CN107991496A - 一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明是一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒,本发明对常规现有试剂进行了改进,加入聚乙二醇、牛血清白蛋白和EDTA在试剂中,有效增强了抗体的免疫活性,从而提供一种稳定高效、保存时间长的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒,保证试剂能在2‑8℃条件下稳定放置20个月。一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒包含试剂R1和试剂R2。本发明提供的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒的抗体活性高,准确性好,线性范围较好,并且本试剂在2‑8℃能稳定保存20个月。
Description
技术领域
本发明涉及一种稳定的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒,属于临床体外检测试剂领域。
背景技术
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)是脂质运载蛋白的一种,最初是在激活中性粒细胞中被发现的一种小分子量分泌性蛋白。NGAL的分子量约为25kDa,共价结合于中性粒细胞明胶酶。NGAL在生理状态下是一种生长因子,主要参与早期肾脏上皮的发生和生长,在正常组织包括肾脏、肺、胃及结肠的上皮组织中表达量较低。在发生缺血性和毒性肾损伤过程中,肾小管上皮细胞中的NGAL显著增加,在开始的两个小时内,尿液和血液中NGAL水平显著增加,因此NGAL是早期急性肾损伤的敏感标志物,也是反映肾功能损伤的标志物,适用于慢性肾病(CKD)、糖尿病肾病、狼疮肾病、IgA肾小管间质性损伤和心肾综合征(CRS)等的检测。
NGAL的检测方法有酶联免疫分析法和胶体金比色法免疫浊比浊法。胶体金比色法有快速简便,易观察的特点,但只能进行定性或半定量检测,灵敏度低。酶免分析法操作简便,特异性强,但灵敏度较低、线性范围较窄。与其他方法相比,免疫比浊法操作简便、结果准确可靠、自动化程度高,且检测快速,具有较高的临床可用度。
常规的NGAL免疫比浊法检测试剂盒中抗体的免疫活性随着放置时间逐渐衰减,降低检测试剂盒的稳定性,限制了线性检测范围,制约了临床应用的推广,急需改进。
发明内容
针对中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白免疫比浊法检测试剂盒应用中存在的问题,本发明对常规现有试剂进行了改进,加入了聚乙二醇、牛血清白蛋白(BSA)和EDTA在试剂中,有效增强了抗体的免疫活性,从而提供一种稳定高效、保存时间长的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂,保证试剂能在2-8℃条件下稳定放置20个月。
本发明是通过以下措施实现的:
一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒,包括试剂R1和试剂R2,各组分原料含量如下:
试剂R1:40mmol/L pH7.2的磷酸盐缓冲液,1mmol/L氯化钠,0.1%ProClin300,0.1mmol/L聚乙二醇。
试剂R2:2%羊抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白抗体包被乳胶颗粒,1mmol/L氯化钠,0.1%ProClin300,40mmol/L pH7.2的磷酸盐缓冲液,20-40g/L牛血清白蛋白、0.1-1mmol/L EDTA。
本发明的有益效果:
本发明提供的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂抗体活性高,准确性好,并且本试剂在2-8℃能稳定保存20个月。
附图说明
图1为成品试剂盒与实施例1、2、3试剂放置在2~8℃条件下的稳定性曲线。
具体实施方式
为了更好的理解本发明,下面结合具体的实施例进行说明。
实施例1
一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白免疫比浊法检测试剂盒,包括体积比为4:1的试剂R1和试剂R2,试剂R1和R2的组成及含量如下:
试剂R1:
试剂R2:
本实施例描述的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白免疫比浊法检测试剂盒,在使用时采用迪瑞CS-600B全自动生化分析仪进行测定,具体操作步骤如表1所示。
表1中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)检测试剂盒检测方法
计算方法:
样本浓度=(样本ΔA/校准ΔA)×校准浓度
实施例2
一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白免疫比浊法检测试剂盒,包括体积比为4:1的试剂R1和试剂R2,试剂R1和R2的组成及含量如下:
试剂R1:
试剂R2:
具体测试方法如同实施例1。
实施例3
一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白免疫比浊法检测试剂盒,包括体积比为4:1的试剂R1和试剂R2,试剂R1和R2的组成及含量如下:
试剂R1:
试剂R2:
具体测试方法如同实施例1。
相关性检测:
利用中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白标准溶液,利用生理盐水配置成不同浓度样本,中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒(胶乳增强免疫比浊法)(下面简称为成品试剂盒)作为对照,对制备的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂进行准确度验证。检测结果如表2所示。
表2相关性检测结果
通过检测数据可知成品试剂盒检测不同浓度中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白标准液得到的相关系数(R2)为0.9993,而实施例1、2、3所制备的试剂盒检测相关系数分别为0.9994、0.9995、0.9995,其相关性类似于成品检测试剂盒。说明实施例1、2、3制备的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂准确度等同于市场认可的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒。
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒稳定性验证:
对比成品试剂盒及实施例1、实施例2、实施例3的稳定性。具体操作步骤为:分别将成品试剂盒和实施例1、实施例2、实施例3的检测试剂放置于2~8℃冰箱中,每月定时取出一组,按照操作流程对中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白质控品进行检测,测定其浓度,取平均值,从而确定试剂的稳定时间,检测数据如图1所示。
经过稳定性验证,在试剂放置20个月以后,实施例1、2、3所配置的检测试剂抗体免疫活性衰减很小,检测结果稳定。而成品试剂盒检测试剂放置一年以后其抗体免疫活性出现衰减,因此在常规配方的基础上同时加入聚乙二醇、牛血清白蛋白(BSA)和EDTA在试剂中,可使得试剂在经过2~8℃放置20个月后其中抗体的免疫活性依然稳定,检测效果依然能够达到要求的结果。
综合上述分析,本发明提供的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒,通过在试剂中加入聚乙二醇、牛血清白蛋白(BSA)和EDTA,对试剂的准确度没有影响,同时试剂的稳定性提升较大。因此本发明中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白免疫比浊法检测试剂盒有利于在市场中的推广。
Claims (1)
1.一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒,其特征在于,包括体积比为4:1的试剂R1和试剂R2,所述试剂R1和试剂R2的组成及含量如下:
试剂R1:
试剂R2:
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