べて、腫瘍細胞において複製されることが示された。
図14は、以下の凡例を有する。
縦軸:細胞培養上清中の感染性ウイルス(対数のプラーク形成単位(logarithmic plaque forming units))
横軸:時間(日)
未処置のままにしたか、または、2×106 PFU LCMVで静脈内処理した、肩における転移および脇腹における転移(MOPC細胞)を有するC57BL/6マウスの腫瘍径(A)および生存(B)。
LCMVの静脈内治療は、2つの局所の転移に非常に効率的に作用し、そして、従って、生存を延長することを、この実験で示すことができた。
図15Aは、以下の凡例を有する。
縦軸:両方の転移の腫瘍径(センチメートル)
横軸:時間(日)
図15Bは、以下の凡例を有する。
縦軸:パーセントでの生存
横軸:時間(日)
未処理のままにしたか、または、2×104 PFU LCMVで、腫瘍内処理した、メラノーマ(B16F10細胞)を有する、C57BL/6マウスの腫瘍径。
LCMVでの局所処理は、メラノーマで非常に効率的であることを、この実験で示すことができた。
図16は、以下の凡例を有する。
縦軸:メラノーマの腫瘍径(センチメートル)
横軸:時間(日)
治療せずに放置されたか、または、2×106 PFU LCMVで静脈内処理された、MT/retマウス(内因性メラノーマの発症)のメラノーマの数。
LCMVでの全身処理は、メラノーマで非常に効率的であることを、この実験で示すことができた。
図17は、以下の凡例を有する。
縦軸:メラノーマの数
未処理のままにした、または、2×106 PFU Candid#1で、腫瘍内で処理した、ヒト線維肉腫(Sw872細胞)を有する、NOD.SCIDマウスの腫瘍径(A)および生存率(B)。
Candid#1は、線維肉腫の場合も、非常に効果的に作用して、そして、したがって生存を延長することを、この実験で、示すことができた。
図18Aは、以下の凡例を有する。
縦軸:腫瘍径(センチメートル)
横軸:時間(日)
図18Bは、以下の凡例を有する。
縦軸:パーセントの生存率
横軸:時間(日)
未処理のままにした、または、腫瘍内で、2×106 PFU LCMVで処理した、ヒト咽頭癌(human pharyngeal carcinoma)(FaDu細胞)を有する、NOD.SCIDマウスの腫瘍径(A)および生存率(B)。
LCMVは、ヒト咽頭癌(human pharyngeal carcinoma)の場合にも、非常に効果的に作用し、そして、従って、生存を延長することを、この実験で示すことができた。
図19Aは、以下の凡例を有する。
縦軸:腫瘍径(センチメートル)
横軸:時間(日)
図19Bは、以下の凡例を有する。
縦軸:パーセントの生存率
横軸:時間(日)
T細胞の機能に影響を与える、腫瘍特異的T細胞(PD-1、IL-2受容体、IL-7受容体)の受容体の発現。腫瘍特異的T細胞は、さらに、LCMVを用いて、または、用いずに、腫瘍内で処理された、B16F10腫瘍を有する、マウスの血液に由来する。
LCMVは、腫瘍特異的T細胞に、ポジティブに影響を与えることを、この実験で示すことができた。
図20は、以下の凡例を有する。
縦軸:異なる受容体の発現の能力(平均蛍光強度((mean fluorescence intensity)))
腫瘍特異的T細胞(OT1細胞)を用いて、または、用いずに、そして、さらに、腫瘍内で、LCMV(2×106 PFU)を用いて、または、用いずに、処理された、マウスの皮下リンパ腫(EL4細胞)を有するC57BL/6マウスの腫瘍径(A)および生存率(B)。
LCMVが、T細胞療法と相乗的に作用することを、この実験で示すことができた。
図21Aは、以下の凡例を有する。
縦軸:腫瘍径(センチメートル)
横軸:時間(日)
図21Bは、以下の凡例を有する。
縦軸:パーセントの生存率
横軸:時間(日)
腫瘍内で、LCMV(2×104 PFU)を用いて、処理された、マウス咽頭癌(MOPC細胞)(murine pharyngeal carcinoma (MOPC cells))を有する、C57BL/6マウスおよびPD-1欠損マウス(Pdcd1-/-マウス)の生存。
LCMVが、PD-1遮断と相乗的に作用することを、この実験で示すことができた。
図22は、以下の凡例を有する。
縦軸:パーセントの生存率
横軸:時間(日)
Claims (8)
- 癌の治療のための薬剤であって、
先天性免疫細胞を活性化して、腫瘍の退縮に奏効し得、および免疫細胞によるインターフェロン-αの分泌の増加に奏効し得るアレナウイルスを含み、
前記アレナウイルスが、旧世界アレナウイルスであり、
前記旧世界アレナウイルスが、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルスであり、および
前記リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルスが、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルスのWE株である、薬剤。 - 前記治療が、先天性免疫細胞を活性化して、腫瘍の退縮に奏効することを含む、請求項1記載の薬剤。
- 前記アレナウイルスが、さらに、インターフェロン-βまたはインターフェロン-γの分泌の増加に奏効し得る、請求項1または2記載の薬剤。
- 前記アレナウイルスが、ゲノム外来RNAを含まない、請求項1乃至3のいずれか一項に記載の薬剤。
- 前記癌が、癌腫、黒色腫、芽細胞腫、リンパ腫および肉腫からなる群から選択される、請求項1乃至4のいずれか一項に記載の薬剤。
- 癌の治療のための薬剤であって、
先天性免疫細胞を活性化して、腫瘍の退縮に奏効し得、および免疫細胞によるインターフェロン-αの分泌の増加に奏効し得るアレナウイルスを含み、
前記アレナウイルスが、新世界アレナウイルスであり
前記新世界アレナウイルスが、フニンウイルスであり、および
前記フニンウイルスが、Candid#1株である、
薬剤。 - 前記治療が、ヒトに対するものである、請求項1乃至6のいずれか一項に記載の薬剤。
- リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、および任意で薬学的に許容される担体、を含む薬学的組成物であって、
前記リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルスは、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルスのWE株である、薬学的組成物。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2021088871A JP7273102B2 (ja) | 2015-04-17 | 2021-05-27 | 腫瘍の治療および/または阻止において使用するためのアレナウイルス(arenaviruses)、および、(改善された)腫瘍退縮特性(tumor-regression properties)を有するアレナウイルス(arenaviruses)を産生するための方法 |
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE102015207036.0 | 2015-04-17 | ||
DE102015207036.0A DE102015207036A1 (de) | 2015-04-17 | 2015-04-17 | Arenaviren zur Anwendung bei der Behandlung und/oder Vorbeugung von Tumoren sowie Verfahren zur Herstellung von Arenaviren mit (verbesserten) tumorregressiven Eigenschaften |
PCT/EP2016/058347 WO2016166285A1 (de) | 2015-04-17 | 2016-04-15 | Arenaviren zur anwendung bei der behandlung und/oder vorbeugung von tumoren sowie verfahren zur herstellung von arenaviren mit (verbesserten) tumorregressiven eigenschaften |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021088871A Division JP7273102B2 (ja) | 2015-04-17 | 2021-05-27 | 腫瘍の治療および/または阻止において使用するためのアレナウイルス(arenaviruses)、および、(改善された)腫瘍退縮特性(tumor-regression properties)を有するアレナウイルス(arenaviruses)を産生するための方法 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2018515130A JP2018515130A (ja) | 2018-06-14 |
JP2018515130A5 JP2018515130A5 (ja) | 2019-05-23 |
JP7039037B2 true JP7039037B2 (ja) | 2022-03-22 |
Family
ID=55759589
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018505536A Active JP7039037B2 (ja) | 2015-04-17 | 2016-04-15 | 腫瘍の治療および/または阻止において使用するためのアレナウイルス(arenaviruses)、および、(改善された)腫瘍退縮特性(tumor-regression properties)を有するアレナウイルス(arenaviruses)を産生するための方法 |
JP2021088871A Active JP7273102B2 (ja) | 2015-04-17 | 2021-05-27 | 腫瘍の治療および/または阻止において使用するためのアレナウイルス(arenaviruses)、および、(改善された)腫瘍退縮特性(tumor-regression properties)を有するアレナウイルス(arenaviruses)を産生するための方法 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021088871A Active JP7273102B2 (ja) | 2015-04-17 | 2021-05-27 | 腫瘍の治療および/または阻止において使用するためのアレナウイルス(arenaviruses)、および、(改善された)腫瘍退縮特性(tumor-regression properties)を有するアレナウイルス(arenaviruses)を産生するための方法 |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20180117137A1 (ja) |
EP (1) | EP3283104A1 (ja) |
JP (2) | JP7039037B2 (ja) |
CN (1) | CN108025054B (ja) |
BR (1) | BR112017022022A8 (ja) |
CA (1) | CA2982873A1 (ja) |
DE (1) | DE102015207036A1 (ja) |
HK (1) | HK1251168A1 (ja) |
WO (1) | WO2016166285A1 (ja) |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2016075250A1 (en) | 2014-11-13 | 2016-05-19 | Université De Genève | Tri-segmented arenaviruses as vaccine vectors |
DE102015207036A1 (de) | 2015-04-17 | 2016-10-20 | Karl Sebastian Lang | Arenaviren zur Anwendung bei der Behandlung und/oder Vorbeugung von Tumoren sowie Verfahren zur Herstellung von Arenaviren mit (verbesserten) tumorregressiven Eigenschaften |
AU2016274655B2 (en) | 2015-06-10 | 2021-06-17 | Hookipa Biotech Gmbh | HPV vaccines |
AU2016348675B2 (en) | 2015-11-04 | 2022-11-17 | Hookipa Biotech Gmbh | Vaccines against Hepatitis B virus |
EP3373959B1 (en) | 2015-11-12 | 2022-06-29 | Hookipa Biotech GmbH | Arenavirus particles as cancer vaccines |
WO2018185307A1 (en) * | 2017-04-07 | 2018-10-11 | Hookipa Biotech Ag | Arenavirus particles to treat solid tumors |
DE102018215551A1 (de) | 2018-09-12 | 2020-03-12 | Virolutions Biotech Gmbh | Verfahren zur Herstellung eines antitumoralen Arenavirus sowie Arenavirusmutanten |
JP2024508823A (ja) | 2021-02-26 | 2024-02-28 | アバロス セラピューティクス ゲーエムベーハー | 治療目的のための新規のウイルス粒子 |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE102004034461B4 (de) | 2004-07-16 | 2008-02-07 | Chemotherapeutisches Forschungsinstitut Georg-Speyer-Haus | Gentherapie solider Tumore durch retrovirale, mit Arenavirus-Glykoprotein pseudotypisierte Vektoren |
US7994221B2 (en) | 2004-12-06 | 2011-08-09 | Siga Technologies, Inc. | Sulfonyl semicarbazides, carbonyl semicarbazides, semicarbazides and ureas, pharmaceutical compositions thereof, and methods for treating hemorrhagic fever viruses, including infections associated with arenaviruses |
DK2238255T3 (da) | 2007-12-27 | 2013-11-18 | Univ Zuerich | Replikationsdefekte arenavirusvektorer |
WO2011056993A1 (en) * | 2009-11-04 | 2011-05-12 | Yale University | Compositions and methods for treating cancer with attenuated oncolytic viruses |
DE102015207036A1 (de) | 2015-04-17 | 2016-10-20 | Karl Sebastian Lang | Arenaviren zur Anwendung bei der Behandlung und/oder Vorbeugung von Tumoren sowie Verfahren zur Herstellung von Arenaviren mit (verbesserten) tumorregressiven Eigenschaften |
-
2015
- 2015-04-17 DE DE102015207036.0A patent/DE102015207036A1/de active Pending
-
2016
- 2016-04-15 US US15/567,343 patent/US20180117137A1/en not_active Abandoned
- 2016-04-15 WO PCT/EP2016/058347 patent/WO2016166285A1/de active Application Filing
- 2016-04-15 CN CN201680030624.5A patent/CN108025054B/zh active Active
- 2016-04-15 JP JP2018505536A patent/JP7039037B2/ja active Active
- 2016-04-15 CA CA2982873A patent/CA2982873A1/en active Pending
- 2016-04-15 BR BR112017022022A patent/BR112017022022A8/pt active Search and Examination
- 2016-04-15 EP EP16717129.7A patent/EP3283104A1/de active Pending
-
2018
- 2018-08-20 HK HK18110658.2A patent/HK1251168A1/zh unknown
-
2019
- 2019-02-04 US US16/267,095 patent/US11801294B2/en active Active
-
2021
- 2021-05-27 JP JP2021088871A patent/JP7273102B2/ja active Active
Non-Patent Citations (10)
Title |
---|
Cancer Res.,2015年04月15日,vol. 74, no. 8,p. 2171-2181 |
ELIZABETH, Kelly and STEPHEN J. Russell,HISTORY OF ONCOLYTIC VIRUSES: GENESIS TO GENETIC ENGINEERING,MOLECULAR THERAPY,2007年,VOLUME 15, ISSUE 4,P651-659 |
GONI, S.E. et al.,Genomic features of attenuated Junin virus vaccine strain candidate,Virus Genes,2006年,32(1),37-41 |
HONKE, Nadine et al.,Usp18 driven enforced viral replication in dendritic cells contributes to break of immunological tolerance in autoimmune diabetes.,PLoS Pathog.,2013年,9(10),e1003650 |
KOMA, Takaaki et al.,Innate immune response to arenaviral infection: a focus on the highly pathogenic New World hemorrhagic arenaviruses,J Mol Biol.,2013年,425(24),4893-903 |
MOLOMUT, Norman and PADNOS, Morton,INHIBITION OF TRANSPLANTABLE AND SPONTANEOUS MURINE TUMOURS BY THE M-P VIRUS,NATURE,英国,1965年12月04日,VOL:208, NR:5014,PAGE(S):948 - 950,http://dx.doi.org/10.1038/208948a0 |
Nature Communications,2017年03月01日,8:14447,p. 1-14 |
Nature,2001年,vol. 411,p. 1058-1064 |
REISEROVA L; ET AL,IDENTIFICATION OF MATU-MX AGENT AS A NEW STRAIN OF LYMPHOCYTIC CHORIOMENINGITIS VIRUS (LCMV) AND SEROLOGICAL INDICATION OF HORIZONTAL SPREAD OF LCMV IN HUMAN POPULATION,VIROLOGY,NL,1999年04月25日,VOL:257, NR:1,PAGE(S):73 - 83,http://dx.doi.org/10.1006/viro.1999.9638 |
WEBB, H.E. ET AL.,THE TREATMENT OF 18 CASES OF MALIGNANT DISEASE WITH AN ARENAVIRUS,CLINICAL ONCOLOGY,英国,1975年06月,VOL:1, NR:2,PAGE(S):157-169,https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/1183104 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2018515130A (ja) | 2018-06-14 |
EP3283104A1 (de) | 2018-02-21 |
JP2021129589A (ja) | 2021-09-09 |
HK1251168A1 (zh) | 2019-01-25 |
US11801294B2 (en) | 2023-10-31 |
US20190151436A1 (en) | 2019-05-23 |
JP7273102B2 (ja) | 2023-05-12 |
US20180117137A1 (en) | 2018-05-03 |
DE102015207036A1 (de) | 2016-10-20 |
CN108025054A (zh) | 2018-05-11 |
CA2982873A1 (en) | 2016-10-20 |
BR112017022022A2 (pt) | 2019-01-22 |
CN108025054B (zh) | 2022-12-23 |
WO2016166285A1 (de) | 2016-10-20 |
BR112017022022A8 (pt) | 2023-03-07 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7039037B2 (ja) | 腫瘍の治療および/または阻止において使用するためのアレナウイルス(arenaviruses)、および、(改善された)腫瘍退縮特性(tumor-regression properties)を有するアレナウイルス(arenaviruses)を産生するための方法 | |
KR102100092B1 (ko) | 이종 종양-관련 항원들을 발현하는 아데노바이러스 | |
KR102409147B1 (ko) | 종양분해성 백시니아 바이러스 | |
US11596685B2 (en) | Compositions and methods for organ-protective expression and modulation of coding ribonucleic acids | |
JP2023159160A (ja) | 組織におけるコード化リボ核酸の標的化送達、発現および調節のための組成物およびプロセス | |
Chai et al. | In vitro and in vivo effect of 5-FC combined gene therapy with TNF-α and CD suicide gene on human laryngeal carcinoma cell line Hep-2 | |
Liu et al. | Advances and prospects of mRNA vaccines in cancer immunotherapy | |
Wang et al. | TREM2 knockdown improves the therapeutic effect of PD-1 blockade in hepatocellular carcinoma | |
EP3694868B1 (en) | Method for producing an antitumoral arenavirus as well as arenavirus mutants | |
Vega et al. | Viral Vectors in Cancer Immunotherapy | |
Goswami et al. | Using Oncolytic Viruses to Silence the Multidrug Resistance Genes via RNA Interference |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
RD03 | Notification of appointment of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7423 Effective date: 20190325 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20190328 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20190325 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190412 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20190412 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20200129 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20200206 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20200501 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20200701 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200805 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20210107 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20210128 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210527 |
|
C60 | Trial request (containing other claim documents, opposition documents) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C60 Effective date: 20210527 |
|
C11 | Written invitation by the commissioner to file amendments |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C11 Effective date: 20210607 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210706 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20210707 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20210818 |
|
C21 | Notice of transfer of a case for reconsideration by examiners before appeal proceedings |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C21 Effective date: 20210819 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20210820 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20210820 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20211020 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220120 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20220121 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20220224 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20220302 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7039037 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |