CN107987047B - 一种从桑白皮中提取的牻牛儿基黄酮化合物及其方法和应用 - Google Patents

一种从桑白皮中提取的牻牛儿基黄酮化合物及其方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种从桑白皮中提取的牻牛儿基黄酮化合物，以桑白皮为原料，经乙醇提取、浓缩、乙酸乙酯萃取、硅胶拌样、正相硅胶柱层析、溶解、过滤处理等步骤后提取得到一种具有药理活性的新的药用化合物，其化学名称为3'‑牻牛儿基‑5,7,2',4'‑四羟基黄酮，可作为抑制肿瘤细胞生长的用途，不仅为现有肿瘤细胞的研究提供治理方案，更拓展了现有桑白皮资源的应用领域。

Description

一种从桑白皮中提取的牻牛儿基黄酮化合物及其方法和应用
技术领域
本发明是一种从桑白皮中提取的牻牛儿基黄酮化合物及其方法和应用，具体涉及从桑白皮中提取分离的具有药理活性的化合物及其方法和用途，属于植物化学技术领域。
背景技术
桑白皮为桑科植物桑（拉丁学名：Morus alba L. ）的干燥根皮，秋末落叶时至次春发芽前采挖根部，刮去黄棕色粗皮，纵向剖开，剥取根皮，晒干作药用，具有泻肺平喘，利水消肿之功效。常用于肺热喘咳，水饮停肺，胀满喘急，水肿，脚气，小便不利，多是采用同其他中药配伍煎服或制成中成药。
随着科学技术的发展及对中药综合研究的深入，中医药有了新的开发前景，并有着更加广阔的用途，如何开发研制新的有效药物成分，开拓新的应用领域已是人们所关心的问题。在对桑白皮的研究过程中，人们发现，从桑白皮中可提取得到多种具有药物活性的化学成分，例如：
冯冰虹等（参见冯冰虹，苏浩冲，杨俊杰发表的“桑白皮丙酮提取物对呼吸系统的药理作用”，《广东药学院学报》，2005.21（1）；47-49）发现桑白皮丙酮提取物有显著镇咳作用、抑制小鼠耳肿胀、气管酚红排出量显著增加和止喘作用氯仿提取物及碱提取物均有显著的祛痰、抗炎和镇咳作用。
周德文等（参见周德文，李长敏发表的“桑白皮的药理活性”，《国外医药（植物分册）》，1997.12（3）；155-157）发现桑根白皮素、桑呋喃G、桑酮和桑根酮均可抑制十四烷酰氯波醇乙酸酯（TPA）与细胞受体结合；桑酮和桑根酮对促癌因子杀鱼菌素的蛋白激醇C有剂量依赖的抑制作用，对促癌因子鸟氨酸脱羧酶（ODC）活性的诱导有抑制作用。
邹丽宜等（邹丽宜，陈忻，昊铁等发表的“桑白皮低聚壳聚糖体内抗肿瘤作用研究”，《现代中西医结合杂质》，2007.16（1）；28-29）用不同浓度的桑白皮低壳聚糖腹腔注射荷小鼠10d，测定其抑瘤率、生命延长率和重要器官的质量，其结果显示，桑白皮低壳聚糖能有效的抑制肿瘤的生长和延长荷瘤小鼠的生存时间。等等。
近年来，随着人们对肿瘤细胞发生机制和改进肿瘤治疗措施方面的不断研究，越来越多的抗肿瘤活性化合物被人们所报道，为开发研制抗肿瘤新药提供了依据。例如：
现有专利文献CN105566340A（一种桑白皮活性成分Morusin衍生物及其应用与制备方法，2016.05.11）公开了一种可作为防治肿瘤疾病药物的Morusin衍生物，其结构式为：
Figure 100002_DEST_PATH_IMAGE001
其中，R1为卤素或氢或甲氧基；
R2为为卤素或氢或甲氧基；
R3为
Figure 783753DEST_PATH_IMAGE002
。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从桑白皮中提取的牻牛儿基黄酮化合物，通过从桑白皮中提取分离得到具有药理活性的新的药用化合物，为以桑白皮为来源开发新药提供依据。
本发明的另一目的在于提供一种从桑白皮中提取牻牛儿基黄酮化合物的方法，以桑白皮为原料，经乙醇提取、浓缩、乙酸乙酯萃取、硅胶拌样、正相硅胶柱层析、溶解、过滤处理等步骤后提取得到一种新的药用化合物，操作步骤简单易控制，实际操作过程中，牻牛儿基黄酮化合物的提取率可以控制在90%以上，纯度可以控制在98%以上。
本发明的另一目的在于提供一种从桑白皮中提取的牻牛儿基黄酮化合物在抑制肿瘤细胞生长中的用途，为现有肿瘤细胞的研究提供治理方案。
本发明通过下述技术方案实现：一种从桑白皮中提取的牻牛儿基黄酮化合物，所述牻牛儿基黄酮化合物是从桑白皮中提取分离而得到，其结构式为：
Figure DEST_PATH_IMAGE003
。
上述化合物的化学名称为：3'-牻牛儿基-5,7,2',4'-四羟基黄酮。
所述牻牛儿基黄酮化合物为黄色粉末，是具有典型黄酮类特征性化合物。
所述牻牛儿基黄酮化合物的分子量为422，分子式为C25H26O6。
一种从桑白皮中提取牻牛儿基黄酮化合物的方法，包括以下提取步骤：
A．以桑白皮为原料，粉碎后用乙醇加热回流提取，再经减压浓缩后得到浓缩液；
B．将浓缩液用乙酸乙酯萃取，萃取物用甲醛溶解后，用硅胶拌样，取硅胶拌样物进行正相硅胶柱层析，将含有目标化合物的收集液合并后，减压浓缩至固体；
C．将所得固体用二甲基甲酰胺溶解后，经有机膜过滤、C18反相色谱填料高压制备分离后，收集相对应的色谱峰, 再经浓缩至析出固体后，得到牻牛儿基黄酮化合物，其结构式为：
Figure 965860DEST_PATH_IMAGE003
。
所述步骤A中，粉碎后的桑白皮用其重量6～8倍的浓度为75～85%W/W的乙醇进行加热回流提取3～5次。
所述步骤B中，萃取物用浓度为甲醛溶解后，用其质量2～4倍硅胶拌样。
所述步骤B中，正相硅胶柱层析的条件包括：
填料：8～10倍硅胶；
脱洗剂：二氯甲烷：甲醇=15：1；
展开剂：二氯甲烷：甲醇=10：1；
薄层色谱硅胶板：Gf254；
紫外光：254nm。
所述步骤C中，用0.22～0.45μm的有机膜进行过滤。
所述步骤C中，在C18反相色谱填料高压制备分离过程中，以A：甲醇 、B：水，A：B =80：20 V/V为流动相，检测波长为283nm。
一种从桑白皮中提取的牻牛儿基黄酮化合物的应用，包括结构式为：
Figure 130125DEST_PATH_IMAGE003
的牻牛儿基黄酮化合物在抑制肿瘤细胞生长的用途。
本发明与现有技术相比，具有以下优点及有益效果：
（1）本发明涉及的牻牛儿基黄酮化合物是采用提取分离的方式从现有桑白皮中获得的一种新的具有药理活性的化合物，其分子式为C25H26O6，化学名称为3'-牻牛儿基-5,7,2',4'-四羟基黄酮。
（2）本发明通过对新化合物—牻牛儿基黄酮化合物结构式的确定，明确了其具有药理活性，其结构中的牻牛儿基、羟基、羰基等官能团 ，均具有明显的生物活性，如镇痛、抗炎、抗菌作用等。
（3）现代药理研究表明，桑白皮具有多种药物活性，据现有针对桑白皮所提取的活性化合物的药理研究表明，桑白皮的提取物如丙酮提取物，具有祛痰、抗炎和镇咳作用；桑白皮低聚壳聚糖体能有效的抑制肿瘤的生长，等等。而本发明涉及的牻牛儿基黄酮化合物，则是从桑白皮中提取得到的新的具有不同于现有提取物结构的，且同样具有抗肿瘤用途的药用化合物，丰富了现有桑白皮研究的多样性，对于制备抑制肿瘤细胞生长药物具有很好的参考价值。
（4）本发明以桑白皮为原料，采用乙醇提取、浓缩、乙酸乙酯萃取、硅胶拌样、正相硅胶柱层析、溶解、过滤处理等方式提取得到3'-牻牛儿基-5,7,2',4'-四羟基黄酮，由于3'-牻牛儿基-5,7,2',4'-四羟基黄酮作为一种首次报道其结构，并根据核磁二维等相关数据确定了其相对构型的新化合物，药理研究表明其对人子宫颈癌JTC-26株具有很好的抑制效果，具有诱生干扰素作用，在研制新型抗肿瘤物方面，能够作为一种潜体结构进行开发利用。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步地详细说明，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1：
本实施例提出了一种从桑白皮中提取的牻牛儿基黄酮化合物，该牻牛儿基黄酮化合物呈黄色粉末，分子量为422，分子式为C25H26O6，具体结构式如下：
Figure 558702DEST_PATH_IMAGE003
。
该牻牛儿基黄酮化合物是从桑白皮中提取分离而得到的，具体提取步骤如下：
A．以桑白皮为原料，粉碎后用乙醇加热回流提取，再经减压浓缩后得到浓缩液；
B．将浓缩液用乙酸乙酯萃取，萃取物用甲醛溶解后，用硅胶拌样，取硅胶拌样物进行正相硅胶柱层析，将含有目标化合物的收集液合并后，减压浓缩至固体；
C．将所得固体用二甲基甲酰胺溶解后，经有机膜过滤、C18反相色谱填料高压制备分离后，收集相对应的色谱峰, 再经浓缩至析出固体后，得到牻牛儿基黄酮化合物。
实施例2：
本实施例提出了一种从桑白皮中提取的牻牛儿基黄酮化合物，该牻牛儿基黄酮化合物呈黄色粉末，分子量为422，分子式为C25H26O6，具体结构式如下：
Figure 302667DEST_PATH_IMAGE003
。
该牻牛儿基黄酮化合物是从桑白皮中提取分离而得到的，具体提取步骤如下：
A．以桑白皮为原料，粉碎后用其重量6倍的浓度为75%W/W的乙醇进行加热回流提取5次，再经减压浓缩至无醇后，得到浓缩液。
B．将浓缩液用等体积的乙酸乙酯萃取3次，萃取物用纯甲醛（99.5%）溶解后，其质量2倍硅胶拌样，取硅胶拌样物进行正相硅胶柱层析，将含有目标化合物的收集液合并后，减压浓缩至固体。其中，正相硅胶柱层析的条件包括：
填料：8倍硅胶；
脱洗剂：二氯甲烷：甲醇=15：1；
展开剂：二氯甲烷：甲醇=10：1；
薄层色谱硅胶板：Gf254；
紫外光：254nm。
C．将所得固体用二甲基甲酰胺溶解后，经0.45μm的有机膜过滤、C18反相色谱填料高压制备分离（以A：甲醇 、B：水，A：B =80：20 V/V为流动相，检测波长为283nm）后，收集相对应的色谱峰, 再经浓缩至析出固体后，得到牻牛儿基黄酮化合物。
实施例3：
本实施例提出了一种从桑白皮中提取的牻牛儿基黄酮化合物，该牻牛儿基黄酮化合物呈黄色粉末，分子量为422，分子式为C25H26O6，具体结构式如下：
Figure 414979DEST_PATH_IMAGE003
。
该牻牛儿基黄酮化合物是从桑白皮中提取分离而得到的，具体提取步骤如下：
A．以桑白皮为原料，粉碎后用其重量8倍的浓度为85%W/W的乙醇进行加热回流提取3次，再经减压浓缩至无醇后，得到浓缩液。
B．将浓缩液用等体积的乙酸乙酯萃取5次，萃取物用纯甲醛（99.5%）溶解后，其质量4倍硅胶拌样，取硅胶拌样物进行正相硅胶柱层析，将含有目标化合物的收集液合并后，减压浓缩至固体。其中，正相硅胶柱层析的条件包括：
填料：10倍硅胶；
脱洗剂：二氯甲烷：甲醇=15：1；
展开剂：二氯甲烷：甲醇=10：1；
薄层色谱硅胶板：Gf254；
紫外光：254nm。
C．将所得固体用二甲基甲酰胺溶解后，经0.22μm的有机膜过滤、C18反相色谱填料高压制备分离（以A：甲醇 、B：水，A：B =80：20 V/V为流动相，检测波长为283nm）后，收集相对应的色谱峰, 再经浓缩至析出固体后，得到牻牛儿基黄酮化合物。
实施例4：
本实施例提出了一种从桑白皮中提取的牻牛儿基黄酮化合物，该牻牛儿基黄酮化合物呈黄色粉末，分子量为422，分子式为C25H26O6，具体结构式如下：
Figure 937096DEST_PATH_IMAGE003
。
该牻牛儿基黄酮化合物是从桑白皮中提取分离而得到的，具体提取步骤如下：
A．以桑白皮为原料，粉碎后用其重量7倍的浓度为80%W/W的乙醇进行加热回流提取4次，再经减压浓缩至无醇后，得到浓缩液。
B．将浓缩液用等体积的乙酸乙酯萃取4次，萃取物用纯甲醛（99.5%）溶解后，其质量3倍硅胶拌样，取硅胶拌样物进行正相硅胶柱层析，将含有目标化合物的收集液合并后，减压浓缩至固体。其中，正相硅胶柱层析的条件包括：
填料：10倍硅胶；
脱洗剂：二氯甲烷：甲醇=15：1；
展开剂：二氯甲烷：甲醇=10：1；
薄层色谱硅胶板：Gf254；
紫外光：254nm。
C．将所得固体用二甲基甲酰胺溶解后，经0.30μm的有机膜过滤、C18反相色谱填料高压制备分离（以A：甲醇 、B：水，A：B =80：20 V/V为流动相，检测波长为283nm）后，收集相对应的色谱峰, 再经浓缩至析出固体后，得到牻牛儿基黄酮化合物。
实施例5：
本实施例提出了一种从桑白皮中提取牻牛儿基黄酮化合物的方法，具体提取步骤如下：
A．以500g桑白皮为原料，粉碎后用其重量6倍的浓度为80%W/W的乙醇进行加热回流提取3次，每次2小时，合并提取液后再经减压浓缩至无醇味，得到800ml浓缩液。
B．将浓缩液用等体积的乙酸乙酯萃取3次后，回收乙酸乙酯后的萃取物为45g，用浓度为99.5%的纯甲醛溶解该萃取物，再用其质量2倍硅胶拌样，取硅胶拌样物进行正相硅胶柱层析，将含有目标化合物的收集液合并后，减压浓缩至固体。
上述正相硅胶柱层析的条件包括有：以10倍硅胶为填料，湿法装柱，干法上样，以二氯甲烷：甲醇=15：1为脱洗剂进行常压脱洗，分管收集，每管每管约100ml，薄层层析：以Gf254为薄层色谱硅胶板，二氯甲烷：甲醇=10：1为展开剂，254nm紫外光下检视暗斑。
C．将所得固体用二甲基甲酰胺溶解后，经0.45μm的有机膜过滤、C18反相色谱填料高压制备分离（以A：甲醇 、B：水，A：B =80：20 V/V为流动相，检测波长为283nm）后，收集相对应的色谱峰, 再经浓缩至析出固体，得到黄色粉末化合物220mg。
经上述方法由桑白皮中提取得到的黄色粉末化合物，经电喷雾电离质谱ESI-MS显示：正离子 423.21[M+H]+，负离子421.21[M-H]+；即该化合物分子量为422；通过高分辨质谱给出的准分子离子峰，确定分子式为C25H26O6，具体结构式表示如下：
Figure 993914DEST_PATH_IMAGE003
。
实施例6：
本实施例提出了一种从桑白皮中提取牻牛儿基黄酮化合物的方法，具体提取步骤如下：
A．以500g桑白皮为原料，粉碎后用其重量8倍的浓度为80%W/W的乙醇进行加热回流提取4次，每次2小时，合并提取液后再经减压浓缩至无醇味，得到1000ml浓缩液。
B．将浓缩液用等体积的乙酸乙酯萃取4次后，回收乙酸乙酯后的萃取物为49g，用浓度为99.5%的纯甲醛溶解该萃取物，再用其质量2倍硅胶拌样，取硅胶拌样物进行正相硅胶柱层析，将含有目标化合物的收集液合并后，减压浓缩至固体。
上述正相硅胶柱层析的条件包括有：以10倍硅胶为填料，湿法装柱，干法上样，以二氯甲烷：甲醇=15：1为脱洗剂进行常压脱洗，分管收集，每管每管约100ml，薄层层析：以Gf254为薄层色谱硅胶板，二氯甲烷：甲醇=10：1为展开剂，254nm紫外光下检视暗斑。
C．将所得固体用二甲基甲酰胺溶解后，经0.35μm的有机膜过滤、C18反相色谱填料高压制备分离（以A：甲醇 、B：水，A：B =80：20 V/V为流动相，检测波长为283nm）后，收集相对应的色谱峰, 再经浓缩至析出固体，得到黄色粉末化合物240mg。
经上述方法由桑白皮中提取得到的黄色粉末化合物，经电喷雾电离质谱ESI-MS显示：正离子 423.21[M+H]+，负离子421.21[M-H]+；即该化合物分子量为422；通过高分辨质谱给出的准分子离子峰，确定分子式为C25H26O6，具体结构式表示如下：
Figure 807149DEST_PATH_IMAGE003
。
实施例7：
本实施例提出了一种从桑白皮中提取牻牛儿基黄酮化合物的方法，具体提取步骤如下：
A．以1000g桑白皮为原料，粉碎后用其重量6倍的浓度为85%W/W的乙醇进行加热回流提取3次，每次2小时，合并提取液后再经减压浓缩至无醇味，得到2000ml浓缩液。
B．将浓缩液用等体积的乙酸乙酯萃取3次后，回收乙酸乙酯后的萃取物为113g，用浓度为99.5%的纯甲醛溶解该萃取物，再用其质量2倍硅胶拌样，取硅胶拌样物进行正相硅胶柱层析，将含有目标化合物的收集液合并后，减压浓缩至固体。
上述正相硅胶柱层析的条件包括有：以10倍硅胶为填料，湿法装柱，干法上样，以二氯甲烷：甲醇=15：1为脱洗剂进行常压脱洗，分管收集，每管每管约100ml，薄层层析：以Gf254为薄层色谱硅胶板，二氯甲烷：甲醇=10：1为展开剂，254nm紫外光下检视暗斑。
C．将所得固体用二甲基甲酰胺溶解后，经0.45μm的有机膜过滤、C18反相色谱填料高压制备分离（以A：甲醇 、B：水，A：B =80：20 V/V为流动相，检测波长为283nm）后，收集相对应的色谱峰, 再经浓缩至析出固体，得到黄色粉末化合物490mg。
经上述方法由桑白皮中提取得到的黄色粉末化合物，经电喷雾电离质谱ESI-MS显示：正离子 423.21[M+H]+，负离子421.21[M-H]+；即该化合物分子量为422；通过高分辨质谱给出的准分子离子峰，确定分子式为C25H26O6，具体结构式表示如下：
Figure 241147DEST_PATH_IMAGE003
。
实施例8：
本实施例提出了一种从桑白皮中提取牻牛儿基黄酮化合物的方法，具体提取步骤如下：
A．以1200g桑白皮为原料，粉碎后用其重量8倍的浓度为75%W/W的乙醇进行加热回流提取5次，每次2小时，合并提取液后再经减压浓缩至无醇味，得到2350ml浓缩液。
B．将浓缩液用等体积的乙酸乙酯萃取4次后，回收乙酸乙酯后的萃取物为156g，用浓度为99.5%的纯甲醛溶解该萃取物，再用其质量4倍硅胶拌样，取硅胶拌样物进行正相硅胶柱层析，将含有目标化合物的收集液合并后，减压浓缩至固体。
上述正相硅胶柱层析的条件包括有：以8倍硅胶为填料，湿法装柱，干法上样，以二氯甲烷：甲醇=15：1为脱洗剂进行常压脱洗，分管收集，每管每管约100ml，薄层层析：以Gf254为薄层色谱硅胶板，二氯甲烷：甲醇=10：1为展开剂，254nm紫外光下检视暗斑。
C．将所得固体用二甲基甲酰胺溶解后，经0.22μm的有机膜过滤、C18反相色谱填料高压制备分离（以A：甲醇 、B：水，A：B =80：20 V/V为流动相，检测波长为283nm）后，收集相对应的色谱峰, 再经浓缩至析出固体，得到黄色粉末化合物560mg。
经上述方法由桑白皮中提取得到的黄色粉末化合物，经电喷雾电离质谱ESI-MS显示：正离子 423.21[M+H]+，负离子421.21[M-H]+；即该化合物分子量为422；通过高分辨质谱给出的准分子离子峰，确定分子式为C25H26O6，具体结构式表示如下：
Figure 278373DEST_PATH_IMAGE003
。
实施例9：
本实施例提出了一种从桑白皮中提取的牻牛儿基黄酮化合物在抑制肿瘤细胞生长的用途。
本实施例中涉及的牻牛儿基黄酮化合物是采用分离提纯方法从桑白皮中得到的新的具有药理活性的化合物。具体涉及的分离提纯过程如下：
A．以800g桑白皮为原料，粉碎后用其重量8倍的浓度为85%W/W的乙醇进行加热回流提取3次，每次2小时，合并提取液后再经减压浓缩至无醇味，得到1200ml浓缩液。
B．将浓缩液用等体积的乙酸乙酯萃取3～5次后，回收乙酸乙酯后的萃取物为62g，用浓度为99.5%的纯甲醛溶解该萃取物，再用其质量2倍硅胶拌样，取硅胶拌样物进行正相硅胶柱层析，将含有目标化合物的收集液合并后，减压浓缩至固体。
上述正相硅胶柱层析的条件包括有：以10倍硅胶为填料，湿法装柱，干法上样，以二氯甲烷：甲醇=15：1为脱洗剂进行常压脱洗，分管收集，每管每管约100ml，薄层层析：以Gf254为薄层色谱硅胶板，二氯甲烷：甲醇=10：1为展开剂，254nm紫外光下检视暗斑。
C．将所得固体用二甲基甲酰胺溶解后，经0.45μm的有机膜过滤、C18反相色谱填料高压制备分离（以A：甲醇 、B：水，A：B =80：20 V/V为流动相，检测波长为283nm）后，收集相对应的色谱峰, 再经浓缩至析出固体，得到黄色粉末化合物310mg。
经上述方法由桑白皮中提取得到的黄色粉末化合物是具有典型黄酮类特征性化合物，分析结果如下：
所述化合物的电喷雾电离质谱显示，正离子 423.21[M+H]+，负离子421.21[M-H]+；提示该化合物分子量为422。通过高分辨质谱给出的准分子离子峰确定其分子式为C25H26O6。
1H-NMR和13C-NMR数据见下表1。
表1 化合物核磁数据（400MHz，DMSO-d5，TMS，δppm,J=Hz）
Figure 432273DEST_PATH_IMAGE004
通过1H、13C-NMR以及DEPT135º和核磁二维HSQC，HMBC，H-HCOSY，NOESY等分析技术手段，确定了该化合物为：3'-牻牛儿基-5,7,2',4'-四羟基黄酮，其分子结构式如下：
Figure 783620DEST_PATH_IMAGE003
。
经更深入的研究表明，该化合物具有一定的药理活性，其结构中的牻牛儿基、羟基、羰基等官能团 ，均具有明显的生物活性，如镇痛、抗炎、抗菌作用等，其药物用途有抑制肿瘤细胞的生长。
对本实施例涉及的牻牛儿基黄酮化合物（3'-牻牛儿基-5,7,2',4'-四羟基黄酮）进行抑制肿瘤细胞实验：
用MTT法测定化合物对人子宫癌细胞JTC-26的抑制效果。把培养好的人子宫癌细胞制成单细胞悬液，用细胞板计数并稀释至细胞浓度为2×104个/mL.于96孔板中接种细胞，每孔100uL。另设2孔无细胞、仅有100uL培养液[Dulbecco’s modified Eagle’s media(DMEM,Gibeo,USA)+10%小牛血情]的用于仪器调零的空白对照孔。置37℃，5%CO2的培养箱中培养24h，然后加入30uL用培养液稀释好的样品。同时，往阳性对照孔加20uL顺铂，往阴性对照孔和空白对照孔各加入20uL培养液。继续培养72h，每孔加10uL5mg/mL MTT。37℃反应4h，每孔加100uL 10%SDS-0.01moL/L HCL溶液过夜。酶标仪比色测定（测定波长490nm，参考波长570nm）。对肿瘤细胞的抑制率计算方法为（阴性对照组0D值-实验组OD值）/（阴性对照组0D值-空白组OD值）×100%。采用SPSS软件计算IC50值。实验表明，化合物对人子宫癌细胞JTC-26的IC50值为0.118mM，化合物显示了较强的抑制人子宫癌细胞JTC-26的活性。
由此可见，本发明所述的牻牛儿基黄酮化合物是可以作为抗肿瘤药物或其他生物活性先导物的，具有抑制肿瘤细胞生长的用途。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明做任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化，均落入本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种从桑白皮中提取牻牛儿基黄酮化合物的方法，其特征在于：包括以下提取步骤：
A．以桑白皮为原料，粉碎后用乙醇加热回流提取，再经减压浓缩后得到浓缩液；
B．将浓缩液用乙酸乙酯萃取，萃取物用甲醛溶解后，用硅胶拌样，取硅胶拌样物进行正相硅胶柱层析，将含有目标化合物的收集液合并后，减压浓缩至固体；
C．将所得固体用二甲基甲酰胺溶解后，经有机膜过滤、C18反相色谱填料高压制备分离后，收集相对应的色谱峰, 再经浓缩至析出固体后，得到牻牛儿基黄酮化合物，其结构式为：
Figure DEST_PATH_IMAGE001
，
所述步骤B中，正相硅胶柱层析的条件包括：
填料：8～10倍硅胶；
脱洗剂：二氯甲烷：甲醇=15：1；
展开剂：二氯甲烷：甲醇=10：1；
薄层色谱硅胶板：Gf254；
紫外光：254nm，
所述步骤C中，在C18反相色谱填料高压制备分离过程中，以A：甲醇 、B：水，A：B =80：20V/V为流动相，检测波长为283nm。
2.根据权利要求1所述的一种从桑白皮中提取牻牛儿基黄酮化合物的方法，其特征在于：所述步骤A中，粉碎后的桑白皮用其重量6～8倍的浓度为75～85%W/W的乙醇进行加热回流提取3～5次。
3.根据权利要求1所述的一种从桑白皮中提取牻牛儿基黄酮化合物的方法，其特征在于：所述步骤B中，萃取物用甲醛溶解后，用其质量2～4倍硅胶拌样。
4.根据权利要求1所述的一种从桑白皮中提取牻牛儿基黄酮化合物的方法，其特征在于：所述步骤C中，用0.22～0.45μm的有机膜进行过滤。
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