CN108008031A - 同时检测氨基酸、肉碱、酮类、激素的方法和试剂盒 - Google Patents
同时检测氨基酸、肉碱、酮类、激素的方法和试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108008031A CN108008031A CN201711147039.6A CN201711147039A CN108008031A CN 108008031 A CN108008031 A CN 108008031A CN 201711147039 A CN201711147039 A CN 201711147039A CN 108008031 A CN108008031 A CN 108008031A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- carnitine
- product
- amino acid
- internal standard
- quasi
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- PHIQHXFUZVPYII-ZCFIWIBFSA-O (R)-carnitinium Chemical compound C[N+](C)(C)C[C@H](O)CC(O)=O PHIQHXFUZVPYII-ZCFIWIBFSA-O 0.000 title claims abstract description 75
- 229960004203 carnitine Drugs 0.000 title claims abstract description 75
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 title claims abstract description 60
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 31
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 title claims abstract description 29
- 239000005556 hormone Substances 0.000 title claims abstract description 29
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 title claims abstract description 25
- 239000000047 product Substances 0.000 claims abstract description 91
- 230000000155 isotopic effect Effects 0.000 claims abstract description 56
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 33
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 33
- 239000012224 working solution Substances 0.000 claims abstract description 30
- WYEPBHZLDUPIOD-UHFFFAOYSA-N 4,6-dioxoheptanoic acid Chemical compound CC(=O)CC(=O)CCC(O)=O WYEPBHZLDUPIOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 29
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 17
- 208000015978 inherited metabolic disease Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 claims abstract description 10
- DBPWSSGDRRHUNT-UHFFFAOYSA-N 17alpha-hydroxy progesterone Natural products C1CC2=CC(=O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(=O)C)(O)C1(C)CC2 DBPWSSGDRRHUNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 229950000801 hydroxyprogesterone caproate Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims abstract description 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 54
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 44
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 28
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical group OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 claims description 19
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 18
- DBPWSSGDRRHUNT-CEGNMAFCSA-N 17α-hydroxyprogesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@@](C(=O)C)(O)[C@@]1(C)CC2 DBPWSSGDRRHUNT-CEGNMAFCSA-N 0.000 claims description 14
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 claims description 9
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 8
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 claims description 7
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 7
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 7
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 6
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims description 6
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 claims description 6
- DWNBOPVKNPVNQG-LURJTMIESA-N (2s)-4-hydroxy-2-(propylamino)butanoic acid Chemical compound CCCN[C@H](C(O)=O)CCO DWNBOPVKNPVNQG-LURJTMIESA-N 0.000 claims description 5
- 208000012270 Amino acid catabolism disease Diseases 0.000 claims description 5
- 230000001919 adrenal effect Effects 0.000 claims description 5
- IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N hydrazine monohydrate Substances O.NN IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 5
- 239000004474 valine Substances 0.000 claims description 5
- NWZSZGALRFJKBT-KNIFDHDWSA-N (2s)-2,6-diaminohexanoic acid;(2s)-2-hydroxybutanedioic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O NWZSZGALRFJKBT-KNIFDHDWSA-N 0.000 claims description 4
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000011888 foil Substances 0.000 claims description 4
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 claims description 4
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 4
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 2
- 241000219112 Cucumis Species 0.000 claims 1
- 235000015510 Cucumis melo subsp melo Nutrition 0.000 claims 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 abstract description 9
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 6
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 abstract description 5
- 238000012216 screening Methods 0.000 abstract description 5
- DOMWKUIIPQCAJU-LJHIYBGHSA-N Hydroxyprogesterone caproate Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@@](C(C)=O)(OC(=O)CCCCC)[C@@]1(C)CC2 DOMWKUIIPQCAJU-LJHIYBGHSA-N 0.000 abstract 1
- 208000027219 Deficiency disease Diseases 0.000 description 12
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 201000011252 Phenylketonuria Diseases 0.000 description 10
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Natural products CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 8
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 7
- 201000011296 tyrosinemia Diseases 0.000 description 6
- -1 Acyl acetone Chemical compound 0.000 description 5
- 206010058298 Argininosuccinate synthetase deficiency Diseases 0.000 description 5
- 201000011297 Citrullinemia Diseases 0.000 description 5
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 5
- 206010050215 Carnitine palmitoyltransferase deficiency Diseases 0.000 description 4
- 208000034596 Gyrate atrophy of choroid and retina Diseases 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 4
- 208000014380 ornithine aminotransferase deficiency Diseases 0.000 description 4
- 238000004885 tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 4
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 3
- 101001083553 Homo sapiens Hydroxyacyl-coenzyme A dehydrogenase, mitochondrial Proteins 0.000 description 3
- 102100030358 Hydroxyacyl-coenzyme A dehydrogenase, mitochondrial Human genes 0.000 description 3
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 3
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 3
- 208000024393 maple syrup urine disease Diseases 0.000 description 3
- LOVNYFVWYTXDRE-WMSSUOLPSA-N 16-Hydroxyprogesterone Chemical class C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC(O)[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 LOVNYFVWYTXDRE-WMSSUOLPSA-N 0.000 description 2
- 208000006044 2-methylbutyryl-CoA dehydrogenase deficiency Diseases 0.000 description 2
- 102100039358 3-hydroxyacyl-CoA dehydrogenase type-2 Human genes 0.000 description 2
- 208000005676 Adrenogenital syndrome Diseases 0.000 description 2
- 208000034318 Argininemia Diseases 0.000 description 2
- 208000008448 Congenital adrenal hyperplasia Diseases 0.000 description 2
- 108700006770 Glutaric Acidemia I Proteins 0.000 description 2
- 108700022128 Hypermethioninemia Proteins 0.000 description 2
- 208000000420 Isovaleric acidemia Diseases 0.000 description 2
- FFFHZYDWPBMWHY-VKHMYHEASA-N L-homocysteine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCS FFFHZYDWPBMWHY-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 108700004450 Malonic aciduria Proteins 0.000 description 2
- 208000003160 Malonic aciduria Diseases 0.000 description 2
- 102100029461 Malonyl-CoA decarboxylase, mitochondrial Human genes 0.000 description 2
- 208000030162 Maple syrup disease Diseases 0.000 description 2
- 102100038738 Mitochondrial carnitine/acylcarnitine carrier protein Human genes 0.000 description 2
- 108700043217 N-acetyl glutamate synthetase deficiency Proteins 0.000 description 2
- 208000000599 Ornithine Carbamoyltransferase Deficiency Disease Diseases 0.000 description 2
- 206010069116 Tetrahydrobiopterin deficiency Diseases 0.000 description 2
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 2
- 208000012130 acyl-CoA dehydrogenase deficiency Diseases 0.000 description 2
- 206010067728 beta-ketothiolase deficiency Diseases 0.000 description 2
- 208000022837 disorder of methionine catabolism Diseases 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 2
- 201000011286 hyperargininemia Diseases 0.000 description 2
- 208000008245 hypermethioninemia Diseases 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 108700036927 isovaleric Acidemia Proteins 0.000 description 2
- 239000002075 main ingredient Substances 0.000 description 2
- 208000005548 medium chain acyl-CoA dehydrogenase deficiency Diseases 0.000 description 2
- 201000003694 methylmalonic acidemia Diseases 0.000 description 2
- 201000011278 ornithine carbamoyltransferase deficiency Diseases 0.000 description 2
- 201000004012 propionic acidemia Diseases 0.000 description 2
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 2
- 208000001392 short chain acyl-CoA dehydrogenase deficiency Diseases 0.000 description 2
- 238000010183 spectrum analysis Methods 0.000 description 2
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 2
- 201000010866 very long chain acyl-CoA dehydrogenase deficiency Diseases 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CABVTRNMFUVUDM-VRHQGPGLSA-N (3S)-3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCSC(=O)C[C@@](O)(CC(O)=O)C)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 CABVTRNMFUVUDM-VRHQGPGLSA-N 0.000 description 1
- 108700032300 2,4-Dienoyl-CoA Reductase Deficiency Proteins 0.000 description 1
- 108010037959 2-methyl-3-hydroxybutyryl-coenzyme A dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 108700028607 3-Hydroxy-3-Methylglutaryl-CoA Lyase Deficiency Proteins 0.000 description 1
- VAJVDSVGBWFCLW-UHFFFAOYSA-N 3-Phenyl-1-propanol Chemical compound OCCCC1=CC=CC=C1 VAJVDSVGBWFCLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004080 3-carboxypropanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C(O[H])=O 0.000 description 1
- 208000024801 3-hydroxy-3-methylglutaric aciduria Diseases 0.000 description 1
- 101710111025 3-hydroxyacyl-CoA dehydrogenase type-2 Proteins 0.000 description 1
- 108700005389 3-methylcrotonyl CoA carboxylase 1 deficiency Proteins 0.000 description 1
- 201000008000 3-methylcrotonyl-CoA carboxylase deficiency Diseases 0.000 description 1
- 201000003553 3-methylglutaconic aciduria Diseases 0.000 description 1
- KDZOASGQNOPSCU-WDSKDSINSA-N Argininosuccinic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC\N=C(/N)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O KDZOASGQNOPSCU-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 108700005324 Beta ketothiolase deficiency Proteins 0.000 description 1
- 206010005963 Bone formation increased Diseases 0.000 description 1
- 102000002666 Carnitine O-palmitoyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 108010018424 Carnitine O-palmitoyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 102100027943 Carnitine O-palmitoyltransferase 1, liver isoform Human genes 0.000 description 1
- 101710120614 Carnitine O-palmitoyltransferase 1, liver isoform Proteins 0.000 description 1
- 101710108984 Carnitine O-palmitoyltransferase 1, muscle isoform Proteins 0.000 description 1
- 201000002929 Carnitine palmitoyltransferase II deficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000003613 Ethylmalonic encephalopathy Diseases 0.000 description 1
- 208000031978 HSD10 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000012809 HSD10 mitochondrial disease Diseases 0.000 description 1
- 101000677562 Homo sapiens Isobutyryl-CoA dehydrogenase, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 101000841267 Homo sapiens Long chain 3-hydroxyacyl-CoA dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 101000957437 Homo sapiens Mitochondrial carnitine/acylcarnitine carrier protein Proteins 0.000 description 1
- 101000986595 Homo sapiens Ornithine transcarbamylase, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 206010048707 Homocystinaemia Diseases 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020575 Hyperammonaemia Diseases 0.000 description 1
- 108700005882 Isobutyryl-CoA dehydrogenase deficiency Proteins 0.000 description 1
- 102100021646 Isobutyryl-CoA dehydrogenase, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 229930194542 Keto Natural products 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 102100029107 Long chain 3-hydroxyacyl-CoA dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108010027062 Long-Chain Acyl-CoA Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 102000018653 Long-Chain Acyl-CoA Dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108700006159 Long-chain acyl-CoA dehydrogenase deficiency Proteins 0.000 description 1
- 108700000232 Medium chain acyl CoA dehydrogenase deficiency Proteins 0.000 description 1
- 101710118206 Mitochondrial carnitine/acylcarnitine carrier protein Proteins 0.000 description 1
- 208000001769 Multiple Acyl Coenzyme A Dehydrogenase Deficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000003943 Multiple carboxylase deficiency Diseases 0.000 description 1
- 206010052450 Ornithine transcarbamoylase deficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000035903 Ornithine transcarbamylase deficiency Diseases 0.000 description 1
- 102100028200 Ornithine transcarbamylase, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- DYUQAZSOFZSPHD-UHFFFAOYSA-N Phenylpropyl alcohol Natural products CCC(O)C1=CC=CC=C1 DYUQAZSOFZSPHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000932075 Priacanthus hamrur Species 0.000 description 1
- 208000028269 Progressive encephalopathy with leukodystrophy due to DECR deficiency Diseases 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700017825 Short chain Acyl CoA dehydrogenase deficiency Proteins 0.000 description 1
- 102100024639 Short-chain specific acyl-CoA dehydrogenase, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005864 Sulphur Substances 0.000 description 1
- 102000002932 Thiolase Human genes 0.000 description 1
- 108060008225 Thiolase Proteins 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 108700036262 Trifunctional Protein Deficiency With Myopathy And Neuropathy Proteins 0.000 description 1
- 208000034027 Tyrosinemia type 3 Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 229960001009 acetylcarnitine Drugs 0.000 description 1
- 150000001263 acyl chlorides Chemical class 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 201000003554 argininosuccinic aciduria Diseases 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- RGJOEKWQDUBAIZ-UHFFFAOYSA-N coenzime A Natural products OC1C(OP(O)(O)=O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)OC1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 RGJOEKWQDUBAIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005516 coenzyme A Substances 0.000 description 1
- 229940093530 coenzyme a Drugs 0.000 description 1
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- KDTSHFARGAKYJN-UHFFFAOYSA-N dephosphocoenzyme A Natural products OC1C(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)OC1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 KDTSHFARGAKYJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 208000016097 disease of metabolism Diseases 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 239000000686 essence Substances 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 230000004129 fatty acid metabolism Effects 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000002187 fatty acyl carnitines Chemical class 0.000 description 1
- 238000002795 fluorescence method Methods 0.000 description 1
- 208000005461 glutaric acidemia I Diseases 0.000 description 1
- 208000015362 glutaric aciduria Diseases 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 208000016245 inborn errors of metabolism Diseases 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 208000003192 isobutyryl-CoA dehydrogenase deficiency Diseases 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 208000004687 long chain acyl-CoA dehydrogenase deficiency Diseases 0.000 description 1
- 230000003818 metabolic dysfunction Effects 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 201000003645 multiple acyl-CoA dehydrogenase deficiency Diseases 0.000 description 1
- 201000008152 organic acidemia Diseases 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000007079 thiolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 201000007971 tyrosinemia type III Diseases 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
- G01N30/72—Mass spectrometers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N2030/022—Column chromatography characterised by the kind of separation mechanism
- G01N2030/027—Liquid chromatography
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本申请公开了一种同时检测氨基酸、肉碱、酮类、激素的方法和试剂盒。本申请的方法，包括用提取工作液对待测血斑样本进行孵育；离心，取上清液，采用串联质谱对进行检测，获得氨基酸、肉碱、酮类、激素信息；提取工作液包括氨基酸同位素内标准品、肉碱同位素内标准品、17α羟孕酮同位素内标准品、琥珀酰丙酮内标准品和有机溶剂。本申请的方法，只需要一次采血就可以实现氨基酸、肉碱、酮类、激素四大类物质的同时检测，节省了人力成本，也避免了多次采血对待测人员的身心影响。本申请的方法，一次性定量检测13种氨基酸、32种肉碱、1种激素和1种酮类，根据这些指标能筛查46种遗传性代谢疾病，提升了对新生儿遗传代谢性疾病的筛查效率。
Description
技术领域
本申请涉及遗传代谢疾病相关物质检测领域，特别是涉及一种同时检测氨基酸、肉碱、酮类、激素的方法和试剂盒。
背景技术
遗传性代谢疾病是由于遗传物质变异导致代谢功能障碍，从而引发一系列的临床症状的疾病，涉及氨基酸、肉碱、维生素、类固醇等多种物质代谢。据统计，每年我国遗传代谢性疾病新生儿达40-50万，对遗传性代谢疾病及早的发现并进行干预和治疗，可避免和减轻疾病给患儿及其家庭带来的伤害和影响。
现有应用的新生儿代谢性疾病筛查技术有细菌抑制法、酶联免疫法、荧光法等，但这些方法一次只能筛查一种疾病。串联质谱(MS/MS)通过对母离子和子离子的双重选择，大大提升了检测的特异性、灵敏度，从而实现在1-2min内对同一个样本的多种代谢物进行同时检测，可以对氨基酸代谢障碍性疾病，脂肪酸代谢障碍性疾病，有机酸代谢障碍性疾病，激素代谢障碍性疾病等多种类型的遗传代谢病疾病进行筛查。
目前，国际上有美国PerkinElmer公司开发的“非衍生化多种氨基酸、肉碱和琥珀酰丙酮测定试剂盒(串联质谱法)”；国内有广州丰华生物工程有限公司开发的“非衍生化多种氨基酸、肉碱和琥珀酰丙酮测定试剂盒(串联质谱法)”和“衍生化多种氨基酸、肉碱和琥珀酰丙酮测定试剂盒(串联质谱法)”。
无论是国际还是国内的测定试剂盒，都存在如下不足：
A、只能一次性检测部分氨基酸、肉碱和琥珀酰丙酮，而激素类的检测指标需要单独采样，单独检测；
B、新生儿筛查衍生化路线需使用酰氯，会对环境造成污染；
C、在检测氨基酸和肉碱相关的疾病、先天性肾上腺皮质增生症的时候，需要待检者采血两次，有可能造成多一次的心理阴影。
发明内容
本申请的目的是提供一种改进的同时检测氨基酸、肉碱、酮类、激素的方法和试剂盒。
为了实现上述目的，本申请采用了以下技术方案：
本申请的一方面公开了一种同时检测氨基酸、肉碱、酮类、激素的方法，包括采用提取工作液对待测血斑样本进行孵育；离心，取上清液，采用串联质谱对上清液进行检测，获得待测血斑样本中的氨基酸、肉碱、酮类、激素信息；提取工作液包括氨基酸同位素内标准品、肉碱同位素内标准品、17α羟孕酮同位素内标准品、琥珀酰丙酮内标准品和有机溶剂。
需要说明的是，本申请的检测方法，通过对提取工作液进行改进，具体的，在提取工作液中添加氨基酸同位素内标准品、肉碱同位素内标准品、17α羟孕酮同位素内标准品、琥珀酰丙酮内标准品，并采用串联质谱，可以实现氨基酸、肉碱、酮类、激素四大类物质的同时检测。本申请的方法，只需要一次采血就可以完成氨基酸代谢障碍性疾病、肉碱代谢障碍性疾病和激素代谢障碍性疾病等多种类的多项疾病的筛查，一方面缩减了检测工作步骤和时间，提高了检测效率，另一方面，也避免了多次采血对待测人员造成的痛苦或心理阴影。本申请的一种实现方式中，通过串联质谱检测，在检测干血斑样本时，仅需约3微升血液样本就可以一次性定量检测13种氨基酸、32种肉碱、1种激素和1种酮类，根据这些指标能筛查46种遗传性代谢疾病，大大提升了对新生儿遗传代谢性疾病的筛查效率。
还需要说明的是，本申请的提取工作液中，氨基酸同位素内标准品、肉碱同位素内标准品、17α羟孕酮同位素内标准品、琥珀酰丙酮内标准品可以采用市售的各种同位素标准品，例如美国剑桥实验室提供的氨基酸、肉碱、琥珀酰丙酮同位素标准品，美国CIL公司提供的17α羟孕酮同位素标准品等，在此不做具体限定。在本申请的优选方案中，对氨基酸同位素内标准品和肉碱同位素内标准品进行了限定，详见以下方案。
优选的，孵育的条件为，30℃、700～750rpm条件下振荡30分钟。
优选的，氨基酸同位素内标准品包括L-d4-丙氨酸、L-d8-缬氨酸、L-d3-亮氨酸、L-d3-甲硫氨酸、L-13C6-苯丙氨酸、L-13C6-酪氨酸、L-d2-瓜氨酸、L-d2-鸟氨酸和L-d4；5-13C-精氨酸中的至少一种。
需要说明的是，本申请的一种实现方式中，采用L-d4-丙氨酸、L-d8-缬氨酸、L-d3-亮氨酸、L-d3-甲硫氨酸、L-13C6-苯丙氨酸、L-13C6-酪氨酸、L-d2-瓜氨酸、L-d2-鸟氨酸和L-d4；5-13C-精氨酸，九种氨基酸同位素内标准品，按照本申请的半定量方法，通过结构近似的内标定量分析物，可以对13种氨基酸进行检测。
优选的，肉碱同位素内标准品包括L-d9-游离肉碱、L-d3-乙酰肉碱、L-d3-丙酰肉碱、L-d3-丁酰肉碱、L-d9-异戊酰肉碱、L-d3-辛酰肉碱、L-d9-肉豆蔻酰肉碱和L-d3-棕榈酰肉碱中的至少一种。
需要说明的是，本申请的一种实现方式中，采用L-d9-游离肉碱、L-d3-乙酰肉碱、L-d3-丙酰肉碱、L-d3-丁酰肉碱、L-d9-异戊酰肉碱、L-d3-辛酰肉碱、L-d9-肉豆蔻酰肉碱和L-d3-棕榈酰肉碱，八种肉碱同位素内标准品，按照本申请的半定量方法，通过结构近似的内标定量分析物，可以对32种肉碱进行检测。
优选的，提取工作液中，有机溶剂为甲醇。
本申请的另一面公开了一种同时检测氨基酸、肉碱、酮类、激素的试剂盒，该试剂盒用于采用串联质谱对待测血斑样本进行质谱检测，试剂盒包括独立包装的以下组分，
(A)氨基酸同位素内标准品；
(B)肉碱同位素内标准品；
(C)17α羟孕酮同位素内标准品；
(D)琥珀酰丙酮处理液，琥珀酰丙酮处理液中含有琥珀酰丙酮内标准品和水合肼溶液；
(E)质控品，质控品为含有氨基酸和肉碱的人全血滤纸干血片。
需要说明的是，其中，质控品用于评估仪器是否波动，即检测质控品中各个分析物浓度的波动范围，本申请的一种实现方式中，用变异系数CV表示，CV＝标准偏差/均值，通过质控品的多次检测结果，分析各个分析物的CV值，当CV≤25％时，表示仪器状态良好，采集数据良好。
优选的，本申请的试剂盒中，氨基酸同位素内标准品包括L-d4-丙氨酸、L-d8-缬氨酸、L-d3-亮氨酸、L-d3-甲硫氨酸、L-13C6-苯丙氨酸、L-13C6-酪氨酸、L-d2-瓜氨酸、L-d2-鸟氨酸和L-d4；5-13C-精氨酸中的至少一种。
优选的，本申请的试剂盒中，肉碱同位素内标准品包括L-d9-游离肉碱、L-d3-乙酰肉碱、L-d3-丙酰肉碱、L-d3-丁酰肉碱、L-d9-异戊酰肉碱、L-d3-辛酰肉碱、L-d9-肉豆蔻酰肉碱和L-d3-棕榈酰肉碱中的至少一种。
优选的，本申请的试剂盒中还包括V型底96孔板、铝箔封口膜和使用说明书中的至少一种。
需要说明的是，V型底96孔板和铝箔封口膜可以选择性的加入试剂盒中，以方便使用，也可以单独另行购置，在此不做具体限定。使用说明书实际上就是按照本申请的方法和实施例中记载的内容所编写的试验操作步骤。
本申请的再一面公开了本申请的试剂盒，在制备遗传性代谢疾病检测药物或装置中的应用；其中，遗传性代谢疾病包括氨基酸代谢障碍性疾病、肉碱代谢障碍性疾病和激素代谢障碍性疾病中的至少一种。
优选的，本申请的一种实现方式中，尤其可以在检测氨基酸和肉碱相关疾病的同时检测先天性肾上腺皮质增生症。
由于采用以上技术方案，本申请的有益效果在于：
本申请的检测方法，可以实现氨基酸、肉碱、酮类、激素四大类物质的同时检测，避免了衍生化路线对环境的污染，并且，在检测氨基酸和肉碱相关疾病的同时，可以对先天性肾上腺皮质增生症进行检测，只需要一次采血就可以对多项疾病进行检测，一方面，节省了人力成本，降低了多次采血操作可能带来的误差；另一方面，也避免了多次采血对待测人员的身心影响。本申请的方法，可以一次性定量检测13种氨基酸、32种肉碱、1种激素和1种酮类，根据这些指标能筛查46种遗传性代谢疾病，大大提升了对新生儿遗传代谢性疾病的筛查效率。
附图说明
图1是本申请实施例中苯丙氨酸和苯丙氨酸内标准品在苯丙酮尿症患儿和正常人样本中的峰形及强度的质谱图；
图2是本申请实施例中游离肉碱和游离肉碱内标准品在游离肉碱转运缺乏症患儿和正常人样本中的峰形及强度的质谱图。
具体实施方式
本申请的检测方法和试剂盒，与市面上现有的新生儿遗传代谢性疾病筛查试剂盒相比，现有的试剂盒最多只能同时检测氨基酸、肉碱、酮类三大类物质，而本申请的试剂盒和方法，在本申请的试剂盒中加入了17α羟孕酮指标和琥珀酰丙酮指标，可以同时检测氨基酸、肉碱、酮类、激素四大类物质。特别是，氨基酸和肉碱相关疾病的筛查、先天性肾上腺皮质增生症的筛查，两者是单独分开进行的，需要两次采血，而本申请的试剂盒和方法只需要一次采血就可以完成以上两种疾病的筛查。本申请的一种实现方式中，可以一次性定量检测13种氨基酸、32种肉碱、1种激素和1种酮类，根据这些指标能筛查46种遗传性代谢疾病，实现传统的“一次实验检测一种疾病”向“一次实验检测多种疾病”的转变。
本申请的试剂盒和方法增加了肾上腺皮质增生症筛查检测的同时，提升了对于酪氨酸血症筛查的准确性。而且相对于现有的衍生化试剂盒，本申请的样本前处理步骤少，节省了人力成本，降低了人工操作可能带来的误差。同时，由于只需要一次采血，避免了多一次采血对待测对象，特别是对新生儿，造成痛苦或心理阴影。
下面通过具体实施例和附图对本申请作进一步详细说明。以下实施例仅对本申请进行进一步说明，不应理解为对本申请的限制。
实施例
本例的试剂盒包括独立包装的以下组分：
(A)氨基酸同位素内标准品，1瓶，总计约17g；其中，由等量的L-d4-丙氨酸、L-d8-缬氨酸(L-2H8-Val)、L-d3-亮氨酸(L-2H3-Leu)、L-d3-甲硫氨酸(L-2H3-Met)、L-13C6-苯丙氨酸(L-13C6-Phe)、L-13C6-酪氨酸(L-13C6-Tyr)、L-d2-瓜氨酸(L-2H2-Cit)、L-d2-鸟氨酸(L-2H2-Orn)和L-d4；5-13C-精氨酸(L-2H4；5-13C-Arg)组成；以上各氨基酸内标准品的浓度均为500nmol/mL；
(B)肉碱同位素内标准品，1瓶，总计约16.8g；其中，由152nmol/mL的L-d9-游离肉碱(L-2H9-C0)、38nmol/mL的L-d3-乙酰肉碱(L-2H3-C2)、7.6nmol/mL的L-d3-丙酰肉碱(L-2H3-C3)、7.6nmol/mL的L-d3-丁酰肉碱(L-2H3-C4)、7.6nmol/mL的L-d9-异戊酰肉碱(L-2H9-C5)、7.6nmol/mL的L-d3-辛酰肉碱(L-2H3-C8)、7.6nmol/mL的L-d9-肉豆蔻酰肉碱(L-2H9-C14)和15.2nmol/mL的L-d3-棕榈酰肉碱(L-2H3-C16)组成；
(C)17α羟孕酮同位素内标准品13C3-17αOHP，1瓶，总计2.5g；
(D)琥珀酰丙酮处理液，1瓶；琥珀酰丙酮处理液中含有琥珀酰丙酮内标准品13C5-SUAC和水合肼溶液，1瓶琥珀酰丙酮处理液5mL，将琥珀酰丙酮内标准品溶于5mL水合肼中，琥珀酰丙酮内标准品浓度为500nmol/mL；
(E)质控品，2套；质控品为含有氨基酸和肉碱的人全血滤纸干血片，2套质控品总计包括人全血滤纸干血片4张，其中低浓度质控品2张，高浓度质控品2张；
(F)V型底96孔板，40块；
(G)铝箔封口膜，40张；
(H)使用说明书，1份。
试剂盒于2-8℃保存。
使用说明书中披露了本例试剂盒的主要成份和使用方法，其中，主要成份包括以上(A)-(H)。使用方法包括试剂的配制，和同时检测氨基酸、肉碱、酮类、激素的方法，详细如下：
1.日常工作液制备
(1)使用1mL的50％乙腈对氨基酸同位素内标准品的小瓶进行复溶，彻底混匀，直到完全溶解，作为氨基酸同位素内标准品工作液；
(2)使用1mL的50％乙腈对肉碱同位素内标准品的小瓶进行复溶，彻底混匀，直到完全溶解，作为肉碱同位素内标准品工作液；
(3)使用1mL的甲醇对17α羟孕酮同位素内标准品的小瓶进行复溶，彻底混匀，直到完全溶解，作为17α羟孕酮同位素内标准品工作液；
(4)提取工作液配制
如果测试琥珀酰丙酮，提取工作液配制方法如下：
氨基酸同位素内标准品工作液稀释倍数为1:200，肉碱同位素内标准品工作液稀释倍数为1:200，17α羟孕酮同位素内标准品工作液稀释倍数为1:250，琥珀酰丙酮处理液(缩写SUAC)稀释倍数为1:40，稀释溶剂为甲醇。
以配制10mL提取工作液为例，10mL提取工作液包括：氨基酸同位素内标准品工作液50μL、肉碱同位素内标准品工作液50μL、17α羟孕酮同位素内标准品工作液40μL、琥珀酰丙酮处理液250μL、甲醇9610μL，总计10mL。
如果不测试琥珀酰丙酮，提取工作液配制方法如下：
氨基酸同位素内标准品工作液稀释倍数为1:200，肉碱同位素内标准品工作液稀释倍数为1:200，17α羟孕酮同位素内标准品工作液稀释倍数为1:250，稀释溶剂为甲醇。
以配制10mL提取工作液为例，10mL提取工作液包括：氨基酸同位素内标准品工作液50μL、肉碱同位素内标准品工作液50μL、17α羟孕酮同位素内标准品工作液40μL、甲醇9860μL，总计10mL。
2.打孔并加样
使用自动或手动打孔器在干血斑上将滤纸血片打孔，并将滤纸血片移入提供的V型截底的洁净微孔板的板孔内。纸盘的直径应约为3.2mm，即1/8英寸。
试验时，每个板孔只加入一张滤纸片。每个板设置一个孔添加高浓度质控品的3.2mm滤纸片，一个孔添加低浓度质控品3.2mm的滤纸片。
使用多道移液器以反向加样法给每个含有滤纸血片的板孔内添加90μL的提取工作液。用封膜封好，将挥发量降低到最小。
3.孵育
将微孔板置于孵育器或振荡器内，在30℃，750rpm条件下振荡30分钟。
4.琥珀酰丙酮反应
如果测试琥珀酰丙酮，则在步骤“3.孵育”完成后，室温静置2h，保证所萃取的琥珀酰丙酮充分衍生化，即确保干血片样本中的琥珀酰丙酮和提取工作液中的水合肼充分发生衍生化反应。
注意：如果不测试琥珀酰丙酮，可以省略该步骤。
5.样本提取并稀释
4000rpm，离心10min，从每个板块中将20μL上清液转移到96孔板内，加入180μL，40％乙腈进行稀释，使用封膜封好，将溶液挥发量降低到最小，在37℃，600rpm条件下振荡5分钟。
6.质谱上机检测
采用串联质谱对稀释的上清液进行检测。
7.定量结果报告
根据仪器设定程序自动得到各个分析物的浓度。
本例的试剂盒可以定量检测13种氨基酸、32种肉碱、1种激素和1种酮类。其中，13种氨基酸包括：丝氨酸、丙氨酸、精氨酸、瓜氨酸、亮氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸、鸟氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、缬氨酸、脯氨酸。32种肉碱包括：C0、C2、C3、C4、C3DC+C4OH、C5、C5:1、C5DC+C6OH、C5OH+C4DC、C10、C10:1、C10:2、C6、C6DC、C8、C8:1、C8DC、C12、C12:1、C14、C14:1、C14:2、C14OH、C16、C16:1、C16:1OH、C16OH、C18、C18:1、C18:1OH、C18:2、C18OH。1种激素即17α羟孕酮，1种酮类即琥珀酰丙酮。9种氨基酸同位素内标准品与13种氨基酸的对应检测关系如表1所示，8种肉碱同位素内标准品与32种肉碱的对应检测关系如表1所示。
表1 内标准品与分析物对应表
根据以上13种氨基酸、32种肉碱、1种激素和1种酮类的定量检测情况可以筛查46种遗传性代谢疾病，其中包括18种氨基酸代谢障碍性疾病：鸟氨酸氨甲酰基转移酶缺乏症(Ornithine transcarbamylase deficiency/OTC)、N-乙酰谷氨酸合成酶缺乏症(N-acetylglutamate synthetase deficiency/NAGS)、枫糖尿病(Maple Syrup UrineDisease/MSUD)、高缬氨酸血症(VAL)、苯丙酮尿症(Phenylketonuria/PKU)、四氢生物喋呤缺乏症(Tetrahydrobiopterin deficiency/BH4D)、高苯丙氨酸血症Hyperphenylalaninemia/HPA、酪氨酸血症I型(Tyrosinemia I/TYR I)、酪氨酸血症II型(Tyrosinemia II/TYR II)、酪氨酸血症III型(TyrosinemiaⅢ/TYRⅢ)、精氨琥珀酸酶血症(Argininosuccinic Aciduria/ASA)、瓜氨酸血症I型(Citrullinemia I/CIT I)、瓜氨酸血症II型(Citrullinemia II/CIT II)、精氨酸血症(Argininemia/ARG)、同型半胱氨酸血症(Homocystinemia/HCY)、高甲硫氨酸血症(Hypermethioninemia/MET)、高鸟氨酸血症-高氨血症-同型瓜氨酸血症综合症(Hyperammonemia Hyperornithinemia HomocitrullinuriaSyndrome/HHH)、高鸟氨酸血症(Hyperornithinemia/ORN)；12种有机酸血症：3-甲基巴豆酰辅酶A羧化酶缺乏症(3-Methyl crotonyl-CoA carboxylase deficiency/3MCC)、3-甲基戊烯二酸血症(3-Methyl glutaconic aciduria/3MGA)、2-甲基-3-羟丁酰辅酶A脱氢酶缺乏症(2-Methyl-3-hydroxybutyryl-CoAdehydrogenase deficiency/MHBD)、多发性羧化酶缺乏症(Multiple carboxylase deficiency/MCD)、β-酮硫酶缺乏症(Beta-ketothiolasedeficiency/BKT)、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A裂解酶缺乏症(3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA lyase deficiency)、2-甲基丁酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(2-Methylbutyryl CoA dehydrogenase deficiency/SBCADD)、异戊酸血症(Isovaleric acidemia/IVA)、丙酸血症(Propionic acidemia/PA)、甲基丙二酸血症(Methylmalonic Acidemias/MMA)、戊二酸血症I型(Glutaric acidemia type I/GA I)、戊二酸血症II型(Glutaricacidemia type II/GA II)；15种脂肪酸氧化缺陷疾病：肉碱转运缺乏症(Carnitineuptake defect/CUD)、肉毒碱棕榈酰基转移酶缺乏症I型(Carnitine PalmitoylTransferase Deficiency TypeI I/CPT I)、肉毒碱棕榈酰基转移酶缺乏症II型(Carnitine Palmitoyl Transferase Deficiency TypeI II/CPT II)、中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(Medium-Chain Acyl-CoA Dehydrogenase Deficiency/MCAD)、长链-3-羟酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(3-Hydroxy Long Chain Acyl-CoA Dehydrogenase Deficiency/LCHAD)、丙二酰基辅酶A脱羧酶缺乏症(Malonyl-CoA Decarboxylase deficiency/MCD)、异丁酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(Isobutyryl-CoA dehydrogenase deficiency/IBDH)、乙基丙二酸脑病变(Ethylmalonic encephalopathy/EE)、短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(ShortChain Acyl-CoA Dehydronase Deficiency/SCAD)、肉碱/酰基肉碱移位酶缺陷(Carnitine/Acylcarnitine Translocase Deficiency/CACT)、中短链羟酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(Midium/Short Chain Hydroxy Acyl-CoA Dehydrogenase Deficiency/M/SCHAD)、极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(Very Long Chain Acyl-CoA DehydrogenaseDeficiency/VLCAD)、中链-3-酮酰辅酶A硫解酶缺乏症(Medium-chain ketoacyl-CoAthiolase deficiency)、2,4-二烯酰辅酶A还原酶缺乏症(2,4-Dienoyl-CoA reductasedeficiency)、三功能蛋白缺陷病(Trifunctional Protein Deficiency/TFP)；以及一种激素代谢相关的疾病，即先天性肾上腺皮质增生症。
试验例：
本例对500例血液样本进行了检测，所有血液样本由深圳华大生命科学研究院提供和保存，500例血液样本收集自全国范围内的新生儿。
按照本例提供的试剂盒的使用方法，本例首先对质控品进行了检测，以评估仪器是否波动，即检测质控品中各个分析物浓度的波动范围，用变异系数CV表示，CV＝标准偏差/均值，当CV≤25％时则表示仪器状态良好，采集数据良好。本例在一天内对质控品进行了十次检测，每次两个质控品重复，一共20个试验，计算各分析物浓度的CV值，如表2所示。
表2 质控品各分析物的CV值
表2的结果显示，各分析物的CV值都小于25％，证明仪器状态良好，采集数据良好，可以用于检测。
按照本例提供的试剂盒的使用方法，对500例血液样本的血斑进行检测，结果显示，其中，筛选出苯丙酮尿症1例，游离肉碱转移缺乏症1例，其余未非遗传性代谢疾病者，结果与预期相符。苯丙酮尿症患儿及正常人质谱分析图谱如图1所示，先天性肉碱转移酶缺乏症患儿及正常人质谱分析图谱如图2所示。在图1中，A图和B图分别代表苯丙酮尿症患儿的苯丙氨酸及苯丙氨酸内标的峰形和强度，C图和D图分别代表正常人的苯丙氨酸及苯丙氨酸内标的峰形和强度，与他们的浓度成正比。通过比较，可以看见，苯丙酮尿症患儿的苯丙氨酸强度比正常人的强度高很多，超出了正常范围。在图2中，A图和B图分别代表游离肉碱转移缺乏症患儿的游离肉碱及游离肉碱内标的峰形和强度，C图和D图分别代表正常人的游离肉碱及游离肉碱内标的峰形和强度，与他们的浓度成正比。通过比较，可以看见，游离肉碱转移缺乏症患儿的游离肉碱强度比正常人的强度低很多，超出了正常范围。
以上内容是结合具体的实施方式对本申请所作的进一步详细说明，不能认定本申请的具体实施只局限于这些说明。对于本申请所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换。
Claims (10)
1.一种同时检测氨基酸、肉碱、酮类、激素的方法，其特征在于：包括采用提取工作液对待测血斑样本进行孵育；
离心，取上清液，采用串联质谱对所述上清液进行检测，获得待测血斑样本中的氨基酸、肉碱、酮类、激素信息；
所述提取工作液包括氨基酸同位素内标准品、肉碱同位素内标准品、17α羟孕酮同位素内标准品、琥珀酰丙酮内标准品和有机溶剂。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述孵育的条件为，30℃、700～750rpm条件下振荡30分钟。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述氨基酸同位素内标准品包括L-d4-丙氨酸、L-d8-缬氨酸、L-d3-亮氨酸、L-d3-甲硫氨酸、L-13C6-苯丙氨酸、L-13C6-酪氨酸、L-d2-瓜氨酸、L-d2-鸟氨酸和L-d4；5-13C-精氨酸中的至少一种。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述肉碱同位素内标准品包括L-d9-游离肉碱、L-d3-乙酰肉碱、L-d3-丙酰肉碱、L-d3-丁酰肉碱、L-d9-异戊酰肉碱、L-d3-辛酰肉碱、L-d9-肉豆蔻酰肉碱和L-d3-棕榈酰肉碱中的至少一种。
5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述提取工作液中，有机溶剂为甲醇。
6.一种同时检测氨基酸、肉碱、酮类、激素的试剂盒，所述试剂盒用于采用串联质谱对待测血斑样本进行质谱检测，其特征在于：所述试剂盒中包括独立包装的以下组分，
(A)氨基酸同位素内标准品；
(B)肉碱同位素内标准品；
(C)17α羟孕酮同位素内标准品；
(D)琥珀酰丙酮处理液，所述琥珀酰丙酮处理液中含有琥珀酰丙酮内标准品和水合肼溶液；
(E)质控品，所述质控品为含有氨基酸和肉碱的人全血滤纸干血片。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：所述氨基酸同位素内标准品包括L-d4-丙氨酸、L-d8-缬氨酸、L-d3-亮氨酸、L-d3-甲硫氨酸、L-13C6-苯丙氨酸、L-13C6-酪氨酸、L-d2-瓜氨酸、L-d2-鸟氨酸和L-d4；5-13C-精氨酸中的至少一种。
8.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：所述肉碱同位素内标准品包括L-d9-游离肉碱、L-d3-乙酰肉碱、L-d3-丙酰肉碱、L-d3-丁酰肉碱、L-d9-异戊酰肉碱、L-d3-辛酰肉碱、L-d9-肉豆蔻酰肉碱和L-d3-棕榈酰肉碱中的至少一种。
9.根据权利要求6-8任一项所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还包括V型底96孔板、铝箔封口膜和使用说明书中的至少一种。
10.根据权利要求6-9任一项所述的试剂盒，在制备遗传性代谢疾病检测药物或装置中的应用；所述遗传性代谢疾病包括氨基酸代谢障碍性疾病、肉碱代谢障碍性疾病和激素代谢障碍性疾病中的至少一种；优选的，所述激素代谢障碍性疾病为先天性肾上腺皮质增生症。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201711147039.6A CN108008031A (zh) | 2017-11-17 | 2017-11-17 | 同时检测氨基酸、肉碱、酮类、激素的方法和试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201711147039.6A CN108008031A (zh) | 2017-11-17 | 2017-11-17 | 同时检测氨基酸、肉碱、酮类、激素的方法和试剂盒 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108008031A true CN108008031A (zh) | 2018-05-08 |
Family
ID=62052821
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201711147039.6A Pending CN108008031A (zh) | 2017-11-17 | 2017-11-17 | 同时检测氨基酸、肉碱、酮类、激素的方法和试剂盒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN108008031A (zh) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108828109A (zh) * | 2018-08-07 | 2018-11-16 | 质谱生物科技有限公司 | 干血片中胍基乙酸和肌酸浓度的定量检测方法及试剂盒 |
| CN109540622A (zh) * | 2018-12-06 | 2019-03-29 | 扬州诺明哲天医学检验实验室有限公司 | 多种氨基酸和肉碱释放剂检测前处理方法和质谱分析方法 |
| CN109709248A (zh) * | 2018-12-29 | 2019-05-03 | 中国人民解放军总医院 | 用于检测干血片样本中的待检测物的方法和试剂盒及用途 |
| CN110568088A (zh) * | 2019-05-22 | 2019-12-13 | 广州金域医学检验中心有限公司 | 琥珀酰丙酮的检测方法 |
| CN111650314A (zh) * | 2020-06-05 | 2020-09-11 | 深圳华大临床检验中心 | 非衍生法串联质谱检测遗传代谢疾病相关物质的试剂盒和方法 |
| CN112305118A (zh) * | 2020-10-30 | 2021-02-02 | 河北医科大学第二医院 | L-辛酰基肉碱作为疾病诊断的生物标志物 |
| CN112379017A (zh) * | 2020-11-02 | 2021-02-19 | 苏州新波生物技术有限公司 | 一种非衍生化多种新生儿遗传代谢病的筛查试剂盒 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101742995A (zh) * | 2007-05-04 | 2010-06-16 | 珀金埃尔默健康科学股份有限公司 | 检测琥珀酰丙酮 |
| CN104807920A (zh) * | 2015-05-21 | 2015-07-29 | 上海迪安医学检验所有限公司 | 高效液相色谱串联质谱技术检测血清中10种类固醇激素的试剂盒 |
| CN104807921A (zh) * | 2015-05-21 | 2015-07-29 | 上海迪安医学检验所有限公司 | 高效液相色谱串联质谱技术检测血清中10种类固醇激素的方法 |
| CN106483208A (zh) * | 2015-09-02 | 2017-03-08 | 实验室系统诊断有限公司 | 用于使用质谱法检测尿素循环障碍的新方法和试剂盒 |
| CN106841427A (zh) * | 2016-12-30 | 2017-06-13 | 广州市达瑞生物技术股份有限公司 | 一种检测pku和cah的串联质谱试剂盒制备及其应用 |
| CN107144453A (zh) * | 2017-05-24 | 2017-09-08 | 广州金域医学检验中心有限公司 | 氨基酸与酰基肉碱干血斑质控品及其制备方法 |
-
2017
- 2017-11-17 CN CN201711147039.6A patent/CN108008031A/zh active Pending
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101742995A (zh) * | 2007-05-04 | 2010-06-16 | 珀金埃尔默健康科学股份有限公司 | 检测琥珀酰丙酮 |
| CN104807920A (zh) * | 2015-05-21 | 2015-07-29 | 上海迪安医学检验所有限公司 | 高效液相色谱串联质谱技术检测血清中10种类固醇激素的试剂盒 |
| CN104807921A (zh) * | 2015-05-21 | 2015-07-29 | 上海迪安医学检验所有限公司 | 高效液相色谱串联质谱技术检测血清中10种类固醇激素的方法 |
| CN106483208A (zh) * | 2015-09-02 | 2017-03-08 | 实验室系统诊断有限公司 | 用于使用质谱法检测尿素循环障碍的新方法和试剂盒 |
| CN106841427A (zh) * | 2016-12-30 | 2017-06-13 | 广州市达瑞生物技术股份有限公司 | 一种检测pku和cah的串联质谱试剂盒制备及其应用 |
| CN107144453A (zh) * | 2017-05-24 | 2017-09-08 | 广州金域医学检验中心有限公司 | 氨基酸与酰基肉碱干血斑质控品及其制备方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| NILS JANZEN等: "Fast and direct quantification of adrenal steroids by tandem mass spectrometry in serum and dried blood spots", 《JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY B》 * |
| PERKINELMER: "3040-001Z非衍生化多种氨基酸、肉碱和琥珀酰丙酮测定试剂盒(串联质谱法)说明书", 《豆丁网》 * |
| PERKINELMER: "Neobase Non-derivatized Assay Solutions 3041-0020", 《HTTPS://EHSLEGACY.UNR.EDU/MSDSFILES/26197.PDF》 * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108828109A (zh) * | 2018-08-07 | 2018-11-16 | 质谱生物科技有限公司 | 干血片中胍基乙酸和肌酸浓度的定量检测方法及试剂盒 |
| CN109540622A (zh) * | 2018-12-06 | 2019-03-29 | 扬州诺明哲天医学检验实验室有限公司 | 多种氨基酸和肉碱释放剂检测前处理方法和质谱分析方法 |
| CN109709248A (zh) * | 2018-12-29 | 2019-05-03 | 中国人民解放军总医院 | 用于检测干血片样本中的待检测物的方法和试剂盒及用途 |
| CN110568088A (zh) * | 2019-05-22 | 2019-12-13 | 广州金域医学检验中心有限公司 | 琥珀酰丙酮的检测方法 |
| CN111650314A (zh) * | 2020-06-05 | 2020-09-11 | 深圳华大临床检验中心 | 非衍生法串联质谱检测遗传代谢疾病相关物质的试剂盒和方法 |
| CN112305118A (zh) * | 2020-10-30 | 2021-02-02 | 河北医科大学第二医院 | L-辛酰基肉碱作为疾病诊断的生物标志物 |
| CN112379017A (zh) * | 2020-11-02 | 2021-02-19 | 苏州新波生物技术有限公司 | 一种非衍生化多种新生儿遗传代谢病的筛查试剂盒 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108008031A (zh) | 同时检测氨基酸、肉碱、酮类、激素的方法和试剂盒 | |
| CN108051494A (zh) | 一种同时检测多种遗传代谢疾病相关物质的方法和试剂盒 | |
| Vilarinho et al. | Four years of expanded newborn screening in Portugal with tandem mass spectrometry | |
| Chace et al. | Use of tandem mass spectrometry for multianalyte screening of dried blood specimens from newborns | |
| Chace et al. | A biochemical perspective on the use of tandem mass spectrometry for newborn screening and clinical testing | |
| CN108645924B (zh) | 基于超高效液相色谱串联质谱技术的新生儿代谢物的检测方法 | |
| Brauer et al. | Preanalytical standardization of amino acid and acylcarnitine metabolite profiling in human blood using tandem mass spectrometry | |
| Held et al. | Quantitative urine amino acid analysis using liquid chromatography tandem mass spectrometry and aTRAQ® reagents | |
| Wang et al. | Newborn screening of phenylketonuria using direct analysis in real time (DART) mass spectrometry | |
| CN106841427B (zh) | 一种检测pku和cah的串联质谱试剂盒 | |
| Yao et al. | Inaccurate quantitation of palmitate in metabolomics and isotope tracer studies due to plastics | |
| Sun et al. | The screening of inborn errors of metabolism in sick Chinese infants by tandem mass spectrometry and gas chromatography/mass spectrometry | |
| Williams et al. | HIV/HAART-associated oxidative stress is detectable by metabonomics | |
| CN108362795B (zh) | 干血片中同型半胱氨酸含量快速检测方法 | |
| Mueller et al. | Validation of an ESI-MS/MS screening method for acylcarnitine profiling in urine specimens of neonates, children, adolescents and adults | |
| Ginterová et al. | Determination of mushroom toxins ibotenic acid, muscimol and muscarine by capillary electrophoresis coupled with electrospray tandem mass spectrometry | |
| CN106568880A (zh) | 一种高效液相色谱‑串联质谱检测血浆甲基丙二酸的方法及试剂盒 | |
| Pietrowska et al. | LC‐MS‐based metabolic fingerprinting of aqueous humor | |
| CN107091894A (zh) | 液相色谱串联质谱检测甲基丙二酸、甲基枸橼酸和/或同型半胱氨酸的方法 | |
| CN109738539A (zh) | 液相色谱串联质谱测定样品极长链脂肪酸的方法及试剂盒 | |
| Smith et al. | Acylcarnitine analysis by tandem mass spectrometry | |
| Corso et al. | Development and validation of an enzymatic method for total cholesterol analysis using whole blood spot | |
| CN104237442B (zh) | 试剂盒及其应用以及联合检测多种氨基酸和肉毒碱的方法 | |
| Cai et al. | Redox environment metabolomic evaluation (REME) of the heart after myocardial ischemia/reperfusion injury | |
| Fernandes et al. | Putrescine as indicator of manganese neurotoxicity: dose-response study in human SH-SY5Y cells |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| REG | Reference to a national code |
Ref country code: HK Ref legal event code: DE Ref document number: 1248814 Country of ref document: HK |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20180508 |
|
| REG | Reference to a national code |
Ref country code: HK Ref legal event code: WD Ref document number: 1248814 Country of ref document: HK |